Steedman’s wax包埋切片DAPI染色法证实铝诱导花生根尖细胞程序性死亡

【目的】检验Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是否适用于观察花生根尖细胞核形态。【方法】分别采取100μmol/L AlCl3处理不同时间(0、4、8、12 h)后两个花生品种(铝敏感型中花2号和耐铝型99-1507)的根尖,经过Steedman’s wax包埋切片等一系列过程,利用荧光染料DAPI染色观察细胞核形态变化。【结果】100μmol/L AlCl3可引起花生根尖细胞核形态发生改变,核质浓缩、核边缘化、呈新月状等,具有明显的PCD特征。花生根尖细胞在铝胁迫下发生PCD,PCD程度与花生耐铝性呈负相关,与处理时间呈正相关。【结论】Steedman’swax包埋切片DAPI染色法是一种快速、高效的适用于观察花生根尖细胞核形态的方法。

小鼠骨髓组织细胞微核DAPI染色法

实验将DAPI染色方法运用到小鼠微核检测中。选取20只小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只。2组均往小鼠腹腔注射环磷酰胺60mg/kg,1次/d,连续注射3d。实验组采用DAPI染色;对照组采用10%的Giemsa染色。结果显示,实验小鼠骨髓组织细胞微核DAPI染色特异性强,易判断,对照组Giemsa染色结果特异性差,且不能排除染色过程中Giemsa染液中的染色颗粒沉淀的干扰,这样就使Giemsa染色后,对微核的判断造成困难。本实验建立了小鼠骨髓组织细胞微核DAPI染色方法,检测效果好,特异性强。

DAPI染色直接定量测定细菌胞内多聚磷酸盐

采用DAPI将细菌胞内或活性污泥中多聚磷酸盐(Polyp)染色,用酶标仪测定DAPI-Polyp复合物发射荧光的强度,以此定量细菌胞内的Polyp。用该方法和镜检法同时测定异染粒含量差异显著的菌株胞内Polyp,2种方法测定结果一致。异染粒含量差异不显著的菌株胞内Polyp定量分析表明,该方法灵敏度高于镜检法和废水总磷间接测定法。

DAPI染色法在流式细胞术中检测BHK-21细胞周期的探讨

[目的]为规模化细胞培养的检测奠定基础。[方法]采用DAPI标记BHK-21细胞,探索简便易行的DNA检测技术,检测细胞周期中各期的DNA含量。[结果]DAPI标记法是一种可靠的DNA检测方法,且简单易行。[结论]利用DAPI标记法能够准确进行细胞周期检测。

DAPI染色法在检测BHK-21细胞周期的应用

为建立一种检测细胞周期的方法,取悬浮培养的BHK-21细胞按照4,6-联脒-2苯基吲哚(DAPI)染色方法进行染色,利用NC-3000细胞分析仪进行细胞周期分析。结果表明,DAPI标记法简单易行,DAPI标记法能够准确的进行细胞周期检测。

NR/DAPI共染色-荧光计数法测定自来水中的微塑料

为解决现有NR/DAPI共染色-荧光计数法对水样中微塑料(MPs)的高估问题,对水样及实验器具的处理方法进行了优化研究。优化试验结果表明,在500℃条件下对玻璃器皿、滤膜灼烧1 h,可显著减少由实验器具带入样品中的MPs;对自来水样品采用30%H_(2)O_(2)在V_(H_(2)O_(2))∶VH_(2)O=1∶5条件下消解24 h,可消除水样中有机物引起的结果高估。采用改进的NR/DAPI共染色-荧光计数法对合肥市不同区域自来水样品测定结果表明,样品中MPs的平均浓度范围为350~1250个/L,占比最大的MPs种类为聚乙烯(PE,占比为40%~60%),尺寸小于10μm的MPs占比较高(36%~71%)。自来水样品中的MPs具有显著的时间分布特征,在夜间用水低谷时段供水管网中自来水流速低,小颗粒MPs发生沉降聚集,导致早晨龙头初放水中MPs浓度显著高于其他时段。

DAPI染色对A549肺癌细胞弹性模量的影响

原子力显微镜(AFM)能测量活细胞的力学性质。DAPI染色A549肺癌细胞核后用AFM测量细胞的弹性模量,分析DAPI染色对细胞力学性质的影响。通过Hertz模型拟合AFM测量压痕细胞的力-压痕曲线,得到细胞的弹性模量。实验结果:用DAPI染色细胞后其弹性模量为3.66±2.08 kPa,而对照组未染色的细胞弹性模量为3.21±1.73 kPa,数据比较显示,DAPI染色对A549肺癌细胞弹性模量没有显著性影响。

抗枣疯病枣树品种的DAPI荧光染色检测

该文通过嫁接枣疯病病皮和病枝传病的方法 ,对抗病材料婆枣 (JL)和壶瓶枣 (Hu)共 10棵单株 ,结合感病酸枣 (Suan)品种的健枝和疯枝作对照 ,应用DAPI染色技术对抗病材料体内植原体的侵染情况进行了荧光观察 ,结果表明 :抗病植株体内已感染了植原体病原 ,说明应用嫁接方法进行枣疯病病原接种是可行的 ,但其却不表现丛枝症状 ,证明了抗病材料具有一定的抗病性 ;同时 ,抗病材料中发现的金黄色自发荧光 ,也为其抗病物质的寻找和抗病机理的研究提供了重要线索。

高质量花生根尖细胞染色体制片方法研究

为了能快速获得用于染色体分带或者荧光原位杂交的高质量花生根尖细胞染色体制片,通过选择适当粗细的花生侧根,经过对二氯苯浸泡预处理,卡诺氏固定液固定后,直接用45%醋酸烘烤压片,得到了细胞平整、染色体分散的根尖细胞染色体制片。与HCl解离压片的方法相比,该方法中试剂对染色体影响微小。与酶解去壁低渗法相比,该方法没有酶解去壁低渗的过程,不需要用果胶酶和纤维素酶等较贵重试剂,节约了时间和成本,提高了制片效率。该方法不仅适用于花生,也适用于芝麻、水稻、玉米、大豆、青豆、番茄等多种植物。

培养法和染色法对养殖环境中微生物气溶胶浓度的检测

比较不同检测方法对微生物气溶胶检验效果的影响。采用国际标准的AGI-30空气采样器,收集空气样品,分别用培养计数法和DAPI(4,6-联脒-2-苯基吲哚)染色计数法来比较不同养殖环境中微生物气溶胶的浓度。培养计数法测得鸡舍、猪舍和牛舍环境中微生物气溶胶的浓度分别为5.73×105～6.72×106cfu/m3空气,9.5×105～4.01×106cfu/m3空气,5.4×104～8.33×105cfu/m3空气,而DAPI染色计数的浓度分别为8.0×106～3.25×108cell/m3空气,1.5×107～2.28×108cell/m3空气,9.0×105～5.93×107cell/m3空气。培养计数法所得浓度仅为DAPI染色计数法的0.04%～10.4%。染色计数法可能会更加客观的反映环境中微生物气溶胶的浓度。

大肠杆菌O157:H7体内多聚磷酸盐的DAPI荧光定量检测

目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌O157:H7无机多聚磷酸盐(polyP)的可靠方法。方法提取并纯化大肠杆菌O157:H7野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察细菌DAPI-DNA和DAPI-polyP复合物荧光,验证DAPI检测polyP的可行性;细菌液氮速冻溶解、-80℃速冻溶解、-20℃速冻溶解、60℃加热10 min、Triton x-100作用、室温下放置后倍比稀释涂平板,观察6种方法对细菌存活的影响;与DAPI作用后,测定荧光值,确定细胞膜通透性的最佳前处理方法;建立标准曲线,测定EHEC野生株、ppk1两个突变株polyP含量。结果应用360 nm激发波长,DAPI-DNA最大发射波长为460 nm;应用415 nm激发波长,DAPI-polyP最大发射波长为550 nm;应用405 nm激发光,收集DAPI-DNA蓝色荧光(425～475 nm),应用488 nm激发光,收集DAPI-polyP绿色荧光(500～560 nm);最佳细菌前处理方法为-80℃速冻后室温下自然溶解;标准曲线为Y=1849X+127.5(R2=0.991),测定各株菌polyP量,其中野生株显著高于ppk1缺失突变株。结论 DAPI荧光定量检测方法具有直接、可靠、易于操作、定量检测等特点,可为进一步研究polyP在肠出血型大肠埃希菌O157:H7中的作用提供技术支持。

莲藕根尖染色体制片与免疫荧光染色技术的优化

在细胞遗传学研究中,莲藕根尖染色体制片比较困难,研究了莲藕根尖染色体制片过程中适宜取材的根尖长度、有丝分裂指数、预处理试剂和处理时间、固定时间、酶解与低渗时间等相关因素,并对莲制片进行了免疫荧光染色。结果表明:根尖长为1.5 cm左右时有丝分裂指数最高,预处理采用冰水冷冻处理24 h分裂相较多,染色体形态清晰;用4%多聚甲醛固定1h,染色体形态较好;采用2.5%纤维素酶和2.5%果胶酶混合液37℃消化30 min,酶解较彻底,细胞质残留少,染色体分散良好;1×PBS低渗30 min,染色体形态较好;免疫荧光染色后经检测可观察到较强的信号。

紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响

目的探究紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆力及氧化应激损伤的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、紫斑牡丹花粉组(750、1500、3000 mg·kg^(-1)),采用颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1)),制备亚急性衰老模型。Morris水迷宫评估小鼠学习记忆力;HE、DAPI染色评估肝、脑组织细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清、肝脑组织内MDA、T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT及γ-H2AX、SA-β-Gal水平。结果水迷宫实验结果表明,紫斑牡丹花粉能明显提高衰老小鼠的学习记忆力。组织染色结果表明,紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠肝脑组织细胞损伤具有保护作用,且高剂量组作用最为明显。ELISA结果显示,与模型组比较,紫斑牡丹花粉各剂量组的MDA、γ-H2AX、SA-β-Gal水平降低,T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT水平升高。结论紫斑牡丹花粉能改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习记忆力,提高衰老小鼠体内抗氧化酶活性和清除自由基、脂质过氧化物的能力,保护肝脑脏器组织细胞免受氧化损伤,提示其具有潜在的延缓衰老的作用。

一株异养硝化-好氧反硝化-积累磷的细菌Klebsiella pneumoniae A15的筛出及其特性研究

利用以淀粉为唯一碳源的缺氧/好氧序批式系统从污水处理厂活性污泥中分离得到一株肺炎克雷伯氏杆菌A15(Klebsiella pneumoniae A15),该菌具有异养硝化-好氧反硝化和积聚磷能力.它的最佳生长条件:碳源为柠檬酸钠,C/N为30,P/N为0.2,pH为7.在最佳条件下,氨氮、亚硝酸盐和硝酸盐的最高去除率分别为96.27%、99.22%和100%;相应的去除速率分别为1.77、2.08和1.86mg/(L⋅h).该菌株对浓度为8mg/L的磷酸盐和1300mg/L的COD最高去除率分别为100%和95%.氮平衡分析发现该菌可以利用氨氮、硝氮以及亚硝氮产生气态氮,表现出优异的异养硝化和好氧反硝化活性.对菌株胞内磷和EPS中磷的分析结合DAPI染色发现有82%的磷储存在菌株细胞内并且以多聚磷酸盐形式储存,其余磷在EPS中.对该菌株的napA、nirS、nosZ和ppk基因的成功扩增也表明其好氧反硝化和积聚磷能力.本研究展示了一株在脱氮除磷系统中具有特定功能的细菌.

紫杉醇和丹皮酚在胶质瘤治疗中的联合抗肿瘤作用

目的探讨分析紫杉醇(Ptx)和丹皮酚(Pae)在胶质瘤治疗中的联合抗肿瘤效果。方法本研究主要采取细胞培养、噻唑蓝(MTT)试验、DAPI染色、细胞流式术等手段,探究通过联合丹皮酚、紫杉醇化疗,能否增强紫杉醇的化疗作用,并减少紫杉醇的化疗剂量,进而减轻其副作用;同时分析Ptx和Pae的协同抗肿瘤作用机制。结果Ptx、Pae两药合用对U87细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,且不同浓度的Ptx与Pae(125μg/ml)联用时,各浓度组细胞存活率均比单独使用Ptx组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。表明,Pae协同Ptx促进细胞凋亡可能通过细胞活性氧机制来完成,且Pae协同Ptx可促进细胞ROS的产生及细胞蛋白激酶AKT的磷酸化,并抑制肿瘤的生长。结论Pae能进一步增强Ptx针对胶质瘤细胞的抗肿瘤活性,且Pae联合Ptx主要通过细胞活性氧机制来促进细胞凋亡。

奶牛舍环境中气载微生物含量的检测

【目的】准确地定量奶牛舍环境中气载微生物（细菌和真菌）的含量,并评估其健康风险。【方法】利用国际标准的AGI-30空气采样器,以无菌生理盐水为采样介质,收集奶牛舍空气样品,分别用培养计数法和4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色法,对奶牛舍环境中气载微生物含量进行计数,比较两种方法的差异,并对气载微生物潜在危害进行评估。【结果】培养计数法测得奶牛舍内气载微生物含量为1.14×105～8.32×106CFU/m3,而DAPI染色法为9.3×105～5.93×107CFU/m3,DAPI染色法所测气载微生物含量约是培养计数法的7～733倍。以染色法测得的奶牛舍内气载微生物含量计算,人与奶牛每min吸入的微生物量分别为1.58×105CFU和3.29×106CFU。【结论】染色计数法更能客观地反映环境中的气载微生物含量,有助于对环境的健康风险进行科学评估。

猪小肠黏膜下层脱细胞支架的制备及组织学评价

目的评价不同浓度的十二烷基磺酸钠(SDS)处理猪小肠黏膜下层(SIS)的脱细胞效果,筛选最佳脱细胞浓度,为组织工程化角膜上皮的制备提供支架材料。方法配制0.1%、0.2%、0.3%、0.5%SDS随机分成A、B、C、D 4组,分别脱细胞处理SIS 15min、30min、1h、2h(n=20),同时观察SIS的大体形态变化,HE和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察脱细胞前后SIS的生物学特性,并对脱细胞支架进行基因组DNA分析(n=5)。结果脱细胞SIS肉眼观察呈乳白色、半透明的膜状物,具有一定的弹性、韧性及透光性;HE和DAPI染色光学显微镜观察结果显示,A组及B组处理30min时SIS生物支架无细胞及DNA残留,组织结构保留完整,胶原纤维间孔隙率增加;A组及B组处理30min脱细胞率可达90%以上。结论 0.1%及0.2%SDS处理30min条件下脱细胞效果较好,能更好地降低SIS的免疫原性,是SDS脱细胞处理SIS比较理想的浓度时间条件,为组织工程化角膜上皮的构建奠定理论基础。

同步辐射软X射线引起小麦根尖细胞凋亡的研究

采用不同剂量的软X射线辐照小麦种子,利用DAPI荧光染色和TUNEL原位标记对种子萌发后的根尖细胞进行细胞凋亡的检测。结果表明,在剂量为0—288J/cm2范围内的软X射线辐照能引起小麦根尖细胞的凋亡现象(如细胞形态学变化及细胞核内DNA的断裂等)发生,细胞凋亡率与同步辐射软X射线辐照剂量呈正相关性。

亚麻单倍体抗逆基因的转化

为提高亚麻抗逆性,尽快获得转基因纯系亚麻,本研究采用农杆菌介导的转基因技术,将抗盐和低温胁迫基因HY15CS导入单倍体亚麻,结果获得抗性再生植株24株,从15株生长健壮的再生植株中PCR检测到3株阳性植株,阳性率20%;同时进行了不同方法的单倍体检测技术的研究,确定DAPI染色可以做为快速鉴定植物体倍性常用方法。