乌司他丁通过上调Cx43表达减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞铁死亡的作用机制

目的探讨乌司他丁(UTI)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞铁死亡的影响,并分析其保护机制。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组、H/R组、铁死亡诱导剂(Erastin)组、UTI组、UTI+Erastin组、UTI+小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组、UTI+连接蛋白43(Cx43)siRNA(si-Cx43)组,各组给予相应干预后,检测各组细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧、Fe^(2+)、丙二醛、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及Cx43、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,H/R组细胞活力、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著降低,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01)。与H/R组比较,UTI组细胞活力[(71.40±8.05)%vs(42.63±6.71)%]、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著升高,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05)。与UTI组比较,UTI+Erastin组和UTI+si-Cx43组细胞活力、SOD、CAT活性和Cx43、GPX4、FTH1mRNA及蛋白水平显著降低,LDH活性、活性氧、丙二醛、Fe^(2+)和ACSL4mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论UTI可能通过上调Cx43抑制H/R诱导的心肌细胞铁死亡。

血清Cx43、Gal-9水平对老年急性脑梗死患者超早期静脉溶栓治疗预后的评估价值

目的探讨血清间隙连接蛋白43(Cx43)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)水平对老年急性脑梗死(ACI)患者超早期静脉溶栓治疗预后的评估价值。方法选取2020年9月至2022年9月在该院行超早期静脉溶栓治疗的106例老年ACI患者作为研究组,另外选取同期来该院体检的100例体检健康者作为健康组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有研究对象的血清Cx43、Gal-9水平。治疗2周后参考美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分将106例老年ACI患者分为预后良好组(81例)与预后不良组(25例)。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Cx43、Gal-9水平对老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗预后的评估价值,采用多因素Logistic回归分析探讨老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗预后不良的影响因素。结果研究组血清Cx43、Gal-9水平高于健康组(P<0.05);预后不良组血清Cx43、Gal-9水平高于预后良好组(P<0.05);血清Cx43、Gal-9预测老年ACI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.721(95%CI:0.673~0.758)、0.837(95%CI:0.787~0.886),二者联合预测的AUC为0.901(95%CI:0.857~0.946)。预后不良组高血压占比高于预后良好组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,高血压(OR=3.487,95%CI:1.564~7.773),血清Cx43≥106.53 pg/mL(OR=4.586,95%CI:1.982~10.611),血清Gal-9≥11.84 ng/mL(OR=4.345,95%CI:1.957~9.648)是老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗预后不良的危险因素(P<0.05)。结论血清Cx43、Gal-9在老年ACI患者中均呈高表达,可用于评估老年ACI患者超早期静脉溶栓治疗的预后,二者联合检测的评估价值更高。

外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43对冠心病的预测价值分析

目的探讨外周血单个核细胞缝隙连接蛋白37(Cx37)、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)、缝隙连接蛋白43(Cx43)对冠心病的预测价值。方法选取2019年1月至2023年10月该院收治的460例因“疑似冠心病或者胸闷、胸痛待查”而入院拟择期行冠状动脉造影(CAG)的患者作为研究对象,根据CAG检查结果分为冠心病组(212例)和非冠心病(248例)。比较两组临床特征及外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43,并予以多因素Logistic回归分析冠心病发生的危险因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43对冠心病的预测价值。结果冠心病组年龄、体质量指数大于非冠心病组(P<0.05),心率、血清糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)水平高于非冠心病组(P<0.05),吸烟、高血压、高脂血症、冠心病家族史的患者占比高于非冠心病组(P<0.05),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于非冠心病组(P<0.05)。冠心病组外周血单个核细胞Cx37、Cx43表达水平低于非冠心病组,外周血单个核细胞AIM2表达水平高于非冠心病组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,吸烟,高血压,高脂血症,冠心病家族史,外周血单个核细胞Cx37、Cx43表达水平降低,外周血单个核细胞AIM2表达水平升高是冠心病发生的独立危险因素(OR=2.568、2.375、3.313、2.713、0.647、0.464、2.995,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43及3项联合检测预测冠心病的曲线下面积(AUC)分别为0.712、0.732、0.708、0.922,灵敏度分别为66.51%、70.28%、71.70%、89.15%,特异度分别为69.76%、70.16%、69.35%、82.26%,其中联合检测的AUC最大(P<0.05)。结论外周血单个核细胞Cx37、AIM2、Cx43对冠心病发生具有一定的预测价值,其中联合检测的预测价值最高。

Cx43、β-catenin、Smo在第二生心区的表达规律及意义

背景:第二生心区对于胚胎心脏发育具有重要意义,其发育异常会导致多种心脏畸形,Cx43基因敲除后第二生心区细胞的形成和增殖减少,但具体原因尚未明确。目的:①明确β-catenin、Smo以及Cx43在内胚层与第二生心区的表达模式,观察其有无共表达;②探究Cx43与Wnt/β-catenin通路或Shh通路之间是否存在相互作用,共同参与第二生心区的发育。方法:选取胚龄10-12 d的ICR小鼠胚胎石蜡包埋连续切片,进行免疫组织化学染色、苏木精-伊红染色、免疫荧光染色;剥离胚龄11 d小鼠胚胎的原始消化管用于蛋白印迹实验和免疫共沉淀。结果与结论:①胚龄10-12 d,Cx43与Isl1在前肠腹侧和心包腔背侧壁的部分间充质细胞呈共表达,Isl1阳性细胞增多的同时Cx43阳性细胞也增多;②胚龄10-12 d,Cx43与β-catenin在内胚层腹侧共表达;③胚龄10-12 d,Cx43与Smo在内胚层上共表达;④免疫共沉淀结果表明Cx43与β-catenin之间存在相互作用,共同参与第二生心区的发育。

Cx43在基质刚度调控骨髓间充质干细胞分化中的作用机制研究

目的骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有力学敏感性,对周围力学微环境高度敏感。连接蛋白43(connexin 43,Cx43)作为骨组织细胞中组成半通道和间隙连接的主要蛋白,在力学信号传导中发挥重要作用。然而关于Cx43是否参与基质刚度对BMSCs分化的调节仍有待研究。方法本实验制备了模拟骨髓力学微环境不同位置处基质刚度(1、10、34 k Pa)的聚丙烯酰胺水凝胶培养基底;培养间充质干细胞细胞系C3H10T1/2,利用18α-GA抑制C3H10T1/2中Cx43功能;提取BMSCs条件性敲除(c KO)Cx43小鼠(Prx1-Cre;Cx43 flox/flox)和同窝对照flox小鼠(Cx43 flox/flox)原代BMSCs进一步验证。结果抑制Cx43均会导致BMSCs在10、34 k Pa基质刚度上的成脂能力显著下降,而对1 k Pa上BMSCs成脂能力无影响。相比于1 k Pa和34 k Pa,在10 k Pa基质刚度上抑制Cx43导致了BMSCs成骨能力显著下降。在不同基质刚度上抑制BMSCs上Cx43均会导致糖酵解和线粒体融合裂变相关基因表达显著变化,以及成脂和成骨分化过程中ATP的生成。结论BMSCs响应骨髓力学微环境,较软的基质刚度可能对成脂能力有一定程度的恢复作用,而Cx43可能通过代谢途径参与了基质刚度对BMSCs分化的调节。

RgpB通过抑制自噬小体与溶酶体融合避免Cx43降解参与食管癌化疗耐药

目的探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)的毒力因子RgpB在食管鳞癌化疗耐药中的作用机制。方法采用免疫沉淀-质谱联用技术筛选与Pg的毒力因子RgpB互作的自噬调节因子;运用免疫共沉淀实验探索RgpB和自噬调节因子TBC1D5之间的相互作用;采用蛋白免疫印迹法测定Pg感染对食管癌细胞膜受体分子Cx43表达的影响;使用细胞免疫荧光检测Lamp1、Cx43与TBC1D5的关系;利用自噬双荧光观察Pg感染对自噬小体与溶酶体融合的影响;使用平板克隆及CCK-8法检测Pg感染及Cx43抑制剂在使用化疗药后对食管癌细胞系增殖作用的影响。结果免疫沉淀-质谱联用技术筛选出与RgpB互作的自噬调节因子TBC1D5;免疫共沉淀结果显示,Pg分泌的毒力因子RgpB可与自噬调节因子TBC1D5直接结合并相互作用;蛋白免疫印迹法结果显示,感染Pg后食管癌细胞膜Cx43表达量高于未感染组(P<0.05);细胞免疫荧光结果显示,在感染Pg后,Cx43在细胞膜表面的表达量增加(P<0.05);stubRFP-sensGFP-LC3自噬双荧光结果显示,在Pg感染时,自噬体与溶酶体融合受到阻断;平板克隆及CCK-8法结果显示,使用化疗药后,Cx43抑制剂能够逆转Pg感染对食管癌细胞系的促进作用。结论Pg入侵食管癌,其毒力因子RgpB阻碍自噬小体与溶酶体融合,从而使膜受体分子Cx43免受溶酶体降解,导致食管癌化疗耐药。

Cx43对胆总管结扎大鼠心肌损伤的负向调控作用及其机制

目的探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在胆总管结扎(CBDL)引起的大鼠心肌损伤中的作用及其分子机制。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组、CBDL组及Cx43抑制剂组,每组6只。假手术组大鼠行胆总管游离术,CBDL组大鼠游离、结扎并切断胆总管,Cx43抑制剂组大鼠术前24 h通过尾静脉单次注射25 mg/kg的Gap 26后,游离、结扎并切断胆总管。三组大鼠饲养至术后第14天时采用心脏超声检查评估心脏射血分数(EF)、缩短分数(FS)和心率(HR);随后测定三组大鼠血清总胆红素(TBil)、苯丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)水平;取三组大鼠心脏组织行HE染色和Masson染色;采用免疫印迹实验检测心脏组织中Cx43、Wnt 3α、β-catenin蛋白的水平。结果心脏超声检查结果显示,CBDL组、Cx43抑制剂组大鼠心脏EF、FS、HR均显著低于假手术组(F=22.95~43.55,t=5.10~9.32,P<0.05)。血生化及氧化应激指标检测结果显示,与假手术组相比,CBDL组、Cx43抑制剂组大鼠血清中TBil、AST、ALT、LDH、CK-MB、MDA、GSH-PX水平显著升高,SOD的水平显著降低(F=19.29~100.60,t=3.67~13.72,P<0.05)。HE染色及Masson染色结果显示,CBDL组和Cx43抑制剂组大鼠发生心肌损伤及心肌间质纤维化。免疫印迹实验结果显示,与假手术组相比,CBDL组和Cx43抑制剂组大鼠心脏组织中Cx43水平显著下降,Wnt 3α、β-catenin水平显著升高(F=28.50~70.07,t=4.32~11.79,P<0.05);与CBDL组相比,Cx43抑制剂组大鼠心脏组织中Cx43水平显著下降,Wnt 3α、β-catenin水平显著升高(t=4.95~5.20,P<0.05)。结论CBDL大鼠心脏组织中Cx43下调可负向调控激活Wnt 3α/β-catenin通路,导致大鼠心肌组织损伤加剧及心脏功能下降。

尼古丁上调Cx43促发PASMCs炎性反应致小鼠肺动脉重构的机制

目的研究缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)介导肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)炎性反应在尼古丁致小鼠肺动脉重构中的作用机制。方法5周龄雄性C57BL/6J小鼠、Tagln-Cre(+);Cx43^(flox/WT)小鼠各32只,分别随机分为对照组(灭菌注射水)、0.02、0.2和2.0 mg/(kg·d)尼古丁组,每组8只。小鼠按体重每天固定时间进行一次鼻腔滴注,持续8周。染毒结束后,通过HE染色观察各组小鼠肺动脉重构情况;采用磁性分离法培养C57BL/6J、Tagln-Cre(+);Cx43^(flox/WT)小鼠原代远端PASMCs;通过Western blot法检测小鼠PASMCs中Cx43、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)蛋白表达水平。结果与C57BL/6J小鼠对照组相比,尼古丁染毒组C57BL/6J小鼠体重总体呈现增长趋势,且随着尼古丁浓度增加,体重增长变缓。小鼠远端肺动脉出现管壁增厚、管腔狭窄等典型的动脉重构病理特征,Cx43表达上调且呈剂量依赖性关系。Tagln-Cre(+);Cx43^(flox/WT)小鼠HE染色结果显示其肺动脉管壁增厚和管腔狭窄现象有所缓解,且PASMCs中上述炎性反应因子表达减少。结论Cx43表达下调可缓解尼古丁诱导的小鼠远端PASMCs炎性反应,从而改善小鼠肺动脉重构。

Effect and mechanism of Irbesartan on occurrence of ventricular arrhythmias in rats with myocardial ischemia through connexin43(cx43)

Objective: To explore the effect and mechanism of angiotensin II receptor blockers-Irbesartan on occurrence of ventricular arrhythmias in rats with myocardial ischemia. Methods: Rats with embryonic cardiomyocytes-H9c2 were randomly divided into control group. ischemia group. Irbesartan group and Irbesartan+ischemia group. The cell viability of rats in each group was tested using MTT. Real-time PCR was employed to detect the expression of connexin43 (Cx43) mRNA and western blot to detect the expression of Cx43 and phosphorylated Cx43. SD rats were randomly divided into the sham-operation group (SO). myocardial infarction group (MI). Irbesartan group and MI+ Irbesartan group, with 10 rats in each group. HE staining was employed to observe the change in the pathomorpholouy of left ventricular tissue and TUNEL method to analyze the cell apoptosis in the tissue. The immunofluorescence was adopted to observe the expression and distribution of Cx43 in the left ventricular myocardium and study the change in the expression of Cx43 in the cardiac muscular tissue at mRNA and protein level. Results: The intervention of lrbesartan in the condition of ischemia indicated the significant decrease in the number of necrotic cells. The expression of Cx43 was significantly decreased under the culture of ischemia (P<0.05), but in the presence of Irbesartan, the expression of Cx43 was increased compared with the ischemia group (p<0.01). The results of WB assay showed the similar trend of change at mRNA level. There was the significant difference in the score of ventricular arerythmia between MI group and SO group (P<0.01). The incidence of ventricular tachycardia or ventricular fibrillation was significantly increased compared with the one in SO group (P<0.05). There was the significant difference in the overall score between MI+Irbesartan group and MI group (P<0.05). The expression of Cx43 in the cardiac muscular tissue in MI group was significantly decreased (P<0.01(US) SO group). But the expression of Cx43 was increased after the treatment with Irbesartan. Conclusions: Irbesartan can inhibit the injury of H9c2 cardiomyocytes and the decreased expression of Cx43 that are induced by the ischemic myocardial infarction. Irbesartan can also improve the reconstruction of Cx43 in rats with ischemic myocardium to inhibit the myocardial infarction-induced arrhythmias.

牙周炎患者血清LTB4、Cx43水平及其临床意义

目的分析白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)、连接蛋白43(connexin43,Cx43)在牙周炎患者血清中的表达水平,并探究其临床意义。方法选择2020年1月至2022年1月我院口腔科收治的98例牙周炎患者为牙周炎组,根据其病情严重程度分为轻度组34例,中度组36例,重度组28例;同期牙周健康的口腔志愿者95例为对照组。采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中LTB4、Cx43的表达水平。采用Pearson相关性分析血清LTB4、Cx43表达水平相关性以及二者与牙周探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、菌斑指数(plaque index,PLI)的相关性;Logistic回归分析牙周炎发生的影响因素。ROC曲线分析血清LTB4、Cx43表达水平对牙周炎患者的预测价值。结果牙周炎组不正规刷牙方式、每日刷牙时间<3min、次数<2次、夜磨牙的人数显著多于对照组,PD、AL、PLI的水平显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,牙周炎组血清中LTB4、Cx43的表达水平显著升高(P<0.05);重度组牙周炎患者的LTB4、Cx43的表达水平高于中度组和轻度组,中度组高于轻度组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血清中LTB4与Cx43水平以及二者与PD、AL、PLI的值均呈正相关(P<0.05);Logistic回归分析显示,PD、AL、PLI、LTB4、Cx43为牙周炎发生的影响因素(P<0.05)。血清LTB4、Cx43预测牙周炎患者发生的曲线下面积均大于单一指标预测(Z=13.582,P<0.001;Z=8.103,P<0.001)。结论牙周炎患者血清中LTB4、Cx43表达水平显著增加,二者表达呈正相关,是牙周炎发生的影响因素。

突发性耳聋病人血清Cx43、GABA水平及其与听力功能的相关性

目的:探讨γ-氨基丁酸(GABA)、连接蛋白43(Cx43)在突发性耳聋病人中的表达及与听力功能的相关性。方法:选取100例突发性耳聋病人为观察组,根据年龄、性别随机选择100名健康体检者为对照组。收集一般资料,采用酶联免疫吸附法检测血清中GABA、Cx43表达水平,Pearson法分析GABA、Cx43表达的相关性,ROC曲线评价GABA、Cx43表达水平对突发性耳聋的诊断价值。采用logistic回归分析影响突发性耳聋病人听力功能的因素。结果:与对照组相比,观察组病人血清中Cx43、GABA表达水平均明显下降(P<0.01),且听力功能异常病人血清中Cx43、GABA表达水平明显低于听力功能正常病人(P<0.01);突发性耳聋病人血清中GABA与Cx43表达呈正相关关系(r=0.472,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清GABA、Cx43水平诊断突发性耳聋的AUC分别为0.938、0.900,对应的敏感度分别为86.00%、87.00%,特异度分别为92.00%、79.00%,二者联合诊断的AUC为0.963,敏感度为91.00%,特异度为87.00%。logistic回归分析结果显示GABA、Cx43均是突发性耳聋病人听力功能的独立影响因素(P<0.01)。结论:GABA、Cx43在突发性耳聋病人血清中表达水平均降低,与病人听力功能密切相关,联合检测二者可作为诊断突发性耳聋及听力功能异常的生物学指标。

上调Cx43蛋白表达增强自杀基因治疗鼻咽癌的旁观者效应

目的:研究上调Cx43基因蛋白表达增强自杀基因治疗鼻咽癌的旁观者效应。方法:构建带Cx43基因的重组质粒,转染鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-2/tk,实验分组:Cx43未转染组:不同比例鼻咽癌CNE-2细胞与CNE-2tk细胞混合,Cx43转染组:不同比例鼻咽癌CNE-2-Cx43细胞与CNE-2tk-Cx43细胞混合;对照分组:对照组1:不同比例鼻咽癌CNE-2细胞与CNE-2tk细胞混合;对照组2:不同比例鼻咽癌CNE-2-Cx43细胞与CNE-2tk-Cx43细胞混合。以不同对照组比较Cx43转染组与未转染组细胞存活率的差异。结果:以对照组1作为对照,tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为100∶0,95∶5,90∶10,80∶20,75∶25,50∶50,0∶100时,Cx43未转染组与Cx43转染组细胞存活率分别对应为94.3%∶82.4%,83.2%∶63.5%,73.3%∶51.6%,52.7%∶33.9%,38.2%∶27.6%,17.6%∶16.8%,8.1%∶6.3%。tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为100∶0,95∶5,90∶10,80∶20,75∶25时,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他各组比较,差异无统计学意义(P>0.05);以对照组1作为Cx43未转染组对照,以对照组2作为Cx43转染组对照,tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为100∶0,95∶5,90∶10,80∶20,75∶25,50∶50,0∶100时,Cx43未转染组与Cx43转染组细胞存活率分别对应为91.8%∶94.7%,82.1%∶71.9%,72.6%∶58.1%,51.6%∶38.7%,35.5%∶29.8%,13.2%∶16.8%,7.6%∶6.3%。tk^(-)与tk^(+)细胞的混合比例分别为95∶5,90∶10,80∶20,75∶25时,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其他各组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:上调鼻咽癌细胞的Cx43和缝隙连接可明显增强自杀基因治疗鼻咽癌旁观者杀伤效应,为鼻咽癌的防治开拓新的方法和思路。

参附汤调控Cx43分布和表达逆转心肌重塑所致心律失常实验研究

目的:评估参附汤(SF)是否能预防梗死边界区(IBZ)重塑和减少心肌梗死(MI)后阶段发生的室性心律失常。方法:通过对左冠状动脉前降支进行结扎的方法制作MI模型,MI后第一天开始进行SF治疗2周,观察SF对MI的影响。结果:SF治疗可显著降低MI后大鼠快速心律失常诱导率和心律失常评分。在超声心动图中,SF改善了左室收缩和舒张功能。组织学评估显示,SF显著减少了IBZ的纤维区和肌细胞区,增加间隙连接蛋白43(Cx43)阳性区。免疫印迹表明,SF处理显著增加了Cx43的总蛋白和磷酸化蛋白水平。结论:SF干预通过Cx43表达和重新分布抑制左室重塑,降低了MI后快速心律失常的易感性。证明了新的抗心律失常药物能够通过逆转IBZ重塑降低MI后室性心律失常的易感性。

Cx43对高糖诱导下心肌细胞功能的调控及机制研究

分析高糖诱导下Cx43对心肌细胞功能的调控及相关机制情况。方法 建立高糖诱导心肌细胞损伤模型,构建Cx43过表达/干扰质粒。共分为4组,包括模型组(HG组)、模型+Cx43过表达组(HG+OE组)、模型+Cx43空质粒组(HG+EV组)、模型+Cx43干扰组(HG+KD组),将各组H9C2心肌细胞转染后用含有浓度30mmol/L的葡萄糖培养基培养48h。根据增殖、划痕以及细胞黏附实验对心肌细胞功能进行观察。采用Western Blot 对各组内质网应激指标GRP78和NLRP3、ASC、IL-1、pro-caspase-1、caspase-1等焦亡相关蛋白进行检测。结果 1.与HG+EV组相比,HG+OE组心肌细胞增殖率、迁移率、黏附率明显增加(P<0.001);而HG+KD组心肌细胞增殖率、迁移率、黏附率显著下降(P<0.001)。2.Western blotting结果显示,与HG+EV组相比,HG+OE组GRP78、NLRP3、ASC、IL-1、pro-caspase-1、caspase-1 蛋白表达水平均明显下降,而HG+KD组上述蛋白表达水平均明显上升(P<0.01)。结论 Cx43可通过调控细胞焦亡而改善高糖诱导后的心肌细胞功能。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构AQP4、Cx43的影响

目的研究左归降糖解郁方(黄芪、贯叶连翘、姜黄、熟地黄、山茱萸等)对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障精细结构水通道蛋白AQP4和缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。方法采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素、28 d慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为5组:模型组,阳性药(二甲双胍+盐酸氟西汀)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为空白组,灌胃给药4周。给药后,采用Morris水迷宫测试大鼠空间学习能力,HE染色法观察海马组织病理学,免疫组化法检测海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.01),海马细胞存在明显损伤,AQP4和Cx43表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,差异有显著统计学意义(P<0.01),海马细胞形态趋于正常,且AQP4和Cx43表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠的治疗作用可能与调控海马血脑屏障精细结构AQP4和Cx43表达有关。

星形胶质细胞中缝隙连接蛋白connexin 43的表达及其功能调控

目的研究星形胶质细胞中缝隙连接蛋白connexin 43(Cx43)的表达及由其形成的缝隙连接通讯功能的药物调控。方法实验分为正常对照组、全反式维甲酸组(10μmol/L全反式维甲酸作用24 h)及油酸酰胺组(25μmol/L油酸酰胺作用2 h)。western blotting法检测各组星形胶质细胞中Cx43总蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测各组星形胶质细胞Cx43胞膜蛋白的表达;荧光示踪法检测各组星形胶质细胞的缝隙连接通讯功能。结果与正常对照组相比,全反式维甲酸能增强星形胶质细胞中Cx43总蛋白的表达(P<0.01),油酸酰胺则能减弱其表达(P<0.01);全反式维甲酸能增强Cx43胞膜蛋白表达,油酸酰胺能减弱其表达;全反式维甲酸能增强星形胶质细胞缝隙连接通讯功能(P<0.01),而油酸酰胺则可显著降低该功能(P<0.01)。结论药物全反式维甲酸及油酸酰胺可以对星形胶质细胞缝隙连接通讯功能进行调控,其机制可能与其影响星形胶质细胞Cx43总蛋白和胞膜蛋白的表达有关。

胃癌前病变患者根除幽门螺杆菌后Cx32和Cx43的表达

目的:观察胃癌前病变(PL)患者幽门螺杆菌(H.pylori)根除前后Cx32,Cx43表达变化。方法:采用免疫组织化学SABC法检测33例慢性浅表性胃炎(CSG)、88例胃癌前病变(PL)患者H.pylo-ri根除前后胃黏膜活检标本Cx32,Cx43表达水平。结果:PL组Cx32,Cx43阳性表达率(分别为51.1%和54.5%)和阳性表达强度均低于CSG组(分别为100%和93.9%,P<0.05)。胃癌前病变H.pylori阳性组Cx32,Cx43阳性表达率(分别为41.4%和44.8%)和阳性表达强度均低于H.pylori阴性组(分别为70%和73.3%,P<0.05)。胃癌前病变组H.pylori根除者Cx32,Cx43阳性表达率(分别为97.9%和91.7%)较治疗前升高(分别为41.4%和44.8%,P<0.05);未根除者治疗后(分别为40%和50%)与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胃癌前病变患者Cx32,Cx43表达降低,H.pylori根除可上调Cx32,Cx43表达。

Cx43、Skp2在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及临床意义

背景与目的:间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)是间隙连接蛋白家族的主要成员,在多种肿瘤细胞中表达下降。它在许多细胞系以依赖间隙连接(Gapjunction)的途径发挥抑癌作用。最近研究发现它还可能通过抑制S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein2,Skp2)的表达而起到抑制肿瘤生长的作用。Skp2是F鄄box蛋白家族的成员,它能特异性识别并促进某些调节G1期进程的关键性细胞周期调节物的降解,在许多肿瘤中表达升高。本研究检测Cx43和Skp2在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨它们的表达与卵巢癌发展的关系,以及这两种蛋白表达的相互关系。方法:收集81例卵巢上皮性肿瘤的外科手术石蜡标本(良性13例、交界性12例、恶性56例),用免疫组化的方法检测Cx43和Skp2蛋白的表达水平。分析它们的表达水平与临床病理参数的关系以及二者的相互关系。结果:Cx43蛋白在卵巢上皮性良性、交界性及恶性肿瘤中阳性率分别为84.6%、66.7%和33.9%,经免疫组化半定量分析,其在上皮性卵巢癌中的表达水平明显低于良性肿瘤(P<0.01)和交界性肿瘤(P<0.01),在不同年龄及组织类型的卵巢癌中表达无显著性差异(P>0.05),而在中低度分化组、Ⅲ～Ⅳ期组及有淋巴结转移组分别明显低于高分化组(P<0.05)、Ⅰ～Ⅱ期组(P<0.05)及无淋巴结转移组(P<0.

缝隙连接蛋白Cx43在大鼠经脉线上表达的实验研究

目的:研究缝隙连接蛋白Cx43在正常健康大鼠经脉线上的表达及其意义。方法:应用二步法免疫酶技术和ASIAS2000自动扫描图像分析系统对大鼠多条经脉上的Cx43进行定位、定量分析。结果:缝隙连接蛋白Cx43广泛表达于表皮上皮细胞、真皮成纤维细胞、皮下筋膜的肥大细胞以及肌肉肌膜细胞的胞浆胞膜中,经统计学分析,肾经足底段、膀胱经背部段Cx43的表达显著高于邻近对照线,两者相比差异有极显著性意义(P<0.01)。结论:缝隙连接蛋白及缝隙连接与经络高度相关,由缝隙连接介导的细胞间通讯可能在经络活动中起重要作用。

肝细胞癌中PTEN、Cx43及VEGF蛋白的表达

背景与目的:肿瘤抑制基因PTEN、间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)及血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达在肿瘤发生和进展中发挥重要的作用。本研究目的是观察肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中PTEN、Cx43及VEGF蛋白的表达及其关系,探讨它们在HCC发生和发展中的作用。方法:免疫组化链酶素抗生物素-过氧化物酶(SP)法研究47例HCC组织中PTEN、Cx43及VEGF的表达情况。结果:PTEN、Cx43、VEGF在HCC组织中总的阳性率分别为76.6%、42.6%、70.2%。随着肿瘤病程进展,PTEN和Cx43阳性率降低(P均<0.05),而VEGF阳性率显著增高(P=0.001)。与肝内血管癌栓组相比,PTEN在无肝内血管癌栓组的阳性率显著增高(P=0.006)。肝硬化组Cx43阳性率明显低于无肝硬化组(χ2=4.7135,P=0.03)。PTEN阳性率在肿瘤大小、癌组织分化程度及肝硬化背景组无显著性差异。Cx43阳性率在肿瘤大小、癌组织分化程度及肝内血管瘤栓组无显著性差异。VEGF阳性率在肿瘤大小、癌组织分化程度、肝硬化及肝内血管癌栓组无显著性差异。相关分析表明:PTEN阳性率与Cx43阳性率正相关(CramersV=0.3949,P=0.023);PTEN阳性率与VEGF阳性率负相关(CramersV=0.3937,P=0.024);Cx43阳性率与VEGF阳性率无明显相关(CramersV=0.3072,P=0.