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小麦光温敏雄性不育相关基因的DDRT-PCR分析及功能预测 被引量:19
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作者 赵昌平 张立平 +5 位作者 李云伏 马荣才 单福华 张风廷 叶志杰 秦娜 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期56-62,共7页
以小麦光温敏雄性不育系BS210为试材,分别在北京顺义(可育环境)和安徽阜阳(不育环境)两种诱导育性表现的生态环境下种植,并于雌雄蕊分化期、药隔形成期、花粉母细胞形成期、四分体期和单核期5个时期提取小穗组织的RNA,利用DDRT-PCR方法... 以小麦光温敏雄性不育系BS210为试材,分别在北京顺义(可育环境)和安徽阜阳(不育环境)两种诱导育性表现的生态环境下种植,并于雌雄蕊分化期、药隔形成期、花粉母细胞形成期、四分体期和单核期5个时期提取小穗组织的RNA,利用DDRT-PCR方法分离不育系在光、温因子诱导下的差异表达mRNA,并通过反向Northern进行验证.对获得的20条差异表达的EST进行了测序和BLAST分析,得到了4个候选基因的片段,对其进行5′Race扩增、序列分析及功能预测.结果表明它们分别与水稻的DNA修复重组蛋白基因rad50、小麦穗部表达的LRR重复序列型类受体激酶基因、玉米叶片坏死斑点L1s1基因的序列相似性分别为89%、89%和88%,另外还筛选到1个未知功能的新基因片段,它和rad50分别在可育和不育环境下表达的mRNA具有相同的5′端编码区,但3′端非编码区序列出现长度差异.研究结果为深入探讨小麦光温敏雄性不育机理提供了有意义的理论依据. 展开更多
关键词 小麦 光温敏雄性不育 ddrt-pcr分析 不育相关基因片段
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用DDRT-PCR技术克隆小鼠早期胚胎发育相关基因 被引量:17
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作者 李文雍 郁卫东 +1 位作者 刘桂生 陈清轩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期728-732,共5页
mRNA差异显示 (DDRT PCR)技术在哺乳动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用 ,因获得足够量的早期胚胎材料困难而受到限制 .通过对DDRT PCR技术各种条件参数进行优化组合 ,并对某些环节进行改良 ,以小鼠的MⅡ卵、2 细胞胚胎和 4 细胞... mRNA差异显示 (DDRT PCR)技术在哺乳动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用 ,因获得足够量的早期胚胎材料困难而受到限制 .通过对DDRT PCR技术各种条件参数进行优化组合 ,并对某些环节进行改良 ,以小鼠的MⅡ卵、2 细胞胚胎和 4 细胞胚胎为材料进行差异显示 ,仅以相当于5 0个卵细胞的量为起始材料 ,便得到了理想的差示结果 .从差异条带中挑取感兴趣的差异条带进行回收、阳性鉴定、亚克隆、序列分析、并在反向Northern杂交基础上设计了鉴定实验 .结果发现 ,有一个片段差异显著且是阶段性特异表达 .经GenBank检索 ,发现该片段仅有同源的EST ,其全长及功能尚不清楚 ,是一个功能未知基因 ,将该片段命名为ed1.反向Northern杂交结果表明 ,ed1在 2 细胞期胚胎中有表达 ,而在MⅡ卵及 4 细胞胚胎中均不表达 . 展开更多
关键词 ddrt-pcr技术 克隆 小鼠 相关基因 早期胚胎发育
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用改进的DDRT-PCR技术进行人胚差异基因筛选 被引量:7
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作者 苟德明 李文鑫 +1 位作者 蒋达和 黄健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期205-209,共5页
介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速高效mRNA差异显示技术 ,其特点是利用Ready To GoRT PCR反应珠和Ready To GoRAPD分析珠进行mRNA差异显示分析 ,使取样步骤降至最低程度 ,减少了潜在的取样误差和外源... 介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速高效mRNA差异显示技术 ,其特点是利用Ready To GoRT PCR反应珠和Ready To GoRAPD分析珠进行mRNA差异显示分析 ,使取样步骤降至最低程度 ,减少了潜在的取样误差和外源DNA污染 ,并确保每次反应的高度重复性 .通过银染测序胶分析差异显示的cDNA带 ,便于DNA回收和进一步克隆 .用此方法分析人胚发育早期不同阶段基因的差异表达 ,选用6条随机引物对 3、 4和 5周龄人胚进行mRNA差异显示分析 ,从 2 0 0 0多条带中共分离出 14个差异产物 ,经二次扩增及反向RNA印迹确证其中 展开更多
关键词 MRNA差异显示 人胚发育 ddrt-pcr 基因分离
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改良DDRT-PCR研究苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因 被引量:2
4
作者 刘北忠 蒋纪恺 +2 位作者 何於娟 张彦 刘小珊 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期388-390,共3页
The differentiation of human leukemia K562 cells can be induced by matrine. To investigate the mechanism of the induced cell differentiation, an improved DDRT PCR technique was applied to screen the differentially exp... The differentiation of human leukemia K562 cells can be induced by matrine. To investigate the mechanism of the induced cell differentiation, an improved DDRT PCR technique was applied to screen the differentially expressed genes between K562 cells and the matrine treated cells. The sequences of the fragments of the differentially expressed genes were obtained by sequencing following the T A cloned fragments identified by restriction endonuclease, and analyzed with bioinformatics. The results indicated that the multiple gene expression known already changed in the process of induced cell differentiation and an unknown gene fragment was cloned. It suggested that the differentially expressed genes acted as cell differentiation related genes involved in the early phase of the induced cell differentiation. 展开更多
关键词 ddrt-pcr 苦参碱 细胞分化 差异表达基因 中药 白血病
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DDRT-PCR技术分析籽粒苋镉胁迫下相关基因的差异表达 被引量:2
5
作者 晋海军 胡洪利 +4 位作者 陈惠 张世熔 吴琦 孙蓉 唐自钟 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1659-1664,共6页
以镉污染修复植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)的根、叶、果为实验材料,利用DDRT-PCR技术分析籽粒苋Cd胁迫下基因表达水平的变化。结果表明:回收差异片段获得镉处理诱导的4个差异表达序列(EST-1、EST-2、EST-3和EST-4),经Blastn... 以镉污染修复植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)的根、叶、果为实验材料,利用DDRT-PCR技术分析籽粒苋Cd胁迫下基因表达水平的变化。结果表明:回收差异片段获得镉处理诱导的4个差异表达序列(EST-1、EST-2、EST-3和EST-4),经Blastn比对,EST-1与土人参26S核糖体RNA基因部分序列(GB|HQ843466.1)一致性为99%,EST-2与虎耳草26S核糖体RNA大亚基基因部分序列(GB|AF036498.1)一致性为93%,EST-3与大肠杆菌菌株TW14359 DNA聚合酶Ⅲα亚基基因(ECs0186)完整CDS(GB|EU906049.1)一致性为97%,EST-4与米曲霉RIB40β-葡萄糖苷酶基因(XM_001816779.2)一致性为99%;经Blastx比对,EST-1与假定蛋白MTR_5g051030[苜蓿](XP_003614386.1)氨基酸序列相似性为26%,EST-2与假定衰老相关蛋白[柏杉](GB|ACA30301.1)氨基酸序列一致性为98%,EST-3与DNA聚合酶Ⅲα亚基[大肠杆菌OP50](ZP_06935700.1)氨基酸序列一致性为100%,EST-4与β-葡萄糖苷酶[黄曲霉NRRL3357](XP_002383240.1)氨基酸序列一致性为99%;4个差异表达基因通过调控蛋白质代谢、DNA复制和糖代谢等途径来应答镉胁迫。 展开更多
关键词 籽粒苋 镉胁迫 ddrt-pcr技术
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萝卜DDRT-PCR技术体系的优化 被引量:6
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作者 贾晋 张鲁刚 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2008年第4期128-134,共7页
【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg^2+、dNTPs... 【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg^2+、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8-2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求;确定的最佳DDRT-PCR反应体系(20μL)为:10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg^2+2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq酶1.5 U,锚定引物2.5μmol/L,随机引物1.25μmol/L,cDNA用量0.5μL。mRNA差异显示结果表明,高分辨率的片断为100-1 000 bp。经验证,该体系也适用于大白菜和油菜mRNA差异显示研究。【结论】通过两种RNA提取方法比较和DDRT-PCR体系优化,获得了萝卜最佳RNA提取方法及mRNA差异显示反应体系。 展开更多
关键词 萝卜 RNA提取 ddrt-pcr 体系优化
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DDRT-PCR分析铁高效和铁低效小麦品种基因表达的差异 被引量:3
7
作者 印莉萍 刘维仲 +3 位作者 刘祥林 柴小清 邱泽生 张福锁 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2000年第2期58-63,共6页
利用mRNA差异显示 (DifferentialDisplayReverseTranscriptPCR ,简称DDRT PCR)技术比较了正常供和缺铁胁迫下铁高效型小麦 (京— 4 11)的铁低效型小麦 (三属麦— 3)的基因表达差异模式 .此差异模式暗示出两个品种表型差异的遗传背景 .... 利用mRNA差异显示 (DifferentialDisplayReverseTranscriptPCR ,简称DDRT PCR)技术比较了正常供和缺铁胁迫下铁高效型小麦 (京— 4 11)的铁低效型小麦 (三属麦— 3)的基因表达差异模式 .此差异模式暗示出两个品种表型差异的遗传背景 .利用挑选出的差异显示cDNA片段为探针进行Northern杂交 ,证明一些差异cDNA的表达受缺铁胁迫的抑制 .测序和序列分析结果表明 ,受抑制的cDNA片段分别与Cytc基因、ATP binding transporters基因、和dDTP 4 ,6 葡萄糖脱水酶的基因有一定同源性 . 展开更多
关键词 铁高效小麦 ddrt-pcr 铁低效小麦 品种 基因表达
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利用DDRT-PCR分析茶树冬季冷驯化过程中基因表达的差异 被引量:7
8
作者 梅菊芬 汤茶琴 +1 位作者 徐德良 王新超 《热带作物学报》 CSCD 2011年第4期648-652,共5页
采用DDRT-PCR方法对茶树冬季冷驯化过程中3个样品基因差异表达进行初步研究。结果表明,抗寒性不同的茶树存在基因差异表达。从134条差异片段得到稳定扩增的差异片段31条。根据差异片段的序列设计引物对部分片段进行RT-PCR鉴定假阳性,得... 采用DDRT-PCR方法对茶树冬季冷驯化过程中3个样品基因差异表达进行初步研究。结果表明,抗寒性不同的茶树存在基因差异表达。从134条差异片段得到稳定扩增的差异片段31条。根据差异片段的序列设计引物对部分片段进行RT-PCR鉴定假阳性,得到10个阳性片段,其中6个表达量增加,4个表达量降低。经过BLAST比对分析,这些基因与多种植物基因同源性较高,如nectainⅢ蛋白基因(3)、甘油磷酸二酯磷酸二酯酶蛋白家族基因(48)、微管蛋白特异性C伴侣基因(52)、光合系统Ⅱ蛋白D1基因(80、138)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(147),15、82、134和葡萄的蛋白同源性较高。72经比对没有同源性序列。 展开更多
关键词 茶树 冷驯化 基因表达差异 ddrt-pcr
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DDRT-PCR技术及其在植物抗性相关基因分离克隆中的应用 被引量:5
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作者 谷守芹 解灵君 范永山 《河北林果研究》 2005年第2期138-142,共5页
介绍了DDRT-PCR技术的原理及其一般操作过程,并就近几年此技术在植物抗病相关基因(包括抗病相关基因、抗逆相关基因)的分离克隆方面的应用做了概述。同时简要介绍了此技术存在的问题及常见的解决方法,展示了其应用前景。
关键词 ddrt-pcr技术 分离克隆 应用 植物抗性 抗病相关基因 操作过程 抗逆
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利用DDRT-PCR鉴定芸芥自交不亲和系与自交亲和系的差异表达cDNA(英文)
10
作者 范惠玲 白生文 +1 位作者 李华清 孙万仓 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期44-50,共7页
芸芥与芸薹属植物具有亲缘关系,也是芸薹属植物的重要育种资源。自交亲和性是芸芥的一种重要变异性状。为了探明芸芥自交亲和基因的表达器官,并分离与自交亲和性有关的WNA片段,以芸芥的一对近等基因系,自交亲和系(SC)与自交不亲和... 芸芥与芸薹属植物具有亲缘关系,也是芸薹属植物的重要育种资源。自交亲和性是芸芥的一种重要变异性状。为了探明芸芥自交亲和基因的表达器官,并分离与自交亲和性有关的WNA片段,以芸芥的一对近等基因系,自交亲和系(SC)与自交不亲和系(SI)为试材,利用差异显示RT-PCR技术分别对开花前和开花后的叶片、花药和柱头进行鉴定。结果表明,不论开花前还是开花后,芸芥自交亲和系与自交不亲和系的叶片或花药间的扩增带型是一样的,但在近等基因系的柱头间得到了差异表达条带。这证明芸芥自交亲和基因不是组成型表达,而是组织特异性表达,柱头是其唯一的表达器官。在开花前的自交亲和系中共得到了2条cDNA片段,一条小于100bp,另一条为750~1000bP,在开花后的自交亲和系中得到了1条300bp的cDNA片段。据分析这3条cDNA片段可能与芸芥的自交亲和性密切相关。在开花前的自交不亲和系中共得到了2条cDNA片段,一条为500bp,另一条为750bp,同时在开花后的自交不亲和系中得到了1条500~600bp的cDNA片段。这些cDNA片段可以用来区分芸芥的自交亲和系与自交不亲和系,还可用于克隆自交亲和基因。 展开更多
关键词 芸芥 自交亲和系 自交不亲和系 ddrt-pcr
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DDRT-PCR技术在研究附植前胚胎基因表达中的应用
11
作者 张进隆 赵兴绪 +2 位作者 陶金忠 杨永新 张勇 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期6-9,共4页
哺乳动物附植前胚胎的发育受相应基因的调控,在不同的发育阶段表达不同的差异基因,分离并克隆差异表达基因,有利于了解胚胎发育的分子机理.本文对mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)的基本原理、特点,单胚差异显示技术(SPEDDRT-PCR)在研究动物... 哺乳动物附植前胚胎的发育受相应基因的调控,在不同的发育阶段表达不同的差异基因,分离并克隆差异表达基因,有利于了解胚胎发育的分子机理.本文对mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)的基本原理、特点,单胚差异显示技术(SPEDDRT-PCR)在研究动物特定发育阶段表达的基因的优点,以及对不同种类动物早期胚胎在特定发育阶段表达的基因进展情况作了介绍. 展开更多
关键词 ddrt-pcr 附植前胚胎 基因
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DDRT-PCR及其在非跃变型果实成熟研究中的应用
12
作者 邓九生 彭民璋 黄在猛 《广西热作科技》 1999年第1期5-7,共3页
本文介绍了DDRT-PCR成熟相关基因分离与克隆方法的基本原理、步骤和优点;分析了该方法在非跃变型果实成熟的分子生物学机理研究中的应用。
关键词 ddrt-pcr 非跃变型果实 成熟 相关基因 MRNA
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用DDRT-PCR技术对太谷核不育小麦基因差别表达的研究 被引量:1
13
作者 刘秀珍 李传友 +3 位作者 孙兰珍 刘宝申 隋新霞 宋伟 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第12期2163-2166,共4页
采用DDRT-PCR技术对太谷核不育小麦的一对近等基因系进行了差别表达分析,以找出与太谷核不育基因Ta1表达有关的基因并研究其引起雄性不育的机制.共用30对随机引物进行差异显示,从展示的近1000条cD-NA片段中找出30条特异表达的cDNA片段,... 采用DDRT-PCR技术对太谷核不育小麦的一对近等基因系进行了差别表达分析,以找出与太谷核不育基因Ta1表达有关的基因并研究其引起雄性不育的机制.共用30对随机引物进行差异显示,从展示的近1000条cD-NA片段中找出30条特异表达的cDNA片段,其中包括可育特异和不育特异,这些片段可能与Ta1基因的表达有关. 展开更多
关键词 小麦 ddrt-pcr 太谷核不育 Tα1基因 差别表达
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DDRT-PCR法研究小鼠耐受全氟异丁烯中毒的相关基因 被引量:1
14
作者 唐治华 荣曙 丁树标 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期143-145,共3页
目的 急性低剂量全氟异丁烯 (PFIB)染毒后的活存小鼠可对致死量PFIB产生耐受性 ,本文旨在寻找与耐受有关的基因对揭示PFIB中毒耐受机制。方法 采用静式全暴露法 3次染毒PFIB ,抽提耐受 1个致死量PFIB活存动物的肺组织tRNA ,采用DDRT- ... 目的 急性低剂量全氟异丁烯 (PFIB)染毒后的活存小鼠可对致死量PFIB产生耐受性 ,本文旨在寻找与耐受有关的基因对揭示PFIB中毒耐受机制。方法 采用静式全暴露法 3次染毒PFIB ,抽提耐受 1个致死量PFIB活存动物的肺组织tRNA ,采用DDRT- PCR方法 ,使用 3个锚定引物和 4个随机引物分别对耐受小鼠和对照小鼠肺组织总tRNA进行逆转录和PCR扩增反应 ,通过测序胶电泳和银染分析其基因表达差异 ,并对差异DNA片段进行克隆、测序。结果 耐受PFIB的小鼠与对照鼠相比 ,在基因表达上发生了明显变化。对耐受小鼠特有的 3个差异DNA片段进行克隆、测序 ,通过BLAST与Genbank中的基因比对显示 ,克隆的EST(expressedsequencetags)均与小鼠特定的基因高度同源。结论 特异基因的表达是小鼠耐受PFIB的基础 ,耐受动物特有的 3种差异表达EST对应的基因对于揭示PFIB耐受机理可能具有重要意义。 展开更多
关键词 全氟异丁烯 ddrt-pcr 肺损伤
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利用DDRT-PCR技术分离和克隆玉米抗大斑病相关基因片段 被引量:6
15
作者 谷守芹 范永山 +1 位作者 韩建民 董金皋 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2005年第5期503-507,共5页
分离和克隆农作物的抗病基因是植物病理学及分子生物学研究的热点领域,笔者以一套含有不同主效抗病基因的玉米自交系B37,B37Ht1,B37Ht2为试验材料,接种玉米大斑病菌0号小种菌株01-27后,利用mRNA差异显示反转录PCR(mRNAdifferentialdispl... 分离和克隆农作物的抗病基因是植物病理学及分子生物学研究的热点领域,笔者以一套含有不同主效抗病基因的玉米自交系B37,B37Ht1,B37Ht2为试验材料,接种玉米大斑病菌0号小种菌株01-27后,利用mRNA差异显示反转录PCR(mRNAdifferentialdisplayreversetranscriptionPCR,DDRTPCR)技术分离玉米抗大斑病相关基因片段.通过反式Northern杂交检测,共获得了44条差异表达基因片段,其中与B37亲和性互作相关的片段17条,与B37Ht1和B37Ht2非亲和性互作相关的片段分别为11条和8条. 展开更多
关键词 玉米 玉米大斑病菌 DDRT—PCR 抗病相关基因片段
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利用改进的DDRT-PCR分离并鉴定水稻细胞缺铁胁迫相关cDNA克隆 被引量:3
16
作者 支立峰 余涛 +2 位作者 彭茂民 朱英国 李阳生 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2005年第1期7-10,共4页
利用改进的差异显示PCR(DDRT-PCR)技术从水稻细胞中分离与缺铁胁迫相关的新基因。在分离到的8个差异片段中,通过Northern杂交验证,其中5个为阳性。在这5个阳性片段中有3个是受缺铁胁迫抑制,有2个受缺铁胁迫诱导表达。对这些阳性片段的... 利用改进的差异显示PCR(DDRT-PCR)技术从水稻细胞中分离与缺铁胁迫相关的新基因。在分离到的8个差异片段中,通过Northern杂交验证,其中5个为阳性。在这5个阳性片段中有3个是受缺铁胁迫抑制,有2个受缺铁胁迫诱导表达。对这些阳性片段的序列分析表明有3个(IDR2,IDR3,IDR8)为新基因。其中IDR2、IDR8是2个未知基因,IDR3通过GenBank搜索可以找到一些与它同源的已知基因片段。 展开更多
关键词 DDRT—PCR 缺铁胁迫 水稻 悬浮细胞
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用改进的DDRT-PCR技术进行小麦穗和花药特异表达基因的分析
17
作者 刘秀珍 孙兰珍 +2 位作者 刘保申 宋伟 刘青 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第1期113-118,共6页
本研究采用改进的DDRT-PCR技术对小麦穗和花药发育的不同阶段进行了差别表达分析,以找出穗和花药的特异表达基因。用30个随机单引物进行RAPD扩增,从展示的近1000条带中找出14条差别cDNA片段,然后以cDNA为探针进行反向Northern-Blot,结... 本研究采用改进的DDRT-PCR技术对小麦穗和花药发育的不同阶段进行了差别表达分析,以找出穗和花药的特异表达基因。用30个随机单引物进行RAPD扩增,从展示的近1000条带中找出14条差别cDNA片段,然后以cDNA为探针进行反向Northern-Blot,结果得到一条在花药内特异表达增强的阳性片段,命名为S1176450。 展开更多
关键词 ddrt-pcr技术 特异表达基因 小麦穗 RAPD扩增 CDNA片段 表达分析 花药发育 单引物 450 差别
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利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究大豆抗疫霉根腐病的分子机制 被引量:4
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作者 叶楠 李永刚 文景芝 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第9期6-9,共4页
文章以中国优良大豆品种东农46及大豆疫霉优势生理小种1号菌株为材料,利用mRNA差异显示技术研究东农46与大豆疫霉根腐病菌非亲和互作中前后基因表达的差异,寻找并分离出与大豆疫霉根腐病抗病性相关的9条cDNA片段,通过这些差异片段的序... 文章以中国优良大豆品种东农46及大豆疫霉优势生理小种1号菌株为材料,利用mRNA差异显示技术研究东农46与大豆疫霉根腐病菌非亲和互作中前后基因表达的差异,寻找并分离出与大豆疫霉根腐病抗病性相关的9条cDNA片段,通过这些差异片段的序列分析进一步阐述大豆对疫霉根腐病菌的分子抗病机制。 展开更多
关键词 大豆疫霉根腐病 MRNA差异显示技术 抗病基因
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水杨酸诱导的甜瓜DDRT-PCR分析及其基因差异表达片段的分离 被引量:1
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作者 方春媛 陈年来 +2 位作者 任晓燕 张涛 荆世杰 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期90-95,共6页
利用DDRT-PCR技术,比较了1 mmol/L SA诱导第4天与未经SA诱导的甜瓜感白粉病品种卡拉克赛的基因表达差异.共获得差别条带19条,在SA诱导后出现差异带15条,在未诱导的对照中出现差异带4条.对其中的8条差异片段回收、克隆,用EcoRI/HindIII... 利用DDRT-PCR技术,比较了1 mmol/L SA诱导第4天与未经SA诱导的甜瓜感白粉病品种卡拉克赛的基因表达差异.共获得差别条带19条,在SA诱导后出现差异带15条,在未诱导的对照中出现差异带4条.对其中的8条差异片段回收、克隆,用EcoRI/HindIII双酶切和PCR扩增.对其中的cDNA3-4-1测序,在BLAST上比较同源性,发现其与拟南芥热激转录因子hsf8基因具有83%的核苷酸同源性.说明1 mmol/L SA处理的甜瓜叶片在mRNA水平上发生了明显的变化,SA诱导了热激转录因子hsf8基因的大量表达,从而可能影响热激蛋白hsp70的表达,对维持蛋白质结构,稳定胞内环境具有积极作用. 展开更多
关键词 甜瓜 SA MRNA差别显示 hsf8
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正交设计优化东亚砂藓DDRT-PCR反应体系 被引量:1
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作者 沙伟 都艳霞 张梅娟 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2009年第2期193-196,共4页
利用正交实验设计L25(56)对东亚砂藓(Racomitrium japonicum)DDRT-PCR反应体系的6因素(Mg2+、dNTP、锚定引物、随机引物、模板DNA、Taq酶)在5个水平上进行优化实验。结果筛选出各反应因素的最佳体系(20μL)为:Mg2+2.25mmol/L、dNTP0.4mm... 利用正交实验设计L25(56)对东亚砂藓(Racomitrium japonicum)DDRT-PCR反应体系的6因素(Mg2+、dNTP、锚定引物、随机引物、模板DNA、Taq酶)在5个水平上进行优化实验。结果筛选出各反应因素的最佳体系(20μL)为:Mg2+2.25mmol/L、dNTP0.4mmol/L、锚定引物1.0μmol/L、随机引物0.7μmol/L、模板DNA1.6μL、Taq酶2.5U。对东亚砂藓DDRT-PCR最佳反应体系进行梯度PCR引物退火温度筛选,得到的最佳退火温度为45.4℃。该优化体系的建立,为进一步进行东亚砂藓抗旱基因的筛选与克隆等一系列分子研究提供了重要参考依据。 展开更多
关键词 正交设计 东亚砂藓 DDRT—PCR
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