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棉花GhFAD2-1基因5’UTR内含子的克隆与序列分析
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作者 孙亮 文凤 +2 位作者 刘峰 张新宇 孙杰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期1-8,共8页
【目的】对棉花^(Δ12)-油酸去饱和酶基因Gh FAD2-1 5'UTR区的内含子进行克隆和序列分析,为研究Gh FAD2-1的表达调控奠定基础。【方法】利用5'RACE技术,克隆Gh FAD2-1的5'UTR序列,结合棉花基因组序列,克隆Gh FAD2-1 5'... 【目的】对棉花^(Δ12)-油酸去饱和酶基因Gh FAD2-1 5'UTR区的内含子进行克隆和序列分析,为研究Gh FAD2-1的表达调控奠定基础。【方法】利用5'RACE技术,克隆Gh FAD2-1的5'UTR序列,结合棉花基因组序列,克隆Gh FAD2-1 5'UTR内含子,并利用PLACE等生物信息学软件对其顺式作用原件进行分析。【结果】棉花A、D基因组的Gh FAD2-1 5'UTR中各含一内含子序列,全长分别为1 103 bp、1 111 bp;Gh FAD2-1成熟mRNA的5'UTR为77bp,转录的起点碱基为T;5'UTR内含子两个剪切位点分别AA-GG、CA-GC。该内含子包括一些典型的与光响应相关的作用元件,以及与激素和胁迫因素相关的应答元件等。【结论】克隆获得了棉花A、D基因组的Gh FAD2-1基因5'UTR内含子序列;明确其转录的起点碱基及5'UTR内含子的剪切位点,为进一步在分子水平上研究Gh FAD2-1功能及其表达调控规律,为植物的遗传改良奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 ghfad2-1基因 5'UTR内含子 克隆 序列分析
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陆地棉脂肪酸去饱和酶基因GhFAD2-1的克隆与表达分析
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作者 文凤 孙亮 +2 位作者 刘峰 张新宇 孙杰 《江苏农业科学》 2019年第12期74-78,共5页
Δ12-脂肪酸去饱和酶基因FAD2-1是控制种子中单不饱和脂肪酸油酸(C18∶1)向多不饱和脂肪酸亚油酸(C18∶2)转化的关键基因,其表达水平决定植物油的营养价值与氧化稳定性。棉花GhFAD2-1基因的深入研究有利于采用脂肪酸代谢基因工程技术对... Δ12-脂肪酸去饱和酶基因FAD2-1是控制种子中单不饱和脂肪酸油酸(C18∶1)向多不饱和脂肪酸亚油酸(C18∶2)转化的关键基因,其表达水平决定植物油的营养价值与氧化稳定性。棉花GhFAD2-1基因的深入研究有利于采用脂肪酸代谢基因工程技术对棉仁中脂肪酸成分进行定向修饰和改造。采用同源克隆技术获得棉花品种新陆早33号的GhFAD2-1基因,该基因编码区全长1158bp,共编码385个氨基酸;生物信息学分析结果表明,GhFAD2-1基因序列具有1个典型的FAD2结构域和1个FAD2-N端结构,其氨基酸序列与橄榄、芝麻、花生、油茶等作物的FAD2序列相似性较高,在75%~78%之间。利用qRT-PCR技术分析发现,GhFAD2-1基因的表达量随着棉籽的发育呈先升高后降低的趋势,开花后40d达到其表达峰值。使用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)测定其脂肪酸组成,结果表明,开花后0~40d,C18∶1含量/C18∶2含量与GhFAD2-1基因表达量变化趋势相反。 展开更多
关键词 棉花 ghfad2-1 脂肪酸 QRT-PCR GC-MS
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Cloning of Cotton Delta-12 Oleate Desaturase Gene FAD2-1 and Construction of Its ihpRNA and amiRNA Interference Vectors 被引量:1
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作者 赵立群 李红岺 +3 位作者 李仁 李蔚 华金平 郭仰东 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第11期2281-2283,2286,共4页
Delta-12 oleate desaturase gene (FAD2-1) which converts oleic acid into linoleic acid, is the key enzyme determining the fatty acid composition of cottonseed oil. By employing RT-PCR method, full length cDNA of cott... Delta-12 oleate desaturase gene (FAD2-1) which converts oleic acid into linoleic acid, is the key enzyme determining the fatty acid composition of cottonseed oil. By employing RT-PCR method, full length cDNA of cotton delta-12 oleate desat- urase gene GhFAD2-1 containing an open reading frame of 1 158 bp was cloned for constructing RNAi vector. A 515 bp long specific fragment of this gene was se- lected for constructing ihpRNA vector under the control of a seed-specific promoter NAPIN, named pFGC1008-NAPIN-FAD2-1; meanwhile miRNA gene-silencing vector pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1 targeting GhFAD2-1 was also constructed. 展开更多
关键词 Cotton delta-12 oleate desaturase gene ghfad2-1 ihpRNA interferencevector amiRNA interference vector High oleic acid contents
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棉花FAD2-1基因的克隆及其ihpRNA和amiRNA干扰载体的构建 被引量:2
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作者 赵立群 李仁 +4 位作者 李蔚 谭小力 杨佑明 华金平 郭仰东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期189-192,F0003,共5页
采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了... 采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了种子特异性启动子NAPIN调控的ihpRNA干扰表达载体pFGC1008-NAPIN-FAD2-1,同时构建了针对GhFAD2-1基因的人工miRNA表达载体pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1。 展开更多
关键词 棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因 ihpRNA amiRNA 高油酸
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