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重组体pET-28a-alkB/E.coli降解页岩油泥石油烃的功能研究
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作者 李雪菲 句泽林 +3 位作者 齐婷婷 郑乾璐 李喜梅 余丽芸 《山东化工》 CAS 2024年第19期239-243,共5页
为了降解页岩油泥中的石油烃,构建基因工程菌,表达石油烃降解关键酶以提高油泥的降解效果。以Pseudomonas qingdaonensis基因组为模板扩增alkB基因,连接至载体pET-28a,转化至E.coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达的外源... 为了降解页岩油泥中的石油烃,构建基因工程菌,表达石油烃降解关键酶以提高油泥的降解效果。以Pseudomonas qingdaonensis基因组为模板扩增alkB基因,连接至载体pET-28a,转化至E.coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达的外源蛋白。pET-28a-alkB/E.coli处理原油和页岩油泥,采用气相色谱法评估降解效果。发现alkB基因在大肠杆菌中能表达外源蛋白,且14 d原油及页岩油泥的降解率分别为47.5%和47.1%,表明重组体pET-28a-alkB/E.coli具备降解页岩油泥石油烃的功能。 展开更多
关键词 烷烃单加氧酶alkB 生物降解 e.coli BL21(DE3) 页岩油污泥 气相色谱法
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Impact of an oligosaccharide-based polymer on the metabolic profiles and microbial ecology of weanling pigs experimentally infected with a pathogenic E.coli
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作者 Kwangwook Kim Cynthia Jinno +4 位作者 Xunde Li David Bravo Eric Cox Peng Ji Yanhong Liu 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第2期749-764,共16页
Background Our previous study has reported that supplementation of oligosaccharide-based polymer enhances gut health and disease resistance of pigs infected with enterotoxigenic E.coli(ETEC)F18 in a manner similar to ... Background Our previous study has reported that supplementation of oligosaccharide-based polymer enhances gut health and disease resistance of pigs infected with enterotoxigenic E.coli(ETEC)F18 in a manner similar to carbadox.The objective of this study was to investigate the impacts of oligosaccharide-based polymer or antibiotic on the host metabolic profiles and colon microbiota of weaned pigs experimentally infected with ETEC F18.Results Multivariate analysis highlighted the differences in the metabolic profiles of serum and colon digesta which were predominantly found between pigs supplemented with oligosaccharide-based polymer and antibiotic.The relative abundance of metabolic markers of immune responses and nutrient metabolisms,such as amino acids and carbohydrates,were significantly differentiated between the oligosaccharide-based polymer and antibiotic groups(q<0.2 and fold change>2.0).In addition,pigs in antibiotic had a reduced(P<0.05)relative abundance of Lachnospiraceae and Lactobacillaceae,whereas had greater(P<0.05)Clostridiaceae and Streptococcaceae in the colon digesta on d 11 post-inoculation(PI)compared with d 5 PI.Conclusions The impact of oligosaccharide-based polymer on the metabolic and microbial profiles of pigs is not fully understood,and further exploration is needed.However,current research suggest that various mechanisms are involved in the enhanced disease resistance and performance in ETEC-challenged pigs by supplementing this polymer. 展开更多
关键词 CARBADOX Colon microbiota Enterotoxigenic e.coli F18 Metabolomics Oligosaccharide-based polymer Weaned pigs
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Exploring the modulatory role of bovine lactoferrin on the microbiome and the immune response in healthy and Shiga toxin‑producing E.coli challenged weaned piglets
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作者 Matthias Dierick Ruben Ongena +2 位作者 Daisy Vanrompay Bert Devriendt Eric Cox 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期1278-1291,共14页
Background Post-weaned piglets suffer from F18+Escherichia coli(E.coli)infections resulting in post-weaning diar-rhoea or oedema disease.Frequently used management strategies,including colistin and zinc oxide,have con... Background Post-weaned piglets suffer from F18+Escherichia coli(E.coli)infections resulting in post-weaning diar-rhoea or oedema disease.Frequently used management strategies,including colistin and zinc oxide,have contrib-uted to the emergence and spread of antimicrobial resistance.Novel antimicrobials capable of directly interacting with pathogens and modulating the host immune responses are being investigated.Lactoferrin has shown promising results against porcine enterotoxigenic E.coli strains,both in vitro and in vivo.Results We investigated the influence of bovine lactoferrin(bLF)on the microbiome of healthy and infected weaned piglets.Additionally,we assessed whether bLF influenced the immune responses upon Shiga toxin-producing E.coli(STEC)infection.Therefore,2 in vivo trials were conducted:a microbiome trial and a challenge infection trial,using an F18+STEC strain.BLF did not affect theα-andβ-diversity.However,bLF groups showed a higher relative abundance(RA)for the Actinobacteria phylum and the Bifidobacterium genus in the ileal mucosa.When analysing the immune response upon infection,the STEC group exhibited a significant increase in F18-specific IgG serum levels,whereas this response was absent in the bLF group.Conclusion Taken together,the oral administration of bLF did not have a notable impact on theα-andβ-diversity of the gut microbiome in weaned piglets.Nevertheless,it did increase the RA of the Actinobacteria phylum and Bifi-dobacterium genus,which have previously been shown to play an important role in maintaining gut homeostasis.Furthermore,bLF administration during STEC infection resulted in the absence of F18-specific serum IgG responses. 展开更多
关键词 e.coli Immune modulation LACTOFERRIN MICROBIOME
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裂谷热病毒截断的Gn蛋白在E.coli中的表达与多克隆抗体的制备
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作者 李月涛 杨松涛 夏咸柱 《河南科技学院学报(自然科学版)》 2024年第6期29-37,共9页
目的为避免作为中和试验病原的裂谷热病毒(RVFV)存在生物安全隐患,探索建立RVFV假病毒中和试验方法.方法利用pET-30a原核表达载体,构建重组质粒含有截短的Gn蛋白片段,转化BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达目的蛋白通过异丙基-β-D-硫代半... 目的为避免作为中和试验病原的裂谷热病毒(RVFV)存在生物安全隐患,探索建立RVFV假病毒中和试验方法.方法利用pET-30a原核表达载体,构建重组质粒含有截短的Gn蛋白片段,转化BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达目的蛋白通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG),表达蛋白的正确与否通过SDS-PAGE和Western Blotting检测,纯化表达蛋白通过带his标签的镍柱.将RVFV Gn蛋白纯化后免疫小鼠,抗体效价通过ELISA检测,多克隆抗体对G蛋白的特异性通过Western Blotting检测.结果成功获得表达目的蛋白,RVFV Gn蛋白纯化后诱导小鼠产生的Gn多克隆抗体水平较高,并且多克隆抗体对G蛋白的特异性较强.结论利用PET30a载体构建了可表达RVFV截短的Gn蛋白的大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),并且制备的多抗对全长G蛋白的特异性较好,将蛋白纯化免疫Balb/c小鼠,经ELISA检测制备的多克隆抗体,抗体滴度较高. 展开更多
关键词 裂谷热病毒 病毒痒颗粒 多克隆抗体 大肠杆菌
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Evaluating the Potential of Nitrofurantoin and Fosfomycin for E.coli UTIs: A Susceptibility Study
5
作者 Usama Ahmed Muhammad Zubair +1 位作者 Baqaur Rehman Hafiz Muhammad Sultan 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2024年第6期351-358,共8页
This study was designed to find the susceptibility of Nitrofurantoin and Fosfomycin among urinary isolates of Escherichia.coli.Four hundred(400)urine samples were collected for susceptibility of nitrofurantoin and fos... This study was designed to find the susceptibility of Nitrofurantoin and Fosfomycin among urinary isolates of Escherichia.coli.Four hundred(400)urine samples were collected for susceptibility of nitrofurantoin and fosfomycin among urinary isolates of E.coli.All indoor and outdoor patients'urinary samples yielded growth of E.coli.Mid-stream urine specimens were inoculated on blood agar and CLED agar and incubated at 35±2°C.Growth was observed,and Escherichia coli was identified by Gram staining,Catalase,Motility test and API 20E(Bio murex)as per standard procedure.Antimicrobial susceptibility testing of isolates for nitrofurantoin and fosfomycin was carried out by the modified Kirby-Bauer disc diffusion method according to CLSI guidelines ATCC 25922.E.coli was used as a quality control strain.A total of 400 samples were tested susceptibility of nitrofurantoin and fosfomycin among urinary isolates of E.coli during this period.A total of 400 samples yielded the growth of E.coli,out of which 178(44.5%)were male and 222(55.5%)were female samples.Among males,18(10%)were tolerant to nitrofurantoin,and 2(1.1%)were tolerant to fosfomycin.Among females,9(4.09%)were susceptible to nitrofurantoin while 6(2.72%)were susceptible to fosfomycin.Among age groups below 45 years old,6(4.76%)were tolerant to nitrofurantoin,and 2(1.58%)were sensitive to fosfomycin.Between 46-66 years old,4(2.81%)were sensitive to nitrofurantoin,and 3(2.11%)were sensitive to fosfomycin.Between 67-90 years old,17(12.87%)were sensitive to nitrofurantoin,and 4(3.03%)were tolerant to fosfomycin.Fosfomycin and nitrofurantoin showed good susceptibility in urinary isolates of E.coli and can be used empirically in our setup. 展开更多
关键词 e.coli FOSFOMYCIN NITROFURANTOIN SUSCEPTIBILITY Urinary isolates
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龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因缺失株构建及部分生物学特性分析
6
作者 茶金龙 曹国春 +7 位作者 彭洁 杨维林 保志鹏 胡媛媛 吕念词 富国文 张自芳 叶妍琳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第15期66-72,共7页
为了探讨龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因对E.coli部分生物学特性的影响,试验以腹泻龙陵黄山羊肛门拭子为病料进行细菌分离鉴定;从分离菌中挑选对卡那霉素和大观霉素均敏感的原菌株E.coli D1,运用CRISPR/Cas9技术构建缺失株E.coliΔClpV... 为了探讨龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因对E.coli部分生物学特性的影响,试验以腹泻龙陵黄山羊肛门拭子为病料进行细菌分离鉴定;从分离菌中挑选对卡那霉素和大观霉素均敏感的原菌株E.coli D1,运用CRISPR/Cas9技术构建缺失株E.coliΔClpV1-D1;连续传15代后运用PCR方法检测缺失株E.coliΔClpV1-D1遗传稳定性;挑取原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1单克隆接种于LB液体培养基中培养,在24 h内每隔1 h测定其生长速度;30℃培养72 h后采用结晶紫染色法测定原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1生物被膜形成能力;采用MTT法测定原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1在第3,6,9,12小时时的细胞存活率;分别取1.0×10^(5)cfu/mL、1.0×10^(8)cfu/mL浓度的原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1对昆明小鼠进行腹腔注射,24 h后记录各组小鼠死亡数量,进行致病性分析。结果表明:从16份肛门拭子病料中分离得到12株E.coli;运用CRISPR/Cas9技术成功构建出缺失株E.coliΔClpV1-D1;缺失株E.coliΔClpV1-D1连续传15代后仍能稳定遗传;原菌株E.coli D1和缺失株E.coliΔClpV1-D1在24 h内生长速度无显著差异(P>0.05);缺失株E.coliΔClpV1-D1的生物被膜形成能力显著低于原菌株E.coli D1(P<0.05);在测定的4个时间段缺失株E.coliΔClpV1-D1对IPEC-J2细胞毒性减弱,两种浓度的缺失株对小鼠的致死率均显著低于原菌株(P<0.05)。说明缺失ClpV1基因对E.coli生长速度无明显影响,但会降低其生物被膜形成的能力和致病性。 展开更多
关键词 龙陵黄山羊 大肠杆菌 CRISPR/Cas9 ClpV1 致病性
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2种氟喹诺酮类抗生素与群体感应抑制剂对E.coli的联合毒性效应
7
作者 赵远帆 张瑾 +2 位作者 曾健平 张静 张颖 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期27-38,共12页
抗生素滥用带来严重的细菌耐药性,威胁生态环境和人体健康。群体感应抑制剂(quorum sensing inhibitors,QSIs)作为一种理论上难以引发细菌耐药性的新型潜在抗生素替代品,被建议单独使用或与传统抗生素联合使用。因此,考察抗生素与QSIs... 抗生素滥用带来严重的细菌耐药性,威胁生态环境和人体健康。群体感应抑制剂(quorum sensing inhibitors,QSIs)作为一种理论上难以引发细菌耐药性的新型潜在抗生素替代品,被建议单独使用或与传统抗生素联合使用。因此,考察抗生素与QSIs联合作用效应及其作用机理对其在环境中可能产生的联合暴露风险评估具有重要的参考意义。以应用较广泛的2种氟喹诺酮类药物氧氟沙星(ofloxacin,OFL)、左氧氟沙星(levofloxacin,LEV)和1种新型抗菌剂群体感应抑制剂4-羟基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮(4-hydroxy-2,5-dimethyl-3(2H)-furanone,HDMF)为研究对象,运用直接均分法和均匀设计射线法分别设计3个二元和1个三元混合物体系,每个体系包含5条具有不同组分浓度比的射线。应用时间毒性微板分析法测定3种药物及其混合物体系对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的毒性,应用拟合归零法分析混合物的毒性相互作用及相互作用强度,采用分子间对接技术来探讨可能存在的作用机理。结果表明,HDMF、OFL、LEV对E.coli均具有浓度、时间依赖毒性,以半数效应浓度负对数为毒性指标,3种药物在同一暴露时间毒性顺序:LEV>OFL>HDMF。3种药物的二元混合物体系相互作用类型有拮抗/协同作用,而三元混合物体系的作用类型为协同作用,且作用类型和强度受混合物组分、暴露时间和浓度影响。氟喹诺酮类药物混合物体系中,因药物竞争结合蛋白点位而呈现出拮抗作用。在氟喹诺酮类药物和QSIs混合体系中,QSIs会破坏细菌的生物膜,使氟喹诺酮类药物更容易接触细菌造成损伤,从而呈现协同作用。但随着暴露时间的延长,氟喹诺酮类药物会对DNA造成损伤进而减少QSIs作用蛋白的产生,呈现出拮抗作用。 展开更多
关键词 氟喹诺酮类抗生素 群体感应抑制剂 e.coli 联合毒性 分子对接
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提高碱性磷酸酶在E.coli胞内表达的可溶性及活性 被引量:2
8
作者 杨丹燕 林陈水 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第4期372-375,共4页
以E.coliDH5α基因组为模板PCR扩增得到无信号肽的碱性磷酸酶基因片段,与胞内融合表达型T载体连接得到重组质粒,转化表达宿主E.coliBL21(DE3)和E.coliorigami(DE3),经0.1 mM IPTG诱导表达,超声破碎细胞后,SDS-PAGE分析可溶性,融合蛋白在... 以E.coliDH5α基因组为模板PCR扩增得到无信号肽的碱性磷酸酶基因片段,与胞内融合表达型T载体连接得到重组质粒,转化表达宿主E.coliBL21(DE3)和E.coliorigami(DE3),经0.1 mM IPTG诱导表达,超声破碎细胞后,SDS-PAGE分析可溶性,融合蛋白在E.coliorigami(DE3)中的可溶蛋白含量比E.coliBL21(DE3)中高.融合蛋白的可溶部分经Ni2+螯合亲和纯化,纯化后E.coliorigami(DE3)中蛋白活性比E.coliBL21(DE3)中明显提高,达到1 614.3U/mg蛋白. 展开更多
关键词 碱性磷酸酶 e.coli BL21(DE3) e.coliorigami(DE3) 可溶性 活性
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基于dsDNA-CuNCs的荧光ELISA检测牛奶中的E.coli O157:H7 被引量:1
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作者 曹文凯 山珊 +3 位作者 刘道峰 彭娟 邢克宇 赖卫华 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2023年第9期38-43,94,共7页
目的:建立了一种灵敏检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的新型荧光酶联免疫吸附方法。方法:以碱性磷酸酶水解焦磷酸盐-Cu^(2+)配位复合物,释放出Cu^(2+)形成铜纳米簇作为信号报告探针,通过对关键因素Cu^(2+)浓度、焦磷酸盐浓度、DNA模板的浓度... 目的:建立了一种灵敏检测牛奶中大肠杆菌O157:H7的新型荧光酶联免疫吸附方法。方法:以碱性磷酸酶水解焦磷酸盐-Cu^(2+)配位复合物,释放出Cu^(2+)形成铜纳米簇作为信号报告探针,通过对关键因素Cu^(2+)浓度、焦磷酸盐浓度、DNA模板的浓度和长度进行优化。结果:在最优条件下,大肠杆菌O157:H7的菌数为5×10^(4)~1×10^(8)CFU/mL时,与荧光信号值有较好的线性关系(R^(2)=0.9808),最低检出限为2.4×10^(4)CFU/mL。结论:该方法成功地应用于低脂牛奶和脱脂牛奶样本中大肠杆菌O157:H7的测定,平均回收率为92.2%~10^(8).5%,相对标准偏差为4.9%~10.4%。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附 铜纳米簇 大肠杆菌O157:H7 检测
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重组E.coli工程菌高密度培养生产人源型胶原蛋白 被引量:66
10
作者 范代娣 段明瑞 +4 位作者 米钰 宋纪蓉 惠俊峰 王德伟 王国柱 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第7期752-754,共3页
Several technical parameters were studied during the fermentation of recombinant E.coli for the production of collagen-like biopolymer.The effects of dissolved oxygen as well as glucose concentration on fermentation w... Several technical parameters were studied during the fermentation of recombinant E.coli for the production of collagen-like biopolymer.The effects of dissolved oxygen as well as glucose concentration on fermentation were observed.The OD 600 value could reach 98 when dissolved oxygen was controlled at 50% and glucose around 1%.The production of human-like collagen with a yield of 29.4% was obtained. 展开更多
关键词 重组e.coli工程菌 高密度发酵 类人胶原蛋白 培养工艺 发酵
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中药三黄汤、小檗碱对E.coli生长抑制作用与庆大霉素的比较 被引量:13
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作者 刘玉庆 张玉忠 +2 位作者 刘胜贵 金建玲 高培基 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2003年第3期302-306,共5页
庆大霉素对E .coli的抑菌作用强 ,试管稀释法、琼脂稀释法和平板抑菌圈法抑菌试验得到一致的MIC(3~5 μg/mL) ;三黄汤、小檗碱抑菌作用弱而稳定 ,试管稀释法测得的MIC分别为 5 0 0mg/mL和 2 .5mg/mL ,而用平板抑菌圈法得不到明显的抑菌... 庆大霉素对E .coli的抑菌作用强 ,试管稀释法、琼脂稀释法和平板抑菌圈法抑菌试验得到一致的MIC(3~5 μg/mL) ;三黄汤、小檗碱抑菌作用弱而稳定 ,试管稀释法测得的MIC分别为 5 0 0mg/mL和 2 .5mg/mL ,而用平板抑菌圈法得不到明显的抑菌圈 .在亚MIC药物液体分批培养时 ,庆大霉素抑菌曲线起初 2h迅速下降 ,而后回升到初始浓度 ,而三黄汤抑菌曲线平缓稳定 ,说明中药和抗生素的抑菌机制明显不同 .庆大霉素与小檗碱混合使用时 ,与庆大霉素单独使用相近 ,而与三黄混合使用时 ,则主要表现三黄汤的抑菌作用 .因此中西药结合时需要慎用 .在接近MIC药物培养基中连续传代 2 0次后 ,庆大霉素MIC提高 8倍多 ,而三黄汤和小檗碱MIC无显著变化 ,无抗药性产生 ,也不产生对庆大霉素的交叉抗药性 .研究结果还表明 ,在 1/ 4MIC三黄汤中连续传代 2 0次 ,能消除E .coli已形成的庆大霉素抗性 ,这为解决抗生素抗药性提供了线索 .图 4参 2 展开更多
关键词 中药 三黄汤 小檗碱 e.coli 生长抑制作用 庆大霉素 抑菌作用 抗药性
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养殖场空气中E.coli磺胺类抗生素的抗性 被引量:14
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作者 金明兰 孟庆玲 +7 位作者 赵玉鑫 徐莹莹 薛洪海 齐子姝 李娜 沈梦楠 孙世梅 金宁一 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期472-479,共8页
本文从养殖场空气中分离出360株E.coli(大肠杆菌,Escherichia coli),应用肉汤微量稀释法和PCR方法,分离磺胺甲唑敏感菌株,检测抗生素抗性和抗性基因.在分离的E.coli中,对磺胺甲唑敏感菌株为95株(26.4%),有48株含有青霉素、氯霉素、四环... 本文从养殖场空气中分离出360株E.coli(大肠杆菌,Escherichia coli),应用肉汤微量稀释法和PCR方法,分离磺胺甲唑敏感菌株,检测抗生素抗性和抗性基因.在分离的E.coli中,对磺胺甲唑敏感菌株为95株(26.4%),有48株含有青霉素、氯霉素、四环素、环丙沙星、庆大霉素和利福平的抗性,而47株未含有抗性.其中,7株菌株含有1种抗生素抗性、11株菌株含有2种抗生素抗性、17株菌株含有3种抗生素抗性、6株菌株含有4种抗生素抗性、4株菌株含有5种抗生素抗性、3株菌株含有6种抗生素抗性.对抗生素的耐受能力依次为:氯霉素、青霉素、四环素、环丙沙星、庆大霉素、利福平.磺胺甲唑敏感菌株共检出163个抗性基因,sul1、int1、sul2、Int2、sul3检出数量依次为49、44、29、20和19;含一种、二种、三种、四种、五种抗性基因菌株分别为45、22、10、7、2;但有6株未检测出抗性基因.结果表明养殖场建场时间、抗生素使用、养殖规模等与抗生素抗性菌的抗性呈正相关;养殖场空气中分离的E.coli抗生素抗性较高,且具有多重抗性;抗生素抗性的表现型与其基因型之间出现不完全吻合现象. 展开更多
关键词 磺胺类抗性菌 抗性基因 e.coli 养殖场空气
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大肠杆菌E.coli HB101(pBR322)高密度培养过程质粒的稳定性 被引量:12
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作者 喻国策 焦瑞身 +1 位作者 王骥程 王树青 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期185-188,共4页
通过正交实验考察了大肠杆菌E.coli HB101-pBR322)高密度培养过程中,不同培养条件对质粒的稳定性和β(内酰胺酶活力的影响. 结果表明,当温度在33(39oC、pH为6.4-7.2、DO为 40%-80%、 补料速率在5.4-10.8 g/h范围内变化,以及细胞密度... 通过正交实验考察了大肠杆菌E.coli HB101-pBR322)高密度培养过程中,不同培养条件对质粒的稳定性和β(内酰胺酶活力的影响. 结果表明,当温度在33(39oC、pH为6.4-7.2、DO为 40%-80%、 补料速率在5.4-10.8 g/h范围内变化,以及细胞密度达到27.3 g/L、比生长速率达到0.73 h-1时,质粒没有发生丢失现象,但在培养过程中β-内酰胺酶的活力降低. 展开更多
关键词 大肠杆菌e.coli HB101 (pBR322) 高密度培养 质粒稳定性 Β-内酰胺酶 基因工程菌 发酵
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番鸭呼肠孤病毒MW9710σC蛋白基因克隆及其在E.coli中表达 被引量:9
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作者 张云 欧阳岁东 +3 位作者 刘明 胡奇林 韩周 林锋强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期376-380,共5页
应用RT2PCR扩增出番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC基因,序列分析表明σC基因核苷酸数为810bp,编码269个氨基酸,相对分子量为29.4ku,DNAstar软件分析MW9710株的σC核苷酸序列和法国番鸭呼肠孤病毒89026株有93%的同源性,而与禽呼肠孤病毒的... 应用RT2PCR扩增出番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC基因,序列分析表明σC基因核苷酸数为810bp,编码269个氨基酸,相对分子量为29.4ku,DNAstar软件分析MW9710株的σC核苷酸序列和法国番鸭呼肠孤病毒89026株有93%的同源性,而与禽呼肠孤病毒的同源性仅在21%~25%之间,表明番鸭呼肠孤病毒是一类不同于禽呼肠孤病毒的新病毒。将σC基因片段亚克隆到原核表达载体pET32a中,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,Western2blot进一步验证了表达产物与番鸭呼肠孤病毒阳性血清反应,表明σC基因表达产物具有免疫原性,为下一步研制番鸭呼肠孤病毒诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 e.coli 基因克隆 禽呼肠孤病毒 Western 蛋白 原核表达载体 基因表达产物 基因工程疫苗 PCR扩增 相对分子量 核苷酸序列 诊断试剂盒 法国番鸭 软件分析 高效表达 大肠杆菌 IPTG 基因片段 免疫原性 阳性血清 blot 同源性
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过量表达苹果酸酶对E.coli FMJ39厌氧混合酸发酵的影响 被引量:7
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作者 姜岷 谢鑫 +1 位作者 许琳 严明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期69-74,共6页
为了考察苹果酸酶对厌氧混合酸发酵的影响,从E.coliDH5α中PCR扩增苹果酸酶(NAD+-dependent,E.C1.1.1.38)基因sfcA,插入质粒pTrc99a构建了表达质粒pTrc99a-sfcA,有氧和厌氧的条件下,IPTG诱导在E.coliFMJ39(ldh,pfl)中均获得大量表达。... 为了考察苹果酸酶对厌氧混合酸发酵的影响,从E.coliDH5α中PCR扩增苹果酸酶(NAD+-dependent,E.C1.1.1.38)基因sfcA,插入质粒pTrc99a构建了表达质粒pTrc99a-sfcA,有氧和厌氧的条件下,IPTG诱导在E.coliFMJ39(ldh,pfl)中均获得大量表达。厌氧发酵结果表明,过量表达苹果酸酶会影响混合酸发酵中甲酸、乙酸、丁二酸途径。重组菌甲酸和乙酸的量分别比受体菌提高了17.58%和15.27%,丁二酸的量降低了26.87%,柠檬酸的量变化不大。实验证实即使pfl基因缺陷,高浓度的L-Thr和L-Ser也会诱导Tdc操纵元把丙酮酸转化为甲酸和乙酸。 展开更多
关键词 苹果酸酶 e.coli FMJ39 厌氧发酵 混合酸发酵 有机酸
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传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达 被引量:6
16
作者 周继勇 丁红梅 +1 位作者 程丽琴 沈行燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期450-455,共6页
核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片... 核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %~ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %~ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4 展开更多
关键词 禽病毒 传染性支气管炎病毒 核衣壳蛋白 基因克隆 e.coli 表达
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低能离子注入E.coli K12的HRS/IRR效应及recA基因在其诱发中的作用 被引量:4
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作者 杨天佑 李培睿 +2 位作者 田静 李宗伟 秦广雍 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期397-401,共5页
以MG1655(野生型),LE392(recA-)和DH5α(recA-)3株E.coliK12菌株为材料,研究了30keVN+离子注入E.coliK12时HRS/IRR效应的诱发情况及recA基因在其诱发中的作用。结果显示:小于10×1014ions/cm2低剂量离子注入大肠杆菌可诱发HRS/IRR效... 以MG1655(野生型),LE392(recA-)和DH5α(recA-)3株E.coliK12菌株为材料,研究了30keVN+离子注入E.coliK12时HRS/IRR效应的诱发情况及recA基因在其诱发中的作用。结果显示:小于10×1014ions/cm2低剂量离子注入大肠杆菌可诱发HRS/IRR效应;30keVN+离子注入MG1655,LE392菌株都可诱发HRS/IRR效应,而在DH5α菌株中无法诱导IRR效应。recA-与HRS/IRR效应相斥性表明recA基因在HRS/IRR效应的诱发中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 HRS/IRR N^+ 注入 e.coli K12 RECA
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抗菌肽天蚕素B突变体ABP-S1基因在E.coli中的融合表达 被引量:3
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作者 卢强 刘维全 +3 位作者 赵凤芹 刘明远 江禹 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期241-243,共3页
利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的... 利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的转化子高效表达了融合蛋白 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检查 ,融合表达产物最高可占菌体总蛋白的49.45 %。表达产物经包涵体复性 ,柱层析初步纯化 ,通过平板抑菌试验 ,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌以及鱼类重要的致病菌嗜水气单胞菌等多种革兰氏阳性。 展开更多
关键词 抗菌肽 原核表达 绿色荧光蛋白 抗菌活性 大肠杆菌 天蚕素B 突变体 ABP-S1 e.coli 基因表达
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伴大豆球蛋白水解肽对灌喂大肠杆菌(E.coli)的小鼠肠道微生物区系和健康的影响 被引量:5
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作者 沈仓良 姚文 +2 位作者 陈伟华 朱伟云 邹思湘 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期354-358,361,共6页
目的研究服用伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽的小鼠,灌喂E.coli后的健康状况,分析小鼠灌喂E.coli后24h,48h粪样微生物区系的变化。方法应用PCR-DGGE技术对小鼠粪样微生物区系进行相似性分析;应用连续稀释PCR的方法检测小鼠灌喂E.coli后24h,... 目的研究服用伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽的小鼠,灌喂E.coli后的健康状况,分析小鼠灌喂E.coli后24h,48h粪样微生物区系的变化。方法应用PCR-DGGE技术对小鼠粪样微生物区系进行相似性分析;应用连续稀释PCR的方法检测小鼠灌喂E.coli后24h,48h粪样中细菌的数量;同时观察小鼠灌喂E.coli后的健康状况。结果小鼠灌喂E.coli后24h,盐酸彻底水解伴大豆球蛋白液组(HCL-FHC)和灌菌对照组(CON)的相似性较高(71.5%),伴大豆球蛋白组(Conglycinin)和伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽组(PTC)与正常对照组(CONN)的相似性都较高(分别为82.4%和72.9%);灌喂E.coli后48h,CONN组和CON组的相似性不高(59.6%),PTC组和CONN组的相似性较高(73.7%),PTC组和Conglycinin组、HCL-FHC组、CON组的相似性都不高(分别为51.4%、56.3%、48.1%),PTC组小鼠粪中细菌的数量明显低于CON组和HCL-FHC组,同时PTC组健康小鼠的数量明显多于其它处理组。结论伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能维持肠道健康的微生物区系,降低肠道细菌的数量,维持感染E.coli后小鼠的健康。 展开更多
关键词 变性梯度凝胶电泳 伴大豆球蛋白 胃蛋白酶 水解肽e.coli
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基因工程菌E.coli BL21/pET-DsbA-MalQ发酵产麦芽糖转糖基酶的研究 被引量:3
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作者 王水兴 李燕萍 +3 位作者 许杨 夏慧玲 吴凌伟 郁振军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期285-289,共5页
为了获得最佳的基因工程菌E.coli BL21/pET-DsbA-MalQ发酵产酶条件,通过进行诱导时间﹑诱导温度﹑IPTG的浓度﹑诱导前菌液浓度(OD600)等因素梯度实验,研究各因素对发酵产酶的影响。实验结果表明,基因工程菌的最佳诱导条件分别为:诱导时... 为了获得最佳的基因工程菌E.coli BL21/pET-DsbA-MalQ发酵产酶条件,通过进行诱导时间﹑诱导温度﹑IPTG的浓度﹑诱导前菌液浓度(OD600)等因素梯度实验,研究各因素对发酵产酶的影响。实验结果表明,基因工程菌的最佳诱导条件分别为:诱导时间为2.5h,诱导温度为30℃,IPTG浓度为0.5mmol/L,诱导前OD600值为0.5。在最佳工艺条件下,粗酶液的酶活为130U,相当于出发菌产酶效率的135倍。 展开更多
关键词 e.coli BL21/pET-DsbA-MalQ 诱导时间 诱导温度 IPTG浓度 麦芽糖转糖基酶
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