miR-150、Beclin-1及ELOVL6在原发性痛风患者外周血单个核细胞中的表达及与病情的关系研究

目的 分析miR-150、Beclin-1及ELOVL6在原发性痛风患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及与病情的关系。方法 收集2018年3月至2021年5月我院收治的原发性痛风患者98例(GA组),根据患者临床症状分为急性期(AGA组)47例,非急性期(NAGA组)51例;另选取同期健康体检者84例(对照组)。对比不同人群中miR-150、Beclin-1、ELOVL6、尿酸(UA)表达情况;AGA组与NAGA组miR-150、Beclin-1、ELOVL6、UA、视觉模拟评分(VAS)表达情况,分析miR-150、Beclin-1及ELOVL6与UA、VAS评分相关性。结果 GA组miR-150、Beclin-1、ELOVL6蛋白表达低于对照组,UA表达高于对照组(P<0.05);AGA组miR-150、Beclin-1、ELOVL6表达低于NAGA组,UA、VAS评分高于NAGA组(P<0.05);miR-150、Beclin-1及ELOVL6与UA、VAS评分之间均为负相关(P<0.05)。结论 miR-150、Beclin-1及ELOVL6在原发性痛风患者PBMC中的表达均下调,与患者病情进展关系密切。

卵巢浆液性腺癌组织中ELOVL6及KLF4的表达水平与预后的关系

目的探讨卵巢浆液性腺癌组织中超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6)及锌指转录调节蛋白4(KLF4)的表达水平及其与预后的关系。方法选取2012年5月至2014年5月青海红十字医院诊治的105例卵巢浆液性腺癌患者作为研究对象。其中高级别患者设为高级别组(n=75),低级别患者设为低级别组(n=30)。另选择因其他疾病行手术切除的正常卵巢组织和输卵管组织的患者设为对照组(n=25)。采用免疫组化法检测患者组织中ELOVL6及KLF4蛋白阳性表达,使用Spearman分析相关性,患者5年生存率采用Kaplan-Meier单因素分析,影响患者预后的独立危险因素采用Cox多因素分析。结果ELOVL6和KLF4蛋白在低级别组患者中的阳性表达率(53.33%、30.00%)显著低于对照组卵巢组织的阳性率(80.00%、64.00%),差异具有统计学意义(P<0.05),在高级别组患者中的阳性表达率(42.67%、16.00%)显著低于对照组输卵管组织的阳性率(88.00%、80.00%),差异具有统计学意义(P<0.05);高级别组患者Ⅲ期+Ⅳ期中ELOVL6和KLF4蛋白阳性表达率显著低于Ⅰ期+Ⅱ期,术后有残留灶患者的KLF4蛋白阳性表达率显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);高级别组患者ELOVL6和KLF4阳性表达率呈正相关,差异具有统计学意义(r=0.041,P=0.035);高级别组患者的ELOVL6蛋白阳性者5年生存率为40.6%,显著高于阴性者的21.8%,KLF4蛋白阳性者5年生存率为39.2%,显著高于阴性者的18.9%;Cox多因素分析显示KLF4低表达、FIGO分期均是影响高级别组患者预后的独立危险因素。结论卵巢浆液性腺癌患者组织中ELOVL6及KLF4蛋白低表达,FIGO分期和KLF4对患者预后有一定影响。

ELOVL6基因研究现状

ELOVL6基因是超长链脂肪酸延伸酶（ELOVLs）家族成员之一,可以催化饱和和单不饱和脂肪酸的延伸,主要参与脂肪酸延伸和脂酰CoA的生物合成。目前对ELOVL6基因的研究主要集中在脂肪酸代谢、氧化应激、炎症反应等多种代谢性疾病方面,其在抑制某些肿瘤细胞中也发挥着重要的作用。ELOVL6作为牛的重要的脂肪酸代谢调控基因,国内外的研究相对较少,文章对国内外关于该基因的结构、表达情况和生理功能以及牛ELOVL6基因的研究进展进行了较为详细的综述。

猪ELOVL6基因多态性与表达差异分析

为探究ELOVL6基因在猪肌肉生长、脂肪沉积等性状的分子调控机制中所发挥的作用,本实验对藏猪、滇南小耳猪、大约克猪的背脂、背最长肌和肝脏组织的ELOVL6基因进行了RT-qPCR检测,并对ELOVL6基因Intron 3区域进行了多态性分析。结果表明:ELOVL6基因在3个猪种背脂和背最长肌中的趋势完全一致,即藏猪>滇南小耳猪>大约克猪,两两之间差异极显著;在肝脏组织中,藏猪、滇南小耳猪与大约克猪ELOVL6基因的表达量与在背脂和背最长肌中一致,但藏猪与滇南小耳猪差异不显著。在ELOVL6基因Intron3区域,’G^99954A、’T^99793C、’C^99650T3个位点存在连锁突变,且国内脂肪型藏猪、滇南小耳猪均与外来瘦肉型大约克猪呈极显著差异,而藏猪与滇南小耳猪差异不显著。综上可知,ELOVL6基因’G^99954A、’G^99793A、’G^99650A位点的多态性与mRNA表达差异性显著相关,推测这3个连锁突变位点可能是调控ELOVL6基因表达的关键功能位点,为下一步开发肉质性状的遗传标记及利用分子标记实现优质猪肉的选育提供参考。

ELOVL6基因基于Nod样受体蛋白3通路与大动脉粥样硬化性脑梗死风险的研究

目的探讨超长链脂肪酸延伸酶家族成员6(elongase of very long chain fatty acids family member 6,ELOVL6)基因基于Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体通路参与大动脉粥样硬化性脑卒中(large artery atherosclerosis stroke,LAA)的发病机制。方法以LAA患者为研究对象,同期体检的年龄、性别匹配的健康人群为对照,采用小干扰RNA技术,通过实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法研究目标人群外周血ELOVL6、NLRP3基因的mRNA和蛋白表达量以及白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症细胞因子蛋白定量,以分析ELOVL6基因参与LAA发病的可能机制。结果在LAA患者和健康人群中,ELOVL6基因、NLRP3基因mRNA水平(ELOVL6:0.0011±0.0003 vs.0.0005±0.0003,P<0.05;NLRP3:0.049±0.015 vs.0.003±0.002,P<0.05)和蛋白定量(ELOVL6:0.801±0.347 vs.0.451±0.193,P<0.05;NLRP3:0.897±0.346 vs.0.406±0.339,P<0.05),LAA患者均较对照人群增加;IL-6和TNF-α两个炎性指标蛋白表达量(IL-6:1.087±0.178 vs.0.507±0.094,P<0.05;TNF-α:0.600±0.092 vs.0.196±0.044,P<0.05)高于对照人群。进一步分析发现,LAA患者NLRP3基因与IL-1β(r=0.937,P<0.001)、IL-6(r=0.723,P=0.018)和TNF-α(r=0.672,P=0.033)蛋白表达具有正相关性,ELOVL6基因与NLRP3基因蛋白表达具有正相关性(r=0.785,P=0.007),小干扰RNA干扰ELOVL6基因会引起NLRP3基因mRNA(0.002±0.001 vs.0.049±0.015,P=0.010)和蛋白(0.399±0.081 vs.0.897±0.346,P=0.002)表达水平降低。结论ELOVL6基因可能通过ELOVL6-NLRP3-炎症因子信号通路参与了LAA发病。

干扰ELOVL6基因对奶牛乳腺上皮细胞脂代谢相关基因的表达及甘油三酯合成的影响

为揭示超长链脂肪酸延伸酶6(ELOVL6)对奶牛乳腺上皮细胞脂代谢及甘油三酯含量的影响,试验采用PCR技术扩增得到ELOVL6基因CDS区,利用在线软件对蛋白的疏水性和跨膜区进行预测,合成并筛选靶向ELOVL6基因的有效siRNA,将有效siRNA转染乳腺上皮细胞,qRT-PCR检测干扰ELOVL6基因对奶牛乳腺上皮细胞乳脂代谢相关基因表达的影响,利用试剂盒检测细胞内甘油三酯含量。结果表明:(1)克隆得到全长为795 bp的奶牛ELOVL6基因(GenBank登录号:MW960011)的CDS区;经序列比对发现,奶牛的ELOVL6基因序列与牛(NM_001102155.1)、山羊(NM_001314257.1)、大羚羊(XM_040237469.1)的同源性分别为100%、96.73%、96.35%;ELOVL6蛋白的理论等电点为5.94,疏水最大值为2.467,最小值为-2.411,具有6个跨膜区域。(2)成功筛选到靶向ELOVL6基因的siRNA,干扰效率达到90%以上(P<0.05)。(3)将筛选出的siRNA转染至奶牛乳腺上皮细胞,通过qRT-PCR技术检测乳脂合成相关基因的表达,与对照组相比,干扰ELOVL6基因显著抑制了脂肪酸从头合成及去饱和相关基因乙酰辅酶A羧化酶A(ACACA)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBF1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、脂肪酸转运相关基因脂肪酸结合蛋白(FABP3)、甘油三酯合成相关基因二酰甘油酰基转移酶(DGAT1)、磷酸甘油酰基转移酶6(AGPAT6)和甘油三酯水解相关基因激素敏感性脂肪酶(HSL)的表达量(P<0.05)。(4)干扰ELOVL6基因后,乳腺细胞内的甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。上述表明,ELOVL6基因在奶牛乳腺上皮细胞中通过影响脂质代谢相关基因的表达及甘油三酯含量,进而对奶牛乳腺的脂代谢产生调控作用。

西藏牦牛ELOVL6基因的克隆、生物信息学及组织表达量分析

为探究西藏牦牛ELOVL6基因的结构与功能,试验采用PCR技术克隆西藏牦牛ELOVL6基因编码区序列,利用在线软件预测和分析其编码氨基酸序列的生物信息学特征,并利用实时荧光定量PCR技术测定ELOVL6基因在西藏牦牛不同组织中的表达水平。结果表明:西藏牦牛ELOVL6基因编码区序列长度为795 bp,共编码264个氨基酸;与牛ELOVL6基因(GenBank登录号为NM_001102155.1)编码的氨基酸序列比较,其第18位核苷酸位点发生了碱基突变(A→C)。西藏牦牛与普通牛亲缘关系较近,与斑马鱼亲缘关系较远。ELOVL6基因编码蛋白是一种主要在内质网发挥生物学功能的疏水性蛋白,共有20个磷酸化位点,有跨膜结构,无信号肽,二级结构以α-螺旋为主。ELOVL6基因在西藏牦牛的不同组织中均有表达,其中,在脂肪组织中的相对表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。说明ELOVL6基因可能是调控牦牛脂肪酸代谢的关键基因。

中华绒螯蟹ELOVL6 cDNA全长克隆及其表达分析

为了探究中华绒螯蟹自身脂肪酸合成能力,采用RACE技术,克隆获得中华绒螯蟹ELOVL6 c DNA序列全长(Gen Bank accession:KT779219)。该序列全长2247 bp,包括235、873和1139 bp的5'非编码区(5'-UTR)、开放阅读框(ORF)和3'非编码区(3'-UTR),编码290个氨基酸(AA),具有ELOVL家族的全部特征:6个跨膜区、高度保守的组氨酸簇HXXHH、多个保守区以及内质网滞留信号KXKXX。分析发育树表明,ELOVL2与ELOVL5聚为一支,ELOVL6聚为另一支,其中中华绒螯蟹ELOVL6与其他节肢动物ELOVL6聚为一支,与凡纳滨对虾聚为一小支。采用异源表达方法研究ELOVL6编码的蛋白质对脂肪酸的作用,GC-MS结果显示,转基因的酵母培养物C16:0和C16:1n-7含量下降,而C18:0和C18:1n-9的含量升高,同时有新产物C18:1n-7产生。通过荧光定量PCR(q PCR)技术研究ELOVL6基因在中华绒螯蟹不同组织及不同脂肪源喂养下的表达情况,显示该基因在肠道、胃、心脏、肝胰腺、胸神经节、肌肉、眼柄、鳃和脑神经节9个组织均有表达,其中在肝胰腺中表达量最高,显著高于其他组织;在不同脂肪源饲喂的结果中,肝胰腺、肌肉、卵巢和精巢4个组织中均有表达,并且各组织在全鱼油组饲喂下表达量最低,其中用全豆油组饲喂后,肝胰腺中的表达情况显著升高,明显高于全鱼油组和鱼油豆油混合组。以上结果综合表明,中华绒螯蟹中ELOVL6能够催化C16的饱和及C16的单不饱和脂肪酸延长,同时受到饲料中不同脂肪源的一定影响,这为探究中华绒螯蟹PUFA合成途径及脂肪酸调控机制提供了依据。

ELOVL6基因通过调节Akt信号通路影响牛前体脂肪细胞增殖的机制研究

本文旨在探究ELOVL6基因对牛前体脂肪细胞增殖的影响及其潜在的作用分子机制。本研究利用腺病毒在牛前体脂肪细胞中过表达ELOVL6基因并利用Real-time PCR技术检测过表达效率,利用CCK-8探究ELOVL6对牛前体脂肪细胞增殖的影响;进一步通过RNA-Seq筛选LOVL6基因作用信号通路并用Western Blot等试验验证结果的可靠性。结果表明,过表达ELOVL6促进了细胞增殖(CCK-8)。进一步通过RNASeq测序分析发现,ELOVL6过表达引起的差异基因主要富集在细胞周期、cAMP信号通路、PI3K-Akt信号通路、脂肪酸延伸、凋亡和mTOR等信号通路。通过Western Blot试验检测到,ELOVL6能够显著上调前体脂肪细胞内p-Akt和tERK1/2蛋白表达量。过表达ELOVL6后FABP4蛋白表达量显著降低,ACSL4蛋白表达水平显著升高。因此,结合前期的研究结果推测ELOVL6可能通过AKT/mTOR/p70S6K参与牛前体脂肪细胞增殖调控。总之,本研究初步揭示了ELOVL6基因在牛前体脂肪细胞增殖中的作用机制,为脂肪沉积过程中通路调控的研究奠定基础。

ELOVL6基因单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病的相关性

目的探讨辽宁地区汉族人群中超长链脂肪酸延伸酶6(elongation of very long chain fatty acids protein 6,ELOVL6)基因2个SNP位点与妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)的相关性。方法选择2012年6月至2013年6月来我院就诊GDM孕妇128例(GDM组),同期健康孕妇145例作为对照组。记录一般临床资料包括年龄、孕周、身高、体质指数(body mass index,BMI),空腹胰岛素(FIN)及空腹血糖(FPG)水平。采用PCR结合直接测序,检测ELOVL6基因rs12504538和rs17041272位点SNP基因型频率和等位基因频率。分析两组孕妇不同基因型及等位基因胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)的差异。结果 GDM组FPG、FIN及HOMA-IR值高于健康对照组,但HOMA-β水平低于健康对照组(<0.05)。SNP位点rs17041272基因型及等位基因频率在GDM组和对照组间无差异。rs12504538位点基因型(TT,CT,CC)与对照组比较,T等位基因频率明显高于对照组。GDM组CT基因型孕妇FPG、FIN及HOMA-IR水平高于TT基因型者(<0.05)。结论 ELOVL6基因SNP位点rs12504538与GDM发病相关,可能是GDM潜在靶向位点,C等位基因为易感基因。

ELOVL6基因对成都地区汉族人群大动脉粥样硬化脑梗死发病风险的影响

目的探讨ELOVL6基因与成都地区汉族人群大动脉粥样硬化脑梗死(large artery atherosclerosisstroke,LAA)的相关性。方法2015年1月—2017年12月选择成都地区汉族人群为研究对象,采用病例-对照研究,以超长链脂肪酸延伸酶家族成员6(elongase of very long chain fatty acids family member 6,ELOVL6)基因6个单核苷酸多态性(single nucleotides polymorphism,SNP)位点(rs3813825、rs17041272、rs4141123、rs9997926、rs6824447和rs12504538)为遗传标记,分析LAA发病与ELOVL6基因的相关性。同时分析病例组和对照人群外周血ELOVL6基因mRNA表达差异。结果共纳入240例LAA患者和211例健康对照人群。rs9997926在所有人群中只有CC基因型,其余5个SNP在所有样本中成功分型。分析发现,rs17041272多态位点与LAA发病显著相关[CC/(CG+GG):比值比(odds ratio,OR)=0.640,95%置信区间(confidence interval,CI)(0.423,0.968),P=0.034)];TGTTG单倍型增加了LAA患病风险[OR=1.776,95%CI(1.069,2.951),P=0.024];rs17041272、rs6824447和血脂异常之间的交互作用增加了LAA的易感性[OR=2.737,95%CI(1.715,4.368),P<0.001];患者外周血ELOVL6 mRNA表达水平更高(t=-3.167,P=0.003)。结论ELOVL6基因可能与成都地区汉族人群LAA发病风险相关。

ELOVL6在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡能力的影响

目的探讨超长链脂肪酸延伸酶6(elongase of very long chain fatty acids 6,ELOVL6)在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达,并研究ELOVL6对人卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.方法选取2018年4月至2020年12月在青海省第五人民医院行卵巢浆液性腺癌术的80例患者,收集其癌组织,另收集20例因其他疾病行切除手术的正常卵巢和输卵管组织,通过免疫组化法检测患者卵巢组织中ELOVL6蛋白阳性表达.以人卵巢癌细胞SKOV3和OAW28作为对照组,以转染ELOVL6的卵巢癌细胞作为转染组,采用qRT-PCR验证对照组和转染组ELOVL6 mRNA表达水平;MTT实验和Transwell实验分别观察ELOVL6对人卵巢癌细胞增殖侵袭能力的影响,流式细胞仪检测ELOVL6转染后对卵巢癌细胞凋亡的影响.结果免疫组化结果显示,ELOVL6在正常卵巢和输卵管组织中90%以上呈阳性表达,而在低级别浆液性腺癌组织中阳性表达率为44.00%,在高级别浆液性腺癌组织中阳性表达率为54.55%,差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR结果显示,与对照组卵巢癌细胞比较,转染组的SKOV3和OAW28卵巢癌细胞中ELOVL6 mRNA表达水平显著升高(P<0.05);MTT结果表明,SKOV3细胞和OAW28细胞分别在转染ELOVL6培养36 h和48 h后,其增殖能力较对照组有显著性下降(P<0.05);Transwell实验表明,转染组SKOV3细胞穿膜数少于对照组细胞穿膜数[(201±9)个vs(323±12)个],转染组OAW28细胞穿膜数少于对照组细胞穿膜数[(158±4)个vs(286±2)个],差异均有统计学意义(P<0.05);流式检测结果表明,ELOVL6高表达能够明显促进卵巢癌细胞的凋亡.结论ELOVL6在卵巢癌组织中呈弱阳性表达,在卵巢癌细胞中mRAN呈低表达,对卵巢癌细胞的增殖和侵袭起到抑制作用,能够促进卵巢癌细胞的凋亡.