右美托咪定通过下调Dectin-1表达抑制免疫细胞浸润保护缺血/再灌注损伤的心肌

目的:探索右美托咪定(Dex)保护缺血/再灌注(I/R)诱导的心肌损伤的分子机制。方法:小鼠在体实验分组如下:野生型小鼠对照(Control)组、假手术(Sham)组、野生型小鼠缺血/再灌注模型(WT I/R)组和Dex预处理(WT Dex)组,Dectin-1基因敲除小鼠缺血/再灌注模型(KO I/R)组和Dex预处理(KO Dex)组,每组6只。TTC染色并测定小鼠心脏梗死区域(%),HE染色和病理学分析小鼠心肌损伤情况,ELISA测定小鼠血清TNF-α、IL-6和IL-10的水平,流式细胞术(FCM)计数和分选小鼠心肌浸润M2巨噬细胞和中性粒细胞,qPCR测定上述分选细胞中Dectin-1 mRNA表达情况。结果:TTC结果显示Control组和Sham组小鼠心肌未发生梗死;与WT I/R组相比,WT Dex组、KO I/R组和KO Dex组小鼠心肌梗死体积显著减少(P<0.05)。与KO I/R组相比,KO Dex组小鼠心肌梗死体积也明显减小(P<0.05)。HE染色结果显示WT I/R组小鼠心肌排列杂乱,出现大量断裂心肌纤维,WT Dex组、KO I/R组和KO Dex组小鼠心肌纤维存在少许断裂的情况,结构破坏不显著,心肌排列较为整齐;KO Dex组小鼠心肌损伤程度小于KO I/R组。ELISA结果显示,与Sham组相比,WT I/R组小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著升高,IL-10水平显著降低;与WT I/R组相比,WT Dex组和KO I/R组小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著降低,IL-10水平显著升高;与KO I/R组相比,KO Dex组小鼠血清TNF-α和IL-6水平显著降低,IL-10水平显著升高(P<0.05)。FCM结果显示,与Sham组相比,WT I/R组小鼠心肌浸润大量M2巨噬细胞和中性粒细胞(P<0.05);与WT I/R组相比,WT Dex组、KO I/R组和KO Dex组小鼠心肌浸润的M2巨噬细胞和中性粒细胞显著降低(P<0.05);KO I/R组和KO Dex组之间差异无统计学意义(P>0.05)。qPCR结果显示,与Sham组相比,WT I/R组小鼠心肌浸润的M2巨噬细胞和中性粒细胞中Dectin-1 mRNA表达量显著上调(P<0.05);与WT I/R组相比,Dex组则显著降低(P<0.05);KO I/R组和KO Dex组小鼠不表达Dectin-1。结论:Dex预处理对I/R损伤心肌的保护机制涉及降低I/R后小鼠心肌浸润的M2巨噬细胞和中性粒细胞数量,这一过程可能是通过抑制Dectin-1的表达来实现的。

Dectin-1通过巨噬细胞极化影响STEMI的机制研究

目的 探究Dectin-1通过巨噬细胞极化影响STEMI的机制研究。方法 将45只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=15)、si-Dectin-1组(n=15),模型组与si-Dectin-1组分别通过尾静脉注射NC-质粒和si-Dectin质粒,2周后建立ST段抬高型心肌梗死(ST-Segment Elevation Myocardial Infarction, STEMI)模型,2周后分离心脏组织,qPCR检测心脏组织Dectin-1表达水平,TTC染色检测心肌坏死面积,Tunel染色检测心肌凋亡水平,Masson染色检测心肌纤维化水平,ELISA检测心脏组织炎症因子白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)表达水平,Western blot检测心脏组织M1巨噬细胞和M2巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS),CD86,精氨酸酶1(Arginase 1,Arg-1),CD163表达水平。结果 与假手术相比,模型组Dectin表达水平显著升高,si-Dectin-1组Dectin表达水平显著降低;模型组心肌坏死面积增加,细胞凋亡增加,组织纤维化增加,炎症因子IL-1、IL-6、IL-10表达水平升高,与模型组相比,si-Dectin-1组心肌坏死面积降低,细胞凋亡降低,组织纤维化降低,炎症因子IL-1、IL-6、IL-10表达水平降低,差异具有显著的统计学意义(P<0.01);模型组大鼠中iNOS、CD86、Arg-1和CD163的表达水平均显著增加;与模型组比较,si-Dectin-1组大鼠心脏组织中iNOS和CD86蛋白表达水平下调,Arg-1和CD163蛋白表达水平显著上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 si-Dectin-1可发挥STEMI大鼠的心肌保护作用,其机制与巨噬细胞M2极化的调控相关。

基于Dectin-1-Syk-CARD9信号通路研究三黄汤缓解白念珠菌定植小鼠溃疡性结肠炎作用机制

目的基于Dectin-1-Syk-CARD9信号通路研究三黄汤治疗白念珠菌定植小鼠溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用葡聚糖硫酸钠自由饮用联合白念珠菌灌胃建立白念珠菌定植溃疡性结肠炎小鼠模型。将小鼠分为正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶组、氟康唑组和三黄汤低、高剂量组,分别予相应药物干预。观察小鼠一般状况并进行疾病活动指数(DAI)评分,检测小鼠肠道白念珠菌载荷,测量结肠长度并进行结肠组织病理学评分,透射电镜观察结肠上皮细胞超微结构,ELISA检测血清和结肠组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-12含量,q PCR、Western blot和免疫组化检测结肠上皮细胞和结肠组织Dectin-1、Syk、CARD9及核因子(NF)-κBp65和炎症因子表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠活动减弱、摄食量减少,伴有稀便,DAI评分明显升高,肠道白念珠菌载荷增加,结肠长度缩短,组织病理评分增加,结肠上皮细胞间隙增宽,细胞质溶解,线粒体肿胀,血清和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-12含量升高,结肠上皮细胞Dectin-1、CARD9 mRNA和蛋白表达升高,结肠组织p-Syk、p-NF-κBp65、CARD9、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,三黄汤高剂量组小鼠DAI评分明显降低,肠道白念珠菌载荷减少,结肠长度增加,组织病理评分降低,结肠黏膜上皮细胞微绒毛较完整、排列较有序,线粒体轻度肿胀,血清和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-12含量均降低,结肠上皮细胞Dectin-1、CARD9 mRNA和蛋白表达降低,结肠组织p-Syk、p-NF-κBp65、CARD9、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论三黄汤可能通过抑制Dectin-1-Syk-CARD9信号通路、减少炎症因子释放,发挥抗白念珠菌定植UC作用。

AIDS合并马尔尼菲青霉病患者外周血Dectin-1、炎症细胞因子及CD4^+T淋巴细胞表达情况及其临床意义

目的探讨AIDS合并马尔尼菲青霉菌病(Ps M)患者模式识别受体Dectin-1、炎性细胞因子及CD4^+T淋巴细胞表达情况及其临床意义。方法将120例AIDS患者根据是否合并Ps M分为Ps M组和非Ps M组各60例,比较两组Dectin-1的平均荧光强度、CD4^+T淋巴细胞计数和白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-12、IL-23水平。结果 Ps M组的Dectin-1表达、CD4^+T淋巴细胞计数、IL-2、IL-6、IL-12和IL-23水平均低于非Ps M组(P<0.05)。结论 Dectin-1及其调节产生的炎症细胞因子、CD4^+T水平下降可能是导致AIDS的患者对马尔尼菲青霉菌易感的重要原因。

柔肝方上调肝组织Dectin-1及下调TLR4治疗CCl4造模小鼠肝纤维化的作用机制研究

目的评价柔肝方对CCl4致肝纤维化小鼠的治疗作用及对Dectin-1、Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法C57BL小鼠60只,随机分为对照组、模型组和柔肝方组。模型组与柔肝方组均腹腔注射CCl4,每周3次,共6周;其中第3周起两组分别给予0.9%NaCl溶液与柔肝方灌胃,干预6周。检测各组小鼠肝功能,肝组织中Dectin-1、TLR4及相关下游蛋白和mRNA的水平,探讨柔肝方的抗肝纤维化作用。结果柔肝方组ALT、AST明显低于模型组,ALB明显高于模型组(P<0.01);柔肝方组肝脏假小叶形成和纤维化程度以及肝脏羟脯氨酸(Hyp)水平明显低于模型组(P<0.01);柔肝方组Dectin-1表达高于模型组(P<0.01),TLR4表达水平低于模型组(P<0.01);柔肝方组肌动蛋白α(α-SMA)、转化生长因子受体(TGF-β1 R)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)表达均明显低于模型组(P<0.01),且柔肝方组脊髓趋化因子受体2(CCR2)表达也明显低于模型组(P<0.01)。结论柔肝方具有较好的抗肝纤维化的作用,其机制可能与上调Dectin-1、下调TLR4的表达有关,也可能与下调CCR2表达有关。

模式识别受体Dectin-1与β-葡聚糖的免疫识别作用

二十多年前,人们首次发现β-葡聚糖受体作为一种非调理素依赖性受体,可在免疫反应早期,通过识别内、外源配体,在清除衰老细胞和防御感染方面发挥重要作用,进而实现其抗肿瘤、抗感染等生物学效应。本文对β-葡聚糖模式识别受体在先天性免疫细胞和组织中的分布及其在炎症反应中的作用进行了综述。

酿酒酵母β-葡聚糖通过膜受体Dectin-1和TLR-2诱导绵羊瘤胃上皮细胞表达SBD-1的机制研究

为了探索酿酒酵母β-葡聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)β-防御素-1(sheepβ-defensin-1,SBD-1)表达过程中膜受体Dectin-1和TLR-2可能存在的作用。本研究首先利用免疫组化、RT-PCR、免疫荧光和Western blot等方法检测Dectin-1是否在ORECs内表达,并且采用qPCR和Western blot方法对β-葡聚糖刺激ORECs后细胞膜受体Dectin-1和TLR-2的表达变化进行检测。而后用不同浓度的Dectin-1阻断剂昆布多糖或TLR-2特异性封闭抗体分别预处理ORECs后,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的表达变化,以确定β-葡聚糖诱导SBD-1表达过程中Dectin-1和TLR-2的参与情况。结果显示:1)绵羊瘤胃组织及ORECs内存在Dectin-1表达,且β-葡聚糖刺激ORECs后Dectin-1和TLR-2的表达水平显著增加(P<0.05);2)不同浓度的昆布多糖和TLR-2封闭抗体均可以极显著降低β-葡聚糖诱导SBD-1的表达(P<0.01),且随着阻断剂和封闭抗体浓度的增加,其抑制SBD-1表达的作用越明显。结果表明,Dectin-1在绵羊瘤胃组织及ORECs内均表达,并且酿酒酵母β-葡聚糖在ORECs中诱导SBD-1的表达是由Dectin-1和TLR-2介导产生的。

热处理光滑念珠菌对大鼠气道上皮细胞Dectin-1、IL-6和TNF-α表达的影响

目的探讨大鼠气道上皮(RTE)细胞与热处理光滑念珠菌孵育后Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达及意义。方法以体外培养的RTE细胞与热处理光滑念珠菌孵育后分别于2、4、6h观察RTE细胞形态变化,以未与光滑念珠菌孵育的RTE细胞为对照组。用Western blot法检测Dectin-1蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测IL-6和TNF-αmRNA的表达;ELISA法检测上清液IL-6和TNF-α的分泌。结果随着孵育时间的延长,RTE细胞破坏逐渐加重及Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达呈进行性增高。孵育2h组与对照组比较、孵育4h组与孵育2h组比较、孵育6h组与孵育4h组比较,Dectin-1、IL-6和TNF-α的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RTE细胞具有天然免疫功能,其Dectin-1参与了对热处理光滑念珠菌的识别,并激活IL-6和TNF-α的分泌,介导炎性反应。IL-6起负性调节作用。

地塞米松抑制卡氏肺孢子菌肺炎β2-防御素和Dectin-1受体的表达

目的研究卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)鼠肺Dectin-1和β2-防御素的表达变化,探讨地塞米松对Dectin-1和β2-防御素的影响与疾病发生的相互关系。方法实验分4组:正常对照组、Pc刺激组、PCP模型组以及PCP模型恢复组。免疫抑制方法建立PCP动物模型,改良四胺银(Grocoti's methe-namine-silver nitrate method,GMS)染色检测Pc包囊;肺组织切片HE染色观察肺组织病理变化;实时荧光定量和Western blot检测Dectin-1和β2-防御素的mRNA以及蛋白的表达。结果 Pc刺激组的Dectin-1和β2-防御素的mRNA以及蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.05);Pc刺激组和PCP恢复组的Dectin-1和β2-防御素的mR-NA以及蛋白显著高于PCP组(P<0.05),而PCP恢复组与PCP组肺部炎症无明显差别。结论对免疫功能正常宿主,Dectin-1受体和β2-防御素可能在防Pc感染中起重要作用;地塞米松抑制了鼠肺Dectin-1和β2-防御素的表达,这可能与PCP疾病的发生和发展有关。

非粒细胞缺乏肺曲霉病患者血清Dectin-1的检测

目的探讨非粒细胞缺乏肺曲霉病患者血清Dectin-1检测的临床意义。方法收集非粒细胞缺乏的曲霉病患者22例(肺曲霉病组),健康体检者54例(对照组),留取血清,ELISA方法检测两组血清Dectin-1水平。分析Dectin-1水平与血清1,3-D葡聚糖抗原检测(G试验)、半乳甘露聚糖抗原检测(GM试验)和血白细胞计数的关系。结果肺曲霉病组血清Dectin-1水平为(427.2±42.6)pg/mL,对照组为(280.8±39.4)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05);Dectin-1水平与血白细胞计数、G试验、GM试验无相关性。结论在非粒细胞缺乏曲霉病患者血清中,Dectin-1水平明显增高,提示Dectin-1是重要的抗曲霉免疫分子。

模式识别受体Dectin-1与天然免疫反应

在免疫反应早期,抗原递呈细胞表达的模式识别受体通过识别内、外源配体在清除衰老宿主细胞、分子以及防御感染中发挥重要作用。新近发现的树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(den driticcell associatedC typelectin- 1, Dectin -1)作为β- 葡聚糖的主要受体,广泛分布于单核巨噬细胞系统、树突状细胞(dendriticcell,DC)及中性粒细胞等。本文对Dectin- 1分子结构、细胞组织分布及其在诱导、调控局部和全身免疫、炎症反应中的作用进行概述。

Dectin-1与真菌β-葡聚糖介导的天然免疫

β-葡聚糖是真菌胞壁的主要多糖成分。天然免疫系统识别这一成分后触发髓系细胞的免疫应答反应,杀伤和清除入侵微生物。该文主要介绍天然免疫细胞的模式识别受体dectin-1与β-葡聚糖的特性以及它们通过何种信号传导途径激活天然免疫系统。对β-葡聚糖和dectin-1的研究必将为研制抗真菌免疫制剂和抗真菌药物靶点提供崭新的思路。

真菌细胞壁病原相关分子模式TLR/Dectin-1通路及相关细胞因子的免疫作用

侵袭性真菌感染(IFI)是致ICU患者死亡的重要原因之一。机体通过天然免疫重要的模式识别受体(PRR)Toll样受体(TLR)及C型凝集素受体(CLR)与病原相关分子模式(PAMP)识别后启动抗真菌免疫反应。目前明确磷脂甘露聚糖(PLM)的识别主要依赖TLR2和TLR4;β-葡聚糖经TLR2/树突状细胞相关性C型凝集素-1(Dectin-1)或只经Dectin-1识别。PLM和β-葡聚糖被识别后及经Dectin-1驱动获得性免疫后产生一系列下游细胞因子,一些下游细胞因子的免疫作用对不同组织有所不同、不确定或存在争议,一些免疫反应在细节上还没有详尽描述。因此,深入研究PAMP与PRR相互作用及其细胞因子对免疫调节影响,对IFI的预防治疗有重要意义。

模式识别受体-Dectin-1的研究进展

Dectin-1是主要表达于髓样细胞中的非Toll样模式识别受体,它能诱导自身胞内信号介导一系列细胞反应,在抗真菌免疫中发挥着重要的作用。该文对Dectin-1介导的信号途径,Dectin-1与其他模式识别受体的相互作用,Dectin-1在适应性免疫、抗微生物免疫中的作用予以综述。

非粒细胞缺乏侵袭性肺曲霉病患者血清IL-17、Dectin-1的变化

目的探讨非粒细胞缺乏侵袭性肺曲霉病(IPA)患者血清中IL-17、Dectin-1水平的变化及其意义。方法分别收集23例确诊及临床诊断为IPA的非粒细胞缺乏患者(IPA组)、31例临床诊断为肺炎患者(肺炎组)和51例健康体检者(对照组)的资料,应用ELISA法测定血清IL-17含量;同时检测IPA组及对照组血清Dectin-1含量,并测定IPA组患者血清G试验、GM试验、外周血白细胞计数和血清CRP的水平,随访患者预后,分析血清IL-17与其相关性。结果 IPA组患者血清IL-17含量明显高于对照组(P<0.05);肺炎组患者血清IL-17水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05);IPA组血清Dectin-1含量明显高于对照组(P<0.05);IPA组血清IL-17与Dectin-1水平呈正相关(r=0.81,P<0.05);IPA组血清IL-17、Dectin-1水平与G试验、GM试验、白细胞、CRP及患者的预后无相关性(P>0.05)。结论非粒细胞缺乏宿主曲霉感染时刺激Dectin-1产生,激活Th17细胞免疫反应,且两者间存在相关性。

卡氏肺孢子菌肺炎鼠肺模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4的表达变化

目的:研究卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,Pc)肺炎鼠肺Dectin-1、TLR-2和TLR-4的表达,探讨模式识别受体表达改变与PCP疾病发生的相互关系。方法实验分4组:正常对照组、Pc刺激组、PCP模型组以及PCP模型恢复组。地塞米松磷酸钠免疫抑制方法建立PCP动物模型,改良四胺银(GMS)染色检测Pc包囊;肺组织切片HE染色观察肺组织病理变化;实时荧光定量和Western-blot检测Dectin-1、TLR-2和TLR-4的mRNA以及蛋白的表达。结果:Pc刺激组的Dectin-1、TLR-2以及TLR-4的mRNA以及蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.05);Pc刺激组和PCP恢复组Dectin-1的mRNA以及蛋白显著高于PCP组(P<0.05),而肺部Pc载荷量显著低于PCP组(P<0.05)。结论地塞米松抑制了PCP鼠肺Dectin-1、TLR-2和TLR-4受体的表达,这可能与PCP疾病的发生和发展有关。

抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和NO中的作用

目的探讨抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)中的作用。方法①体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,设置处理组(抗Dectin-1单克隆抗体组)、阴性对照组与空白对照组,分别给予灭活或活的白念珠菌刺激。②刺激1h,3h,6h,8h后用酶联免疫吸附试验检测各组分泌的TNF-α水平,③刺激6h后Griess法检测各组产生NO的水平。结果①刺激1h后抗体浓度为20μg/mL处理组分泌的TNF-α水平(79.82±11.74pg/mL)低于阴性对照组(105.15±12.36pg/mL)(P<0.05),3h,6h,8h后各浓度处理组TNF-α水平均低于阴性对照组(P均<0.01),且呈浓度依赖性;②6h后各浓度处理组NO水平(61.24±8.85μmol/L,45.36±3.92μmol/L,36.37±2.58μmol/L)均低于阴性对照组(87.65±9.17μmol/L)(P<0.05)。结论抗Dectin-1单克隆抗体在白念珠菌刺激小鼠巨噬细胞释放TNF-α和NO中发挥抑制作用。

新生隐球菌通过Dectin-1上调单个核细胞miR-146a的表达

目的研究miR-146a是否参与新生隐球菌感染免疫应答过程。方法采用RT-PCR检测了6例新生隐球菌性脑膜炎患者和6名健康个体外周血单个核细胞(PBMC)中miR-146a的表达。以热灭活新生隐球菌刺激来自健康个体的PBMC,并加入Dectin-1抑制剂昆布多糖,采用RT-PCR检测热灭活新生隐球菌和昆布多糖对PBMC中miR-146a表达的影响。结果新生隐球菌性脑膜炎患者PBMC中miR-146a的表达较健康个体明显增高。热灭活新生隐球菌可以上调PBMC中miR-146a的表达,昆布多糖可以削弱其上调miR-146a表达的能力。结论热灭活新生隐球菌可以通过Dectin-1受体上调miR-146a的表达。miR-146a参与了新生隐球菌感染免疫应答过程,值得进一步研究。

Dectin-1在curdlan诱导的慢性肉芽肿病高炎症反应中的作用机制

慢性肉芽肿病(CGD)是一种罕见的遗传免疫缺陷综合症.CGD病人最常见为NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)功能缺失造成吞噬细胞内活性氧生成障碍,不能清除外源的细菌与真菌的感染.凝胶多糖curdlan属于1,3-β-葡聚糖,是白色念珠菌细胞壁的主要成分.目前,作为吞噬细胞中主要的模式识别受体,凝集素dectin-1是否参与curdlan诱导巨噬细胞参与免疫炎症反应以及其分子机制不十分清楚.为了研究这一机制,我们采用luminol和Amplex Red法检测活性氧生成水平,ELISA检测炎症因子IL-1β水平以及免疫荧光法检测NF-κB信号通路的激活情况.结果表明,curdlan浓度依赖性上调巨噬细胞活性氧生成,NOX2缺失显著降低活性氧产生,dectin-1缺失部分降低活性氧的生成和部分阻断NF-κB信号通路的激活.NOX2 KO小鼠炎症因子IL-1β水平显著升高,Dectin-1缺失后NOX2 KO小鼠IL-1β水平降低;Dectin-1 KO小鼠的IL-1β水平与WT小鼠比无显著差异,与Dectin-1/NOX2 KO小鼠比差异显著.上述结果提示,curdlan刺激下机体通过巨噬细胞内的dectin-1受体诱导免疫应答,激活NF-KB信号通路释放炎症因子IL-1β,同时通过dectin-1受体激活NOX2释放活性氧清除病原,促进机体修复.在这一过程中dectin-1不是唯一参与的受体.