ATRA调节人异位子宫内膜间质细胞GJIC Connexin基因、蛋白的作用及意义

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)、connexin基因、蛋白的调节作用及意义。方法:取24例子宫内膜异位症患者卵巢处异位内膜标本,分离纯化得到间质细胞,分别用0.1mmol/L、1mmol/L、10mmol/LATRA处理24h、48h、72h、96h、120h,同时设置空白对照组,采用荧光漂白后恢复技术检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIC功能密切相关的Cx43、Cx26、Cx32的基因及蛋白表达。结果:ATRA处理72h内,1mmol/L、10mmol/L组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1mmol/LATRA组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化。未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43、Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达;经1mmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43mRNA和蛋白表达,但未见Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达。结论:ATRA能选择性地诱导Cx43基因及蛋白表达,从而有效上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA可能是治疗子宫内膜异位症的潜在药物。

左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞分化过程中Cx43表达及GJIC功能的影响

目的：研究左归丸含药血清对培养MC3T3-E1细胞分化成熟过程中Cx43表达及GJIC功能的影响。方法：胰蛋白酶消化法传代培养MC3T3-E1细胞,通过血清药理学方法,设立正常对照组、左归丸组（5%、10%、15%）。分别用RT-PCR、Western blot法检测培养细胞第7、14、21天Cx43mRNA、蛋白表达;第21天划痕染料标记示踪法检测细胞GJIC功能。结果：随着培养时间增加,各组MC3T3-E1细胞Cx43mRNA、蛋白表达逐渐增强;GJIC染料标记检测中,可见绿色荧光在划痕两侧扩散,荧光定量分析存在组间差异。各浓度左归丸含药血清均可促进培养细胞的Cx43mRNA和蛋白表达、增强GJIC功能,并与含药浓度正性相关,其中以10%组作用最显著（P〈0.05或P〈0.01）。结论：左归丸含药血清能增强MC3T3-E1细胞Cx43mRNA、蛋白表达及GJIC功能,这可能是其促进MC3T3-E1细胞分化成熟的重要机制之一。

表皮生长因子对人子宫内膜细胞GJIC影响的体外研究

[目的]探讨表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)对人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(Gap Junction Intercellular Communication,GJIC)及连接蛋白(Connexin,Cx)43、32表达的影响。[方法]采用划痕染料标记示踪技术,以荧光黄染料在细胞间的扩散作为评价间隙连接通讯的指标,观察EGF对原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察EGF对Cx43、Cx 32表达的影响。[结果]EGF可显著抑制人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC功能(P<0.01);增强Cx43、Cx32表达(P<0.05)。[结论]EGF可显著抑制人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;EGF增强子宫内膜Cx43、Cx32表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能。

腺病毒介导Cx43基因修饰对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响

目的观察急性白血病骨髓基质细胞(acute leukemia bone marrow stromal cells,ALBMSCs)经腺病毒介导的间隙连接蛋白43(Cx43)基因修饰后Cx43基因表达的变化以及对细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染ALBMSCs,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达并计算转染效率,RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测ABMSCs转染前后Cx43基因及蛋白表达情况,通过染料传输实验观察细胞间隙连接通讯功能的变化。结果荧光显微镜下观察可见ALBMSCs在转染Ad-Cx43-GFP后24h即有绿色荧光表达,计数绿色荧光细胞的百分率得出转染效率为(82.7±2.16)%;RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测显示转染Ad-Cx43-GFP后ALBM-SCsCx43基因及蛋白表达较转染前增强(P<0·01);转染Ad-Cx43-GFP后ALBMSCs GJIC功能较转染前增强(P<0·01)。结论腺病毒介导Cx43基因修饰ALBMSCs后可上调其Cx43基因的表达并增强GJIC功能。

两性霉素B对急性白血病骨髓基质细胞上Cx43表达及GJIC功能的影响

目的探讨两性霉素B作用下急性白血病骨髓基质细胞上连接蛋白43(Cx43)表达及对细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法体外Dexter法培养13份急性白血病骨髓基质细胞(2ml/份),传代后加入两性霉素B(5×10-6mol/L)(1ml/份);采用流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测加药前后Cx43蛋白表达的变化,采用荧光漂白恢复技术(FRAP)比较加药前后GJIC功能的差异。结果加药后急性白血病骨髓基质细胞上Cx43的表达的阳性率为(35.9±4.06)%,与加药前(38.75±3.95)%相比无明显变化但出现定位异常;加药前基质细胞的荧光强度在淬灭后缓慢恢复,而加药后基质细胞的荧光在淬灭后400s仍未恢复,GJIC功能被阻断。结论两性霉素B可影响Cx43在急性白血病骨髓基质细胞上的定位并阻断其GJIC功能。

CX/GJIC下调对急性肝功能衰竭大鼠肝细胞增生修复的影响

目的探讨缝隙连接蛋白/细胞间缝隙连接通讯(CX/GJIC)下调对急性肝功能衰竭(AHF)大鼠肝细胞增生修复的影响。方法大鼠190只(SPF级,江西实验动物质量检测中心提供),随机分成苯巴比妥组PB(n=60),对照组(n=30),模型组(n=100)。PB组动物诱导后与模型组采用四氯化碳腹腔注射法造模,造模后1、3、7、10、14d采取肝组织标本行免疫组化查Cx32、切开标记荧光染料传输(IL/DT)查GJIC功能。结果(1)造模后动物立即出现精神萎靡,活动及摄食减少,尿黄,严重者多脏器出血,昏迷甚至死亡。PB与模型组的组间病死率差异显著(P<0.01)。(2)免疫组化显示,模型组的Cx32蛋白主要集中在胞膜上,细胞间,数量较PB组明显增多,且随着时间呈进行性增加的趋势;PB组的Cx32主要分布在胞浆内,数量极少。(3)荧光染料传输试验发现,模型组的染料传输能力在造模后与对照组比明显减低(P<0.01);PB组染料传输能力明显受抑制,除在第3天与模型组间的差别无统计学意义外,其余时间点与其它各组间差异均显著(P<0.05)。结论通过预先下调肝细胞间的CX/GJIC,可以减轻AHF急性期的肝脏损害,促进残存肝细胞增生和肝功能的好转,降低AHF大鼠的病死率。

细胞间隙连接信息交通（GJIC）抑制试验用于筛检促癌剂的初探

细胞间隙连接信息交通（ＧＪＩＣ）抑制试验用于筛检促癌剂的初探毕洁，刘建，印木泉（上海军医大学卫生毒理学教研室２００４３３）化学致癌是一个多因素、多阶段和多种遗传学改变的过程。细胞间信息交流对细胞的分化、发育、干细胞对于细胞的控制、对协调同一组织内不同...

大蒜素改善GJIC功能及抗氧化作用的实验研究

本文从氧自由基、ＧＪＩＣ（细胞间缝隙连接通讯）及ＤＮＡ含量三个不同角度观察了大蒜素可显著减轻氧自由基对细胞的毒害，并能解除苯巴比妥对ＧＪＩＣ的抑制（Ｐ＜００１），提示大蒜素有明显的预防苯巴比妥的动物促癌作用及对抗氧自由基损害的功效。

Cx43介导GJIC与mTOR在胃癌组织中表达及意义

目的:探讨连接蛋白43(Cx43)介导的细胞间隙连接(GJIC)与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在胃癌组织中的表达情况及意义。方法:利用免疫组化和qRT-PCR技术联合检测60例胃癌组织及正常胃黏膜组织中Cx43及mTOR的表达情况及其与临床病理参数的关系。结果:在胃癌组织中Cx43 mRNA及蛋白的表达均低于正常胃黏膜组织;而mTOR mRNA及蛋白的表达均高于正常胃黏膜组织(均P<0.01)。Cx43 mRNA及蛋白的表达与胃癌分化程度、TNM分期、浸润深度及淋巴转移均有关(均P<0.05);而mTORmRNA及蛋白的表达与胃癌分化程度、TNM分期及浸润深度有关(均P<0.05),mTOR蛋白表达与淋巴转移无关(P=0.10),mTOR mRNA表达与淋巴转移相关(P<0.05)。相关性分析显示:胃癌组织中Cx43与mTOR蛋白表达呈负相关(r=-0.656,P<0.01);Cx43与mTOR mRNA表达亦呈负相关(r=-0.528,P<0.01)。结论:Cx43与mTOR参与了胃癌的发生、发展,与胃癌的侵袭及转移有关,且在胃癌的演进过程中Cx43介导的GJIC表达下降可能刺激mTOR表达增高,Cx43可能成为潜在治疗胃癌的靶点。

GJIC、UBE2C及miR-20a-5p在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨细胞间隙连接通讯(gap junction in-tereellular communication,GJIC)、泛素偶联酶(Ubiquitin conjugating enzyme E2C,UBE2C)及miR-20a-5p基因在胃癌组织中的表达及临床意义,为胃癌患者的临床治疗提供参考价值。方法:本研究采用便利抽样的方法,随机收集了2017年1月至2021年1月在大庆龙南医院收治的110例胃癌标本作为观察组和110例胃部粘膜标本作为对照组,采用荧光免疫检测法检测GJIC、UBE2C及miR-20a-5p基因表达状况。结果:UBE2C在胃癌患者中阳性表达率为86.36%,正常胃粘膜组织中阳性表达率为28.18%,差异具有统计学意义(χ^(2)=19.32,P=0.00);miR-20a-5p在胃癌患者中阳性表达率为89.10%,正常胃粘膜组织中阳性表达率为36.36%,差异具有统计学意义(χ^(2)=20.16,P=0.00);miR-20a-5p中的表达与患者的淋巴转移、肿瘤分期及Lauren分型呈显著相关(P<0.05);在人类正常胃部粘膜中具有较强的GJIC功能,随着胃癌细胞系恶性程度的增强细胞GJIC功能降低或缺失。多因素回归显示淋巴结转移、Lauren分型、肿瘤分期与miR-20a-5p及UBE2C表达相关(P<0.05)。结论:GJIC、UBE2C及miR-20a-5p在胃癌组织具有较高的表达性,与胃癌的发生具有较大的关联性。

左归丸含药血清对BMSCs成骨分化过程中Cx43表达及GJIC功能的影响

目的：研究左归丸含药血清对培养大鼠BMSCs成骨向诱导分化过程中Cx43表达及GJIC功能的影响。方法：密度梯度离心法制取BMSCs培养传代,通过血清药理学方法,设立正常对照A组、左归丸含药血清B组、缝隙连接阻滞C组。培养过程中进行细胞形态学观察;第14天分别采用RT-PCR、FRAP技术检测Cx43、β-catenin、BGPmRNA表达及细胞GJIC功能;第21天茜素红染色检测矿化结节形成情况。结果：左归丸含药血清能明显促进Cx43、β-catenin、BGPmRNA表达,与A组比较,P〈0.05;加用AGA后,Cx43、β-cateninmRNA表达无明显影响,而BGPmRNA明显下降,与B组比较,P〈0.05。FRAP检测镜下观察B组细胞内荧光恢复明显,其平均荧光恢复率与A、C组比较差异显著,P〈0.01。钙结节相对面积定量分析,B组显著高于A、C组,P〈0.05。结论：左归丸含药血清能增强BMSCs成骨向诱导分化过程中Cx43表达及GJIC功能,并与β-catenin、BGP基因在此过程中发挥协同作用。这可能是其促进BMSCs成骨分化成熟的重要机制。

EMs异位及在位内膜间质细胞Cx43的表达及GJIC功能的体外研究

目的:研究子宫内膜异位症(EMs)的异位与在位内膜间质细胞中Cx43的表达及间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能,探讨间质细胞GJIC功能异常对EMs发病的影响。方法:取24例卵巢处子宫内膜异位灶、41例EMs在位内膜以及30例正常子宫内膜,分离出间质细胞,加入雌、孕激素培养,建立体外间质细胞培养模型。利用激光共聚焦显微镜(LSCM)分别检测三组间质细胞的Cx43表达及GJIC功能。结果:间质细胞成功培养率分别为:异位内膜组45.8%(11/24)、EMs在位内膜组92.7%(38/41)、对照组93.3%(28/30),异位内膜间质细胞纯度为95%,在位内膜间质细胞纯度达98%。EMs异位内膜间质细胞中Cx43表达水平及GJIC功能明显比其他两组低,正常对照组的Cx43表达水平及GJIC功能最高,且差异均有显著性(P﹤0.01)。结论:(1)同时建立EMs异位内膜、在位内膜及正常内膜间质细胞的体外模型,有助于研究EMs的发病机制;(2)间质细胞中Cx43蛋白表达下调及其GJIC功能异常与EMs发生有关,调节Cx43表达或GJIC功能可能是潜在的治疗策略。

GJIC增强剂PGE_2对兔脂肪细胞向成骨细胞横向分化的影响

目的探讨缝隙连接通讯增强剂前列腺素E2对脂肪细胞向成骨细胞横向分化及细胞间缝隙连接通讯的影响。方法选取3月龄新西兰大白兔腹股沟处脂肪组织,分离提取成熟脂肪细胞,使其去分化得到去分化脂肪细胞,取第三代去分化的脂肪细胞进行成骨诱导,加入GJIC增强剂PGE2设为增强组,并设立对照组,MTT法观察PGE2对细胞倍增是否有影响,进行茜素红钙结节染色和I型胶原免疫组化染色对成骨细胞定性检测,Western blot技术和划痕标记染料示踪法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达。结果 MTT法检测结果显示PGE2对细胞生长增殖无显著影响。茜素红染色显示均发现紫红色结节。免疫组化染色显示增强组I型胶原表达增强,SLDT法显示增强组荧光染料扩散高于对照组,Western blot技术检测结果显示增强组Cx43蛋白的表达增高。结论 PGE2可以增强缝隙连接通讯以增强向成骨细胞分化的能力。

全反式维甲酸上调异位子宫内膜间质细胞GJIC功能的机制

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的调节作用及其机制.方法:取人子宫内膜异位症(EMs)患者的间质细胞,采用0.1,1,10μmol/L ATRA于24,48,72,96和120 h分别进行处理,同时设置空白对照组.采用激光共聚焦显微镜检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIC功能密切相关的Cx43,Cx26和Cx32的基因及蛋白表达.结果:经ATRA处理后,1μmol/L与10μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化.未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43,Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达;经1,10μmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43 mRNA和蛋白表达,但未见Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达.间质细胞的GJIC功能与去磷酸化Cx43蛋白的表达有关.结论:ATRA能选择性的诱导Cx43基因及其去磷酸化蛋白的表达,从而上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA酸可能是治疗EMs的潜在药物.

全反式维甲酸对IL-22诱导HaCaT细胞中Cx43和GJIC功能影响研究

目的:探究全反式维甲酸(ATRA)对IL-22处理后HaCaT细胞Cx43蛋白表达水平和细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响,以及该过程是否与JNK通路有关,进一步阐明ATRA对GJIC功能影响的分子作用机制。方法:筛选ATRA影响IL-22处理HaCaT细胞最适处理时间;划痕标记染料示踪试验观察GJIC功能影响;免疫荧光检测ATRA和/或IL-22处理组Cx43、p-JNK、JNK表达水平的变化。结果:ATRA使HaCaT细胞的GJIC功能呈处理时间依赖性上升。ATRA作用于IL-22诱导HaCaT细胞后, Cx43蛋白表达水平增加, GJIC功能上调,p-JNK表达无明显变化。结论:ATRA可抑制IL-22介导的Cx43表达减少和GJIC下调作用,这一过程与JNK通路无关。

GJIC与中枢神经系统疾病的研究

中枢神经系统的结构和功能虽然极具独特性,但其细胞和组织的基本特性与其他部位也是大同小异的,比如说细胞间缝隙连接(gap junction intercellular,GJ),而作为一种通讯方式细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)普遍存在于多细胞生物体内,该研究在中外已经成为了炙手可热的研究对象,指明了很多疾病可能的发病和治疗机制,尤其是在中枢神经系统疾病方面,本文针对GJIC在中枢神经系统相关疾病发病机制中所起的作用作简要综述。

THE EFFECT OF TRANSFECTED CX43 GENE ON THE GJIC AND PROLIFERATION OF GLIOMA CELLS

Objective: To evaluate the effect of Cx43 gene on gap junction intercellular communication (GJIC) and proliferation of glioma cells. Methods: Cx43 cDNA was transfected into TJ905 human glioblastoma cells using lipofectamine. The expression of Cx43 was identified by Northern blot analyses, in situ hybridization and immunohistochemistry. MTT assay and average number of AgNORs (Argyrophlic nuclear organizer regions) were used to determine the cell proliferation. TUNEL method was used for detection of cell apoptosis, and scrape loading and dye tranfer method for examination of GJIC. Results: The Cx43 expression was greatly upregulated when Cx43 gene was transfected into TJ905 glioma cells. The cell proliferation was inhibited while the cell apoptosis was not increased and GJIC was significantly restored in the glioma cells transfected with Cx43 gene. Conclusion: Cx43 gene has an inhibitory effect on the glioma cell proliferation, but no effect on induction of cell apoptosis. The restoration of GJIC may be the major mechanism involved in its effect. Cx43 gene can be the candidate for gene therapy of gliomas.

黄芩素对缝隙连接蛋白Cx32组成的GJIC功能的影响

目的:在转染并稳定表达Cx32的HeLa细胞上,观察黄芩素对Cx32组成的GJIC及Cx32蛋白表达水平的影响。方法:细胞接种荧光示踪法观察不同浓度黄芩素对GJIC的影响;细胞免疫荧光法观察黄芩素在影响GJIC功能浓度范围内对Cx32蛋白表达的影响。结果:黄芩素(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)增强Cx32组成的GJIC功能的荧光渗透率为10.04%,22.5%和35.33%;黄芩素(2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L)增强组成GJIC的Cx32蛋白表达的荧光强度为(27.12±0.30)%,(56.31±1.02)%和(83.47±1.85)%。结论:黄芩素可增强缝隙连接蛋白Cx32组成的GJIC功能,其机制可能与增加Cx32蛋白表达水平有关。

胆汁酸的遗传毒性和对细胞间隙连接通讯(GJIC)抑制作用的研究

本文应用Ａｍｅｓ试验，ＣＨＬ细胞体外染色体畸变试验检测了脱氧胆酸和石胆酸的遗传毒性；还观察了脱氧胆酸和石胆酸对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞的恶性转化作用。并应用划痕标记染料示踪技术（ＳＬＤＴ）观察了胆汁酸对细胞间隙连接通讯（ＧＪＩＣ）的抑制作用。结果表明，脱氧胆酸和石胆酸无诱发基因突变和染色体畸变作用，也无诱发培养细胞的恶性转化作用。因此本实验未证明脱氧胆酸和石胆酸是遗传毒性致癌物。然而，脱氧胆酸和石胆酸对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＧＪＩＣ均有明显抑制作用。

全反式维A酸通过AKT和ERK1/2通路影响IL-22诱导HaCaT细胞中的Cx43和GJIC功能

目的探索全反式维A酸(RA)通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对IL-22诱导的HaCaT细胞中Cx43表达下调和细胞间隙连接通讯(GJIC)降低的影响。方法应用细胞划痕试验(SLDT)记录RA、IL-22和信号通路抑制剂处理的HaCaT细胞中GJIC的变化。Western blot检测Cx43、p-JNK、p-AKT、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果RA以剂量依赖性方式显著增加GJIC功能,并恢复IL-22诱导的HaCaT细胞GJIC功能降低程度。RA显著恢复了IL-22诱导的HaCaT细胞中Cx43表达的下调,但这种作用并非通过抑制IL-22激活的JNK信号通路而发生。RA通过激活AKT和ERK1/2信号通路而不是p38信号通路来抑制IL-22诱导的GJIC降低和Cx43表达下调。此外,研究用AKT抑制剂MK-2206或ERK1/2抑制剂SCH772984处理细胞后显示出相反的结果。结论RA可抑制IL-22诱导的HaCaT细胞Cx43表达下调和GJIC功能降低,且是通过激活AKT和ERK1/2信号通路而不是JNK和p38信号通路介导的。本研究进一步拓展了维A酸在GJIC中作用的理解,并可能为银屑病的治疗提供新的靶点。