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基于真核CMV启动子构建猪瘟病毒感染性cDNA克隆与病毒拯救
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作者 关飞虎 王静 +6 位作者 宋亚芬 温立佳 田野 蒋颖 杨承槐 张辉 张乾义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期561-567,607,共8页
为建立猪瘟病毒(CSFV)反向遗传操作系统,本研究将CSFV石门株(SM)全基因组克隆至pBAC11载体中,并采用重叠延伸PCR方法在病毒基因组5'端和3'端分别加入CMV真核启动子序列和RzBGH序列,并将其基因组nt2809的碱基C突变为T,将原有的Af... 为建立猪瘟病毒(CSFV)反向遗传操作系统,本研究将CSFV石门株(SM)全基因组克隆至pBAC11载体中,并采用重叠延伸PCR方法在病毒基因组5'端和3'端分别加入CMV真核启动子序列和RzBGH序列,并将其基因组nt2809的碱基C突变为T,将原有的AfeⅠ酶切位点突变消失作为拯救病毒的遗传标记。将构建的质粒转染PK-15细胞培养后,收集细胞上清盲传3代后通过RT-PCR扩增蛋白编码基因,并经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。RT-PCR鉴定结果显示扩增到CSFV特异性基因;IFA结果显示接种病毒的细胞出现绿色荧光。表明病毒拯救成功,将其命名为BAC-rSM。将BAC-rSM株在PK-15细胞中连续传18代,将第18代病毒经RT-PCR扩增E2基因,并对遗传标记的位点经Afe I酶切和鉴定,分析BAC-rSM病毒的遗传稳定性,结果显示第18代BAC-rSM株遗传标记稳定存在,表明拯救的病毒具有遗传稳定性。将BAC-rSM和SM株病毒分别以MOI 1感染PK-15细胞,在感染后不同时间点收获病毒并测定病毒滴度,结果显示BAC-rSM和SM株生长动力学特征基本一致。对第18代BAC-rSM株与SM株进行全基因组序列比对分析,利用在线软件npsa-prabi.ibcp.fr/对Erns和E2蛋白二级结构预测,采用荧光定量PCR(qPCR)对BAC-rSM和SM株感染PK-15细胞中IFN-βmRNA的转录水平。全基因测序比对分析结果显示,BAC-rSM株基因组共存在46个碱基突变,经预测其Erns和E2的突变导致各自的二级结构改变;qPCR检测结果显示,相对SM感染的PK-15细胞,BAC-rSM感染后8 h和24 h PK-15细胞中IFN-βmRNA的转录水平显著或极显著降低(P<0.05、P<0.01)。本研究建立了一种简单、操作方便的CSFV反向遗传操作系统的方法,为进一步开展CSFV的分子生物学、毒力决定因素、分子发病机制、疫苗开发和病毒与宿主相互作用的研究提供了新的技术方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 cmv启动子 感染性克隆 反向遗传操作系统
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CMV通过影响效应因子MpC002的表达干预桃蚜种群增长的机制
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作者 毛立杰 梁晓 +3 位作者 刘迎 伍春玲 韩晓燕 陈青 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期271-277,共7页
【目的】桃蚜是CMV的重要传毒媒介,效应因子MpC002在桃蚜取食寄主过程中发挥关键作用,CMV和MpC002均存在于蚜虫唾液中,但两者如何相互作用从而利于病毒传播知之甚少。为探讨CMV影响MpC002表达干预桃蚜种群增长的机制。【方法】利用绝对... 【目的】桃蚜是CMV的重要传毒媒介,效应因子MpC002在桃蚜取食寄主过程中发挥关键作用,CMV和MpC002均存在于蚜虫唾液中,但两者如何相互作用从而利于病毒传播知之甚少。为探讨CMV影响MpC002表达干预桃蚜种群增长的机制。【方法】利用绝对定量的qPCR法建立CMV拷贝数检测的标准曲线方程y=-3.1631x+39.763。【结果】桃蚜取食CMV感染辣椒10 s体内CMV含量最高,然后随着取食时间的延长CMV含量不断降低,其获毒过程符合非持久性传毒特征。取食CMV感染辣椒5 min-24 h的桃蚜MpC002表达量显著降低至取食前的37%-58%;取食CMV感染辣椒的3龄、4龄若蚜和1-4龄若蚜的平均发育历期分别为1.58 d、2.07 d和6.47 d,显著长于取食未处理辣椒的1.25 d、1.47 d和5.33 d,但1龄和2龄若蚜发育历期在CMV感染辣椒和未处理辣椒间无显著差异;平均产蚜期、总产蚜量和单日平均产蚜量分别为10.03 d、16.87头和1.67头,显著短于取食未处理辣椒桃蚜的14.27 d,39.73头和2.82头;净增殖率、内禀增长率、周限增长率分别为16.87、0.21、1.24,均显著低于取食未处理辣椒桃蚜的39.73、0.31、1.36,平均世代周期(13.02 d)和种群加倍时间(3.26 d)均显著长于取食未处理辣椒桃蚜的12.00 d和2.30 d。【结论】CMV能显著抑制桃蚜MpC002的表达,从而延长其发育历期和降低其繁殖,最终抑制其种群的增长。 展开更多
关键词 cmv 辣椒 桃蚜 效应因子MpC002 种群增长
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痰和肺泡灌洗液CMV-DNA检测的临床意义探讨 被引量:2
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作者 杜云 陈强 +3 位作者 章高平 胡玉 朱晓华 吴爱民 《江西医药》 CAS 2015年第12期1375-1378,共4页
目的寻找早期诊断巨细胞病毒肺炎的指标。方法选取实验50例小儿肺炎病例,所有患儿血CMV-Ig M均为阳性,分为婴儿组及幼儿组,收集痰液及肺泡灌洗液,采用荧光实时定量PCR技术检测CMV-DNA,分析对比痰液及肺泡灌洗液巨细胞病毒检出情况;对照... 目的寻找早期诊断巨细胞病毒肺炎的指标。方法选取实验50例小儿肺炎病例,所有患儿血CMV-Ig M均为阳性,分为婴儿组及幼儿组,收集痰液及肺泡灌洗液,采用荧光实时定量PCR技术检测CMV-DNA,分析对比痰液及肺泡灌洗液巨细胞病毒检出情况;对照组为12例血CMV-Ig M为阳性的非肺炎病例,完善肺泡灌洗液CMV-DNA检测,比较实验组和对照组的肺泡灌洗液CMV-DNA检测结果。结果⑴对比实验组和对照组的肺泡灌洗液CMV-DNA检测结果,两组比较,差异有统计学意义(χ^2=12.402,P〈0.001)。⑵实验组中,对比痰及肺泡灌洗液CMV-DNA检测结果,两组比较,差异无统计学意义(χ^2=1.000,P=0.317)。同时对比痰及肺泡灌洗液高载量组(CMV-DNA〉1×105copies/ml),两组比较,差异有显著统计学意义(χ^2=19.385,P〈0.001)。⑶婴儿组与幼儿组痰CMV-DNA高载量组阳性率进行对比,两组比较,差异有统计学意义(χ^2=5.965,P〈0.05);婴儿组与幼儿组肺泡灌洗液CMV-DNA高载量组阳性率进行对比,两组比较,差异有统计学意义(χ^2=3.861,P〈0.05)。结论肺泡灌洗液CMV-DNA检测结果较痰CMV-DNA检测结果更有意义,不同年龄段巨细胞病毒肺炎的检出率不同。 展开更多
关键词 巨细胞病毒肺炎 cmv-IgM cmv-DNA检测 支气管肺泡灌洗液cmv-DNA检测
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CMV-DNA和IgM抗体检测对慢性重型乙型肝炎患者活动性巨细胞病毒感染的诊断价值评估 被引量:1
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作者 褚金国 吕定丰 +3 位作者 相代荣 钱国清 谢一潋 李国祥 《现代实用医学》 2017年第3期292-294,421,共4页
目的评估CMV-DNA和IgM抗体检测对慢性重型乙型肝炎患者活动性巨细胞病毒感染的诊断价值。方法 100例慢性重型乙型肝炎(CSHB)患者采用免疫组化二步法检测CMV-pp65抗原、荧光定量PCR法检测CMV-DNA及酶联免疫吸附反应法(ELISA)检测CMV-IgM... 目的评估CMV-DNA和IgM抗体检测对慢性重型乙型肝炎患者活动性巨细胞病毒感染的诊断价值。方法 100例慢性重型乙型肝炎(CSHB)患者采用免疫组化二步法检测CMV-pp65抗原、荧光定量PCR法检测CMV-DNA及酶联免疫吸附反应法(ELISA)检测CMV-IgM抗体,以CMV-pp65抗原为对照,分析比较不同检测方法的差异性。结果 100例CSHB患者CMV-DNA阳性27例,阳性率为27%(27/100);CMVpp65抗原阳性45例,阳性率为45%(45/100);差异有统计学意义(P<0.05)。CMV-IgM抗体阳性4例,阳性率为4%(4/100),明显低于CMV-pp65抗原和CMV-DNA阳性率(均P<0.05)。CMV-pp65与CMVDNA诊断一致性分析采用Kappa检验,Kappa值为0.483,在0.4~0.7之间,表示吻合程度一般。CMVDNA诊断巨细胞病毒感染的灵敏度为0.486,特异度为0.906;CMV-IgM抗体诊断巨细胞病毒感染的灵敏度为0.064;特异度为0.981。CMV-DNA诊断巨细胞病毒感染的ROC曲线下面积(AUC)为0.687,P=0.001;IgM抗体诊断巨细胞病毒感染的AUC为0.522,P=0.699。结论 CMV-DNA诊断慢性重型乙型肝炎患者合并活动性巨细胞病毒感染的价值不如CMV-pp65抗原,但CMV-DNA可作为CMV-pp65抗原诊断的对照和补充,而CMV-IgM抗体无诊断价值。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 慢性重型乙型肝炎 cmv-pp65抗原 cmv-DNA cmv-IgM抗体
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1例异基因造血干细胞移植术后并发CMV和EBV共激活患儿的护理
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作者 许淑惠 《全科护理》 2024年第1期196-198,共3页
异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是指将健康人的造血干细胞移植至病人体内,目的是帮助其重建造血和免疫功能。越来越多的研究已经证实allo-HSCT是地中海贫血病人能够重新获得生命... 异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是指将健康人的造血干细胞移植至病人体内,目的是帮助其重建造血和免疫功能。越来越多的研究已经证实allo-HSCT是地中海贫血病人能够重新获得生命的主要治疗方法,目前在各大移植中心广泛开展。 展开更多
关键词 异基因造血干细胞移植 巨细胞病毒 EB病毒 护理
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转CP基因线辣椒对CMV和CMV-RNA的抗病性比较 被引量:10
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作者 徐秉良 商鸿生 王旭 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期132-137,共6页
本试验以转化 CMV- CP和 TMV- CP基因线辣椒纯合系作试材 ,比较了接种 CMV粒体和CMV- RNA后的发病特点和叶片中的病毒含量。结果表明 :转化线辣椒不仅能抵抗 CMV粒体的侵染 ,而且还能抵抗 CMV- RNA的侵染。不论接种 CMV粒体或 CMV- RNA,... 本试验以转化 CMV- CP和 TMV- CP基因线辣椒纯合系作试材 ,比较了接种 CMV粒体和CMV- RNA后的发病特点和叶片中的病毒含量。结果表明 :转化线辣椒不仅能抵抗 CMV粒体的侵染 ,而且还能抵抗 CMV- RNA的侵染。不论接种 CMV粒体或 CMV- RNA,CP(+ )线辣椒的系统症状都延迟出现 ,显症株率和病害严重度级别大幅度降低 ,病毒增殖和运转受到抑制 ,接种叶片与新生叶片中的病毒含量明显减低。这一结果证实 CMV- RNA不能克服线辣椒由 CP基因介导的抗病性。 展开更多
关键词 转CP基因线辣椒 cmv cmv-RNA 抗病性 转基因线辣椒 抗病毒
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转化CMV-cP基因番茄对CMV病毒抗性鉴定 被引量:4
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作者 杨荣昌 徐鹤林 +5 位作者 余文贵 陆春贵 龙明生 刘春清 潘乃 陈章良 《上海农业学报》 CSCD 1995年第1期73-77,共5页
苗期人工接种,对转化CMV-cP基因的番茄品种8805R1~R4代进行接种CMV病毒试验。结果表明:黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因在番茄中的表达,对抑制CMV病毒病症状的表现及延迟其发展均起到一定作用。8805R3代对CM... 苗期人工接种,对转化CMV-cP基因的番茄品种8805R1~R4代进行接种CMV病毒试验。结果表明:黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因在番茄中的表达,对抑制CMV病毒病症状的表现及延迟其发展均起到一定作用。8805R3代对CMV的抗性明显高于R1代,R4代抗性已基本稳定。当高浓度的CMV病毒侵染R4代植株时,也会出现100%的发病率,但它们的新生枝叶能正常生长并开花结果。利用半叶法测定8805R。(cp+)及8805R4(cp-)接种叶和新生叶病毒浓度,结果是:cp(+)和cP(-)在接种叶上病毒含量相当,但cP(+)的新生叶中病毒含量明显低于cP(+)的等位叶,说明CMV-cP基因的存在,限制了CMV病毒粒子的迁移和繁衍,最终也减轻了CMV病毒的危害程度。 展开更多
关键词 番茄 cmv-cp 基因 cmv 病毒 抗性鉴定
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158例乙肝患者重叠感染CMV的临床观察 被引量:2
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作者 王爱林 袁宝山 +2 位作者 孙淑艳 吴杨 孟庆斌 《中国实验诊断学》 2005年第5期786-787,共2页
目的了解乙肝病毒(HBV)感染者及健康人感染巨细胞病毒(CMV)状态及临床特征。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对158例乙肝患者和160例健康体检者进行抗CMV-IgM和抗CMV-IgG检测。结果乙肝患者血清抗CMV-IgM阳性率为22.15%(35/158),抗CM... 目的了解乙肝病毒(HBV)感染者及健康人感染巨细胞病毒(CMV)状态及临床特征。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对158例乙肝患者和160例健康体检者进行抗CMV-IgM和抗CMV-IgG检测。结果乙肝患者血清抗CMV-IgM阳性率为22.15%(35/158),抗CMV-IgG阳性率为78.48(124/158);而健康对照者血清抗CMV-IgM阳性率为2.5%(4/160),抗CMV-IgG阳性率为86.25%(138/160),两者抗CMV-IgG阳性率比较无显著性差异(P>0.05)而抗CMV-IgM阳性率比较有显著性差异(P<0.01)。结论抗CMV-IgM在乙肝患者的阳性率高于健康人,差异有非常显著性意义。可能因HBV感染诱导机体出现免疫应答低下或免疫调节功能紊乱,使机体对CMV易感或激活体内原已潜伏的CMV,从而使乙肝患者伴有活动性CMV感染,加重肝细胞活动性炎症反应和损伤程度。 展开更多
关键词 cmv HBV cmv-IgM
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Association between renin-angiotensin system inhibitor and the risk of CMV pneumonia:a Mendelian randomization study
9
作者 Jian-Sheng Gao Hui-Min Liu Huang-Yao Ru 《Clinical Research Communications》 2024年第4期5-10,共6页
Background:Cytomegalovirus(CMV)reactivation is linked to a high mortality rate,especially among the elderly.Prior research suggests that renin-angiotensin system(RAS)inhibitors may influence both the onset and prognos... Background:Cytomegalovirus(CMV)reactivation is linked to a high mortality rate,especially among the elderly.Prior research suggests that renin-angiotensin system(RAS)inhibitors may influence both the onset and prognosis of pneumonia.This study aims to examine the causal relationship between RAS inhibitor use and the risk of CMV pneumonia using Mendelian randomization(MR)analysis.Methods:We conducted an analysis using data from two genome-wide association studies(GWAS)involving individuals of European ancestry.This dataset included individuals treated with RAS inhibitors and those with CMV pneumonia.We assessed the relationship between RAS inhibitor use and CMV pneumonia risk using the inverse variance weighted(IVW)method.The results were further evaluated for pleiotropy,heterogeneity,and robustness.Results:The Mendelian randomization(MR)analysis revealed a causal relationship between RAS inhibitor use and an increased risk of CMV pneumonia(IVW:odds ratio[OR]=2.73;95%confidence interval[CI]=1.11-6.73;P=0.028).Conclusions:Our finding indicate a positive causal relationship between the use of RAS inhibitors and the onset of CMV pneumonia. 展开更多
关键词 Mendelian randomization cmv pneumonia renin angiotensin system inhibitors
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巨细胞病毒性肝炎尿CMV-DNA及血PP_(65)检测的临床意义 被引量:3
10
作者 江佩芳 茅君卿 《浙江预防医学》 2005年第6期74-74,76,共2页
关键词 巨细胞病毒性肝炎 cmv-DNA 临床意义 PP65 2002~2003年 检测 主要临床表现 肝功能异常 消化道出血 cmv感染 降低死亡率 肝脏肿大 婴幼儿期 颅内出血 早期诊断 尿 肝硬化 并发症 药治疗 抗病毒 活动性
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血清CMV-IgM及CMV-IgG抗体检测对住院患儿CMV感染筛查的临床意义
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作者 张安全 吴庆飞 +1 位作者 彭文娟 薛立军 《中国医学工程》 2015年第9期38-38,41,共2页
目的研究血清CMV-Ig M及CMV-Ig G抗体检测对住院患儿CMV感染筛查的临床意义。方法对我市西北部三家医院(宝安区福永人民医院、宝安区松岗人民医院、光明新区人民医院)的4 685例伴有黄疸、不明原因低出生体重、肺炎、肝功能损害等疑似... 目的研究血清CMV-Ig M及CMV-Ig G抗体检测对住院患儿CMV感染筛查的临床意义。方法对我市西北部三家医院(宝安区福永人民医院、宝安区松岗人民医院、光明新区人民医院)的4 685例伴有黄疸、不明原因低出生体重、肺炎、肝功能损害等疑似病例的住院患儿进行CMV感染筛查,以微粒子酶免化学发光法定量检测血清CMV-Ig M及CMV-Ig G抗体,从而了解我市西北部小儿CMV感染现状以及血清CMV-Ig M及CMV-Ig G抗体检测在住院患儿CMV感染筛查中的应用价值。结果 4 685例住院患儿中CMV感染者1 520例,感染率32.48%,新生儿感染651例,发病率62.84%(651/1036),1个月至1岁410例,发病率51.64%(410/794),1~3岁549例,发病率44.93%(549/1222),3~10岁523例,发病率32.03%(523/1633),CMV Ig M阳性846例,阳性率55.66%(846/1520),CMV Ig G阳性率63.42%(964/1520)。结论住院患儿年龄越低则CMV感染发病率越高,新生儿及1周岁以下儿童发病率较高,对住院患儿应定期进行CMV筛查,血清CMV-Ig M及CMV-Ig G抗体检测可作为辅助诊断措施进行应用。 展开更多
关键词 血清cmv-IgM cmv-IgG抗体 筛查 cmv感染
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基于外壳蛋白基因序列的百香果CMV快速检测 被引量:1
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作者 张春柳 《宁德师范学院学报(自然科学版)》 2021年第2期191-198,205,共9页
为提高百香果黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的检测效率,根据Gen Bank数据库中的CMV外壳蛋白(coat protein,CP)的基因核苷酸序列保守区域设计引物,在单一PCR检测体系的基础上,建立双重PCR检测体系.结果发现:样本中含有2个CMV... 为提高百香果黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的检测效率,根据Gen Bank数据库中的CMV外壳蛋白(coat protein,CP)的基因核苷酸序列保守区域设计引物,在单一PCR检测体系的基础上,建立双重PCR检测体系.结果发现:样本中含有2个CMV的外壳蛋白基因序列,分别命名为PeCMV-LJ和PeCMV-1.测序结果显示,克隆的PeCMV-LJ和PeCMV-1重合片段只相差一个碱基,基因序列大小分别为619、301 bp;生物信息学分析显示,克隆的PeCMV-LJ和PeCMV-1片段与已报道的其他CMV分离物的一致性介于94.84%~97.58%;CMV的CP基因进化分析结果表明,百香果CMV与黄瓜CMV进化关系最近.利用3条百香果CMV的CP基因特异引物的设计,可同时检测病毒3个特异性位点,避免假阳性的产生,1对百香果EF1a内参引物的使用,可以检测百香果cDNA合成质量,避免假阴性的产生,整个检测过程可以在4 h内完成.综上,本研究建立的双重PCR体系能够用于CMV的快速检测. 展开更多
关键词 百香果 cmv Pecmv-LJ基因 Pecmv-1基因 PCR
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双抗TMV+CMV辣椒转基因工程植株的再生及抗病毒鉴定 被引量:31
13
作者 毕玉平 单蕾 +3 位作者 王兴军 徐平丽 周钟信 米景九 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1999年第3期103-108,共6页
在构建 T M Vcp 和 C M Vcp 双价表 达载体和 建立 辣 椒高 效转 化 体系 的基 础 上用 农杆 菌 介导法转化 辣椒栽培 品种农 大40 和湘 研一号。 对52 个抗 卡那霉 素再生植 株进行点 杂交 鉴定 ,结果 16株为 T ... 在构建 T M Vcp 和 C M Vcp 双价表 达载体和 建立 辣 椒高 效转 化 体系 的基 础 上用 农杆 菌 介导法转化 辣椒栽培 品种农 大40 和湘 研一号。 对52 个抗 卡那霉 素再生植 株进行点 杂交 鉴定 ,结果 16株为 T M Vcp 和 C M Vcp 阳 性,而 P C R 检测发 现 其中 有 2 株 为假 阳性 株。 进一 步 温室 攻毒 试 验 表明有7 个 阳性转基 因植株 对 T M V 和 C M V 同时表 现为免疫 。 展开更多
关键词 TMV cmv 辣椒 转基因植株 抗病毒 鉴定
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我国不同CMV分离物2b基因片段的RT-PCR扩增及其序列比较 被引量:11
14
作者 庄木 王晓武 +3 位作者 谢丙炎 郑文光 冯兰香 方智远 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期146-150,共5页
本研究根据黄瓜花叶病毒2b基因的保守序列设计引物,利用一步RT-PCR技术对多个不同寄主和不同地理来源的黄瓜花叶病毒分离物的2b基因片段进行扩增,获得了含该基因全长约90%的cDNA片段(300bp)。序列测定与比较分析结果表明,国内不同CMV... 本研究根据黄瓜花叶病毒2b基因的保守序列设计引物,利用一步RT-PCR技术对多个不同寄主和不同地理来源的黄瓜花叶病毒分离物的2b基因片段进行扩增,获得了含该基因全长约90%的cDNA片段(300bp)。序列测定与比较分析结果表明,国内不同CMV分离物2b基因片段核酸序列同源性达93%以上,推测的氨基酸序列同源性超过90%,且均属于亚组Ⅰ。 展开更多
关键词 cmv分离物 2b基因 基因片段 RT-PCR扩增 黄瓜 花叶病毒 氨基酸 序列同源性
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CMV与SP双启动子增强外源基因在小鼠骨骼肌中的表达效率 被引量:9
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作者 章倩倩 刘松财 +2 位作者 戴建威 任晓慧 张永亮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期554-559,共6页
构建分别含有CMV、肌肉特异启动子SP及双启动子CMV-SP的真核报告基因EGFP表达载体(pCMV-EGFP、pSP-EGFP及pCMV-SP-EGFP)和生长激素释放因子(GRF)表达载体(pCMV-GRF、pSP-GRF和pCMV-SP-GRF).将3种EGFP表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌.注射... 构建分别含有CMV、肌肉特异启动子SP及双启动子CMV-SP的真核报告基因EGFP表达载体(pCMV-EGFP、pSP-EGFP及pCMV-SP-EGFP)和生长激素释放因子(GRF)表达载体(pCMV-GRF、pSP-GRF和pCMV-SP-GRF).将3种EGFP表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌.注射后1周、2周、3周以及4周时,分别提取肌肉组织RNA,应用半定量RT-PCR检测报告基因(EGFP)的表达量,发现pCMV-SP-EGFP组EGFP表达量显著高于pCMV-EGFP组和pSP-EGFP组(P<0.01);经荧光检测得到了较强的荧光信号.将3种GRF表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌,在注射后每隔10d记录小鼠累积增重,采血并用RIA法测定血清胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)浓度,结果pCMV-SP-GRF组累积增重、IGF-I浓度分别高于生理盐水组、pCMV-GRF组和pSP-GRF组(P<0.05).结果表明:CMV与SP两种启动子组合,在小鼠骨骼肌内使外源基因表达效率提高.本研究为提高外源基因在肌肉组织的表达提供了新的途径. 展开更多
关键词 cmv启动子 SP启动子 双启动子 EGFP GRF IGF-Ⅰ
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CP基因转化的线辣椒抗卡那霉素和抗CMV特性的遗传 被引量:25
16
作者 商鸿生 王旭 徐秉良 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2001年第5期103-106,共4页
利用根癌土壤杆菌 ,采用叶盘法转化线辣椒 (Capsicum annuum var.longunt)优良品种陕 82 12 ,建成了能同时表达 CMV和 TMV外壳蛋白基因 (CP基因 )的 T1 代纯合系。以其自交 T2 ~ T4代 ,以及 T2 代植株与未转化陕 82 12杂交的 F1 代和 ... 利用根癌土壤杆菌 ,采用叶盘法转化线辣椒 (Capsicum annuum var.longunt)优良品种陕 82 12 ,建成了能同时表达 CMV和 TMV外壳蛋白基因 (CP基因 )的 T1 代纯合系。以其自交 T2 ~ T4代 ,以及 T2 代植株与未转化陕 82 12杂交的 F1 代和 F2 代群体为试材 ,研究了抗卡那霉素和抗黄瓜花叶病毒 (CMV)特性的遗传传递规律。结果发现 ,抗卡那霉素标记基因和抗病性基因在自交和杂交各代都能稳定地高效表达 ;两者在自交各代纯合 ;在杂交 F1 代抗药性和抗病性都表现为显性 ;在杂交 F2 代 ,抗药植株对敏感植株 ,以及抗病植株对感病植株的分离比都符合 3∶ 1的理论比例。 展开更多
关键词 转基因线辣椒 CP基因 cmv 卡那霉素 抗病性 遗传规律 育种
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海藻提取物防治番茄CMV病毒效果及其机理研究 被引量:10
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作者 郭晓冬 孙锦 +2 位作者 韩丽君 马书智 于庆文 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期313-316,共4页
探讨了海藻提取物对番茄CMV病毒的防治作用,结果表明:海藻提取物对CMV有很好的体外钝化效果和预防CMV侵染的作用,其中以3.0g.L-1的浓度较为合理;番茄接种CMV病毒后施用海藻提取物,病株的SOD、POD酶活性明显升高,并明显降低了病株的病毒... 探讨了海藻提取物对番茄CMV病毒的防治作用,结果表明:海藻提取物对CMV有很好的体外钝化效果和预防CMV侵染的作用,其中以3.0g.L-1的浓度较为合理;番茄接种CMV病毒后施用海藻提取物,病株的SOD、POD酶活性明显升高,并明显降低了病株的病毒含量,降低了病毒对叶绿体的破坏。 展开更多
关键词 海藻提取物 番茄 cmv
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烤烟CMV抗性的主基因+多基因混合遗传模型分析 被引量:12
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作者 陈小翠 代帅帅 +7 位作者 张兴伟 蒋彩虹 任民 程立锐 付宪奎 王元英 张志明 杨爱国 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1278-1286,共9页
以高抗CMV的烤烟品种台烟8号为母本(P1),以高感CMV的烤烟品种NC82为父本(P2),在2个不同的时间环境下构建P1、P2、F1和F24个世代群体,在植株不同生长时期进行CMV病害鉴定。运用植物数量性状"主基因+多基因"混合遗传模型分析方... 以高抗CMV的烤烟品种台烟8号为母本(P1),以高感CMV的烤烟品种NC82为父本(P2),在2个不同的时间环境下构建P1、P2、F1和F24个世代群体,在植株不同生长时期进行CMV病害鉴定。运用植物数量性状"主基因+多基因"混合遗传模型分析方法对该世代群体的CMV抗性进行联合分析。结果表明,在温室环境中,苗期和成株期鉴定CMV抗性遗传都符合E1模型,即由2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性多基因混合控制,主基因遗传率分别是37.11%、57.76%;在大田环境中,苗期抗性鉴定符合加性-显性-上位性多基因模型(C0),多基因遗传率为26.86%,而成株期鉴定属于2对主基因+多基因模型(E2),主基因遗传率为36.57%。研究表明,由于植物抗性基因的表达具有时空性,台烟8号对CMV的抗性遗传在不同的时间和环境具有一定的差异;但随着植株的生长,抗性遗传趋于稳定,在成株期时,2个不同的环境均表现为2对主基因+多基因控制,所以对烤烟CMV抗性品种选育和改良要以主基因为主,同时注重环境的影响。 展开更多
关键词 烤烟 cmv抗性基因 主基因+多基因 遗传模型 遗传率
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烤烟CMV抗性基因QTL定位 被引量:13
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作者 文轲 张志明 +7 位作者 任民 蒋彩虹 申莉莉 程立锐 耿锐梅 陈小翠 冯莉 杨爱国 《中国烟草科学》 CSCD 2013年第3期55-59,共5页
利用SSR技术,在抗CMV烟草中发掘与抗病基因紧密连锁的分子标记,目的是为抗病基因的定位克隆以及培育抗病新品种奠定基础。本研究以抗CMV的烤烟品种台烟8号、感病品种NC82为亲本,构建BC1代分离群体,对其进行抗性遗传分析。对分布于烟草2... 利用SSR技术,在抗CMV烟草中发掘与抗病基因紧密连锁的分子标记,目的是为抗病基因的定位克隆以及培育抗病新品种奠定基础。本研究以抗CMV的烤烟品种台烟8号、感病品种NC82为亲本,构建BC1代分离群体,对其进行抗性遗传分析。对分布于烟草24条连锁群上的2317个SSR位点进行了多态性筛选,获得了62个稳定多态性标记,利用这些标记对288株BC1群体分型数据,用WinQTLCart2.5进行分析,找到一个与抗性相关的QTL,LOD值为2.6。研究结论表明,台烟8号对CMV的抗性由多基因控制,标记53735与抗性QTL紧密连锁,遗传距离为0.1 cM,该QTL位于10号连锁群,贡献率为13%。 展开更多
关键词 烟草 cmv SSR 抗性基因
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CMV侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达及代谢响应的研究 被引量:6
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作者 毛伟华 龚亚明 +6 位作者 宋兴舜 夏晓剑 王彦杰 周艳虹 师恺 李亚丹 喻景权 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期3691-3697,共7页
【目的】研究黄瓜花叶病毒病(CMV)侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达和代谢途径响应。【方法】在结合气体交换和叶绿素荧光参数及抗性相关酶活性测定的基础上,应用农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室自主开发的黄瓜cDNA芯片... 【目的】研究黄瓜花叶病毒病(CMV)侵染胁迫下黄瓜重要功能基因表达和代谢途径响应。【方法】在结合气体交换和叶绿素荧光参数及抗性相关酶活性测定的基础上,应用农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室自主开发的黄瓜cDNA芯片研究黄瓜在CMV侵染胁迫下的基因表达谱变化,并对其中5个具有代表性的基因通过实时荧光定量PCR(QRT—PCR)进行检测,以验证cDNA芯片杂交结果的可靠性。【结果】共获得67个差异表达显著的基因,其中42个基因下调表达,25个基因上调表达。这些差异表达的基因涉及了许多重要代谢途径。许多与光合作用、氮同化相关的基因受到明显的抑制;而一些防御相关基因和信号传导相关基因则诱导表达;同时,也发现了一些与CMV胁迫相关的功能未知基因或未有任何功能信息的基因。【结论】CMV胁迫引发了黄瓜代谢发生一系列复杂的适应性变化,PR1-1a等基因可能在黄瓜防御CMV侵染过程发挥着重要作用。 展开更多
关键词 黄瓜 cmv CDNA芯片 基因表达谱
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