CD8^(+)T细胞亚群对小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其机制研究

目的 探索CD8^(+)T细胞亚群对小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)形成的影响。方法 通过Lasso回归和随机森林法筛选AS血管关键免疫浸润细胞。构建载脂蛋白E基因(Apolipoprotein E,ApoE)/重组激活基因1(recombination activating gene-1,Rag1)双基因敲除(double knockout, DKO)小鼠,通过高脂喂食构建AS模型。将ApoE基因敲除小鼠分为对照组(Con组)、高脂喂食组(HFD组),每组3只;将ApoE/Rag1 DKO小鼠分为DKO+S组[高脂喂食+磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline, PBS)]、DKO+效应记忆型T细胞(effective memory T cell, Tem)组(高脂喂食联合CD8^(+)Tem回输)及DKO+终末分化Tem(terminal effector memory T cell, Temra)组(高脂喂食联合CD8^(+) Temra回输),每组3只。用油红O染色及苏木精-伊红染色观察Con组、HFD组、DKO+S组、DKO+Tem组及DKO+Temra组小鼠血管壁AS斑块形成情况。结果 Lasso回归和随机森林法结果提示,CD8^(+)Tem是参与班块形成的关键CD8^(+)T细胞类型。油红O染色和苏木精-伊红染色显示,与Con组比较,HFD组AS斑块面积显著增加(P<0.05);HFD组与DKO+S组AS斑块面积比较无显著差异(P>0.05);与DKO+S组比较,DKO+Tem组及DKO+Temra组AS斑块均显著增加(P<0.05)。结论 CD8^(+)T细胞亚群与小鼠AS形成密切相关,CD8^(+)Tem和CD8^(+)Temra显著诱导AS斑块形成。

晚期恶性肿瘤患者CD8及CD28 T淋巴细胞亚群结果分析

目的 分析晚期恶性肿瘤患者CD8及CD28 T淋巴细胞亚群的构成。方法 采用流式细胞术检查55例晚期恶性肿瘤患者T淋巴细胞亚群,并与体检健康者作比较。结果 研究组晚期恶性肿瘤患者CD4+、CD4+/CD8+比值、CD8+CD28+明显低于对照组(P<0.01),CD8+,CD8+CD28-明显高于对照组(P<0.01)。结论 晚期恶性肿瘤患者机体免疫功能低下,表现为CD4+,CD8+CD28+低下,而CD8+CD28-明显升高,因此临床上检测CD8+及CD28+淋巴细胞亚群,更能反映T淋巴细胞的免疫功能,具有一定的临床参考价值。

藏蒲公英多糖纳米乳剂对小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4^+、CD8^+的影响

研究藏蒲公英多糖对小鼠免疫功能的调节作用。采用流式细胞术检测健康小鼠在灌胃0.1ml质量分数0.85%生理盐水、0.1ml质量分数1%藏蒲公英多糖水溶液和0.1ml质量分数1%藏蒲公英多糖纳米乳剂情况下,外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+数量的动态变化。结果发现,藏蒲公英多糖和藏蒲公英多糖纳米乳剂均能够显著提高小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+水平,降低T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+比值,尤以藏蒲公英多糖纳米乳剂效果最为显著。

急性胰腺炎CD_8^+T淋巴细胞亚群及C-反应蛋白的临床分析

目的:探讨急性胰腺炎性反应期内C-反应蛋白和CD8+T细胞亚群变化,评估急性胰腺炎严重程度。方法:选取急性胰腺炎患者60例,在发病的7 d内每天测定患者血清CD8+T细胞亚群和C-反应蛋白,同时行增强CT检查。依据患者病情及增强CT结果,将样本分轻重两组,两组间血清CD8+T细胞亚群和C-反应蛋白水平比较均采取t检验。结果:轻症组CD8+T细胞亚群波动幅度较重症组小;重症组患者CD8+T细胞亚群明显低于轻症组;血清C-反应蛋白水平在起病第1天即开始上升,第2天达到峰值,此后开始逐渐下降,轻重症组间比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:急性胰腺炎炎性反应反应期C-反应蛋白及CD8+T细胞亚群的测定能够评估患者病情的严重程度。

系统性红斑狼疮中医证型与Ag-NORs和CD8^+调节性T细胞亚群的关系

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)中医辨证分型与外周血T淋巴细胞核仁组成区嗜银蛋白(Ag-NORs)含量和CD8+CD28-、CD8+CD28+T细胞亚群的相关性。方法:采用银染技术和流式细胞术,分别对24例热毒炽盛型、16例肝肾阴虚型SLE患者和20例健康者的外周血T淋巴细胞Ag-NORs含量和CD8+CD28-、CD8+CD28+T细胞亚群比例进行测定。结果:与健康对照组比较,SLE两证型组患者CD8+CD28-及CD8+CD28-/CD8+CD28+比值升高,CD8+CD28+比例下降,差异有显著性意义;与肝肾阴虚组比较,热毒炽盛组患者Ag-NORs含量升高,CD8+CD28-、CD8+CD28+比例降低,差异有显著性意义。经直线相关性分析,Ag-NORs与CD8+CD28-、CD8+CD28+之间无相关性。结论:外周血T淋巴细胞Ag-NORs含量、CD8+调节性T细胞亚群的改变与SLE中医证型具有一定相关性,可作为SLE中医辨证分型的客观化指标。

健康双生子外周血CD4^+和CD8^+ T细胞亚群相对计数遗传度研究

目的分析围生期及生命早期环境因素与外周血CD4+、CD8+T细胞相对计数的关系,估计CD4+和CD8+T细胞亚群的遗传度。方法采用双生子研究设计,经纳入与排除标准选取在新疆医科大学第一附属医院、乌鲁木齐市妇幼保健医院、新疆维吾尔自治区人民医院、中国人民解放军乌鲁木齐总医院和乌鲁木齐市第一人民医院出生的健康双生子。收集研究对象一般家庭状况、母亲孕期及分娩状况、出生时状况等信息,在双生子满1周岁时进行体检。体重和身高等体格发育指标依照"1995年中国九市7岁以下儿童体格发育调查研究"标准进行测量。测定外周血CD4+和CD8+T细胞亚群相对计数,并通过微卫星DNA基因分型技术进行卵型鉴定。CD4+和CD8+T细胞亚群的遗传度估计应用Mx软件进行分析。结果研究期间共有172对双生子进入分析,其中82对为(47.7%)同卵双生子(MZ),90对为异卵双生子(DZ)。Apgar评分与MZ、DZ组CD4+T细胞相对计数呈弱正相关(rMZ=0.16,rDZ=0.14,P<0.05)。最终选择AE模型得到1岁幼儿外周血CD4+和CD8+T细胞的遗传度分别为61.8%(95%CI:38.3%～74.8%)与57.3%(95%CI:34.5%～70.2%)。结论 1岁幼儿外周血CD4+和CD8+T细胞亚群遗传度高于成人水平,Apgar评分或与CD4+和CD8+T细胞亚群相对计数相关。

放疗对子宫颈鳞状细胞癌CD8+T细胞亚群的影响研究

确证放疗是否对于子宫颈鳞癌CD8+T细胞浸润 有影响,使癌内CD8+T细胞亚群比例变化。方法:建立小 鼠子宫颈上皮内瘤变模型,与正常小鼠进行对照试验,分 为健康小鼠对照组、空白对照组、局部放疗组,每组8只。 局部放疗组进行局部放疗(20Gy)后,取小鼠外周血,根 据CD8+T细胞表面趋化因子受体 CCR7 及 CD45RA 界 定小鼠外周血中CD8+T细胞亚群利用流式细胞术检测其比 例变化。结果:在对局部放疗组与空白对照组的小鼠进行 CD8+T细胞亚群分析时,结果显示初始细胞和中央记忆细 胞的比例在前者中显著提升,而效应细胞和效应记忆细胞 的比例则有所下降,并且这些差异具有统计学上的显著性 ( P<0.05 )。相比之下,健康对照组的小鼠相较于空白对照 组,其外周血中的初始细胞增多,记忆细胞比例相应减少, 同样展现出显著的差异( P<0.05 )。结论:肿瘤起了小鼠外 周血中CD8+T淋巴细胞亚群结构的显著变化,进而可能导 致免疫系统的混乱,使机体清除肿瘤功能减弱。空白对照 组与局部放疗组比较,初始细胞、中央记忆细胞比例增加, 效应细胞、效应记忆细胞比例减少,说明放疗使癌内微环 境改善机体细胞免疫功能较好有利于肿瘤的清除。

子宫颈上皮内瘤变患者CD4＋、CD8＋T细胞表达与高危型HPV感染的关系

目的探讨不同级别宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中CD4+、CD8+T细胞表达及与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的关系。方法对2005年1月至2008年8月在珠海市人民医院阴道镜下宫颈活检诊断为CIN并行宫颈锥切治疗的72例患者的资料进行分析,采用杂交捕获第二代方法(HC-Ⅱ)检测高危型HPVDNA含量;采用免疫组化检测30例CIN1、43例CIN2/3及10例正常宫颈组织中CD4+、CD8+T细胞的表达。结果 CIN2/3组的HR-HPV感染率显著高于CIN1组(P<0.05),CIN组HR-HPV感染率高于慢性宫颈炎组(P<0.01)。慢性宫颈炎组、CIN1组和CIN2/3组CD4+T细胞表达率分别为60.0%、43.3%和33.3%,CD8+T细胞的表达率分别为70.0%、46.7%和31.0%;CD4+、CD8+T细胞在CIN1组及CIN2/3组的表达显著低于慢性宫颈炎组(P<0.05)。结论 CD4+、CD8+T细胞表达下调可能促进宫颈HR-HPV感染的发生,并对宫颈癌前病变的发生、发展起一定的作用。

金龙固本补肺健脾合剂对哮喘缓解期患者外周血CD4^+、CD8^+ T细胞表达的影响及疗效

目的观察金龙固本补肺健脾合剂对哮喘缓解期(宿痰伏肺兼肺脾气虚证)患者外周血CD4^+、CD8^+T细胞表达的影响及临床疗效。方法将48例哮喘缓解期患者随机分为治疗组和对照组,治疗组采用金龙固本补肺健脾合剂口服治疗,对照组不进行药物干预,疗程均为4个月,随访期12个月。观察中医证侯评分、CD4^+、CD8^+及西医疗效等指标。结果中医证候评分,治疗组下降明显,与对照组比较(P<0.01)具有显著统计学意义;CD4^+治疗后与对照组比较,治疗组下降比较明显(P<0.05);CD8^+疗后治疗组与对照组比较,治疗组下降明显,具有统计学意义(P<0.05);疾病疗效方面治疗组显著优于对照组(P<0.01)。结论治疗支气管哮喘主要通过下调CD4、CD8表达,促进支气管哮喘患者体内CD4^+、CD8^+细胞凋亡,可有效改善哮喘缓解期患者的临床症状,从而减少支气管哮喘的发作。

戊乙奎醚预处理对脓毒症患者CD8^+CD28^-调节性T细胞的影响及意义

目的:观察CD8+CD28-调节性T细胞在脓毒症发病机制及戊乙奎醚预处理对该细胞的作用。方法:采用流式细胞术检测25例经戊乙奎醚预处理的脓毒症患者(观察组)及25例经等量生理盐水预处理的患者(对照组)外周血CD8+CD28-调节性T细胞及其胞内细胞因子白介素10(IL-10)、转化生长因子(TGF-β1)及叉头蛋白p3(Fox p3)的百分含量。选取16例健康体检者作为空白对照(健康组)。结果:与健康人比较,脓毒症患者的CD8+CD28-调节性T细胞及其上述三种细胞因子均明显升高(P<0.05)。经过戊乙奎醚预处理,观察组患者上述指标明显低于预处理前(P<0.05),且明显低于对照组(P<0.05),但对照组较预处理前无统计学差异(P>0.05)。结论:CD8+CD28-调节性T细胞数量及功能过亢是脓毒症一个重要发病机制,戊乙奎醚预处理可能通过抑制该细胞的活性而减轻脓毒症的严重程度。

成年人脂肪源间充质干细胞治疗急性移植物抗宿主病后CD_8^+T细胞亚群的变化

目的初步探讨成年人脂肪源间充质干细胞(AMSC)治疗急性移植物抗宿主病(aGVHD)的分子机制。方法3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD的患者,以每1kg体重2×106个细胞剂量静脉输注AMSC;首先应用尼龙毛柱分离外周血T淋巴细胞,再经CD8磁珠分选出CD+8T淋巴细胞,应用流式细胞术检测发生aGVHD患者使用AMSC前后外周血CD+8T细胞亚群的变化。结果与输注AMSC前相比,输注AMSC后,CD+8T细胞中的CD+8CD2-8亚群显著上调,同时,患者的aGVHD得以有效控制。结论AMSC治疗aGVHD的作用机制可能与其上调CD+8CD2-8T细胞亚群有关,CD+8T细胞可能是AMSC作用的靶细胞。

重组人纤维连接蛋白诱导的CIK细胞的生物学特性和对肺癌细胞株杀伤活性的体外研究

背景与目的CIK细胞是过继免疫治疗的重要手段之一,简化体外培养过程从而提高其增殖率和杀瘤活性仍是目前研究的一个热点课题。本研究观察重组人纤维连接蛋白(recombinant human fibronectin,RN)诱导CIK细胞的生物学特性,建立一种高效、简便的体外CIK细胞扩增方法。方法抽取10名健康人外周静脉血各50mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,分别采用RN诱导法和传统方法培养CIK细胞,记录细胞增殖数;用流式细胞术测定免疫细胞表型和分泌IFN-γ、IL-4、穿孔素和颗粒酶B细胞的百分比;用MTT法测定CIK细胞对4种人肺癌细胞株的体外杀伤率。结果RN诱导的CIK细胞扩增倍数为传统方法的2.0倍-3.5倍,具有统计学差异(P<0.05);RN诱导组和传统方法组CD3+CD16+CD56+细胞绝对数分别增加了3778倍和2069倍;RN诱导组细胞中CD3+CD8+细胞比例明显高于传统方法组(P<0.05);但CD3+CD4+细胞比例无统计学差异(P>0.05);对4种肺癌细胞株的体外杀伤活性无统计学差异(P>0.05)。RN诱导的CIK较诱导前:分泌IFN-γ的细胞比例明显增加;分泌IL-4的细胞比例略有降低;释放穿孔素、颗粒酶B的阳性细胞比例较诱导前增加。结论RN诱导法是一种高效、简便的体外扩增CIK方法,可以替代传统方法。

尖锐湿疣患者皮损及外周血CD4^+和CD8^+细胞免疫功能的检测

目的通过对尖锐湿疣(CA)患者皮损及外周血CD4+和CD8+细胞免疫功能检测的分析,探讨尖锐湿疣患者细胞免疫功能的变化及其对CA的影响。方法通过流式细胞仪(FCM)对40例CA患者及20名正常人外周血进行反映细胞免疫功能的T淋巴细胞亚群的检测,实验采用免疫组化的方法对40例CA皮损样本中CD4+和CD8+细胞的数目进行检测。结果CA患者外周血及皮损较正常对照组中的CD8+细胞百分率增加,CD4+细胞百分率及CD4+/CD8+比值降低。结论CA患者存在全身和局部的细胞免疫功能低下,而且局部皮损细胞免疫功能低下可能在CA的发病中具有重要作用。

吸毒人群中HIV、TB感染者免疫细胞和细胞因子监测

目的测定吸毒人群外周血中T细胞亚群、Thl-Th2细胞因子,评价HIV、TB感染后免疫学指标的变化。方法对吸毒人群中9例HIV阳性者、5例患活动性结核病者、40例吸毒人群中健康者及40例正常人群,应用流式细胞技术(FCM)分别检测CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞百分率,计算CD3+CD4+/CD3+CD8+即Th细胞与Ts细胞的比值,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th1(IL-2、IFN-γ)/Th2(IL-4、IL-6)细胞因子浓度。结果HIV感染组、TB感染组及吸毒者健康组、正常人组各项指标间差异有统计学意义,CD3+CD4+/CD3+CD8+即Th细胞与Ts细胞的比值及Th1(IL-2、IFN-γ)浓度均明显低于对照组,HIV<TB<吸毒人员健康者<正常人群(P<0.05)。而Th2(IL-4、IL-6)细胞因子浓度则明显高于正常人群。结论CD3+CD4+/CD3+CD8+即Th细胞与Ts细胞的比值及Th1(IL-2、IFN-γ)/Th2(IL-4、IL-6)细胞因子浓度的检测在评价HIV、TB感染者的免疫状况、进展和预后判断等方面具有重要作用。

生物反应调节剂对结核性腹膜炎合并肠梗阻外科治疗的疗效观察

目的观察CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T-细胞亚群的表达水平在结核性腹膜炎合并肠梗阻患者外科治疗中的作用。方法选择行部分肠切除一期吻合术的86例结核性腹膜炎合并肠梗阻的患者,将应用免疫反应调节剂的49例病人做为治疗组,将未使用免疫反应调节剂的的37例病人做为对照组,治疗组术前术后给予"RHZE+左氧氟沙星+营养支持"加用生物反应调节剂治疗;对照组术前术后给予"RHZE+左氧氟沙星+营养支持"治疗。观察两组治疗前后的表达情况及术后肠瘘发生率情况。结果 T细胞亚群测定结果显示治疗组治疗前后CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+的变化与对照组治疗前后的变化在统计学上差异具有显著性(P<0.05);治疗组49例术后发生肠瘘2例,经换药治疗后1周好转;对照组37例发生肠瘘7例,经加强营养支持及换药治疗后6例好转,1例死亡。两组差异具有显著性(P<0.05)。结论通过外源性生物反应调节剂,调节机体T淋巴细胞亚群CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+的表达水平能提高机体免疫力,能显著降低术后因感染诱发肠瘘的几率,故调节剂可作为结核性腹膜炎合并肠梗阻外科治疗的免疫辅助治疗方法。