温阳生肌膏调控GRP78/CHOP通路抑制过度内质网应激促糖尿病难愈合创面修复

目的:通过分析葡萄糖调节蛋白78(CRP78)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路研究温阳生肌膏对内质网应激(ERS)的调控,以探讨温阳生肌膏促进糖尿病难愈合创面修复的相关机制。方法:SD大鼠高脂饲料喂养联合链脲霉素腹腔注射后手术制备背部全层皮肤缺损建立大鼠糖尿病难愈合创面模型;实验分为正常组、模型组、温阳生肌膏组和贝复新(重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用凝胶)组;正常组及模型组消毒后予以生理盐水涂抹,温阳生肌膏组及贝复新组分别以温阳生肌膏、贝复新涂抹创面,每日换药1次;处理14 d后观察创面愈合情况,计算创面愈合率;HE染色观察创面组织显微形态;Western blot法检测创面组织GRP78、CHOP和cas pase-12含量;免疫组化法检测创面GRP78、CHOP和caspase-12表达及分布情况;透射电子显微镜观察创面内质网数量及肿胀情况;ELISA检测创面促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果:各组相应干预14 d后检测各项指标。与正常组相比,模型组创面愈合率显著降低(P<0.01),炎症渗出较多,肉芽组织生长情况差,GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达升高(P<0.01),炎症因子IL-1β含量显著增加(P<0.01);与模型组相比,温阳生肌膏组创面愈合率显著增加(P<0.01),炎症渗出减少,肉芽组织生长良好,创面组织GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01);炎症因子IL-1β含量显著降低(P<0.01)。结论:温阳生肌膏促进糖尿病难愈合创面愈合的作用,可能与其下调GRP78/CHOP通路,抑制过度ERS,降低创面细胞凋亡水平有关。

RCN1和GRP78在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:检测RCN1和GRP78在结直肠癌组织中的表达水平,分析与临床病理特点的相关性,并探索预后价值。方法:采用TCGA及UALCAN数据库分析RCN1和HSPA5 mRNA在结直肠癌中的表达情况,收集临床标本进行免疫组化验证两者表达情况,分析与临床病理特征的相关性及预后价值。结果:生物信息学分析表明,RCN1和HSPA5 mRNA在结直肠癌中都显著高表达,并且两者表达呈正相关。RCN1表达与N分期及TP53突变显著相关,HSPA5在黏液腺癌中的表达较高。在结直肠癌组织中,RCN1和GRP78蛋白均高表达并定位于细胞质,GRP78的表达与T分期显著相关。Kaplan-Meier生存分析曲线显示,RCN1高表达组患者DFS明显低于低表达组患者,且有较短的OS趋势。多因素COX回归分析表明,神经侵袭、TNM分期及高表达的RCN1是结直肠癌DFS的独立危险因素。相关性分析:RCN1和GRP78在结直肠癌中表达呈正相关。结论:RCN1与GRP78表达呈正相关,是结直肠癌不良预后的独立危险因素。

室旁核H_(2)S对高盐性高血压大鼠内质网应激蛋白GRP78的影响

目的:通过外源给予高盐性高血压大鼠室旁核(paraventricular nucleus,PVN)硫化氢(hydrogen sulfide,H 2S)供体GYY4137,观察PVN中GRP78的蛋白表达含量变化,探讨室旁核H 2S对高盐性高血压GRP78的影响。方法:雄性Dahl盐敏感大鼠40只,随机分成4组,即正常对照组、正常给药组、模型组和模型给药组。分别饲喂正常盐饲料(0.3%NaCl)和高盐饲料(8%NaCl)4周后,双侧PVN插管持续微量注射GYY4137,采用尾动脉无创测量平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),ELISA法检测血浆去甲肾上腺素(norepinephrine,NE),采用免疫组织化学技术及Western blotting法检测PVN中GRP78蛋白表达。结果:(1)与正常对照组相比,高盐模型组的MAP、血浆NE水平明显升高(P<0.01);与高盐模型组相比,高盐干预组MAP、血浆NE水平明显下降(P<0.01);(2)与正常对照组相比,高盐模型组室旁核中GRP78的蛋白表达明显升高(P<0.01);与高盐模型组相比,高盐干预组室旁核中GRP78的蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论:室旁核H 2S可通过降低外周交感神经活动改善高盐性高血压,其机制可能与抑制室旁核内质网应激有关。

动态心电图联合血清IMA、GRP78、miR-29a诊断冠心病心肌缺血的临床价值

目的前瞻性研究动态心电图(DCG)联合血清缺血修饰白蛋白(IMA)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、微小RNA-29a(miR-29a)诊断冠心病心肌缺血的临床价值。方法回顾性选择2020年7月至2022年8月于宿迁市第一人民医院就诊的冠心病心肌缺血患者100例,按照冠脉病变支分为单支组(n=67)、多支组(n=33),两组均行DCG联合血清IMA、GRP78、miR-29a检查。观察两组DCG特征;血清IMA、GRP78、miR-29a水平。以冠脉造影诊断结果为金标准,评价DCG及血清IMA、GRP78、miR-29a单独、联合诊断冠心病心肌缺血的诊断效能。分析冠心病心肌缺血患者DCG特征及血清IMA、GRP78、miR-29a水平与冠心病心肌缺血的病变程度相关性。结果单支组ST段压低幅度、ST段压低持续时间、心肌缺血发作频次分别为(1.41±0.16)mm、(7.82±0.80)min、(2.04±0.22)次、均小于多支组[(3.42±0.36)mm]、(17.13±1.93)min、(4.32±0.45)次],差异均有统计学意义(P<0.05)。单支组血清IMA水平为(13.29±1.60)U/mL,高于多支组[(7.34±0.76)U/mL],血清GRP78、miR-29a水平分别为(1.32±0.12)ng/mL、1.84±0.21,均低于单支组[(2.26±0.24)ng/mL、3.95±0.42],差异均有统计学意义(P<0.05)。以冠脉造影诊断结果为金标准,DCG及血清IMA、GRP78、miR-29a四者联合诊断冠心病心肌缺血的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值均高于四者单独、两两及三三联合诊断(P<0.05)。经Pearson相关性分析,ST段压低幅度、ST段压低持续时间、心肌缺血发作频次及血清GRP78、miR-29a水平与冠心病心肌缺血不同病变程度呈正相关(r=0.812、0.737、0.713、0.594、0.686,P<0.05),血清IMA水平与冠心病心肌缺血不同病变程度呈负相关(r=-0.521,P<0.05)。结论DCG联合血清IMA、GRP78、miR-29a可提高对冠心病心肌缺血的诊断效能。

大鼠脑缺血再灌注后GRP78和GADD153的表达变化研究

目的观察内质网应激相关因子GRP78和GADD153在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达,探讨脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的内质网应激机制。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞及再通模型,应用缺口末端标记法检测细胞凋亡;通过RT-PCR、免疫组化和Western-blot方法检测脑缺血再灌注后不同时相缺血周围区GRP78和GADD153的mRNA和蛋白表达。结果模型组GRP78和GADD153表达均高于假手术组,分别于再灌注12h和24h达高峰,GADD153表达与神经细胞凋亡时间趋势一致。结论脑缺血再灌注启动内质网应激反应,前期以GRP78表达上调为主;后期GADD153大量表达,二者表达平衡可能对于神经细胞最后转归具有重要意义。

电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注大鼠GRP78和Caspase-12基因表达的影响

目的观察电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)大鼠脑GRP78和Caspase-12基因表达的影响,探讨针刺发挥脑保护作用是否与内质网应激凋亡通路有关。方法 100只大鼠随机分为5组,每组20只,即正常组、假手术组、手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)脑I/R模型。采用TUNEL染色法,检测大鼠神经细胞凋亡指数;采用实时定量多聚酶链式反应(Real-Time polymerase chain reaction,RT-PCR),检测GRP78、Caspase-12 mRNA表达。结果与正常组和假手术组相比,手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数升高,GRP78和Caspase-12 mRNA表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与手术造模组相比,依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数和Caspase-12 mRNA表达均明显降低(P<0.01),GRP78 mRNA表达明显升高(P<0.01);与依达拉奉组相比,针刺干预组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论针刺内关、百会穴可以有效抑制脑缺血神经元细胞凋亡,其保护机制可能上调内质网应激保护性GRP78表达,同时抑制促凋亡Caspase-12表达有关。

糖脂清对糖尿病大鼠海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12表达的影响

目的通过观察糖脂清对糖尿病大鼠海马组织的内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的影响,探讨其在改善糖尿病大鼠认知功能的作用机制。方法采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射复制2型糖尿病大鼠模型,并给予糖脂清高、中、低剂量组干预8周后,采用ELISA法检测血清空腹葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),计算稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI);qPCR和Western blot法检测海马组织内质网应激相关因子GPR78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达水平。结果糖脂清各剂量组均能够显著降低FPG及HOMA-IR(P<0.01),除低剂量组外,糖脂清均可显著提高ISI(P<0.01),3组FINS水平无显著性差异(P>0.05)。与模型组比较,糖脂清低、中、高3个剂量组GRP78mRNA和蛋白相对表达均显著增加,CHOP、Caspase-12mRNA表达均减少(P<0.01),中、高剂量组CHOP、Caspase-12蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论糖脂清能够控制血糖,改善胰岛素抵抗,增加胰岛素敏感性,同时能够调节海马内质网应激相关因子GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA和蛋白的表达。

乳腺癌中GRP78、Survivin表达的相关性及与预后的关系

目的:探讨乳腺癌中GRP78、Survivin表达的相关性及其与乳腺癌患者预后的关系。方法:采用免疫组化Envision法检测169例乳腺癌石蜡标本中GRP78、Survivin的表达状况,并对其表达的相关性以及与乳腺癌患者预后的关系进行了统计分析。结果:在169例乳腺癌标本中,GRP78强表达为68例(40.2%),弱表达为101例(59.8%);Survivin强表达为96例(56.8%),弱表达为73例(43.2%)。对二者相关性的分析表明二者表达的吻合度具有统计学意义,但吻合程度较弱。单因素生存分析结果表明GRP78(+)Survivin(+)组(1组)、GRP78(-)Survivin(+)组(2组)、GRP78(+)Survivin(-)(3组)之间的无病生存时间差异无显著性(P>0.05),但与GRP78(-)Survivin(-)组(4组)相比,其无病生存时间均较差,差异有显著性(P<0.05);1、2、3组间的总生存时间差异无显著性(P>0.05),但与4组相比,其总生存时间均较差,差异有显著性(P<0.05)。多因素Cox回归分析表明GRP78、Survivin的表达状况是影响乳腺癌患者无病生存时间的独立预后因素(P<0.05),但不是总生存时间的独立预后因素(P>0.05)。结论:乳腺癌中GRP78与Survivn存在着相关性,GRP78和/或Survivn强表达提示患者预后不良,GRP78、Survivin的表达状况对判断乳腺癌患者的预后具有一定的参考价值。

葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的差异表达

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝组织GRP78及CHOP表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维大鼠内质网应激通路相关分子GRP78、CHOP表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制。方法:采用40%的CCl4皮下注射(3mL·kg-1·d-1,2次/周,首剂加倍)6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以200、100、50mg·kg-1·d-1的GbE灌胃干预6周,空腹取肝组织,Real-time PCR及免疫组化法分别检测肝组织GRP78及CHOP基因的mRNA及蛋白表达。结果:肝组织GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增加(P<0.05,P<0.01);应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织GRP78和CHOP基因的mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:肝纤维化大鼠肝脏发生了内质网应激反应,GbE下调肝纤维化大鼠肝组织内质网应激通路相关分子GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。

热休克、Poly I:C上调草鱼GRP78基因表达

葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是细胞内一种应急蛋白,它通过对细胞内、外胁迫因子产生强烈的应答而调节内质网稳态.草鱼(Ctenopharyngodon idellus)GRP78克隆于草鱼肝肾cDNA文库,全长2490bp.其中,5'非编码区为155bp,含有7个热休克元件,3'非编码区为373bp,最大开放阅读框为1962bp,编码653个氨基酸.序列分析表明,草鱼GRP78的N端包含3个HSP70家族的签名序列,C末端为内质网蛋白滞留信号KDEL,草鱼GRP78与人及其它动物的同源性很高.适应性进化分析也显示GRP78非常保守,受到强烈的功能约束,说明该蛋白质在进化中非常重要.RT-PCR分析表明,相对于本底水平,34℃热激和Poly I:C诱导后,草鱼GRP78在肝、肾等组织中的表达明显上调.

GRP78、GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨GRP78及GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法收集胃癌手术标本183例,制成组织芯片,用免疫组化法检测GRP78和GRP94的蛋白表达;取30例胃癌新鲜组织用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GRP78、GRP94 mRNA相对表达。结果免疫组化法检测结果显示:GRP78、GRP94蛋白的阳性表达率分别为80.1%和73.8%,与癌旁正常胃黏膜比较差异有统计学意义(P<0.05);与肿瘤的大小、浸润、转移、分期有关(P<0.05);与性别、年龄和组织分化无关。半定量RT-PCR结果显示癌组织和癌旁组织中的GRP78、GRP94mRNA均有表达,胃癌组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。结论 GRP78、GRP94蛋白在人胃癌中呈高表达并与胃癌的转移和侵袭有关,可作为判断胃癌恶性程度的有用指标。GRP78、GRP94 mRNA的高表达可能与胃癌组织中的转录调控相关。

GRP78、CHOP在α-细辛醚诱导的Eca109细胞凋亡中的作用

目的:研究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在α-细辛醚诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡中的作用。方法:采用0.25、0.50及1.00 g/L的α-细辛醚作用于体外培养的Eca109细胞,并以无干预的细胞作为对照。分别于培养后12、24、36、48 h,采用MTT法检测Eca109细胞的增殖抑制情况;采用免疫荧光染色法检测细胞凋亡情况;运用Real-time PCR和Western blot检测凋亡相关基因GRP78和CHOP的表达水平。结果:α-细辛醚对Eca109细胞的增殖具有抑制作用(P<0.05),且具有时间、剂量效应关系。α-细辛醚作用48 h后,GRP78和CHOP mRNA和蛋白的相对表达量明显增加(P<0.05)。结论:α-细辛醚可抑制Eca109细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制与调节内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP表达有关。

高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞中GRP78和CHOP表达的变化及对血管重构的影响

目的:观察高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)内质网应激(ERS)相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达、细胞凋亡率和血管中层厚度的变化,探讨ERS对高血压血管重构的影响。方法:将48只成年雄性SD大鼠随机等分为假手术对照组(对照组)和手术模型组,根据术后结束实验时间的不同,每组又分为3 d、7 d、14 d和28 d 4个亚组,每个亚组6只(n=6)。对大鼠测量血压后,应用免疫组化染色法检测主动脉VSMCs中GRP78和CHOP的表达。采用缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞的凋亡;利用图像分析软件测量血管中层的厚度。结果:①模型组3 d、7 d、14 d和28 d亚组的平均动脉压(MAP),分别为(141.90±9.01)、(150.42±6.29)、(158.00±8.54)和(174.00±8.25)mmHg,均分别高于相应的对照组[(115.06±8.85)、(123.85±9.85)、(118.48±7.60)和(120.08±8.85)mmHg,P<0.05],且随着时间的延长,血压值逐渐升高。②除模型组3 d亚组外,模型组7 d、14 d和28 d亚组GRP78的表达(A值分别为0.60±0.04、0.85±0.06和0.55±0.06),均显著高于相应的对照组(A值分别为0.47±0.01、0.47±0.03和0.47±0.02,P<0.01),于术后14 d达到最高值。③模型组14 d、28 d亚组CHOP的表达(A值分别为0.48±0.04和0.57±0.05)显著高于相应的对照组(A值分别为0.40±0.02和0.40±0.01,P<0.01),于术后28 d达到最高值;模型组3 d和7 d亚组(A值分别为0.41±0.05和0.41±0.04)与相应的对照组(A值分别为0.39±0.03和0.39±0.03)比较无明显差异。④模型组3 d、7 d、14 d和28 d亚组VSMCs的凋亡率分别为(18.20±0.03)%、(12.00±0.03)%、(6.60±0.02)%和(2.30±0.02)%,与相应的对照组[分别为(21.40±0.04)%、(20.90±0.04)%、(20.50±0.04)%和(21.30±0.04)%]比较有非常显著性差异(P<0.01)。⑤模型组除3 d和7 d亚组血管中层的厚度与相应的对照组比较无明显差异外,模型组14 d和28 d亚组血管中层的厚度[分别为(100.32±2.92)μm和(107.52±5.42)μm]与相应对照组血管中层的厚度[分别为(93.43±2.73)μm和(92.92±3.17)μm]比较有非常显著性差异(P<0.01)。模型组除3 d与7 d亚组中膜的厚度比较无差异外,其余两亚组间中膜的厚度比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论:在高血压发生早期,VSMCs中ERS反应的启动,可导致GRP78及CHOP的表达呈不对称增加,引起细胞凋亡率下降,这可能是血管重构发生的原因之一。

CCl4诱发galectin-3基因敲除鼠急性肝损伤中GRP78和BAD表达

目的观察半乳糖凝集素-3(galectin-3)基因敲除鼠肝脏中GRP78和BAD表达,探讨急性肝损伤中galectin-3抗凋亡作用。方法制备GRP78和BADDNA探针,分别利用Western和Northern杂交技术检测在CCl4损伤galectin-3基因敲除鼠肝组织中GRP78和BAD蛋白和mRNA表达。结果成功构建PTS1-BAD和PTS1-GRP78扩增质粒。GRP78蛋白主要定位在微粒体中,galectin-3+/+小鼠经CCl4处理6-14h后,肝脏GRP78表达上调至高峰,而后恢复正常;在galectin-3-/-小鼠中,CCl4处理后GRP78表达水平未见变化。正常或者CCl4处理的galectin-3+/+和-/-小鼠中GRP78 mRNA表达未见显著差别。galectin-3+/+鼠中主要定位在微粒体中在CCl4处理前后未见BAD蛋白在细胞浆和微粒体中表达。galectin-3-/-中BAD主要定位在肝细胞浆和微粒体,CCl4处理前后表达升高。BAD mRNA 1.6kb片段在galectin-3+/+和-/-小鼠经CCl4处理前后均没有变化,但0.9kb片段galectin-3+/+和-/-小鼠经CCl4处理后表达降低。结论CCl4可诱导肝脏mRNA降解,该过程中参与细胞凋亡的蛋白质表达升高。galectin-3+/+小鼠CCl4处理后肝细胞凋亡以内质网应急途径为主,而galectin-3-/-则以线粒体为主。在肝细胞中galectin-3对线粒体凋亡和内质网应急途径均有抑制作用。

当归补血汤对糖尿病肾病大鼠GRP78的影响

目的:研究当归补血汤对糖尿病肾病大鼠的内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)治疗中的作用机制。方法:实验设空白组(NC组)、模型组(DN组)、当归补血汤高剂量组(7.14 g·kg^(-1)·d^(-1),DH组)、当归补血汤低剂量组(1.79 g·kg^(-1)·d^(-1),DL组)、格列奇特组(2.68 mg·kg^(-1)·d^(-1),GT组),链脲佐菌素(STZ)结合高脂高糖饮食建立大鼠糖尿病肾病模型(T2DM),连续喂养8周,观察大鼠的一般状态;检测生化指标(血糖、血脂、肾功能);光镜、电镜观察其肾脏病理变化;免疫组化、western Blot及RT-PCR检测GRP78的蛋白及mRNA表达水平。结果:DN组大鼠空腹血糖、血总胆固醇较NC组明显升高;治疗组血生化相关指标均低于DN组;DH组最为明显。形态学观察可见DN组小鼠肾小球细胞水肿,系膜基质增多,肾小管上皮细胞胞浆出现空泡;经治疗病变减轻;DN组的GRP78的表达高于空白;治疗组的GRP78的表达降低;DH组尤为明显。结论:当归补血汤能保护肾脏,减少尿蛋白,其对DN大鼠的肾脏保护作用可能与调控GRP78表达抑制ERS反应有关。

肠道菌群、GRP78、TLR4在大鼠肝硬化发生发展中的作用

目的探讨肠道菌群、肠组织中内质网应激蛋白GRP78(glucose-regulated protein 78)、模式识别受体TLR4(toll-like receptors 4)表达水平的改变在大鼠肝硬化发生发展中的作用。方法采用复合致病因素法诱导大鼠肝硬化。HE染色观察肝与小肠病理学改变,ARISA(automated ribosomal intergenic-spacer analysis)分析回肠内容物肠道菌群组成,培养法检测各组动物细菌易位情况,ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)测定血浆生化指标,quantitative real-time PCR、Western blotting检测肝、肠组织GRP78、TLR4的表达。结果肝硬化模型动物肝、肠组织病理学改变明显。随着肝硬化的进展,模型动物血浆中ALT(alanine aminotransferase)、内毒素和Hcy(homocysteine)的水平逐渐增高。模型组与对照组间肠道菌群的组间相似性明显降低。模型组发生细菌易位的大鼠数量、易位率显著升高。模型组动物肝、肠组织中GRP78的表达水平均随病程进展显著升高;肝组织中TLR4的表达水平在6周之前随病程进展显著升高,8周仍明显高于正常动物,但低于6周时的表达水平;肠组织中TLR4的表达水平在6周之前随病程进展显著升高,8周则明显降低。结论肠道微生物群落结构的生态失调、应激水平升高、免疫功能下降,导致肠道细菌易位,加重肝损伤,促进肝硬化形成。

未折叠蛋白反应相关因子GRP78、ATF6和XPB1在人食管鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的了解食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中未折叠蛋白反应(UPR)相关因子GRP78、ATF6、XPB1的表达情况,探讨UPR激活在ESCC发生和发展中的作用。方法选取经手术切除确诊的ESCC癌组织、正常食管黏膜组织各99例,应用免疫组化SP方法检测GRP78和ATF6的蛋白表达情况;应用RT-PCR方法分析XBP1两种不同的亚型(非剪接型XBP1-u和剪接型XBP1-s)的分布情况。结果 GRP78和ATF6在ESCC组织中阳性率分别为67.7%和62.6%,而正常食管组织中阳性率分别为37.4%和35.6%,差异均显著(P<0.05);ESCC中GRP78和ATF6表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移均有相关性(P<0.05)。RT-PCR结果显示,XBP1-s基因在ESCC和正常食管组织中均有表达,分别为0.446±0.033和0.217±0.018,差异显著(t=60.6153 P<0.05);XBP1-s基因在ESCC组织中表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移均有相关性(P<0.05);而XBP1-u基因在两组细胞中的表达差异不显著(P>0.05)。结论在ESCC细胞中,由于UPR被激活,ATF6信号转导通路和IRE1依赖的XBP1剪切机制被活化。UPR与ESCC的发展、浸润、转移相关,也许能对ESCC诊疗提供新思路。

GRP78在不同分化程度胃癌组织中的表达

目的:探讨不同分化程度胃癌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达差异。方法:分别用Western blot和免疫组化法检测GRP78在高、中、低三种分化程度胃癌组织中的表达水平。结果:Western blot和免疫组化结果均证实GRP78蛋白表达水平与胃癌细胞分化程度呈负相关。结论:GRP78蛋白表达水平在不同分化程度胃癌组织中存在差异,但作为胃癌细胞分化程度判定的参考指标缺乏可操作性。

多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中GRP78的表达

目的:探讨神经毒素多巴胺(DA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)细胞模型中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达,为深入研究PD的发病机制提供理论依据。方法:建立多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型,实验组加入DA(溶解于0.2%维生素C,DA终浓度为200μmol.L-1),对照组加入等体积的0.2%维生素C,分别孵育24h,台盼蓝染色检测细胞存活率,Hoechst33342染色检测细胞凋亡。分别提取实验组和对照组细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达,应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)鉴定差异蛋白质。结果:实验组细胞存活率为53.2%,与对照组细胞存活率(100%)比较显著下降(P<0.05)。荧光染色,实验组可见细胞核呈固缩状或碎裂状,呈典型的凋亡形态学改变;对照组可见细胞胞核着均匀一致蓝色。DIGE分析,实验组表达增高的一个蛋白质点,经质谱分析鉴定确认为GRP78。结论:多巴胺能够诱导SH-SY5Y细胞凋亡,凋亡过程中GRP78表达增高,提示GRP78增高可能与PD的发病机制有关。