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胱蛋白酶抑制剂超家族成员CRES的研究进展
1
作者 李宁 李建远 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2009年第1期12-15,共4页
胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(cystain-related epididymal spermatogenic,CRES)蛋白是胱蛋白酶抑制剂(cystatin)家族中的一个亚类,在结构上与cystatin家族具有一定的同源性,但缺少胱氨酸蛋白酶抑制活性必需的保守序列,主要在睾丸... 胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生(cystain-related epididymal spermatogenic,CRES)蛋白是胱蛋白酶抑制剂(cystatin)家族中的一个亚类,在结构上与cystatin家族具有一定的同源性,但缺少胱氨酸蛋白酶抑制活性必需的保守序列,主要在睾丸及附睾中表达。探究CRES亚类的表达调控及其生物学功能将有助于阐明精子发生与成熟的分子机制,为解决精子成熟异常引起的不孕症提供分子基础,也为开发一些阻断精子成熟的男性避孕药物提供新的设计思路。 展开更多
关键词 胱蛋白酶抑制剂超家族 cres 睾丸 附睾 精子发生
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CRES的危害因素识别方法:以EETD为例 被引量:4
2
作者 李京生 赵林 +1 位作者 王阳 孟亮 《中国安全科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期106-111,共6页
首先厘清传统危害识别方法的局限性,运用系统理论的事故模型及过程(STAMP)的系统理论过程分析(STPA)方法,分析CRES不能使动车组(EMU)制动这一危害事件,将其安全问题看作是控制问题;然后以车载地震紧急处置装置(EETD)为例,分析其引起的... 首先厘清传统危害识别方法的局限性,运用系统理论的事故模型及过程(STAMP)的系统理论过程分析(STPA)方法,分析CRES不能使动车组(EMU)制动这一危害事件,将其安全问题看作是控制问题;然后以车载地震紧急处置装置(EETD)为例,分析其引起的不安全控制控制行为,找出产生不安全控制行为的原因,进而分析出其危害因素;最后与传统的故障树分析(FTA)方法结果对比,验证基于STAMP模型的STPA方法的有效性。结果表明:用该方法能比FTA方法识别出更多的危害因素,如设计缺陷、沟通不畅等。 展开更多
关键词 高铁地震预警系统(cres) 车载地震紧急处置装置(EETD) 危害因素识别 系统理论的事故模型及过程(STAMP) 系统理论过程分析(STPA)
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胱蛋白酶抑制剂超家族中的新成员——CRES亚类
3
作者 袁青 王一飞 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第6期479-482,共4页
胱蛋白酶抑制剂超家族由stefins、cystatins及kininogens三个家族组成,CRES亚类是近年来发现的cystatins家族的新成员,主要包括Cres、Cres 2、Cres 3、Testatin、Cystatin T、Cystatin SC、Cystatin E1及Cystatin E2等,它们在结构上与cy... 胱蛋白酶抑制剂超家族由stefins、cystatins及kininogens三个家族组成,CRES亚类是近年来发现的cystatins家族的新成员,主要包括Cres、Cres 2、Cres 3、Testatin、Cystatin T、Cystatin SC、Cystatin E1及Cystatin E2等,它们在结构上与cystatins家族具有一定的同源性,但不具备cystatins抑制半胱氨酸蛋白酶所必需的三个功能位点,主要在雄性生殖系统尤其是睾丸及附睾中表达。探究CRES亚类的表达调控及其生物学功能将有助于阐明精子发生与成熟过程的分子机制。 展开更多
关键词 胱蛋白酶抑制剂 超家族 cres亚类 睾丸 附睾 生物学功能
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Seasonal Temperature Variations of Lake Vrana on the Island of Cres and Possible Influence of Global Climate Changes
4
作者 Mladen Kuhta Brkic Zeljka 《Journal of Earth Science and Engineering》 2013年第4期225-237,共13页
Lake Vrana on the island of Cres is one of the largest fresh water features on Mediterranean islands. The maximum depth of the lake is 72 m and it stores 220 million m3 of fresh water. The paper provides an overview o... Lake Vrana on the island of Cres is one of the largest fresh water features on Mediterranean islands. The maximum depth of the lake is 72 m and it stores 220 million m3 of fresh water. The paper provides an overview of lake and groundwater temperature measurements to date and recent activities within the EU project "CC-WaterS (Climate Change and Impacts on Water Supply)". Groundwater temperatures in the lake surrounding are almost constant throughout the year, in the range from 14.6 ℃ to 13.1 ℃, while thermodynamic cycle of the lake conforms to the characteristics of a monomictic, medium depth lake in the moderate climate belt. Present and future climate simulations using three limited area models were analyzed (Aladin, Promes and RegCM3), they pointed out further air temperature increase in range of 0.27 ℃/10 yrs to 0.32 ℃/10 yrs. The significant changes of precipitation rates were not indicated. Considering increasing water consumption from the lake, already asserted negative trends, indicated climate changes and possible effects on the lake recharge, it is necessary to establish continual monitoring of parameters that describe lake system behaviour and periodically analyze lake conditions, especially with respect to the extraction for the public water supply. 展开更多
关键词 Lake Vrana cres island KARST climate changes water temperature.
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指向深度学习的高中英语阅读课CRES教学模式探索——以“The Freshman Challenge”为例
5
作者 白竹蓉 《福建教育研究》 2023年第12期24-26,共3页
依照英语学习活动观设计的CRES教学模式,将学生已有的生活体验关联课堂内容,引导学生体验、对比中外生活差异,培养学生文化意识,并把学习内容迁移到自身生活,促进思维品质的提升,形成正确的价值观,落实立德树人。
关键词 深度学习 cres英语阅读课教学模式 核心素养
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医院获得性耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌血流感染危险因素 被引量:2
6
作者 喻玲丽 周莹丽 +2 位作者 段萌萌 白玉霞 张文斌 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期100-103,共4页
目的分析医院获得性耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)血流感染的特点及影响因素。方法采用回顾性巢式病例对照研究方法,选取2020年1月—2022年12月某三级综合医院发生医院获得性CRE血流感染的56例病例为CRE组,按1∶1选择同期56例碳青霉烯... 目的分析医院获得性耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)血流感染的特点及影响因素。方法采用回顾性巢式病例对照研究方法,选取2020年1月—2022年12月某三级综合医院发生医院获得性CRE血流感染的56例病例为CRE组,按1∶1选择同期56例碳青霉烯类敏感肠菌目细菌(CSE)血流感染患者为CSE组,分析感染菌株和科室分布,并通过单因素和多因素logistic回归分析CRE血流感染的相关因素。结果CRE血流感染科室分布以重症监护病房(ICU,23例,41.07%)和血液科(17例,30.36%)为主;感染菌株主要为肺炎克雷伯菌(32例,57.14%)和大肠埃希菌(16例,28.57%)。单因素分析结果显示,恶性肿瘤、60 d内住院史、感染前入住ICU>48 h、机械通气、留置中央静脉导管、使用二联及以上抗菌药物、抗菌药物使用时间≥10 d均与CRE血流感染有关(均P<0.05)。多因素logistic回归分析发现,感染前入住ICU>48 h、感染前抗菌药物使用时间≥10 d是医院获得性CRE血流感染的独立危险因素(P<0.05)。结论临床尤其是ICU应关注患者的流行病学史,尽早识别CRE血流感染高危因素的患者,同时合理使用抗菌药物,规范有创操作,以减少医院获得性CRE血流感染的发生。 展开更多
关键词 耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌 血流感染 医院感染 CRE 危险因素
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应用Cre-LoxP系统构建牛结节性皮肤病病毒缺失TK基因毒株
7
作者 张玉哲 任善会 +10 位作者 姚威 龚真莉 张红强 柳民意 尤婷 王相伟 李积雲 殷相平 孙跃峰 陈豪泰 万学瑞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4517-4529,共13页
利用同源重组技术及Cre-LoxP系统平台,构建牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)缺失TK基因毒株,为研制出安全、高效的LSDV基因工程疫苗提供备选毒株。以TK基因为靶基因,利用Cre-LoxP系统平台,红色荧光蛋白(RFP)为筛选标... 利用同源重组技术及Cre-LoxP系统平台,构建牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)缺失TK基因毒株,为研制出安全、高效的LSDV基因工程疫苗提供备选毒株。以TK基因为靶基因,利用Cre-LoxP系统平台,红色荧光蛋白(RFP)为筛选标记,采用重叠PCR方法扩增左、右同源臂以及RFP基因表达框并进行融合,将其克隆至pUC19T载体,构建基因缺失转移载体pUC19T-LSDV-ΔTK-RFP。将转移载体重组质粒转染至Vero细胞,并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株,构建LSDV-ΔTK-RFP重组病毒。采取蚀斑法、有限稀释法纯化LSDV-ΔTK-RFP。然后,利用Cre-LoxP系统,在MDBK-Cre细胞中从病毒基因组中切除RFP标签,采取蚀斑法和有限稀释法筛选并纯化LSDV-ΔTK毒株。利用PCR及测序方法对重组毒株进行鉴定,并测定其一步生长曲线。结果表明成功构建缺失TK基因的重组毒株(LSDV-ΔTK),重组毒株复制力略低于野生毒株。应用Cre-LoxP系统构建的缺失TK基因LSDV毒株,具有良好的遗传稳定性和复制生长特性,为后续LSDV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株,同时拓展了Cre-LoxP系统的应用范围。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒 TK基因 CRE/LOXP系统 重组毒株
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Lyz2+单核-巨噬细胞在多囊卵巢综合征小鼠子宫中的谱系示踪
8
作者 刘美辰 李博雅 +6 位作者 任萌萌 杨婷婷 马萍 曹思甜 马虹 裴秀英 张淑雅 《宁夏医科大学学报》 2024年第3期223-229,共7页
目的在骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠上建立多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型,通过谱系示踪方法揭示巨噬细胞在PCOS小鼠子宫中的分布特点。方法利用Cre/LoxP系统构建骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠,分别构建Td-tomato... 目的在骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠上建立多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型,通过谱系示踪方法揭示巨噬细胞在PCOS小鼠子宫中的分布特点。方法利用Cre/LoxP系统构建骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠,分别构建Td-tomato^(flox/flox)小鼠和Lyz2^(Cre)工具小鼠,使两者进行交配,得到Lyz2^(Cre)Tdtomato^(flox/flox)小鼠,其骨髓来源单核-巨噬细胞均被标记上红色荧光蛋白(Td-tomato),再通过来曲唑联合高脂饲料构建PCOS小鼠模型,通过免疫荧光多标结合激光共聚焦共定位方法检测PCOS小鼠子宫中巨噬细胞的分布及数量。结果成功构建了骨髓来源单核-巨噬细胞谱系示踪小鼠(Lyz2^(Cre)Td-tomato^(flox/flox)),并在谱系示踪小鼠上成功构建了PCOS小鼠模型。PCOS小鼠子宫的HE染色结果显示结构异常;免疫荧光多重标记检测发现,在PCOS小鼠子宫中巨噬细胞分布在子宫外膜、肌层、内膜,且M2型巨噬细胞数量增多(P<0.05)。结论本研究构建了肥胖型PCOS小鼠模型,发现骨髓来源的M2型巨噬细胞在PCOS小鼠子宫中增多。 展开更多
关键词 谱系示踪 多囊卵巢综合征 CRE/LOXP系统 骨髓来源巨噬细胞
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巨噬细胞特异性敲除KLF2基因小鼠模型构建与鉴定
9
作者 孟雪 王新洲 +1 位作者 高水波 吴鸿 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期444-450,共7页
目的 建立巨噬细胞特异性敲除Kruppel样因子2(kruppel-like factor 2,KLF2)基因小鼠模型,探讨KLF2对巨噬细胞炎症反应的调控作用。方法 运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建KLF2~(flox/+)小鼠。通过与Lyz2-Cre~(+/+)小鼠繁育得到目的基因... 目的 建立巨噬细胞特异性敲除Kruppel样因子2(kruppel-like factor 2,KLF2)基因小鼠模型,探讨KLF2对巨噬细胞炎症反应的调控作用。方法 运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建KLF2~(flox/+)小鼠。通过与Lyz2-Cre~(+/+)小鼠繁育得到目的基因型小鼠,通过基因型鉴定、实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western Blot从DNA、RNA、蛋白水平验证KLF2敲除效率。分离培养小鼠骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages, BMDMs),检测脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的炎症相关因子mRNA变化。结果 建立了KLF2~(flox/flox)/Lyz2-Cre~+基因型小鼠,即巨噬细胞特异性敲除KLF2基因。小鼠骨髓、BMDMs的KLF2 mRNA及蛋白水平显著低于对照组小鼠,而心脏、肝、肾组织中KLF2 mRNA表达较对照组小鼠无显著变化。两组小鼠的体重、进食、进水、形态无显著性差异。在LPS作用下,缺失KLF2的BMDMs炎症相关基因IL-6 mRNA表达水平较对照组显著下降,而IL-1、iNOS、CD86 mRNA表达水平较对照组显著升高。结论 本研究成功构建了巨噬细胞特异性敲除KLF2小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞KLF2对临床炎症相关疾病的调控作用及机制奠定基础。 展开更多
关键词 Kruppel样因子2 特异性敲除小鼠 CRE/LOXP系统 巨噬细胞 动脉粥样硬化
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CX3 CR1^(GFP)报告基因小鼠的构建、鉴定及效率检测
10
作者 赵鑫鑫 黄蓉 +3 位作者 陈露云 黄春梅 涂佳杰 王鑫铭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2392-2398,共7页
目的 基于Cre/Loxp系统构建CX3CR1^(GFP)基因小鼠,并分析CX3CR1^(GFP)表达效率。方法 通过以限制酶为基础的克隆技术设计靶向载体,用线性化的靶向载体转染胚胎干细胞(embryonic stem,ES),将筛出缺失新霉素抗性基因(neomycin resistance ... 目的 基于Cre/Loxp系统构建CX3CR1^(GFP)基因小鼠,并分析CX3CR1^(GFP)表达效率。方法 通过以限制酶为基础的克隆技术设计靶向载体,用线性化的靶向载体转染胚胎干细胞(embryonic stem,ES),将筛出缺失新霉素抗性基因(neomycin resistance gene,neo)的重组ES细胞克隆注入囊胚中产生嵌合CX3CR1^(+/GFP)小鼠,与野生型小鼠(wild type mice,WT)交配,反复回交得到CX3CR1^(GFP/GFP)小鼠。分别提取WT和CX3CR1^(GFP)小鼠DNA及mRNA,使用琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型,RT-qPCR检测小鼠不同组织中CX3CR1的表达水平;Western blot分析GFP蛋白对外周血中的单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)及不同组织中CX3CR1的表达;流式细胞术检测骨髓中免疫细胞的标记效率;免疫荧光观察小鼠不同组织中GFP的表达情况。结果琼脂糖凝胶电泳结果表明,转基因小鼠基因型为CX3CR1^(GFP/GFP)纯合子。RT-qPCR和Western blot结果表明,增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)已靶向取代CX3CR1基因,因此在CX3CR1^(GFP)小鼠中CX3CR1表达极低,而GFP表达明显上调;流式细胞术和免疫荧光显示,GFP有效标记CX3CR1^(GFP)小鼠,在不同组织及不同细胞均有表达且表达具有差异。结论 本研究构建并鉴定CX3CR1^(GFP)基因报告小鼠,且GFP在小鼠体内稳定表达。为进一步揭示CX3CR1在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。 展开更多
关键词 CX3CR1 EGFP Cre/Loxp 流式细胞术 免疫荧光 类风湿关节炎
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Cre/loxP条件性基因敲除小鼠在椎间盘退变研究中的应用
11
作者 黄龙鳌 陈棣 江华 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期990-997,共8页
椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是一个在生命早期就开始的过程,其与遗传、机械负荷、创伤和营养因素以及衰老密切相关,已证是腰痛的主要原因之一[1]。然而,IDD的分子生物学机制仍然不清楚。椎间盘的不同细胞类型表... 椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)是一个在生命早期就开始的过程,其与遗传、机械负荷、创伤和营养因素以及衰老密切相关,已证是腰痛的主要原因之一[1]。然而,IDD的分子生物学机制仍然不清楚。椎间盘的不同细胞类型表达不同的基因,以调控椎间盘的发育和稳态。 展开更多
关键词 条件性基因敲除 椎间盘退变 生命早期 Cre/loxP 分子生物学机制 营养因素 机械负荷 IDD
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儿童耐碳青霉烯类肠杆菌感染的治疗进展
12
作者 郑义寒 陈正荣 《儿科药学杂志》 CAS 2024年第4期54-58,共5页
耐碳青霉烯类肠杆菌(CRE)是严重威胁全球公共健康的一类细菌,在全世界的发病率和病死率均呈上升趋势,它的高感染性、高死亡性和高耐药性给临床治疗带来巨大的挑战[1-3]。CRE感染在儿童中日益普遍,往往造成不良的临床结果。
关键词 临床结果 耐碳青霉烯类肠杆菌 公共健康 高耐药性 CRE 感染性 治疗进展 临床治疗
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Responding of zooplankton to environmental factor changes in the Changjiang River estuarine regions in spring-summer from 2016 to 2020
13
作者 Jieqing YANG Dongrong ZHANG +4 位作者 Yuange CHEN Longling OUYANG Yangyang YANG Jin ZHOU Yunrong SHI 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第2期544-559,共16页
The estuarine areas are under frequent influence from freshwater intrusion and ocean currents,in which zooplankton species are diversified and variable as they are sensitive to physio-chemical variations in water.Ther... The estuarine areas are under frequent influence from freshwater intrusion and ocean currents,in which zooplankton species are diversified and variable as they are sensitive to physio-chemical variations in water.Therefore,understanding the relationships between zooplankton and environmental factors help us know the water quality.To achieve co-existence with species in similar ecological group or habit,they could inevitably alter themselves to fit the ecology and adjust the function according to the competitive exclusion in ecological theory.However,information of the co-existence of dominant species in the Changjiang(Yangtze)River estuary(CRE)and adjacent waters remains scarce.We explored the relationships between dominant zooplankton and environmental factors in the study region in spring-summer from 2016 to 2020,involving particularly the composition of dominant species,ecological groups,their relationships with environmental factors,and co-existence of important species,using the non-multidimensional scale analysis(nMDS)method and redundancy analysis.Results show that Labidocera euchaeta and Tortanus vermiculus were dominant species in the study scope.The turnover rate of dominant zooplankton was greater(>50%)in spring while the species number was higher in summer.The dominant species were estuarine,offshore,and eurytopic based on the adaptation to salinity.In spring,the ecological groups were dominated by estuarine species,while in summer by estuarine and offshore species.In addition,the nMDS showed that the dominant species in the same ecological group were more dispersed and not prominently clustered;the dominant species were staggered among different ecological groups.The temperature,salinity,pH,dissolved oxygen,and chlorophyll a were the main environmental factors on the distribution of the dominant species in spring,while in summer were dissolved oxygen,temperature,salinity,and pH.The domination of medusae of Nemopsis bachei and Pleurobrachia globosa in zooplankton community in spring,and the continuous decrease in abundance of L.euchaeta reflected the effects of local climate change.The temperature and salinity changes in different years and the subsequent response of zooplankton reflected the influence of freshwater intrusion and/or ocean currents.Zooplankton in similar ecological habits exhibited the competitive exclusion in terms of co-existence. 展开更多
关键词 Changjiang River estuary(CRE) ZOOPLANKTON dominant species ecological group environmental factor CO-EXISTENCE
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Vav^(Cre)介导的荧光报告系统对小鼠小胶质细胞的标记效率
14
作者 李冰冰 李佳倬 +2 位作者 朱盼盼 王一婷 谢华锋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2024年第4期450-454,共5页
目的:探讨Vav^(Cre)介导的荧光报告系统对小胶质细胞的标记效率。方法:将Vav^(Cre)/Rosa26REYFP fl/fl雄鼠与C57BL/6雌鼠杂交获得Vav^(Cre)/Rosa26REYFP^(fl/-)和Rosa26REYFP^(fl/-)子代。以发现雌鼠阴道栓的时间标记为E0.5,流式细胞术... 目的:探讨Vav^(Cre)介导的荧光报告系统对小胶质细胞的标记效率。方法:将Vav^(Cre)/Rosa26REYFP fl/fl雄鼠与C57BL/6雌鼠杂交获得Vav^(Cre)/Rosa26REYFP^(fl/-)和Rosa26REYFP^(fl/-)子代。以发现雌鼠阴道栓的时间标记为E0.5,流式细胞术检测EYFP在E7.5~E8.25、E10~E10.5、E12~E12.5、E14~E14.5小鼠胚胎和新生小鼠小胶质细胞中的表达。结果:Vav^(Cre)/Rosa26REYFP^(fl/-)组E10~E10.5、E12~E12.5、E14~E14.5胚胎和新生小鼠小胶质细胞中EYFP阳性率高于Rosa26REYFP^(fl/-)组(P<0.001),且均>95.000%。Vav^(Cre)/Rosa26REYFP^(fl/-)E7.5~E8.25小鼠胚胎中EYFP阳性率为(0.059±0.009)%。结论:以Vav^(Cre)介导的荧光报告系统可以稳定、高效地标记小鼠小胶质细胞,可以用于动态监测小胶质细胞的发育。 展开更多
关键词 小胶质细胞 Vav^(Cre) Rosa26REYFP 小鼠
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髓系特异性Spi1基因敲除小鼠的构建和基因鉴定
15
作者 吴旭铭 王卉卉 +5 位作者 朱向玲 周园园 王安琪 张慧茹 刘崇 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期413-417,共5页
目的构建髓系特异性Spi1基因敲除小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点研究提供动物模型基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理和Cre/LoxP系统,设计并构建sgRNA和Donor载体,以第2号外显子(Exon 2)所在的转录本为敲除区域,在Exon 2... 目的构建髓系特异性Spi1基因敲除小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点研究提供动物模型基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理和Cre/LoxP系统,设计并构建sgRNA和Donor载体,以第2号外显子(Exon 2)所在的转录本为敲除区域,在Exon 2两侧各放置同向Loxp元件;将Cas9蛋白、sgRNA和Donor载体混合显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,移植受精卵到假孕的C57BL/6J母鼠的子宫中,19~20 d后获得F0代。将阳性F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配,得到稳定的F1代Spi1^(flox/+)小鼠。F1代Spi1^(flox/+)小鼠雌雄自交得到Spi1^(flox/flox)小鼠。Spi1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配得到Spi1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Spi1^(flox/flox)交配,得到的Spi1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Spi1基因敲除(KO)小鼠;Spi1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(-)小鼠作为野生型(WT)小鼠。提取WT和KO小鼠DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型;Western blot检测WT和KO小鼠免疫细胞中脾病灶形成病毒前病毒整合癌基因-1/富含嘌呤盒1(PU.1)表达。结果PCR鉴定结果显示,采用flox引物鉴定时仅扩增出220 bp条带的小鼠,即基因型为Spi1^(flox/flox)纯合子,采用Lyz2-Cre引物鉴定时扩增出700 bp的小鼠,基因型为Lyz2-Cre^(+);Western blot结果显示,与WT组比较,KO组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)和腹腔原位巨噬细胞(PM)中的PU.1不表达(P<0.01);T细胞中KO小鼠PU.1表达水平与WT小鼠差异无统计学意义;PCR和Western blot结果均表明髓系特异性Spi1 KO小鼠构建成功。结论成功构建和鉴定髓系特异性Spi1 KO小鼠,为进一步揭示PU.1在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。 展开更多
关键词 髓系特异性 Spi1 基因敲除 CRISPR/Cas9 Cre/LoxP PCR Western blot
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T细胞条件性敲除Spi1基因小鼠的繁育及鉴定
16
作者 王卉卉 朱向玲 +5 位作者 吴旭铭 张慧茹 周园园 王安琪 刘崇 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第4期595-599,共5页
目的繁育T细胞条件性敲除Spi1基因的小鼠并对其进行鉴定,为进一步探索Spi1编码蛋白PU.1的作用提供研究基础。方法将Lck-Cre小鼠与Spi1^(flox/flox)小鼠进行杂交繁育,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出基因... 目的繁育T细胞条件性敲除Spi1基因的小鼠并对其进行鉴定,为进一步探索Spi1编码蛋白PU.1的作用提供研究基础。方法将Lck-Cre小鼠与Spi1^(flox/flox)小鼠进行杂交繁育,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出基因型为Lck-Cre×Spi1^(flox/flox)的小鼠即为T细胞条件性敲除Spi1基因的纯合子小鼠。使用磁珠分选脾脏T淋巴细胞,并应用Western blot、实时荧光定量PCR(qPCR)及流式细胞术检测PU.1在T细胞中的敲除效率。结果Lck-Cre×Spi1^(flox/flox)小鼠基因稳定遗传。与Spi1^(flox/flox)小鼠相比,Lck-Cre×Spi1^(flox/flox)小鼠脾脏T细胞中的PU.1表达水平显著降低。结论该研究应用Cre/LoxP系统和CRISPR/Cas9技术成功构建了T细胞条件性敲除Spi1基因小鼠,为后续研究PU.1在T细胞相关疾病中的具体作用提供了可靠的动物模型。 展开更多
关键词 Spi1 CRE/LOXP系统 CRISPR/Cas9技术 T细胞 PU.1 条件性敲除
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基于Cre/Loxp系统的Csf1r-Cre^(ERT2)R26R^(EYFP)报告基因小鼠的构建及效率检测
17
作者 朱向玲 吴旭铭 +5 位作者 王卉卉 周园园 王安琪 张慧茹 刘崇 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第7期1175-1180,共6页
目的构建报告基因小鼠,评价Csf1r-Cre^(ERT2)介导增强黄色荧光素蛋白EYFP标记组织CD45^(+)细胞CSF1R的效率。方法Csf1r-Cre^(ERT2)小鼠与R26R^(EYFP)小鼠繁育,他莫昔芬诱导、PCR筛选Csf1r-Cre^(ERT2)R26R^(EYFP)小鼠,流式细胞术和Wester... 目的构建报告基因小鼠,评价Csf1r-Cre^(ERT2)介导增强黄色荧光素蛋白EYFP标记组织CD45^(+)细胞CSF1R的效率。方法Csf1r-Cre^(ERT2)小鼠与R26R^(EYFP)小鼠繁育,他莫昔芬诱导、PCR筛选Csf1r-Cre^(ERT2)R26R^(EYFP)小鼠,流式细胞术和Western blot分析EYFP对不同组织以及不同组织CD45^(+)细胞中CSF1R的标记效率。结果获得Csf1r-Cre^(ERT2)R26R^(EYFP)报告基因小鼠。此外,Csf1r-Cre^(ERT2)小鼠介导EYFP可有效标记小鼠组织CSF1R以及不同部位中CD45^(+)细胞。与R26R^(EYFP)组比较,Csf1r-Cre^(ERT2)小鼠介导EYFP标记效率最高的是脑组织(P<0.001),最低的是胸腺组织(P<0.05),脾脏组织则差异无统计学意义。结论成年Csf1r-Cre^(ERT2)小鼠与R26R^(EYFP)小鼠是获得Csf1r-Cre^(ERT2)R26R^(EYFP)诱导型条件性荧光小鼠的有效途径。Csf1r-Cre^(ERT2)介导EYFP可对小鼠不同部位CSF1R以及CD45^(+)细胞中CSF1R进行有效示踪。 展开更多
关键词 Csf1r-Cre^(ERT2) R26R^(EYFP) CRE/LOXP系统 CD45 流式细胞术
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蛋白激酶D3血管内皮细胞条件性敲除小鼠的构建及表型分析
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作者 张茜 马军虎 +4 位作者 海霞 马睿婷 宁晓茜 马小元 张淑雅 《宁夏医科大学学报》 2024年第9期873-877,885,共6页
目的构建Prkd3血管内皮细胞条件性敲除小鼠并分析其表型,探讨血管内皮细胞上Prkd3条件性敲除小鼠的敲除效率及可能的表型。方法利用Cre/LoxP系统构建血管内皮细胞条件性基因敲除小鼠模型,即分别构建Prkd3flox/flox小鼠和Cdh5-Cre工具小... 目的构建Prkd3血管内皮细胞条件性敲除小鼠并分析其表型,探讨血管内皮细胞上Prkd3条件性敲除小鼠的敲除效率及可能的表型。方法利用Cre/LoxP系统构建血管内皮细胞条件性基因敲除小鼠模型,即分别构建Prkd3flox/flox小鼠和Cdh5-Cre工具小鼠,再将两者进行交配,筛选得到Prkd3血管内皮条件性敲除小鼠(Cdh5-Cre;Prkd3flox/flox,简称Prkd3ΔEC)。在血管内皮细胞内特异性敲除Prkd3,通过鼠尾PCR法进行基因型鉴定;分离肝血窦内皮细胞并用Western blot检测敲除效率,通过功能学及组织病理学方法评估内皮细胞中Prkd3缺失对肝脏的影响。结果成功构建Prkd3ΔEC,敲除效率大于90%。表型分析发现,Prkd3ΔEC小鼠表现出自发性肝纤维化,随年龄增长逐渐加重(P<0.05);通过HE染色和天狼星红染色发现肝脏中胶原纤维增多,血管周围的纤维成分明显增多(P<0.05)。表明血管内皮细胞中Prkd3缺失能够诱发自发性肝纤维化。结论成功构建了Prkd3ΔEC,该条件性敲除小鼠的肝脏存在自发性肝纤维化情况。 展开更多
关键词 Prkd3 血管内皮细胞条件性敲除小鼠 CRE/LOXP系统 肝纤维化
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因为小,而而错过它?CREEK朗泉4040A紧凑型解码合并式功放
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作者 小路(图/文) 《视听前线》 2024年第2期66-70,共5页
这应该是英国CREEK(朗泉)有史以来体积最小的合并式功放,其摆放面积还不及一张A4纸,如果光看照片而不看实物的话,你想象不到它是如此之小。但就是这么小的一台合并式功放,却集合了多种功能。如果是老一代发烧友,一定对4040这组数字很熟... 这应该是英国CREEK(朗泉)有史以来体积最小的合并式功放,其摆放面积还不及一张A4纸,如果光看照片而不看实物的话,你想象不到它是如此之小。但就是这么小的一台合并式功放,却集合了多种功能。如果是老一代发烧友,一定对4040这组数字很熟悉。早期,CREEK就有这样一台合并式功放,它具有纤细的机身,黑色的面板,具有木纹的顶板和侧板,面板上还有为数不少的按键和旋钮,它就是CREEK在1982年推出的CAS4040合并式功放。 展开更多
关键词 CRE 解码 CAS EK 紧凑型 按键 多种功能 面板
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土壤遥感分类识别专家系统的结构设计 被引量:4
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作者 付炜 《生态环境》 CSCD 2004年第1期63-68,73,共7页
介绍了土壤遥感分类识别专家系统的设计原理与实现方法,阐述了土壤遥感分类识别专家系统的土壤分类决策判断树的构造原理,讨论了土壤遥感分类识别专家知识表示的基本原则和系统知识库中专家知识的组织方式,以及专家系统推理机的设计原... 介绍了土壤遥感分类识别专家系统的设计原理与实现方法,阐述了土壤遥感分类识别专家系统的土壤分类决策判断树的构造原理,讨论了土壤遥感分类识别专家知识表示的基本原则和系统知识库中专家知识的组织方式,以及专家系统推理机的设计原理和推理规则的构建方法。系统采用压缩编码方式存储地学专题图形和遥感图像数据,具有数据与图像的存储更新、查询检索、分析处理、特征提取和信息输出等功能。该系统可以对遥感图像进行土壤类型的分类识别,并对分类精度进行监测与评价。用该系统对新疆天山北麓阜康试验区的土壤分类识别进行了试验研究,并对试验结果进行了讨论与评价。 展开更多
关键词 土壤 遥感技术 压缩编码方式 遥感图像 cres 土壤遥感分类识别专家系统 属性数据库
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