钙结合蛋白d28k基因在鸡子宫中表达变化的研究

[目的]研究鸡子宫中钙结合蛋白d28k基因的变化规律。[方法]采集不同产蛋阶段蛋鸡的子宫组织,利用RT-PCR方法检测钙结合蛋白d28k mRNA在子宫的表达情况。[结果]蛋进入子宫前2、1 h检测到钙结合蛋白d28k的表达,随着蛋壳的形成和钙化程度的加速,蛋进入子宫后5、15 h钙结合蛋白d28k的表达量逐渐增加,在蛋进入子宫后15 h达到最高水平,在产蛋后1、2 h没有检测到该基因的表达。[结论]钙结合蛋白d28k是影响蛋壳钙化的重要基因。

帕金森病小鼠相关脑区内钙结合蛋白D28kmRNA的表达

目的 研究钙结合蛋白 D2 8k(Ca BP)在帕金森病(PD)发病机制中的作用 .方法 将 1-甲基 - 4-苯基 - 1,2 ,3,6 -四氢吡啶 (MPTP)按 30 mg·kg- 1剂量腹腔注射给 C5 7BL 小鼠 ,建立 PD鼠模型 .用反转录 PCR及原位分子杂交方法检测 PD鼠和正常鼠脑内 Ca BP m RNA的表达变化 .结果 与正常鼠对比 ,Ca BP m RNA在 PD鼠的海马、纹状体、黑质等脑区的表达水平明显下调 .结论 Ca BP可能通过对特定脑区神经元的保护作用来抵御

钙结合蛋白Calbindin-d28k在雌(女)性生殖中的作用

钙结合蛋白Calbindin-d28k(CaBP-d28k)是一种维生素D依赖性钙结合蛋白,参与了多种生殖事件。本文综述了CaBP-d28k的结构特点,在雌(女)性生殖系统的表达、作用及其调节。

Calbindin－D28k mRNA在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神经元中的表达

用原位杂交组织化学技术，用同位素标记的寡核苷酸探针，对Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋｍＲＮＡ在大鼠三叉神经节和背根节初级传入神经元中的表达进行了观察．结果发现：在大鼠三叉神经节中，约１６．１％的神经元为ＣａｌｂｉｎｄｉｎＤ２８ｋ阳性神经元，而在背根神经节中，阳性神经元占节细胞总数的２０．６％．这两个神经节中的阳性神经元主要集中在大型细胞（８．１％和１２．３％）及小型细胞（４．２％和６．８％）．从而提示Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ｋ可作为上述两种神经细胞的标志物，在此类初级传入神经元的某些生理功能中可能有重要作用．

钙结合蛋白calbindin-D28k在人输卵管组织的表达(英文)

本研究旨在探讨育龄妇女输卵管中钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)的表达和变化。33例月经规律、有正常生育史的育龄妇女,因子宫肌瘤、子宫腺肌症行子宫切除术(一并切除输卵管),输卵管取材均包括峡部、壶腹部和伞部,按月经周期分为增生早期组6例,增生中期组5例、增生晚期组5例,分泌早期组7例,分泌中期组5例和分泌晚期组5例。采用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应法检测CaBP-D28k在人输卵管组织中的表达。结果显示,人输卵管组织中存在CaBP-D28k蛋白及mRNA表达。CaBP-D28k蛋白表达于输卵管上皮细胞的胞浆中,在月经周期同一时期,输卵管峡部、壶腹部、伞部的表达无明显差别(P>0.05)。在月经周期中,CaBP-D28k蛋白表达在增生早、中期最低,而在增生晚期和分泌早期明显增高(P<0.05),分泌中、晚期显著下降(P<0.05)。CaBP-D28k蛋白阳性表达分布在月经周期中出现再分布,在增生早、中期呈灶状或片状弥散分布在胞浆中,增生晚期和分泌早、中期CaBP-D28k蛋白呈聚集的颗粒状集中在细胞顶部,至分泌晚期则仍呈灶状或弥散状分布;CaBP-D28kmRNA表达也随月经周期发生变化,在增生晚期和分泌早期明显增高(P<0.05)。结果表明,人输卵管组织中存在CaBP-D28k蛋白及mRNA表达,且具有周期性变化。

鸡D28k钙结合蛋白cDNA的克隆与序列分析

根据已发表的鸡D28k钙结合蛋白(CaBP-D28k)基因序列设计合成1对引物,利用RT-PCR技术从新扬州鸡小肠组织RNA中扩增出鸡CaBP-D28kcDNA,并克隆至pGEM-T中,经PCR、Xho 和BamH 双酶切鉴定测序后,用DNAStar软件对克隆出的cDNA进行同源性分析。结果表明:新扬州鸡CaBP-D28k基因片断长为18.5kb,与Gen-Bank中的CaBP-D28k基因具有高度的同源性(99.2%),在开发阅读框内仅有一个碱基的差别,中间没有出现缺失和插入,证明所得到的是鸡CaBP-D28kcDNA。

PTD-Calbindin D28K融合蛋白的表达、纯化及其穿膜功能的鉴定

目的 构建融合蛋白PTD CalbindinD2 8K(CaBP2 8)的表达质粒 ,并进行诱导表达、纯化 ,在体外初步鉴定其跨膜转运功能。方法 提取大鼠脑组织总RNA ,反转录后用聚合酶链反应 (PCR)法扩增编码CaBP2 8的全长cD NA序列 ,重组入 pET 32a及含有PTD的pTransVector表达载体中 ,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL2 1(DE3) ,构建重组体的表达菌株。IPTG诱导表达后 ,以NTA Ni亲和层析柱进行分离纯化 ,SDS PAGE以及Westernblot鉴定。纯化的CaBP2 8及PTD CaBP2 8用FITC标记 ,分别以一定的浓度孵育体外培养的cos7细胞 ,最后荧光显微镜下观察两者在细胞中的分布情况 ,并用流式细胞仪 (FCM)做定量分析。结果 成功地构建了含有及不含有PTD的CaBP2 8表达载体 ,插入片断 783bp ,表达产物相对分子质量分别约 30 0 0 0、5 0 0 0 0 ,经Weternblot鉴定 ,与抗CaBPD2 8K抗体均有特异性反应。孵育培养的cos7细胞后 ,CaBP2 8 FITC仅少量吸附于细胞膜表面 ,而PTD CaBP2 8 FITC则分布于胞质内 ;FCM定量分析发现 ,细胞荧光强度随着目的蛋白的孵育浓度或孵育时间增加而增加 ,并且孵育时间为 1h时荧光达到最强。结论 重组PTD CaBP2

钙结合蛋白Calbindin-D28K在人健康和龋坏牙齿中免疫定位

目的 :探讨Calbindin -D2 8K(CaB)在牙髓损伤修复过程中的作用。方法 :用免疫组化ABC法观察CaB在健康和龋坏人恒牙牙髓中的表达 ,并用图像分析系统进行半定量分析。结果 :CaB在正常和龋病牙髓中成牙本质细胞、前期牙本质、血管内皮细胞及神经纤维中均有表达。在中龋和深龋组部分牙髓细胞CaB弱阳性表达。中龋组成牙本质细胞数目增多 ,胞浆、胞突及部分胞核强阳性。深龋组前期牙本质层变薄 ,成牙本质细胞空泡变性 ,见单层扁平的成牙本质样细胞 ,胞浆及核染色强阳性。成牙本质细胞浆中CaB含量在中、深龋组明显增加。血管内皮细胞中三组间CaB含量无显著性差异。结论

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化

目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制。方法:常规培养细胞24 h,20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技术检测D28K和calpain基因。结果:20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h凋亡率改变分别为(6.10±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,随药物作用时间延长细胞凋亡率增加;辛伐他汀作用K562细胞12、24、48、72 h,游离钙荧光强度变化为52.93±2.85、19.63±1.56、13.81±1.05、7.84±0.98,各处理组荧光强度与对照组相比升高(P<0.05);与相同时间对照组比较,calpain和D28K基因分别在辛伐他汀作用K562细胞24 h和48 h后上调(P<0.05)。结论:辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度显著升高,细胞内Ca2+浓度调节蛋白D28K和calpain基因上调,这些改变可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制之一。

CaBP-D28k在蛋鸡生殖器官中的表达及其与蛋品质性状的关联分析

研究采用荧光定量PCR技术对Ca BP-D28k在蛋鸡生殖器官中的表达量进行分析,并利用SSCP技术寻找Ca BP-D28k的SNPs位点,继而与蛋品质性状进行关联分析。结果表明:1 Ca BP-D28k在各部位的表达情况为:输卵管子宫部>输卵管伞部>卵巢>输卵管膨大部>输卵管峡部。以卵巢为参照基准1,输卵管子宫部Ca BP-D28k表达量约为其73倍,差异极显著(P<0.01),输卵管峡部、膨大部与卵巢Ca BP-D28k表达量差异显著(P<0.05)。2 Ca BP-D28k第三外显子存在A5115G的突变位点,共检测到3种基因型(AA、AG和GG)。AG型蛋壳强度极显著高于AA和GG型(P<0.01),GG型哈氏单位与AA和AG型存在显著差异(P<0.05)。结果表明,Ca BP-D28k在蛋鸡生殖器官中有相对量的差异,并与蛋壳形成过程中钙离子的转运有密切联系;AG型为调控蛋壳强度和哈氏单位的优势基因型,研究结果为SNPs辅助选择育种提供了理论基础。

D28k钙结合蛋白cDNA的克隆及序列分析

利用RT PCR技术从鸡小肠组织RNA中扩增鸡D2 8k钙结合蛋白cDNA ,以进一步研究D2 8k钙结合蛋白促进肠钙吸收的机理。结果表明 ,鸡肠道D2 8k钙结合蛋白cDNA的开放阅读框由 789个碱基对组成 ,编码由 2 6 2个氨基酸组成的多肽 ,分子质量约为 2 7.9ku ;禽类D2 8k钙结合蛋白基因长 18.5kb ,10个间插序列将其分成 11个编码外显子 ,启动子区以GC为主 (6 0 %～80 % )。D2 8k钙结合蛋白氨基酸序列的同源性在鼠和人之间达到 98.5 % ,在蟾蜍和鸡之间达到80 .9% ,在人和鸡之间为 79.8% ,在鼠和鸡之间为 79.5 %。不同种属的动物之间D2 8k钙结合蛋白的氨基酸序列存在较高的同源性。

人卵巢组织中钙结合蛋白Calbindin-d28k蛋白和基因的表达

目的:分析钙结合蛋白Calbindin-d28k(CaBP-d28k)在人卵巢组织中的表达。方法:收集人卵巢组织标本23例,采用免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链反应法检测CaBP-d28k在人卵巢中的蛋白及mRNA表达。结果:人卵巢中存在CaBP-d28k蛋白及其mRNA表达,CaBP-d28k蛋白定位于卵泡中的卵母细胞、颗粒细胞,以及少量的卵泡膜细胞和黄体中的粒黄体细胞和膜黄体细胞的胞浆中。卵泡各时期CaBP-d28k蛋白阳性表达强度由弱渐强依次为原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡。结论:人卵巢中多种细胞表达钙结合蛋白CaBP-d28k,其表达随卵母细胞成熟而增强。

钙结合蛋白Calbindin-D28K在人牙胚发育过程中的表达

目的 :研究人牙胚不同发育时期Calbindin -D2 8K(CaB)的表达 ,以期分析CaB在人牙体硬组织形成过程中的作用 ,为探明人牙齿矿化过程中经细胞钙转导机制提供实验依据。方法 :免疫组化ABC染色。结果 :人牙胚蕾、帽状期成釉器无CaB的表达 ;钟状早期成釉器的内釉细胞及部分牙乳头表面处于分化状态的细胞弱阳性染色 ;钟状晚期成釉器的成釉细胞、成牙本质细胞及部分胞核呈现强阳性染色。结论 :CaB参与了人釉质及牙本质的形成过程 ,并且在人牙胚发育过程中的CaB表达具有时间特异性及细胞特异性。

上皮钙通道基因在维生素D受体和Calbindin-D28k双基因敲除鼠中的变化

目的研究上皮钙通道TRPV5和TRPV6基因与维生素D受体(VDR)和钙结合基因Calbindin-D28k的关系,以及肾钙的重吸收减少是否与TRPV5和TRPV6基因表达减少有关。方法制备VDR和CaBP-D28k双基因敲除小鼠,普通和高钙食物喂养下,检测野生型鼠(WT),CaBP-D28(-/-),VDR(-/-),和VDR(-/-)/CaBP-D28k(-/-)鼠的体重、摄食量及血尿参数值,用实时RT-PCR的方法检测各种鼠肾脏TRPV5和TRPV6的mRNA水平。结果普通饮食下,双基因敲除小鼠尿钙的分泌和血清甲状旁腺激素水平更高。TRPV5和TRPV6两者的表达在CaBP-D28k敲除鼠中均无变化,而在VDR敲除鼠和双基因敲除鼠中下调的幅度相当。高钙饮食下,VDR及双基因敲除小鼠的血离子钙水平正常。所有小鼠这两个基因的表达普遍降低,而在VDR和双基因敲除鼠中的表达更低。结论这些结果证实了上皮钙通道基因受钙和维生素D的调节,CaBP-D28k的缺失对两者无影响。肾钙的重吸收减少与TRPV5和TRPV6基因表达无明显关系。

含Calbindin-D28K mRNA的神经元在大鼠前脑中的分布—原位杂交组织化学法观察

本实验应用原位杂交组织化学技术,利用同位素标记的寡核苷酸探针,对大鼠前脑含Calbindin-D28 K mRNA的神经元的分布状况进行了详细的观察。结果发现在不同脑区或核团中,标记神经元的数量和标记强度各不相同。某些部位含许多强阳性神经元,如:前嗅核、大脑皮质、尾壳核、缰核、下丘脑、齿状回及中脑和杏仁复合体中的部分核团;然而,在另外一些脑区中,标记细胞呈中等阳性,如:嗅球的球旁细胞、盖带、梨状区内核、海马的CA1区中的锥体细胞层以及丘脑和杏仁核复合体中的部分核团。少数脑区中的标记细胞呈弱阳性,且数量较少,如;嗅结节、隔区、斜角带核等。这些结果表明含Calbindin-D28K mRNA的神经元在大鼠前脑中具有区域特异性分布特点,从而提示Calbindin-D28K在神经系统中的某些部位可能具有重要的作用。

1,25(OH)_2D_3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K表达和矿化能力的影响

目的 :研究 1,2 5 (OH) 2 D3 对培养人牙乳头细胞Calbindin -D2 8K(CaB)表达和矿化能力的影响。方法 :用 10 -8mol/L 1,2 5 (OH) 2 D3 矿化液处理长期培养的第 2 8天细胞 2 4h ,用放射免疫和免疫组化方法 ,观察CaB表达和碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙蛋白 (OC)的变化。同位素示踪方法观察 1,2 5 (OH) 2 D3 对胞外基质4 5Ca2 + 的影响。结果 :加入1,2 5 (OH) 2 D3 后ALP活性约为对照组的 4倍 ;OC含量约为对照组的 1.5倍。CaB在培养 2 8d牙乳头细胞及其胞外基质中表达 ,而在培养 14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。 1,2 5 (OH) 2 D3 可加强CaB表达 ,并使胞外基质对4 5Ca2 + 摄取量增加 1.5倍。结论 :1,2 5 (OH) 2 D3 有促进人牙乳头细胞矿化作用 ,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性 ,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成 ,增加基质对Ca2 + 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一 ,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca2 + 聚集和直接贮存的作用。

MPTP诱导的帕金森病鼠脑内Calbindin-D28k表达的免疫组化研究

目的探讨Calbindin-D28k在帕金森病发病过程中的作用。方法健康C57BL/6J小鼠采用MPTP腹腔注射建立帕金森病动物模型,动物存活期分别为14d和28d。应用ABC免疫组化结合图像分析技术观察Calbindin-D28k在不同脑区的表达。结果帕金森病鼠脑内黑质和腹侧被盖区Calbindin-D28k的表达在28d比对照组增加,造模后海马CA1区Calbindin-D28k的表达在14d和28d两个时间点均比对照组增加;而在脑皮质Calbindin-D28k的表达在造模14d和28d均较对照组降低。结论不同脑区神经元可能由于Calbindin-D28k含量的不同而对MPTP的敏感性不同;帕金森病鼠不同脑区Calbindin-D28k表达的变化,可能是脑内神经元启动自我保护机制引起Calbindin-D28k在不同脑区重新分配,以达到保护损伤神经元的目的。

脑苷肌肽对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β-淀粉样蛋白42和钙结合蛋白-D28K表达的影响

目的观察脑苷肌肽(cattle encephalon glycoside and ignotin injection,CEGI)对APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠脑内β-淀粉样蛋白42(amyloidβ-peptide,Aβ42)和钙结合蛋白-D28K(calbindin-D28K,CB)表达的影响,探讨CEGI对阿茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的防治作用。方法 APPswe/PS1d E9双转基因AD模型小鼠共48只,随机分为脑苷肌肽低剂量组[Tg+CEGI-L组,腹腔注射CEGI 6.6 ml/(kg·d)]、高剂量组[Tg+CEGI-H组,腹腔注射CEGI 13.2 ml/(kg·d)]、阳性药盐酸多奈哌齐组[Tg+Donepezil组,Donepezil灌胃2 mg/(kg·d)],模型组(Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液),每组12只;同月龄同背景非转基因野生型C57BL/6J小鼠12只作为正常对照组(n Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液)。小鼠自5月龄开始腹腔注射给药1个月,然后进行Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,硫黄素S荧光染色和免疫组织化学染色检测皮质区Aβ42表达,免疫组织化学染色检测海马CA1区及CA3区CB表达的变化。结果行为学实验,与Tg组比较,Tg+CEGI-L组小鼠空间学习和记忆能力有明显改善(P<0.05);小鼠大脑皮质Aβ42的表达数目在Tg组显著高于Tg+CEGI-L组和Tg+CEGI-H组(43.00±10.03 vs 24.63±10.61/24.89±6.81,P<0.05);小鼠海马CA1区神经元保护性蛋白CB在Tg+CEGI-L组显著高于Tg组(0.056±0.023 vs 0.031±0.001,P<0.05)。结论 CEGI能抑制Aβ42在大脑中的聚集沉积、CB过表达来降低神经元损伤,进而改善APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠的学习记忆能力。

Calbindin-D28k与肌动蛋白在人健康及龋坏牙齿中的分布

目的 探讨Calbindin -D2 8k与肌动蛋白在健康和龋坏人恒牙中的分布相关性及意义。方法 用免疫组化方法分别检测Calbindin -D2 8k与肌动蛋白在正常、中龋和深龋人牙中的表达并观察比较。结果 正常组Calbindin -D2 8k在前期牙本质远髓 2 / 3区域染色阳性 ,肌动蛋白在成牙本质细胞及位于矿化牙本质中的细胞突呈阳性 ;中龋组位于前期牙本质中的成牙本质细胞突Calbindin -D2 8k与肌动蛋白均呈强阳性 ,Calbindin -D2 8k在病损区前期牙本质全层呈阳性且较正常组明显增强 ;深龋组Calbindin -D2 8k染色部位主要位于成牙本质细胞核。结论 在第三期牙本质形成活跃的成牙本质细胞中Calbindin -D2 8k与肌动蛋白的分布变化具有一致性 ,均与牙本质基质的分泌有关。

真核表达载体pCDNA3-CaBP-D28k的构建及细胞表达

构建钙结合蛋白D28k(calbindin-D28k,CaBP-D28k)真核表达载体,并证实了其在真核细胞COS-1中的表达情况,为进一步研究该重组载体在动物体内的表达奠定了基础。通过酶切方法自含鸡CaBP-D28k基因的克隆质粒pGEM-T-CaBP-D28k中扩增CaBP-D28k基因,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3中,阳性克隆鉴定后,在PEI作用下转染COS-1细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到了CaBP-D28k在COS-1中的表达。