干预CDl37-CDl37配体轴对载脂蛋白E基因敲除小鼠活化T细胞核因子c1表达的影响

目的 探讨CDl37-CDl37配体（CDl37L）相互作用对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠活化T细胞核因子c1（NFATcl）表达的影响。方法采用ApoE^-/-小鼠颈动脉硅胶圈置人法快速建立动脉粥样斑块模型。分别采用免疫组织化学及流式细胞术检测小鼠颈动脉斑块及脾脏淋巴细胞中NFATcl表达。体外培养的小鼠淋巴细胞NFATclmRNA和蛋白表达分别应用RT-PCR和流式细胞技术检测。结果体内抗CDl37特异性刺激CDl37．CDl37L轴后，斑块及脾脏中淋巴细胞中NFATcl表达增加。体外培养的淋巴细胞中抗CDl37刺激CDl37-CDl37L轴后，淋巴细胞NFATclmRNA和蛋白表达明显上调，刺激浓度以20μg/m1时作用最强，刺激时间24h最佳（P〈0．05）。抗CDl37L特异性阻断CDl37-CDl37L轴能明显抑制NFATclmRNA及蛋白表达，浓度以20μg／ml时抑制作用最强，抑制时间24h最佳（P〈0．05）。结论CDl37-CDl37L相互作用能调控ApoE。-小鼠NFATcl的表达。

人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点

目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点。方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达。结果:诱导培养5～7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%。结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加。为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础。

重组可溶性人CD137在CHO细胞中的表达

目的:获得表达人可溶性CD137抗原的dhfr-CHO细胞株。方法:将CD137-hIgG1Fc-pCD-NA3重组质粒及pSV2-dhfr质粒,运用脂质体介导法共转染CHO细胞。用G418筛选出阳性克隆,MTX递增浓度诱导人可溶性CD137在dhfr-CHO细胞的表达。运用RT-PCR检测CD137mRNA转录水平,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人CD137可溶性蛋白在CHO细胞中的表达。结果:重组质粒转化细胞进行RT-PCR后,得到一大小为558bp的特异性条带,与人CD137胞膜外区一致;重组质粒转化细胞进行SDS-PAGE得到一大小约为37KDa的条带,与人CD137-hIgG1Fc融合蛋白大小基本一致。结论:获得了表达人可溶性CD137的dhfr-CHO细胞株,为获得纯化的CD137抗原、制备CD137单抗奠定了基础。

CD137信号对CIK细胞增殖和功能的调节作用

目的:探讨CD137信号对CIK细胞的增殖和功能调节作用。方法:分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),实验组在常规CIK培养体系中加入CD137单抗(CD137-CIK组),对照组在常规CIK培养体系中加入鼠IgG1同型对照(IgG1-CIK组)。苔盼蓝拒染法细胞计数分析细胞增殖;流式细胞术检测细胞表型及细胞内因子的表达;LDH酶释放法检测CIK细胞杀伤活性。结果:CD137-CIK组细胞体外扩增效率显著高于IgG1-CIK组,CD137-CIK组细胞浓度最高达(9.87±0.57)×106/ml;IgG1-CIK组最高为(7.02±0.68)×106/ml;CD137-CIK组和IgG1-CIK组细胞中CD3+CD56+细胞比例至28天分别达到(39.86±4.69)%和(29.14±5.12)%(P<0.05);经CD137mAb作用后,其体外杀伤肺癌细胞株A549活性明显高于对照组(P<0.05);第0、7、14、21天流式检测IFN-γ表达,实验组CD3+CD56+细胞IFN-γ的表达显著高于对照组。结论:CD137mAb介导的共刺激信号可以促进CIK细胞的体外增殖活性,并增强CIK细胞体外抗瘤作用。其中CD137-CIK组CD3+CD56+细胞的比例及其IFN-γ表达显著提高,这可能是CD137信号增强CIK抗瘤作用的重要原因。

CD137研究新进展

CD137是近年新发现的肿瘤坏死因子受体超家族的新成员 ,是一种新的共刺激信号分子。它参与T细胞的活化、分化、增殖、凋亡、信号传导及细胞外粘附 ;活化的CD137参与调节细胞因子对粒细胞的抗凋亡作用 ;CD137作为一个独特的潜在的单核细胞存活因子 ,可诱导单核细胞存活、增殖与粘附 ;CD137作为一种重要的受体亦参与调节树突状细胞 (DC)的功能 ;CD137的配体 (CD137L)表达于癌细胞表面 ,在肿瘤免疫及治疗中起作用 ;自身免疫病中慢性活化的自身反应T细胞表达CD137,CD137的异常表达与免疫疾病的发生存在某种关系 ;CD137在改善骨髓移植后异源T细胞的移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病 (GVL)等异源免疫反应中亦起重要作用。

Pristane诱导狼疮模型鼠共刺激分子的表达变化

探讨共刺激分子在Pristane诱导狼疮鼠体内的表达变化及意义。采用6～8周龄雌性BALB／c鼠单次腹腔注射0．5ml Pristane，对照组注射0．5ml PBS。通过尿蛋白试纸法检测尿蛋白含量；ELISA法检测外周血自身抗体（抗ds-DNA、南Sm／RNP）含量；HE染色评估病理学损伤；流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏淋巴细胞表面共刺激分子CD28、CD40L/D40、CDl37／CDl37I。的表达；免疫组织化学法检测小鼠组织中共刺激分子CD28、CD40L、CDl37的表达。实验结果点示：与对照组小鼠相比，模型组小鼠出现多种SLE样临床症状和体征；模型组小鼠外周血和脾脏淋巴细胞表面共刺激分jCD28，一个月时表达增高，后逐渐下降至低于正常对照组（P〈0．05）；CD40三个月时表达升高，六个月时表达降低至于正常对照组（P〈0．05），而CD40I。的表达变化无统计学意义（P〉0．05）；CDl37／CDl37L三个月时表达增高并维持高表达状态至处死（P〈O．05）；狼疮鼠肺组织中共刺激分子CD28、CD40L和CDl37呈现高表达状态，其他组织中变化并不明显。以上结果提示，Pristane诱导狼疮鼠体内共刺激分子表达发生异常变化，可能与其疾病的发生发展有密切关系，为临床治疗系统性红斑狼疮提供了研究基础。

CD137分子通过微小RNA-145a-5p调控载脂蛋白E-/-小鼠活化T细胞核因子c1表达

目的 探讨CD137分子信号通路是否通过微小RNA-145a-5p （miR-145a-5p）调控活化T细胞核因子c1（NFATc1）表达.方法 选取18只载脂蛋白（Apo）E-/-小鼠,8周龄,颈动脉硅胶圈植入建立模型后,根据随机区组法分为对照组、CD137刺激组和CD137抑制组,每组6只;采用荧光定量PCR（qRT-PCR）检测小鼠颈动脉斑块以及平滑肌细胞中miR-145a-5p含量;免疫荧光检测斑块中NFATc1分布,qRT-PCR、Western blot方法检测小鼠体内、外NFATc1表达.用脂质体转染miR-145a-5p的拟似物和抑制物进入血管平滑肌细胞（VSMC）;通过分子克隆技术构建NFATc1真核表达载体p3xFLAG-NFATc1、p3xFLAG-NFATc 1-3＇ UTR.构建双荧光素酶报告载体psicheck2-NFATc1,并通过同源重组法构建psicheck2-NFATc1的突变载体psicheck2-NFATc1-Mut转染细胞后分为正常组和突变组.结果 CD137刺激组ApoE-/-小鼠斑块及VSMC中miR-145a-5p水平明显低于对照组（分别为0.21 ±0.06比1.00±0.00,P＜0.05;0.22±0.07比0.50±0.12,P＜0.05）,斑块内NFATc1表达高于对照组（P ＜0.05）;CD137抑制组ApoE-/-小鼠斑块及VSMC中miR-145a-5p水平低于CD137刺激组（分别为0.74±0.17比0.21 ±0.06,P＜0.05;0.78 ±0.12比0.22 ±0.07,P＜0.05）,而斑块内NFATc1表达高于CD137刺激组（P＜0.05）.miR-145a-5p的拟似物处理组中NFATc1表达低于对照组,而抑制物处理组中NFATc1表达高于对照组（P＜0.05）;p3xFLAG-NFATc1-3＆#39; UTR过表达组中外源性NFATc1表达低于对照组（P＜0.05）;双荧光素酶实验中,正常组中拟似物处理组荧光水平明显低于对照组（0.56±0.08比1.00 ±0.00,P＜0.05）,突变组中荧光水平与对照组比较差异无统计学意义.结论 CD137分子能够通过miR-145a-5p调控NFATc1的表达.

CD137信号及CD137L逆向信号在动脉粥样硬化中作用的研究进展

近年研究显示，炎症一免疫反应在动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）过程中发挥重要作用。共刺激分子CD137及其配体CD137L相互作用是激活T淋巴细胞的关键第二信号，参与细胞的免疫应答、免疫耐受等多种反应。CDl37主要表达于活化的T淋巴细胞表面，而CD137L主要表达于抗原提呈细胞（antigenpresentingceils，APC）表面，如单核．巨噬细胞、树突状细胞（dendriticcells，DC）等。