毛蕊花糖苷抑制Erastin诱导的多巴胺能神经细胞系MN9D细胞铁死亡

背景:近年越来越多的研究证实多巴胺能神经元细胞铁死亡参与了帕金森病的发病,毛蕊花糖苷目前被证实具有抗氧化、抗炎和神经保护作用。目的:探讨毛蕊花糖苷对Erastin诱导的MN9D细胞铁死亡的保护效果及作用机制。方法:以MN9D细胞为研究对象,分为对照组、模型组(20μmol/L Erastin组)、Erastin+1μg/mL毛蕊花糖苷组、Erastin+5μg/mL毛蕊花糖苷组、Erastin+10μg/mL毛蕊花糖苷组。MN9D细胞在CO_(2)恒温培养箱中培养24 h,然后用不同质量浓度毛蕊花糖苷预处理8 h,再加入20μmol/L Erastin诱导24 h后,采用ELISA法检测还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、总铁离子、丙二醛水平,免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶的表达,Western blot法检测酪氨酸羟化酶、核因子红细胞-2相关因子2、血红素加氧酶1、谷胱甘肽过氧化物酶4蛋白表达。结果与结论:(1)与对照组相比,模型组还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶水平明显减少(P<0.05),丙二醛和总铁离子水平明显增加(P<0.05);与模型组相比,毛蕊花糖苷1,5,10μg/mL组还原型谷胱甘肽、超氧化物歧化酶水平明显增加(P<0.05),丙二醛和总铁离子水平明减少(P<0.05);(2)与对照组相比,模型组酪氨酸羟化酶阳性细胞面积明显减少(P<0.05);与模型组相比,毛蕊花糖苷1,5,10μg/mL组酪氨酸羟化酶阳性细胞面积明显增加(P<0.05);(3)与对照组相比,模型组酪氨酸羟化酶、核因子红细胞-2相关因子2、血红素加氧酶1、谷胱甘肽过氧化物酶4的蛋白表达明显减少(P<0.05);与模型组相比,毛蕊花糖苷1,5,10μg/mL组酪氨酸羟化酶、核因子红细胞-2相关因子2、血红素加氧酶1、谷胱甘肽过氧化物酶4的蛋白表达明显增加(P<0.05)。结果提示:毛蕊花糖苷对Erastin诱导的MN9D细胞铁死亡具有明显的抑制作用,其机制可能通过作用于核因子红细胞-2相关因子2/血红素加氧酶1/谷胱甘肽过氧化物酶4通路实现的。

天然水凝胶支架的分类及其在3D细胞培养的应用研究进展

天然水凝胶支架由亲水性聚合物链交联形成,有相互连接的多孔结构、良好的生物相容性,通过模拟细胞外基质为细胞的增殖、分化、迁移和相互作用提供了空间微环境,是一种很有前景的3D细胞培养支架材料。本文从制备方法、交联方式、支架材料对天然水凝胶支架进行分类,详细介绍了近年来基于天然水凝胶支架的3D细胞培养在细胞工程、组织工程、病毒培养等生物医学领域的应用。随着生物医学不断发展,需深入研究3D培养细胞与天然水凝胶支架微环境之间相互作用,不断探索新的天然聚合物材料与凝胶制备方式,以便开发高性能、可调控、适用性强的多功能新型天然水凝胶。

α粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化模型的建立

目的:建立α粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化模型。方法:α粒子照射永生化BEP2D细胞,通过细胞传代培养,最终经裸鼠成瘤实验,病理切片鉴定,瘤组织培养获取肿瘤细胞系,角蛋白多克隆抗体免疫组化鉴定细胞上皮来源。结果:(1)α粒子照射BEP2D细胞后,培养35代,54代细胞接种裸鼠成瘤,照后20代BEP2D细胞及未照射永生化BEP2D细胞接种裸鼠不成瘤;(2)瘤体病理切片鉴定为鳞状上皮癌;(3)瘤组织培养得到肿瘤细胞系2个,角蛋白多抗免疫组化实验,细胞胞浆强阳性,证实为上皮来源。结论:1.5Gyα粒子照射诱发BEP2D细胞恶性转化,成功建立α粒子照射诱发肺癌的细胞研究模型。

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节

背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因。方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性。同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异。结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显。而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞。结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一。

人慢性胃炎与神经内分泌G、D细胞关系的研究

探讨神经内分泌 G、D细胞与慢性胃炎的关系。用免疫细胞化学方法对 5 2例慢性胃炎及 9例对照者进行胃窦粘膜内 G、D细胞密度计数。结果显示慢性胃炎病人的 G、 D细胞数均低于对照组 ,特别是萎缩性胃炎 G、 D细胞显著减少 ,同时还发现不同组别、不同程度的萎缩性胃炎 ,其 G细胞的数量均大于 D细胞 ,G/ D细胞的比值在中、重度萎缩性胃炎与其它组相比有显著性差异 (P<0 .0 1)。资料还显示 G、D细胞的计数不仅可以判断胃窦粘膜的萎缩程度 ,而且可作为观察临床疗效的一项重要指标。

BEP2D细胞恶性转化过程中Smad7基因对MAPK信号通路的调控

背景与目的:Smad7基因是转化生长因子(transforminggrouthfactor-茁,TGF-β)信号通路的抑制分子,有研究表明TGF-β通过活化SMAD通路和ras/MEK/ERK通路来诱导某些基因的表达。本研究旨在探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D经辐射诱发恶性转化过程中,作为SMAD蛋白家族的抑制分子Smad7是否参与TGF-β对MAPK信号通路的调控。方法:将人工合成的Smad7siRNA及Smad7真核表达载体与pTet-Elk,pTet-Jun反式激活载体、报告基因荧光素酶共转染BEP2D细胞,TGF-β刺激,通过报告基因荧光素酶的表达丰度来检测Smad7对MAPK信号通路的调控。结果:永生化BEP2D细胞中,TGF-β刺激之后,Elk和Jun磷酸化活性升高(PElk=0.033,PJun=0.016);Elk或Jun同Smad7真核表达载体共转染之后,Elk磷酸化活性升高,Jun磷酸化活性降低(PElk=0.017,PJun=0.028);Elk或Jun同Smad7-siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低,Jun磷酸化活性升高(PElk=0.018,PJun=0.005)。恶性化BERP35T2细胞中,TGF-β刺激之后,Elk磷酸化活性增强(P=0.006),Elk同Smad7siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低(P=0.000);恶性化细胞中几乎检测不到Jun的活性。结论:在BEP2D细胞发生恶性转化过程中,Smad7基因干预MAPK信号通路,使ERK和JNK磷酸化活性的平衡失调,导致促增殖作用强于生长抑制作用,从而有助于细胞向恶性方向发展。

三参滋胃饮对慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜G细胞和D细胞的作用

目的 :探讨三参滋胃饮对慢性萎缩性胃炎 (CAG)大鼠胃黏膜 G细胞和 D细胞的作用及其机制。方法 :采用综合法 (主动免疫、寒凉胆汁及热水灌胃等 )复制 CAG大鼠模型 ,应用大、小剂量三参滋胃饮及对照药物维酶素 (WMS)连续给药 5 0 d,观察给药前后各组胃黏膜病理改变、免疫组化染色后 G细胞及 D细胞的形态和数量变化。结果 :萎缩性胃炎模型鼠 G细胞和 D细胞数量明显减少 (P<0 .0 1 ) ,且两种细胞均有脱颗粒现象 ;G/D比值下降 ,表明在萎缩发生期间 G细胞下降速度较 D细胞快 ,即 G细胞对萎缩病变反映更为敏感。给药结束后三参滋胃饮组 G、D细胞数量均明显增多 ,最终使 G/D比值恢复至正常组水平 ,且与 WMS组比较差异有显著性(P<0 .0 5 )。大剂量组病理改变的恢复情况优于小剂量组。结论 :三参滋胃饮可能通过改善胃黏膜炎症反应促进腺体及内 (旁 )分泌细胞再生 ,通过改善胃肠激素对胃功能的调节作用而发挥治疗作用。

α粒子诱发BEP2D细胞转化过程中肺癌相关基因表达的cDNA Microarray研究

目的：探讨辐射诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)转化过程中肺癌相关基因的表达。方法：用Cartesian PixSys5500 cDNA Microarray点样仪将60个肺癌相关基因以微阵列形式点布于醛基化的玻璃片上。提取α离子辐射前BEP2D细胞（原代）和α粒子辐射后20代、35代细胞总RNA，经长片段反转录和线性扩增标记成荧光探针后与微阵列中cDNA进行杂交。结果：原代细胞中检测到40个基因表达；20代检测到47个基因表达；35代检测到20个基因表达。所检测的基因中，抑癌基因的mRNA丰度在原代和20代后细胞中急剧下降；大多数癌基因的表达丰度在20代以后细胞中仅轻微下降；生长因子类基因大都在20代细胞表达。结论：在辐射诱发的人支气管上皮转化细胞中，抑癌基因的失活可能与细胞恶化有关；癌基因及生长因子类基因可能促进了细胞的转化。

人参皂苷-Rh_2对人乳腺癌T47D细胞的生长抑制作用及对Caspase-3表达的影响

目的:研究人参皂苷-Rh2(GS-Rh2)对雌激素依赖性人乳腺癌T47D细胞增殖和凋亡的影响,并对可能引起凋亡的机制做一初步探索。方法:采用MTT比色法观察GS-Rh2对体外培养的T47D细胞生长的抑制作用;用光学显微镜观察T47D细胞用药前后的形态学变化;应用流式细胞仪检测凋亡细胞和细胞周期变化以及Caspase-3表达的变化。结果:MTT比色法测定结果显示,T47D细胞经GS-Rh2作用后生长受抑制,呈剂量依赖性和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)为21.6μg/mL;光学显微镜显示T47D细胞经GS-Rh2作用后呈较明显的凋亡形态学改变;流式细胞仪检测证实,GS-Rh2能在一定浓度范围内诱导T47D细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G1期,并使Caspase-3表达增加。结论:GS-Rh2能抑制体外培养的T47D细胞增殖并诱导其凋亡。Caspase-3表达增加可能是GS-Rh2诱导T47D细胞凋亡的机制之一。

丹参酮ⅡA抗乳腺癌T47D细胞增殖的GPER途径研究

目的利用经典雌激素受体（estrogenic receptor,ER）和G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen recep-tor,GPER）阳性乳腺癌T47D细胞,探索丹参酮IIA（TanshinoneIIA）对细胞增殖活性的影响及其GPER介导与调节功能.方法以GPER激动剂G1和GPER拮抗剂G15为工具药干预,并应用GPERSiRNA转染构建GPER基因沉默的T47D细胞,利用MTT细胞增殖实验观察丹参酮IIA对T47D细胞增殖速率的影响及GPER的介导作用.利用Westernblot方法检测丹参酮IIA对T47D细胞GPER表达情况的影响.结果1×10^-5 mol·L^-1 ～1×10^-7 mol·L^-1丹参酮IIA能够明显抑制T47D细胞增殖,且该抑制作用可被G1拮抗,可被G15增强.丹参酮IIA作用于GPER基因沉默的T47D细胞,该细胞表现出更为明显的生长抑制效应.West-ernblot测定结果表明,1×10^-5 mol·L^-1和1×10^-6 mol·L^-1丹参酮IIA可使T47D细胞GPER蛋白表达明显降低.结论丹参酮IIA具有抑制乳腺癌T47D细胞增殖的作用,该抑制作用可经GPER途径介导;且丹参酮IIA具有对靶细胞GPER表达的调节功能.

SAGE方法分析永生化BEP2D细胞及α粒子诱发恶性转化BEP2D细胞的基因表达

目的：采用基因表达系列分析（ｓｅｒｉａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＳＡＧＥ）方法，分析永生化ＢＥＰ２Ｄ细胞及α粒子诱发恶性转化ＢＥＰ２Ｄ细胞的基因表达。方法：细胞培养，收获永生化ＢＥＰ２Ｄ细胞及α粒子诱发恶性转化ＢＥＰ２Ｄ细胞；提取细胞总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，合成生物素标记的双链ｃＤＮＡ；采用ＳＡＧＥ方法获取标签序列，结合ＵｎｉＧｅｎｅ文库分析标签代表的转录本，最终通过ＳＡＧＥ软件分析标签丰度，比较两组细胞基因表达差异。选取ＳＡＧＥ实验得到的在两组细胞中表达的已知基因Ｓｍａｄ７和 ＣＣＲ１１，以 ＲＴ－ＰＣＲ方法制备探针，用两组细胞等量总ＲＮＡ为样本，做 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交。结果：建立了２个独立的 ＳＡＧＥ文库。一个是１．５ Ｇｙα粒子照射诱发恶性转化ＢＥＰ２Ｄ细胞的ＳＡＧＥ文库，一个是永生化ＢＥＰ２Ｄ细胞ＳＡＧＥ文库。从２个文库中分别挑取克隆５３个、５０个，进行测序，测序一共得到总标签２３３１个，代表单一转录本 ２５２个，有 ７０％的 ＳＡＧＥ标签可找到与之一一对应的基因，有８４个核糖体蛋白基因，约占３３％；有１２个转录本（４．８％）找不到与之理想匹配的已知基因；

NNK诱发BEP2D细胞产生活性氧及其对DNA的损伤

通过测定细胞内和细胞上清中活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）水平，以及ＤＮＡ 加合物——８－羟基脱氧鸟嘌呤核苷（８－ｈｙｄｒｏｘｙｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ，ＯＨ８ｄＧ）含量，对烟草特异亚硝胺类化合物４－甲基亚硝胺－１（３－吡啶基）－１－丁酮（４－（ｍ ｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍ ｉｎｏ）－１－（３－ｐｙｒｉｄｙｌ）－１－ｂｕｔａｎｏｎｅ，ＮＮＫ）诱发人乳头状病毒永生化的人支气管上皮细胞（ｈｕｍ ａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍ ａｖｉｒｕｓ－ｉｍ ｍ ｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｈｕｍ ａｎｂｒｏｎｃｈｉａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ，ＢＥＰ２Ｄ）产生的ＲＯＳ及其对ＤＮＡ 的氧化损伤进行研究，并观察纳米硒的保护作用．结果表明，ＢＥＰ２Ｄ 细胞经不同浓度的ＮＮＫ 作用后，细胞内和细胞上清中ＲＯＳ以及ＯＨ８ｄＧ含量均显著增加，并有较好的剂量效应关系．１ μｍ ｏｌ·Ｌ－ １纳米硒（ｎａｎｏｓｅｌｅｎｕｉｍ ，ＮＳ）能明显抑制ＮＮＫ 诱发ＢＥＰ２Ｄ细胞产生的ＲＯＳ及ＯＨ８ｄＧ 水平．揭示ＮＮＫ 能造成细胞的氧化损伤，而ＮＳ对ＮＮＫ 所致细胞的氧化损伤有保护作用．

刺槐素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响

目的研究刺槐素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探究刺槐素雌激素样作用的主要介导受体。方法磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期的变化,q PCR检测雌激素受体-α(ERα)、雌激素受体-β(ERβ)、细胞增殖抗原标记物(Ki67)mRNA表达,Western blot法检测ERα、ERβ蛋白表达。结果刺槐素浓度为0.001~10μmol·L^(-1),能促进T47D细胞增殖,使S和G_2/M期的细胞比例明显增加,增殖指数升高,同时增加Ki67 mRNA的表达,此作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780所拮抗。刺槐素及17β-雌二醇(E2)均可上调ERα和ERβ的表达,刺槐素联合ERα受体拮抗剂(MPP)可逆转刺槐素的促增殖作用,使S和G_2/M期的细胞比例明显降低,减少Ki67mRNA的表达;但刺槐素联合ERβ受体拮抗剂(PHTPP)处理虽可抑制细胞增殖效应,使S和G_2/M期的细胞比例降低,减少Ki67 mRNA的表达,但作用不明显。结论刺槐素具有雌激素样作用,在0.001~10μmol·L^(-1)浓度范围内,可通过调节ERα受体表达来促进T47D细胞的增殖。

下颌下腺切除对大鼠胃窦粘膜G、D细胞影响的免疫组织化学研究

用免疫组织化学方法观察了下颌下腺切除后，胃窦粘膜胃泌素细胞（Ｇ细胞）和生长抑素细胞（Ｄ细胞）的分布、形态和数量及Ｇ／Ｄ细胞比值的变化。结果显示：下颌下腺切除后１０～２１ｄ，Ｇ细胞密度增大，常三五成群，分布区域变宽。细胞计数显示，术后１０～２１ｄ，Ｇ细胞数量明显增多（Ｐ＜０．０１）。术后１４ｄ，Ｄ细胞数量明显减少（Ｐ＜０．０１）；术后２１ｄ，Ｄ细胞数量有所增加，但仍少于正常组（Ｐ＜０．０５）。术后１０ｄ，Ｇ／Ｄ细胞比值上升（Ｐ＜０．０５）；术后１４～２１ｄ，比值明显升高（Ｐ＜０．０１）。实验结果表明：下颌下腺切除可致Ｇ、Ｄ细胞的分布、数量和Ｇ／Ｄ细胞比值发生明显变化，这可能提示下颌下腺与Ｇ、Ｄ细胞之间有功能上的联系。

脾虚证与胃窦D细胞的关系

目的 探讨脾虚证与生长抑素 (somatostain,SS)内分泌细胞 (D细胞 )数量变化的关系 .方法 用免疫组化链酶亲合素过氧化酶复合技术 (SABC)对利血平脾虚大鼠模型胃粘膜和患者胃粘膜组织的 D细胞染色 ;观察各组 D细胞的形态和数量变化 .结果 和对照组相比 ,脾虚大鼠模型 7d组 D细胞数升高 (43.4± 3.1 vs78.6± 4.6,P<0 .0 1 ) ,强阳性细胞率下降 [(34.6± 2 .5) % vs(2 4 .1± 3.5) % ,P<0 .0 1 ] ;脾虚大鼠模型 1 4 d组 D细胞强阳性细胞率升高 [(34.6± 2 .5) % vs(46.4± 9.0 ) % ,P<0 .0 5] ;四君子汤治疗组大鼠与正常对照组间 D细胞数 (43.4± 3.1 vs41 .7± 3.7)及强阳性细胞率无显著差异 [(34.6± 2 .5) % vs(33.1± 1 .7) % ,P>0 .0 5] .患者脾虚组 D细胞阳性数 (70 .4± 1 0 .1 ) ,(38.1± 6.4) ,(45.4± 8.6) ,(P<0 .0 1 )及强阳性率较胃热、肝火上炎组均增加 (43.2± 8.7) % ,(1 7.9± 6.6) % ,(2 1 .8± 7.5) % (P<0 .0 1 ) .结论 脾虚证大鼠和患者胃粘膜组织中 D细胞阳性和强阳性细胞率增加 ,提示脾虚患者临床出现腹胀、纳差等症状可能是由于

榄香烯对PLA801D细胞株诱导分化研究

目的观察榄香烯(elemene)对体外培养的PLA801D细胞株(人肺巨细胞癌株)生长抑制作用。方法应用相差显微镜观察经不同浓度的榄香烯溶液(25、50和100μg/L)作用的PLA801D细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期各时相的变化,电子显微镜观察亚细胞结构改变。结果对照组细胞呈梭形贴壁生长,实验组细胞贴壁不佳,细胞数目变少,细胞改变呈剂量依赖性。流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,电子显微镜下可见细胞核染色质趋边凝集,胞质有空泡。结论榄香烯能够抑制体外培养的PLA801D细胞生长,阻滞PLA801D细胞G1期向S期转化进程,且呈剂量依赖性诱导细胞凋亡。

黄荆子乙酸乙酯提取物对人乳腺癌T47D细胞及其裸鼠移植瘤生长抑制的影响

目的:研究黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)对人乳腺癌(T47D)细胞及其裸鼠移植瘤生长抑制的影响。方法:体外培养T47D细胞,溴化标记尿嘧啶(BrdU)掺入法测定细胞核酸合成的抑制作用;平皿克隆形成法测定细胞锚定依赖生长能力的抑制作用;人乳腺癌T47D裸鼠移植瘤模型治疗实验,观察EVn-50在体内对T47D细胞生长抑制作用,HE染色观察乳腺癌组织和细胞形态改变。结果:EVn-50抑制体外培养T47D细胞核酸合成和生长,呈剂量依赖性;EVn-50对裸鼠移植瘤的生长具有显著抑制作用,呈剂量和时间依赖性;EVn-5080mg/kg实验组对移植瘤的瘤重抑制率为51.4%(P<0.001);镜下观察EVn-5080mg/kg实验组肿瘤组织坏死组织较多,细胞异型性较少。结论:黄荆子乙酸乙酯提取物对人乳腺癌有生长抑制作用。

幽门螺旋杆菌对慢性胃炎患者胃窦黏膜内G、D细胞的影响

目的 了解幽门螺旋杆菌 (HP)对慢性胃炎胃窦黏膜内G、D细胞的影响。 方法 用免疫组织化学双重染色法 ,观察正常人、HP- 组和HP+ 组慢性胃炎患者胃窦黏膜内G、D细胞的数量 ,G D细胞的比值以及G、D细胞接触的百分率。 结果 G细胞数量在 3组中无明显差异 (P >0 0 5 ) ,HP+ 胃炎组D细胞显著减少 ,与其他 2组相比有显著性差异 (P <0 0 1) ;而G D细胞比值增高 ,G、D细胞接触的百分率下降。 结论 HP可抑制胃窦D细胞生长抑素的合成和D细胞的增殖 ,从而可能减少D细胞对G细胞胃泌素分泌的抑制。

过表达microRNA-7对人肺癌95D细胞凋亡的影响

目的探讨过表达micro RNA-7对人肺癌95D细胞体内外凋亡的作用。方法将mi R-7真核表达载体(命名为p-mi R-7)体外瞬时转染人肺癌95D细胞,利用TUNEL法观察95D细胞凋亡的变化;免疫荧光技术检测各组细胞磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达;建立人肺癌裸鼠模型,肿瘤局部注射p-mi R-7后利用TUNEL法检测肿瘤局部细胞凋亡变化,同时,免疫组织化学法检测凋亡相关的磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达变化。结果体外转染p-mi R-7后可导致人肺癌细胞的凋亡(P<0.05)。同时,细胞中磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平显著增加(P<0.05);肿瘤局部注射p-mi R-7后,肿瘤局部mi R-7表达水平及细胞凋亡也明显增强(P<0.05),磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平也显著增加。结论过表达mi R-7可以导致肿瘤细胞凋亡,这与凋亡相关蛋白Caspase3和Caspase9磷酸化水平增加有关。

Forskolin上调MN9D细胞Nurr1的表达及Nurr1过表达对酪氨酸羟化酶的影响

目的寻找能激活MN9D细胞内源性孤儿核受体(Nurrl)表达的信号分子,研究Nurrl表达增高对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响,探讨激活Nurrl表达的信号机制。方法用蛋白激酶A激动剂Forskolin或蛋白激酶C激动剂PMA作用于MN9D细胞,用免疫荧光细胞化学及Westernblot方法检测MN9D细胞内源性Nurrl表达的变化,以及Nurrl表达增加对TH表达的影响。利用PKA信号转导通路的特异性抑制剂H89探讨激活Nurrl表达的信号机制。结果1·从加入Forskolin1h起,直至6h,MN9D细胞Nurrl表达比未加Forskolin组明显增加(P<0·05);Forskolin主要增加MN9D细胞核内Nurrl含量,而细胞浆内Nurrl含量变化不明显;Forskolin作用后MN9D细胞TH表达无明显变化。2·用蛋白激酶A的特异性抑制剂H89预处理后,Forskolin仍具有增加Nurrl表达的作用。结论Forskolin可增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位,单纯Nurrl表达及核转位增加不影响MN9D细胞TH的表达,TH表达的激活可能还需要其他特殊的细胞(或神经元)环境或共激活因子的共同作用。Forskolin增加MN9D细胞内源性Nurrl表达及核转位的作用不是主要通过激活PKA信号转导通路完成的。