头孢类抗生素的新型中间体D-7-ACA

目的:研究新型头孢中间体D-7-ACA的特点、性质和应用。方法:查阅现有文献和专利,研究、分析并总结出D-7-ACA在头孢抗生素合成中的应用。结果:D-7-ACA作为合成头孢类抗生素的中间体,可替代7-ACA,简化操作步骤。结论:新型头孢中间体D-7-ACA可用于多种头孢类抗生素的合成。

超高效液相色谱法测定D-7-ACA的含量

D-7-ACA(3-去乙酰基-7-氨基-头孢烯酸)为头孢菌素类抗生素的新型中间体,用于生产头孢呋辛、头孢地尼等产品,具有收率高、质量优等特点。采用超高效液相色谱法(UPLC)测定,并按外标法以峰面积计算含量。结果表明,UPLC可用于准确测定D-7-ACA含量,有较强的专属性;D-7-ACA在0.040 14~0.160 56 mg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.997 5;精密度良好;检测限和定量限非常低,检测限达到1.2×10-9,定量限达到4×10-9;溶液的稳定性良好,溶液冷藏放置12 h,RSD为0.26%。方法的耐受性良好,当色谱条件如柱温上下浮动5℃,流速上下浮动0.1 mL/min,流动相pH值上下浮动0.1时,仍能保证检测结果准确。

三相法提取猪肝酯酶及其在制备D -7-ACA中的应用

酯酶广泛存在于动物、植物和微生物中,具有作用范围广、底物特异性高等特点。该酶能够催化许多含有酯、酰胺、硫酯或乙酰基的化合物的水解与合成,在生物催化领域具有重要的用途。对来源于猪肝中的酯酶采用三相分离的方法进行了提取,并利用猪肝酯酶的水解特性,研究了其催化7-氨基头孢烷酸(7-ACA)脱乙酰基制备去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA)的过程。主要研究结果:确立了三相法分离提取猪肝酯酶的方法,考察了有机溶剂种类、有机溶剂用量、硫酸铵浓度以及体系的pH和提取温度等条件对三相法分离提取猪肝酯酶的影响。实验结果表明在硫酸铵质量分数为45%、异丁醇与水相之比为1∶1、pH7.0、温度为30℃的条件下,酶活回收率为54.84%,纯化倍数为6.32倍。以猪肝酯酶为催化剂,研究了猪肝酯酶催化7-ACA脱乙酰基制备D-7-ACA,在pH7.5、温度35℃、底物浓度2%、酶添加量30 U/mL的反应条件下,7-ACA转化率达到94.33%。

固定化D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸

部分纯化的变异三角酵母D-氨基酸氧化酶(DAO)在碱性条件下变性过氧化氢酶,再与大孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯高聚物共价交联。与游离酶相比,固定化酶的最适反应温度升高,最适pH范围变宽,对温度和pH的稳定性都有明显的提高。固定化DAO在搅拌反应器中催化头孢霉素C(CPC)转化为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸(Gl-7-ACA)。以0.03g/mL的CPC为底物,在温度25℃、pH7.2条件下,产物的得率>93%,副产物得率<5%。经过110批反应后,固定化酶保持64%的初始活力。

两步酶法制备去乙酰基7-氨基头孢烯酸

以生产头孢菌素C(CPC)过程中的副产物去乙酰头孢菌素C(DCPC)为原料,用固定化D-氨基酸氧化酶(DAAO)和固定化戊二酰基酰化酶(GA),连续两步进行酶裂解,制备了去乙酰基7-氨基头孢烯酸(D-7-ACA),总收率72%。滴加浓度为1 mol/L的过氧化氢可使去乙酰基戊二酰基7-ACA(D-G l-7-ACA)的收率提高6%。提高氧气流速和改善搅拌形式可以加快DAAO酶反应速度,使中间产物残留减少3%。高纯度的去乙酰头孢菌素C钠盐(DCPCNa)可以提高该两步酶法反应的收率和产品质量,延长酶的使用寿命。

酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展

氨基头孢烷酸 (7 ACA)是生产头孢菌素的重要原料 ,目前都由头孢菌素C通过化学法或生物酶法生产。综述了利用酶法生产 7 ACA的研究进展 ,其中涉及催化过程所用两种酶 (D 氨基酸氧化酶和GL 7 ACA酰化酶 )的酶学特性、表达、纯化。

加校正因子的RP-HPLC法测定不同方法生产的7-氨基头孢烷酸中有关物质

目的建立一种能够准确测定7-氨基头孢烷酸中有关物质的方法，同时进行不同方法生产的产品的含量测定及有关物质检查。方法采用高效液相色谱法。使用C18色谱柱（SB-C18,5μm，4．6mm×250mm）；以磷酸盐缓冲液（取5g磷酸氢二钾和5g磷酸二氢钾溶解于1000mL水中，用磷酸调节流动相pH值至6．0）-乙腈（92：8）为流动相；检测波长为254nm；柱温为35℃；进样量20μL。结果7-氨基头孢烷酸在504～0．02534μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9991；去乙酰7-氨基头孢烷酸在10．52-0．0263μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9996；去乙酰氧7-氨基头孢烷酸在9．66～0．02415μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9998；头孢菌素C在10．5～0．02625μg／mL范围内，线性关系良好，相关系数R^2为0．9998。溶液的稳定性及进样精密度、日内精密度、重复性、专属性良好。去乙酰7-氨基头孢烷酸、去乙酰氧7-氨基头孢烷酸和头孢菌素C的校正因子分别为0．80、0．82、1．67。结论此方法可以准确测定7-氨基头孢烷酸中的含量，并采用校正因子法计算有关物质的含量。不同方法生产的7-氨基头孢烷酸的含量及有关物质无明显差异。

去乙酰基7-氨基头孢烯酸制备方法的研究进展

目的:系统概述新型头孢中间体去乙酰基7-氨基头孢烯酸(D-7-ACA)的特点、应用及制备研究进展。方法:查阅现有文献总结出D-7-ACA的各种制备研究进展。结果:三酶法制备D-7-ACA,可将头孢菌素C(CPC)和3-去乙酰-头孢菌素C(D-CPC)催化转化为D-7-ACA,提高了头孢菌素C发酵组份的利用率,并且避免了使用有毒化学试剂,且酶法生产工艺具有条件温和、无污染、收率高、成本低等优点,更有利于产业化生产。

三角酵母D-氨基酸氧化酶的固定化研究

通过共价结合的方法把三角酵母 D-氨基酸氧化酶 (DAO)分别固定在三种大孔高聚物和二种多糖的载体上 ,结果表明多糖类载体壳聚糖和 Sepharose4B比高聚物更能有效地固定化 DAO。经过固定化后 ,壳聚糖和环氧载体Epecust固定化酶对温度和 p H的稳定性提高 ,表观米氏常数增大。在分批式头孢菌素 C氧化脱氨的反应中 ,固定化酶表现出良好的操作稳定性 ,戊二酸单酰基 - 7-氨基头孢霉烷酸的得率为 93%。

游离细胞催化与膜分离耦合制备7-氨基头孢烷酸的工艺研究

利用产D-氨基酸氧化酶(DAAO)和戊二酰基-7-氨基头孢烷酸酰化酶(GLA)的高酶活重组大肠杆菌,对双酶催化制备7-ACA的工艺进行了研究。提出了一条游离细胞反应与膜分离耦合的7-ACA生产新工艺:用游离细胞进行催化,用超滤膜进行细胞和产物的分离。结果发现用中空纤维超滤膜可以将反应体系中的细胞和催化产物分离,分离得到的细胞可重复使用;分离得到的反应液经一步结晶,7-ACA纯度为93.1%,结晶收率为51%。

酶法转化头孢菌素C成为7-氨基头孢烷酸的研究进展

7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是生产头孢菌素的重要原料,目前大多由头孢菌素C通过化学法或酶法转化而来。本文综述了两步酶法生产7-ACA的研究进展,并详细阐述了催化过程用到的D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA酰化酶的酶学特性、表达、纯化及固定化。

过氧化氢在生成戊二酰-7-氨基头孢烷酸过程中的影响

头孢菌素C(CPC)在D-氨基酸氧化酶为催化剂的情况下,与O2反应生成α-ketoadipyl-7-ACA,再与过氧化氢反应生成戊二酰基-7-氨基头孢烷酸(Gl-7-ACA)。在此反应中生成的α-ketoadipyl-7-ACA是造成目标产物收率低的关键因素之一。通过加入适量的双氧水可以使剩余的α-ketoadipyl-7-ACA转化为Gl-7-ACA,从而使裂解的收率提高5%。

7-氨基-3-乙烯基 头孢烷酸的一步法环保制备方法

7-氨基-3-乙烯基-4-头孢烷酸(7-AVCA)是头孢克肟和头孢地尼的药用中间体。为解决7-AVCA合成过程中收率低、环境污染严重等难题,通过改造D-7-ACA的分子结构,提出了一种全新的制备7-AVCA的一步法环保合成工艺。D-7-ACA经P.C.C氧化后,与甲基三苯基溴翁盐进行Wittig反应,制备得到7-AVCA。实验结果表明,该合成工艺较原有工艺操作简单、原子利用率高,所制备的7-AVCA产品物质的量收率约为62.0%,纯度约为99.1%。

7-氨基-3-甲氧基甲基-3-头孢烯-4-甲酸的合成

7-氨基-3-甲氧基甲基-3-头砲烯-4-甲酸(7-AMCA)是头砲泊岳酯合成的必备中间体。针对目前以7-氨基头胞烷酸(7-ACA)或D-7-ACA为起始原料合成7-AMCA的2种工艺路线均存在工艺条件苛刻、溶剂难回收、环保压力大、产品纯度低等缺陷,为了开发1种适合其工业生产的绿色制备工艺,在以D-7-ACA制备7-AMCA的基础上,通过实验考察了关键原材料的用量、反应温度、反应时间等对产品收率及质量的影响。实验结果表明,当反应温度为30℃,反应时间为15 min,原料原甲酸三甲酯与D-7-ACA的物质的量比为2:1,氨水作为碱性析晶试剂时,制得的7-AMCA产品性状好、纯度高,该工艺更有利于工业化生产。

酶法转化头孢菌素C成为7-氨基头孢烷酸的研究

7-氨基头孢烷酸（7-ACA）是生产头孢菌素的重要原料，目前大多由头孢菌素C通过化学法或酶法转化而来。本文综述了两步酶法生产7-ACA的研究进展，并详细阐述了催化过程用到的D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA酰化酶的酶学特性、表达、纯化及固定化。

酶形式差异的三酶系统一步法转化头孢菌素C制备7-氨基头孢烷酸

【目的】对酶形式差异的三酶系统一步法裂解头孢菌素C(CPC)制备7-氨基头孢烷酸(7-ACA)进行研究。【方法】对重组大肠杆菌分别进行摇瓶和发酵罐高密度表达,获得最高酶活后使用两个形式差异的三酶系统一步法转化CPC制备7-ACA。【结果】相较于摇瓶发酵,发酵罐发酵获得的酶活更高,发酵罐上对重组大肠杆菌的高密度表达发现,补料流加总量为400mL的甘油混合液(15%甘油+7.5%鱼蛋白胨,W/V),发酵72h后菌浓度达到32.79g/L、最高的戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶(GA)和过氧化氢酶(CAT)活力分别为7 099.85U/L和15 776.20U/L。利用一个三酶系统包括固定化D-氨基酸氧化酶(DAAO)、游离GA和CAT,一步法催化CPC获得的7-ACA生成率为87.28%;而另一个三酶系统包括固定化DAAO、冻融细胞GA和CAT一步法催化CPC获得的7-ACA生成率为87.10%。【结论】两种酶形式差异的三酶系统一步法制备7-ACA的得率大致相等。GA对α?酮己二酰-7-氨基头孢烷酸(AKA-7-ACA)的特异性和水解能力较差,限制了该工艺运用。

头孢尼西钠的合成

7-氨基头孢烷酸(7-ACA)与5-巯基-1,2,3,4-四氮唑-1-甲基磺酸双钠盐(SMT-DS)在BF3作用下缩合,生成7-氨基-3-[甲磺酸基-1-H-四唑-5-基-巯甲基]-3-头孢烯4-羧酸(3)。3与D-(-)-甲酰基扁桃酸酰氯在pH6.5-7.0下酰化、盐酸作用下去甲酰基成头孢尼西酸,再与N,N-二苄基乙二胺二醋酸盐(DBED)结合生成头孢尼西胺盐(5)。5经酸化,成盐反应得头孢尼西钠。反应总收率为60.7%,所得产品纯度为98.7%(HPLC)。

Flavonoid Glycosides from the Leaves of Glyphaea brevis

A new flavonoid, acacetin-7-O-β-D-glucopyranosyl-(1 → 2)-β-D-glucuronopyranoside (1), together with four known flavonoids, apigenin-7-O-β-D-glucopyranosyl-(1 → 2)-β-D-glucuronopyranoside (2), acacetin (3), acacetin-7-O-β-D-glucuronide (4) and genkwanin-5-O-primveroside (5) were isolated from the leaves of Glyphaea brevis. Their structures were elucidated by spectroscopic techniques. The isolated compounds (1 - 5) were tested for their antioxidant activity using the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging assay. The tested compounds showed slight negative antioxidant activities against DPPH radicals.

大肠杆菌头孢菌素C乙酰酯酶的敲除对头孢菌素C酰化酶应用的影响

7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是合成头孢菌素类抗生素的重要中间体,工业上通常采用头孢菌素C酰化酶一步水解头孢菌素C制备,但在该反应产物中存在一个主要杂质3-去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA),该杂质的产生是由大肠杆菌中内源基因aes编码的头孢菌素C乙酰酯酶水解头孢菌素C或7-ACA引起的。为了防止D-7-ACA的形成,获得高品质7-ACA,减少下游精制成本,采用大肠杆菌双质粒pTargetF/pCas敲除系统,设计相应的gRNA以及同源修复供体DNA,对大肠杆菌BL21(DE3)中的aes进行敲除,从而获得了Aes缺陷型菌株BL21(DE3)△aes。将携带头孢菌素C酰化酶(CPCacy)表达质粒pET30-CPCacy的重组工程菌BL21(DE3)/pET30-CPCacy和BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy所诱导表达的孢菌素C酰化酶细胞破碎上清液进行7-ACA的生产对比试验,结果表明,敲除菌BL21(DE3)△aes/pET30-CPCacy对头孢菌素C的转化率为98.8%而原始菌为98.5%,同时7-ACA的产率为80.7%而原始菌株为80.2%,杂质D-7-ACA的产率仅为0.1%,为原始菌的25%,这些工作为进一步生产高品质的7-ACA奠定了基础。