姜黄素调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制研究

目的:探讨姜黄素通过调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制。方法:利用生物信息学方法预测并分析转录因子FOXP3与CCR5启动子的结合位点;采用AutoDock 4.2软件对姜黄素与FOXP3进行柔性对接;MTT法检测姜黄素对Jurkat细胞活性的影响;qRT-PCR和Western blot检测不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;构建pcDNA3.1-FOXP3真核表达载体;结合转录因子预测结果,运用Overlap PCR法扩增突变型CCR5基因片段,构建突变型CCR5启动子报告载体pFireRluc-Mt-CCR5;利用双荧光素酶报告基因技术验证转录因子FOXP3与CCR5的启动子结合位点。结果:JASPAR转录因子预测结果显示,CCR5启动子区与转录因子FOXP3存在结合位点;分子对接结果显示,姜黄素能够与FOXP3的酶活区域结合;MTT结果显示,姜黄素作用24 h后对Jurkat细胞活性产生抑制作用,IC50为34.48μmol/L;qRT-PCR和Western bot结果显示,不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后,CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均降低,且存在剂量依赖性;双荧光素酶报告基因技术证实FOXP3能够与CCR5启动子结合,且转录因子FOXP3可调控CCR5启动子活性;过表达FOXP3后,姜黄素对CCR5的作用结果显示:当姜黄素浓度为60μmol/L时,作用于共转染pcDNA3.1-FOXP3和pFireRluc-Wt-CCR5的HEK293T细胞CCR5启动子荧光素酶活性相对值明显高于pFireRluc-Wt-CCR5+curcumin-60组(P<0.01)。结论:FOXP3能够调控CCR5启动子活性,其作用机制可能是姜黄素通过作用于FOXP3与CCR5启动子结合位点影响CCR5启动子活性。

FOXP3在BRCA1/2突变乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨BRCA1/2突变乳腺癌FOXP3表达情况及潜在意义。方法选取北京大学肿瘤医院48例BRCA突变者(BRCA116例,BRCA232例)和78例年龄匹配的非突变者,采用免疫组织化学检测乳腺癌组织FOXP3的表达情况。为验证免疫组织化学结果,分析TCGA-BRCA中39例BRCA1、36例BRCA2和948例非携带者乳腺癌的FOXP3 RNA表达水平及其与同源重组缺陷评分的关系。结果在BRCA1突变者中FOXP3阳性率43.8%(7/16),BRCA2突变者为59.4%(19/32),非携带者为9.0%(7/78)。BRCA1/2突变患者FOXP3阳性率均显著高于非突变者(P=0.002;P<0.001)。TCGA-BRCA结果显示,BRCA1/2突变乳腺癌的FOXP3 RNA水平也显著高于非携带者(P=0.02,P=0.004)。FOXP3 RNA水平与同源重组缺陷评分正相关(Spearman R=0.30,P<2.2e-16)。结论BRCA1/2突变乳腺癌较非突变者FOXP3表达更高,可能对免疫治疗更敏感。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

microRNA-4281通过调节FOXP3引起Treg/Th17免疫失衡诱导免疫性血小板减少性紫癜

目的 研究miR-4281在免疫性血小板减少性紫癜(ITP)中的作用及其机制。方法 通过GEO数据库筛选ITP中异常表达的miRNA。收集新诊ITP、治疗有效的ITP患者以及健康受试者,取静脉血,分离外周血单核细胞(PBMCs)和CD4^(+)T细胞。利用实时定量PCR检测细胞中miR-4281以及其他因子的表达量。使用流式细胞术分析细胞中CD4^(+)CD25^(+)FOXP3^(+)Tregs和Th17细胞的含量。使用Pearson相关系数法检验miR-4281表达水平与各因子的关系。结果 生物信息学分析发现miR-4281在ITP中异常表达。与健康受试者和治疗有效的ITP患者相比,miR-4281的表达水平下降。ITP患者PBMCs中,miR-4281表达水平与Tregs含量和Treg/Th17呈正相关,与Th17细胞含量呈负相关;miR-4281可促进Tregs细胞的分化,并抑制Th17的分化;miR-4281表达水平与FOXP3表达水平正相关。结论 miR-4281表达水平在ITP中降低,这种降低可以抑制FOXP3的表达,导致Treg/Th17免疫失衡,促进ITP进展。

外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值

目的:探讨外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值。方法:选取2021年1月—2023年12月于赣州市人民医院行人工周期-冻融胚胎移植的患者108例,其中妊娠成功48例,妊娠失败60例。观察比较妊娠成功和失败患者外周血miR-21-5p、Foxp3、D-二聚体(D-D)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)的差异,并分析外周血miR-21-5p、Foxp3及凝血功能指标预测人工周期-冻融胚胎移植结局的价值。结果:妊娠成功患者外周血miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D均高于妊娠失败患者,APTT和PT均明显长于妊娠失败患者(P<0.05)。miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D和PT是妊娠失败的影响因素(P<0.05)。miR-21-5p、Foxp3 mRNA、D-D和PT预测妊娠失败的受试者操作特征(ROC)曲线下面积分别为0.857、0.790、0.922和0.861。结论:人工周期-冻融胚胎移植成功和失败患者外周血miR-21-5p、Foxp3及D-D和PT有所差异,且在预测妊娠结局方面有一定应用价值。

FOXP3、TGF-β1在子宫内膜异位症诊疗中的研究进展

子宫内膜异位症严重影响育龄期女性的生活质量,其发病机制至今尚未阐明。调节性T细胞在机体免疫抑制中发挥关键作用,近年来大量研究证明,FOXP3相关免疫抑制可影响肿瘤微环境,在其发生发展中起到关键性作用,肿瘤微环境与内异症局部微环境相似,免疫功能异常在内异症发生发展中至关重要。TGF-β1可在免疫排斥和免疫抑制中发挥作用,参与子宫内膜异位症的发生发展过程。本文主要探究FOXP3、TGF-β1与内异症发病机制的相关性,为其免疫治疗提供新方向。

FOXP3^(+)肿瘤浸润性淋巴细胞与乳腺癌病理特征和预后的相关性研究

目的探讨FOXP3^(+)肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs)与乳腺癌临床病理特征之间的相关性及其预后的意义。方法选取2009年1月至2013年5月期间首都医科大学附属北京世纪坛医院治疗的156例浸润性乳腺癌患者,采用免疫组化方法检测FOXP3^(+)和CD4^(+)的蛋白表达,记录患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴结转移情况、组织学分级、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体-2(HER-2)、Ki-67指数、无病生存(DFS)率和总生存(OS)率,探讨FOXP3^(+)TILs与临床病理特征之间的相关性,使用Kaplan-Meier曲线和Cox比例风险模型进行生存分析。结果156例浸润性乳腺癌患者的中位年龄为51岁(32~70岁),乳腺癌组织中,FOXP3^(+)高表达的患者51例(32.7%),FOXP3^(+)的表达在肿瘤的组织学分级(P=0.021)、PR(P=0.016)、HER-2(P=0.018)、Ki-67指数(P=0.042)、腋窝淋巴结转移(P=0.001)方面的差异均有统计学意义。CD4^(+)TILs的表达与所有患者的临床病理特征均无明显相关性。生存分析显示,FOXP3^(+)高表达患者的OS率低于FOXP3^(+)低表达患者的OS率(64.7%比87.6%,χ^(2)=15.3,P<0.001)。FOXP3^(+)高表达患者的DFS率也低于低表达患者的DFS率(56.9%比80.0%,χ^(2)=13.1,P<0.001),差异有统计学意义。在74例腋窝淋巴结转移阳性的患者中,FOXP3^(+)高表达患者的DFS率低于FOXP3^(+)低表达患者的DFS率,差异有统计学意义(χ^(2)=5.730,P<0.001)。在多因素Cox生存分析显示,FOXP3^(+)TILs是乳腺癌患者OS[HR=2.732(95%CI=1.174~6.207),P=0.023]和DFS[HR=2.092(95%CI=1.068~4.088),P=0.032]预后不良的独立影响因素。结论FOXP3^(+)高表达患者的OS率和DFS率均低于FOXP3^(+)低表达患者,FOXP3^(+)TILs可作为乳腺癌患者的独立不良预后因素。

CD4+CD25+Foxp3+Treg在子痫前期患者外周血中表达的意义及与妊娠结局的相关性分析

目的分析CD4+CD25+叉头框蛋白3(Foxp3)+调节性T淋巴细胞(Treg)在子痫前期(PE)患者外周血表达中的意义及与妊娠结局的相关性。方法选取2020年1月~2023年1月收治的112例PE患者为疾病组,另根据年龄、孕周匹配选取健康孕妇60例为健康组。疾病组中根据疾病严重程度分为轻度组与重度组。比较外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平差异及不良妊娠结局发生率。疾病组根据是否存在妊娠不良结局分为不良组与良好组。对比良好组与不良组患者临床资料。Logistic回归分析影响PE患者不良妊娠结局的因素。Spearman相关性分析法分析CD4+CD25+Foxp3+Treg与不良妊娠结局的相关性。结果疾病组、轻度组、重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于健康组,不良妊娠结局发生率均高于健康组(P<0.01)。疾病组、重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于轻度组,不良妊娠结局发生率高于轻度组(P<0.01),重度组CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比低于疾病组,不良妊娠结局发生率高于疾病组(P<0.01)。不良组的孕前体质量指数(BMI)、24 h尿蛋白定量高于良好组,终止妊娠时间早于良好组,外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均低于良好组,差异有统计学意义(P<0.001);Logistic回归分析显示孕前BMI、终止妊娠时间、24 h尿蛋白定量、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分比均是导致不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.001)。Spearman相关性分析显示外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平与不良妊娠结局呈负相关(r=-0.722,P<0.01)。结论PE患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达水平异常低表达,是导致不良妊娠结局发生的独立危险因素,且与不良妊娠结局的发生成负相关。

Foxp3在小鼠肺发育中的动态表达及意义

目的:通过分析叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)在小鼠肺发育过程中的表达及其与肺发育相关标志物之间的关系,探讨Foxp3在肺发育中的可能作用。方法:根据小鼠肺发育的进程,选取胎鼠及新生鼠分为6组,分别于孕17.5 d及出生后1、4、7、14、21 d留取肺组织,HE染色观察肺组织形态,免疫组织化学染色检测CD31含量并观察肺微血管密度。qRT-PCR检测Foxp3及肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)、血管生成素-1(angiopoietin 1,Ang-1)mRNA表达,蛋白质印迹法检测Foxp3及SP-C、VEGF-A、Ang-1蛋白表达。结果:肺组织内Foxp3 mRNA在孕17.5 d小管期表达最高,后呈现不断减少趋势。SP-C mRNA在小鼠出生后1 d表达最高,随后逐渐减弱,直至肺泡化晚期。VEGF-A、Ang-1 mRNA在孕17.5 d表达最高,之后呈现不断减少趋势,最终趋于稳定。Foxp3蛋白在小管期已有表达,且在小管期及囊泡期表达最高,其后逐渐趋于平稳,VEGF-A及Ang-1在小管期及囊泡期表达亦最高,后逐渐减少;SP-C表达于出生后1 d达到最高,随后逐渐减少,并于肺泡化中晚期趋于平稳。相关性分析显示,Foxp3与SP-C、VEGF-A及Ang-1存在相关性(r分别为0.661、0.630和0.738)。结论:Foxp3在胎肺期及出生后早期呈现动态表达,Foxp3在小管期及囊泡早中期的高表达与SP-C、VEGF-A及Ang-1呈正相关,提示Foxp3可能促进肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞的增殖,参与肺发育过程。

桧木醇通过TGF-β1/Foxp3/RORγt通路抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 研究桧木醇对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 用0、5、10和20μmol/L桧木醇处理人乳腺癌MCF-7细胞,采用划痕法检测细胞的迁移、Transwell法检测细胞侵袭能力、流式细胞技术检测细胞凋亡情况、采用蛋白免疫印迹法检测TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路相关蛋白的表达。结果 与对照组比较,5、10和20μmol/L桧木醇组细胞细胞划痕愈合率、侵袭能力均显著降低(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞划痕愈合率和侵袭能力逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白显著降低(P<0.05),随着桧木醇浓度的升高,TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 桧木醇可以通过抑制乳腺癌细胞中TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路来调节乳腺癌细胞的侵袭、迁移和凋亡,具有成为乳腺癌免疫治疗的潜在靶点。

MicroRNA-214在胃癌血浆中的表达及对PTEN/AKT/Foxp3的影响

目的 明确microRNA-214在胃癌患者血浆中的表达,验证其成为胃癌血清学标志物的可能性;研究microRNA-214在胃癌免疫逃逸中的作用和相关机制。方法 收集47例初发胃癌患者及30例健康体检者血液标本,荧光定量PCR检测microRNA-214在胃癌患者与健康对照者中的表达差异,Pearson相关性分析研究microRNA-214在癌组织和血浆中表达水平的相关性;荧光定量PCR和免疫组化检测PTEN、AKT、Foxp3在胃癌组织和癌旁正常组织中mRNA和蛋白水平的表达差异,Pearson相关性分析PTEN、AKT、Foxp3基因与microRNA-214的相关性。结果 microRNA-214在胃癌患者血浆中表达上调,在癌组织与血浆中的表达明显呈正相关性(r=0.986,P<0.001);PTEN mRNA在癌组织中表达量降低,AKT mRNA和Foxp3 m RNA在癌组织中表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化显示PTEN在癌组织中弱阳性或阴性,在癌旁组织中呈阳性;AKT和Foxp3在癌组织中呈阳性,在癌旁组织中呈阴性;Pearson相关性分析结果显示microRNA-214与PTEN mRNA在癌组织中表达呈明显负相关性,与AKT、Foxp3 mRNA在癌组织中的表达呈明显正相关性,差异有统计学意义(P<0.05);结论 本实验证实了microRNA-214在胃癌患者血浆中的表达可以代表肿瘤组织中的水平,microRNA-214具有成为胃癌血清学标志物的潜力;发现microRNA-214可能对Foxp3的水平产生调控,在胃癌免疫逃逸中扮演一定角色。

冷冻消融联合养肺方治疗对Lewis肺癌CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg的影响及机制

目的 探讨冷冻消融联合养肺方治疗对Lewis肺癌CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞影响及机制。方法 构建C57BL/6小鼠肺癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、冷冻消融组、冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组,每组5只。模型组行假手术,在小鼠移植瘤部位切开缝合,其余各组均行双循环冷冻消融术。术后冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组分别给予1.64、3.28、6.56 g/kg养肺方灌胃,模型组、冷冻消融组分别给予等体积的生理盐水灌胃,均1次/d,连续给药14 d。给药期间观察并记录各组小鼠肿瘤体积,末次给药后剥离脾脏和移植瘤,称取瘤体质量并计算抑瘤率;流式细胞术检测脾脏CD4^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞比例;qRT-PCR和Western blot法检测瘤组织中Foxp3表达。结果 各组小鼠肿瘤体积均逐渐增长,增长速度为模型组>冷冻消融组>冷冻消融联合养肺方低剂量组>冷冻消融联合养肺方中剂量组>冷冻消融联合养肺方高剂量组。手术联合药物干预14 d后,与模型组比较,各治疗组肿瘤体积小(P<0.05);与冷冻消融组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组肿瘤体积小(P<0.01);冷冻消融联合养肺方高剂量组肿瘤体积小于低剂量组(P<0.01)。与模型组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组瘤体质量小(P<0.05);与冷冻消融组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组瘤体质量小(P<0.05)。冷冻消融组、冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组抑瘤率逐渐升高。与模型组比较,各治疗组CD4^(+)T细胞比例低(P<0.05),冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组的CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T%细胞比例低(P<0.05);与冷冻消融组比较,冷冻消融联合养肺方高剂量组CD4^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞比例低(P<0.05);冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组CD4^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞比例逐渐降低。与模型组比较,冷冻消融联合养肺方低、中、高剂量组肿瘤组织中Foxp3 mRNA相对表达量和Foxp3蛋白表达均降低(P<0.01);冷冻消融联合养肺方中、高剂量组Foxp3 mRNA相对表达量和Foxp3蛋白表达均低于冷冻消融组(P<0.01)和冷冻消融联合养肺方低剂量组(P<0.05)。结论冷冻消融联合养肺方通过减少Lewis肺癌小鼠脾脏CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞比例,下调肿瘤组织中Foxp3表达,发挥抑制Lewis肺癌增殖作用,其机制可能与增强机体抗肿瘤免疫应答,改善肿瘤免疫抑制有关。

Treg、FoxP3和TGF-β在慢性髓系白血病中的表达及意义

目的:分析调节性T细胞(Treg)、叉头状转录因子P3(FoxP3)和转化生长因子-β(TGF-β)在慢性髓系白血病(CML)不同时期中的表达及意义。方法:收集2018年3月-2021年3月在菏泽市立医院血液内科就诊的73例CML患者的外周血,根据患者所处的CML不同时期,将患者分为初诊组、慢性期组和急变期组,应用流式细胞术检测患者Treg水平,RT-q PCR检测FoxP3 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验检测血浆中TGF-β的表达水平,分析上述指标在患者临床发病过程中的作用。结果:初诊组患者Treg比例较慢性期组升高,但差异无显著统计学意义(P=0.695),而急变期组较初诊组和慢性期组均显著升高(P=0.008,P<0.001)。初诊组、慢性期组和急变期组FoxP3mRNA表达水平分别为11.61±2.21、6.46±1.35和8.54±2.13,FoxP3 mRNA表达水平在CML不同时期的差异具有统计学意义(F=55.199,P<0.001)。初诊组和急变期组FoxP3 mRNA表达水平均高于慢性期组(P<0.001),且初诊组最高(P<0.001)。TGF-β的表达水平在CML不同时期中无统计学差异(H=0.634,P=0.728)。结论:Treg细胞亚群在CML不同时期中的异常分布和FoxP3 mRNA在CML初诊时和急变期的表达水平显著升高,表明Treg亚群可能通过免疫调节促进CML的发生和进展。

细菌性肺炎患儿肠道微生态及其与血FOXP3、G-CSF水平的关系

目的 研究细菌性肺炎患儿肠道微生态及其与血清转录因子叉头蛋白(FOXP3)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(G-CSF)水平的关系。方法 选择细菌性肺炎患儿120例为肺炎组,其中轻度组55例,重度组65例,另选取同期健康体检患儿120例为对照组。比较各组肠道微生物、血清FOXP3、G-CSF水平,分析肠道微生物与FOXP3、G-CSF水平的相关性。结果 肺炎组乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌及真杆菌水平低于对照组;重度组乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌及真杆菌低于轻度组;肺炎组FOXP3、G-CSF高于对照组,重度组FOXP3、G-CSF高于轻度组(P<0.05)。双歧杆菌、肠球菌、乳杆菌及真杆菌与FOXP3、G-CSF呈负相关(P<0.05)。结论 细菌性肺炎患儿肠道微生态与肺炎病情程度有关,且与血清FOXP3、G-CSF呈负相关。

沉默Foxp3对牙周膜成纤维细胞在炎症环境下炎症因子的表达及增殖和迁移的影响

目的探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法使用小干扰RNA(siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blotting)实验验证Foxp3沉默效率,筛选Foxp3基因沉默效果最佳的siRNA。使用牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)来源脂多糖(LPS)模拟体外炎症环境,CCK-8检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs增殖的影响;划痕实验及transwell细胞迁移实验检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs迁移的影响;RT-PCR、Western blotting实验检测炎症环境下hPDLFs炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8的表达。结果siRNA转染后,RT-PCR、Western blotting检测显示,Foxp3-si3组Foxp3的mRNA和蛋白表达均显著降低(mRNA表达,t=21.03,P<0.0001;蛋白表达,t=12.8,P<0.001)。在炎症环境下,Foxp3基因沉默对hPDLFs的增殖无显著影响(P>0.05);Foxp3基因沉默促进hPDLFs的迁移,IL-6、IL-8的表达升高(P<0.05)。结论在炎症环境下,Foxp3基因沉默可促进hPDLFs迁移和炎症因子表达升高,但对hPDLFs的增殖无明显影响。Foxp3基因在牙周炎中具有抑制炎症的作用。

FOXP3表达及病理组织学特征在溃疡性结肠炎诊断和鉴别诊断中的作用

目的探讨FOXP3表达及病理组织学特征在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)、感染性肠炎及孤立性直肠黏膜溃疡综合征(solitary rectal ulcer syndrome,SRUS)诊断和鉴别诊断中的作用。方法收集64例UC、24例感染性肠炎和14例SRUS。采用免疫组化EnVision两步法检测FOXP3在UC、感染性肠炎和SRUS淋巴细胞中的表达,计数10个高倍镜视野(high power field,HPF)下阳性淋巴细胞数目,取平均值;评估三组病变中4项病理组织学特征:黏膜腺体结构改变、固有层慢性炎细胞增多、黏膜基底部淋巴浆细胞增多和隐窝炎、隐窝脓肿。结果UC组中FOXP3阳性淋巴细胞数(52.60个/HPF)明显高于感染性肠炎组(11.30个/HPF)和SRUS组(9.30个/HPF),差异有统计学意义。组织学特征:与感染性肠炎组相比,UC组具有明显的黏膜腺体结构改变(UC组:61/64;感染性肠炎组:5/24)和黏膜基底部淋巴浆细胞增多(UC组:55/64;感染性肠炎组:5/24),而在固有层慢性炎细胞增多(UC组:64/64;感染性肠炎组:24/24)和隐窝炎、隐窝脓肿(UC组:36/64;感染性肠炎组:14/24)方面差异无统计学意义。与SRUS组相比,UC组具有明显的固有层慢性炎细胞增多(UC组:64/64;SRUS组:1/14)、黏膜基底部淋巴浆细胞增多(UC组:55/64;SRUS组:1/14)和隐窝炎、隐窝脓肿(UC组:36/64;SRUS组:1/14),而在黏膜腺体结构改变方面差异无统计学意义(UC组:61/64;SRUS组:14/14)。FOXP3阳性细胞数>23个/HPF(Cut-off值)时,联合组织学特征高度支持UC的诊断。结论联合FOXP3表达和组织学特点有助于UC的诊断及与感染性肠炎和SRUS的鉴别。

急性非ST抬高心肌梗死患者外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg和IL-27变化的临床意义

目的观察急性非ST抬高心肌梗死患者(Non-STMI)治疗过程中外周血CD4^(+)CD25^(+)T/CD4^(+)T、CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25high T比例及细胞因子TGF-β1、IL-10、INF-γ、IL-27的浓度变化,阐明Non-STMI患者是否存在调节性T细胞比例及功能异常。方法选取2012年8月至2016年4月入住中山大学附属第一医院急诊病房和CCU的Non-STMI40名,不稳定性心绞痛(UA)患者19名和同龄健康志愿者20名作为对照组(HC)。患者诊断明确后次日清晨和经规范治疗后5~7天,留取空腹外周血标本。流式细胞术检测CD4^(+)CD25^(+)T/CD4^(+)T、CD4^(+)CD25high Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25high T细胞。ELISA法检测细胞因子TGF-β1、IL-10、INF-γ和IL-27浓度。结果UA、Non-STMI组CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25highT比例较HC组减低(P<0.01);Non-STMI明显低于UA组(P<0.05),而治疗后Non-STMI组Foxp3^(+)Treg细胞比例显著升高(P<0.05)。入院时Non-STMI和UA组TGF-β1、IL-10浓度较HC组明显降低(P<0.05),而INF-γ和IL-27浓度明显升高(P<0.05)。治疗后Non-STMI组IL-27迅速下降,而UA组变化不明显。治疗前IL-27浓度与CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25highT呈线性负相关、与INF-γ浓度呈线性正相关。治疗后只有IL-27和CD4^(+)CD25high Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)CD25highT呈线性负相关。结论Non-STMI患者CD4^(+)CD25highFoxp3^(+)Treg比例及功能异常,细胞因子IL-27有助于判断患者的临床疗效。

干扰素α1b联合孟鲁司特钠治疗小儿嗜酸性粒细胞支气管炎的疗效及对氧化应激反应、外周血FOXP3 mRNA水平的影响

目的 研究干扰素α1b联合孟鲁司特钠治疗小儿嗜酸性粒细胞(Eos)支气管炎(EB)的疗效及对氧化应激反应、外周血FOXP3 mRNA水平的影响。方法 选取2019年5月至2021年5月郑州瑞祥医院收治的128例EB患儿为研究对象,采用随机数字表法将患儿分为对照组和观察组,每组64例。对照组采用孟鲁司特钠治疗,观察组采用干扰素α1b联合孟鲁司特钠治疗。比较两组临床疗效,临床症状消失时间,治疗前后外周血Eos计数、诱导痰Eos分类,治疗前后外周血FOXP3 mRNA水平、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、晚期蛋白氧化产物(AOPPs)、脂质过氧化氢(LHP)]水平及T淋巴细胞亚群分析(CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD8^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞/CD8^(+)T淋巴细胞比值)。结果 观察组临床总有效率(95.31%)高于对照组(79.69%),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组发热、咳嗽、咳痰、喘息、哮鸣音消失时间均短于对照组(P<0.05)。治疗后两组外周血Eos计数、诱导痰Eos分类均较治疗前减少(P<0.05),且治疗后观察组外周血Eos计数、诱导痰Eos分类均少于对照组(P<0.05)。治疗后两组外周血AOPPs、LHP水平均较治疗前降低(P<0.05),且治疗后观察组外周血AOPPs、LHP水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后两组外周血SOD、T-AOC、FOXP3 mRNA水平及CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞/CD8^(+)T淋巴细胞比值均较治疗前升高(P<0.05),CD8^(+)T淋巴细胞百分比较治疗前下降(P<0.05);且治疗后观察组外周血SOD、T-AOC、FOXP3 mRNA水平及CD3^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞百分比、CD4^(+)T淋巴细胞/CD8^(+)T淋巴细胞比值均高于对照组(P<0.05),CD8^(+)T淋巴细胞百分比低于对照组(P<0.05)。结论 干扰素α1b联合孟鲁司特钠治疗小儿EB效果确切,可改善免疫功能、氧化应激反应,调节Eos计数、痰Eos分类及FOXP3 mRNA水平。

FOXP3基因下调EMT抑制肝细胞癌细胞迁移

目的 探讨FOXP3基因对肝细胞癌细胞迁移能力的影响及机制研究。方法 利用慢病毒感染的方式构建FOXP3稳定敲低的细胞模型。采用qRT-PCR和Western blot实验验证病毒感染效率。利用划痕实验检测肝癌细胞的迁移能力,并采用Western blot的方法检测下调FOXP3基因后上皮细胞-间充质转化(EMT)通路相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Slug的表达变化。结果 感染FOXP3-shRNA后,肝癌细胞HepG2和MHCC97H中FOXP3的表达水平显著降低。体外试验证明敲低FOXP3可显著抑制肝癌细胞的迁移能力。Western blot实验表明下调FOXP3可抑制EMT通路,上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin及Slug的表达。结论 下调FOXP3通过介导EMT抑制肝癌细胞的迁移能力;FOXP3可能作为肝癌复发转移的潜在治疗靶点。

人FOXP3基因的生物信息学分析

在正常生理和应激生物环境中,叉头转录因子3(FOXP3)是调节性T细胞发育和抑制功能的重要转录因子。试验利用生物信息学在线工具及软件对FOXP3蛋白的理化性质、蛋白晶体结构、翻译后修饰以及其相互作用蛋白等进行了研究。研究发现FOXP3蛋白复合物主要包含NFAT1 DNA结合域和与脱氧核糖核酸结合的FOXP3 FKH结构域,并且通过多种翻译后修饰影响FOXP3蛋白构象和与其互作蛋白的相互作用,最终改变FOXP3蛋白活性以调节Treg抑制特征。研究结果可为今后深入研究FOXP3如何调节Treg抑制的新方法和增强自身免疫性疾病免疫耐受的新疗法提供参考。