射干止咳胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒作用初探

目的初步探讨射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内外抗病毒作用。方法通过细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)结合MTT法考察射干止咳胶囊体外抑制甲型H1N1流感病毒活性的作用;采用小鼠滴鼻法感染甲型H1N1流感病毒为模型,观察射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内抗病毒作用。结果体外抗病毒试验结果显示,射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的最高抑制率为11.86%,提示在攻毒剂量为100TCID_(50)的条件下,射干止咳胶囊在体外对甲型H1N1流感病毒的抑制作用不明显。小鼠滴鼻感染5LD_(50)的甲型H1N1流感病毒,射干止咳胶囊低、中、高剂量组小鼠的死亡率分别为30%、10%、30%,死亡保护率达50%、70%、50%,平均生存天数分别为13 d、14 d、13 d,说明各给药组对攻毒小鼠具有较好的死亡保护作用。结论射干止咳胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒的作用不显著,但射干止咳胶囊各剂量组对甲型H1N1流感病毒攻毒致小鼠死亡却具有明显的保护作用。

感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的药效学研究

目的探讨感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的药效学情况。方法108例甲型H1N1流感病毒感染患者,随机分为观察组和对照组,每组54例。对照组使用磷酸奥司他韦治疗,观察组在对照组治疗基础上使用感冒清热片治疗。比较两组患者临床疗效、症状改善指标(起效时间、退热时间、止咳时间、痊愈时间)、以及治疗前后的中医证候(发热、咽痛、头痛、鼻塞流涕、咳嗽、乏力)积分、血清炎性因子[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]。结果观察组治疗总有效率96.30%高于对照组的77.78%(P<0.05)。治疗后,观察组患者发热、咽痛、头痛、鼻塞流涕、咳嗽、乏力评分分别为(0.83±0.24)、(1.12±0.30)、(1.07±0.29)、(1.03±0.32)、(1.05±0.33)、(1.09±0.28)分,均低于对照组的(1.46±0.37)、(2.31±0.58)、(2.14±0.52)、(2.25±0.63)、(2.36±0.61)、(2.42±0.65)分(P<0.05)。观察组起效时间(1.03±0.34)d、退热时间(1.56±0.40)d、止咳时间(4.35±0.68)d、痊愈时间(6.63±1.26)d均短于对照组的(2.32±0.57)、(2.63±0.74)、(7.24±1.16)、(9.38±1.72)d(P<0.05)。治疗后,观察组CRP(2.11±0.56)mg/L、TNF-α(19.34±2.20)μg/L、IL-6(4.02±0.54)ng/L均低于对照组的(4.83±0.69)mg/L、(25.89±2.73)μg/L、(6.13±0.62)ng/L(P<0.05)。结论感冒清热片防治甲型H1N1流感病毒感染的疗效显著,能有效缓解证候,加快症状缓解速度,提高抗炎作用。

疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的疗效观察

目的观察疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的临床效果及对患儿IL-1β、IL-6、IFN-γ的影响。方法106例甲型H1N1流感病毒肺炎患儿随机分为对照组与观察组各53例。对照组给予奥司他韦治疗,观察组给予奥司他韦联合疏风解毒胶囊治疗。比较两组临床疗效、预后相关指标、血气指标[动脉血氧分压(PaO_2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO_2)、氧合指数(PaO_2/FiO_2)]、炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(iIFN-γ)]以及不良反应发生率。结果观察组治疗总有效率为96.23%,高于对照组的81.13%(P<0.05)。观察组患儿体温恢复正常时间、咳嗽缓解时间、肺啰音消失时间、病毒转阴时间均显著短于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组患儿PaO_2、PaO_2/FiO_2高于对照组,PaCO_2低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组患儿血清IL-1β、IL-6、IFN-γ均低于对照组(P<0.05)。两组患儿治疗期间不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论疏风解毒胶囊治疗儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的效果确切,有助于促进患儿病情快速康复,改善血气指标,降低炎性反应,且安全性良好。

耐多药肺结核合并烟曲霉、甲型H1N1流感病毒感染1例并文献复习

患者,男,61岁,农民,因“反复咳嗽8年,加重伴发热1 d”入院,入院后予抗结核治疗、奥司他韦抗病毒治疗、伏立康唑抗真菌治疗等,治疗过程中关注CYP2C19基因检测、血药浓度、药物相互作用、不良反应、肝肾功能监测,经治疗后患者症状好转出院。耐多药肺结核合并侵袭性曲霉菌、甲型H1N1流感病毒感染,精准诊疗是关键,同时开展抗结核、真菌、病毒治疗可能会加重肝肾功能负担,精准用药剂量的把控,药物间的相互作用都是需要重点关注的内容。该文旨在提高对耐多药肺结核合并烟曲霉、甲型H1N1流感病毒感染病例的认识。

长春市2016—2020监测年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征分析

目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和变异分析。结果长春市109株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA蛋白相比均有S84N、S162N和I216T共同的氨基酸位点变异,且有1株发生了HA蛋白D222N位点突变,提示此毒株可引起患者下呼吸道症状。109株病毒株的HA基因之间核苷酸同源性为96.9%~100%,氨基酸同源性为97.2%~100%。在进化树分析上,都属于6B.1大分支,并且随着时间的推移,HA在基因进化树上离早期疫苗株A/California/7/2009越来越远,同一年份里也有毒株位于不同的小分支内。结论长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因在不断的变异中,应持续进行监测,为预防甲型H1N1流感大流行提供参考。

IGFBP7在H1N1流感病毒引发的肺上皮细胞炎症和凋亡中的作用及机制

目的探究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)在H1N1流感病毒引发的肺上皮细胞炎症和凋亡中的作用及机制。方法Western blot实验检测H1N1病毒对肺上皮A549细胞中IGFBP7表达的影响;MTT法检测A549细胞的活力;ELISA试剂盒检测炎症因子水平;Western blot实验检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的表达。结果H1N1病毒显著抑制A549细胞的活力且具有剂量、时间依赖性(P<0.05);H1N1病毒显著促进IGFBP7的表达且具有剂量、时间依赖性(P<0.05);干扰IGFBP7显著降低H1N1诱导的A549细胞的炎症因子水平(P<0.05);干扰IGFBP7显著抑制细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p65磷酸化(P<0.05);过表达ERK或核因子κB(NF-κB)显著逆转IGFBP7对A549细胞炎症和凋亡的影响(P<0.05)。结论干扰IGFBP7的表达能够通过调控ERK/NF-κB信号通路减轻H1N1诱导的肺上皮A549细胞的炎症反应,并减少A549细胞的凋亡,为甲型流感病毒引发的肺损伤的治疗提供了新思路。

银离子信号放大电化学免疫法检测H1N1流感病毒

提出了一种新型高灵敏度的电化学分析方法,用于H1N1流感病毒的检测。双抗夹心免疫反应在酶联免疫吸附剂测定(ELISA)板上进行,纳米银-二氧化钛-壳聚糖(Ag-TiO2-CS)复合物标记的多抗作为信号源,经氨水溶解后产生的电活性的Ag+,结合高灵敏度的电化学方法间接检测H1N1流感病毒。通过对实验条件的考察可知,Ag-TiO2-CS标记过程简单易行,电化学反应结果提示,电介质对峰电流影响较大。实验结果表明,在优化的条件下,H1N1流感病毒浓度在1×10-5~10μg·mL-1范围内,电化学信号强度与病毒浓度呈多项式曲线关系,H1N1流感病毒浓度在1×10-5~0.1μg·mL-1范围内,电化学信号强度与病毒浓度呈线性关系。所构建的电化学免疫传感器结合了ELISA易操作性和电化学的高灵敏度,同时双抗夹心免疫法又表现出高选择性,可为新型电化学免疫分析提供新的思路。

磷酸奥司他韦不同时序干预对A型H1N1流感病毒感染小鼠模型药效及炎症因子调控作用研究

目的针对目前抗病毒体内实验给药时间点偏早的现状,本研究以磷酸奥司他韦(达菲)作为“工具药”,比较不同时序干预对病毒感染小鼠的影响,为抗病毒药物研究选择合理的模型干预时间点提供依据。方法将Balb/c小鼠随机分成6组,滴鼻感染流感病毒(0.25 TCID_(50))建立病毒感染小鼠模型,达菲-1组、达菲-2组分别在染毒后d 1和d 4灌胃给药。测定体质量,计算生存率、脏器指数,测定病毒载量及炎症因子含量。结果与空白对照组比较,模型组小鼠的体质量降低,肺指数均明显升高(P<0.05);模型-2组13个炎症因子表达水平差异有显著性(P<0.05)。与模型-1组相比,达菲-1组肺指数、脾指数明显降低(P<0.05),病毒载量为模型-1组的0.54倍;与模型-2组相比,达菲-2组肺指数明显降低(P<0.05)、胸腺指数明显升高(P<0.05),病毒载量为模型-2组的0.03倍,13个炎症因子表达水平差异具有显著性(P<0.05)。结论方案2的小鼠染毒后症状更明显、稳定、给药后减轻了肺部炎症损伤,考虑了潜伏期,待模型动物出现症状开始进行药物干预符合临床用药指征,无论是在模型评估还是药物评价将更合理和准确。

中药对H1N1流感病毒致急性肺损伤影响机制的研究进展

H1N1流感病毒是最易发生变异的流感病毒,人感染H1N1流感病毒后的临床症状主要表现为高热、咳嗽、肌肉酸痛,病情严重者快速进展为急性肺损伤(Acute lung injury, ALI),ALI是H1N1流感病毒感染后致死的主要因素。H1N1流感病毒致ALI机制尚未有明确定论,目前国内外公认的机制主要有炎症反应、细胞因子表达,免疫调控机制,凝血/纤溶系统失衡,细胞凋亡、自噬及焦亡等。近年来,部分中药被证实可有效缓解H1N1流感病毒致ALI患者持续性高热、进行性低氧症等症状,但中药治疗H1N1流感病毒致ALI作用机制尚不明确,明确中药对H1N1流感病毒致ALI影响机制后筛选安全、有效的中药有望成为H1N1流感病毒致ALI治疗的新手段。

甲型H1N1流感病毒流行病学调查

目的：了解甲型H1 N1流感病毒的流行特点及传播规律，加强对流感大流行的防控。方法：收集2009年10～12月吉林大学第一医院住院发热门诊中具有流感症状患者的临床样品（鼻咽拭子和血清），采用血凝抑制法、巢式 RT-PCR技术检测具有流感症状患者血清标本中的特异性抗体、咽拭子中的甲型H1N1 RNA 等指标。结果：结果56份流感患者的咽拭子经核酸检测，甲型流感NP和M的阳性率分别为37.5％和27.8％，而甲型H1N1的阳性率仅为3.6％。通过血凝抑制实验结果表明：在相应的血清标本中，能特异性抑制甲型H1N1流感病毒红细胞凝集的样品为27份，抗体均大于1∶320，其中8份样品抗体效价大于1∶5120。恢复期的血清效价与急性期相比有显著的抗体差异，甲型H1 N1病毒特异性抗体阳性率为48.2％，明显高于核酸的检测。结论：核酸检测可在感染早期（排毒期）进行检测，而血清学的抗体检测多用在感染中后期（抗体产生）检测，两者联合可提高甲型H1 N1流感的检出率。

1例甲型H1N1流感病毒合并高黏液型肺炎克雷伯菌感染患者俯卧位通气的护理体会

总结1例甲型H1N1流感病毒感染合并高黏液型肺炎克雷伯菌感染患者俯卧位通气的护理体会。护理要点:做好患者的评估,正确掌握俯卧位通气开始及结束的时机,保证治疗的安全有效;根据患者病情,选择合适的翻身方式,保护各管路,做好皮肤护理;运用Richmond躁动-镇静量表(RASS)和镇静-躁动评分(SAS)评分,做好镇痛镇静管理,提高患者的舒适度,保障有效通气。做好气囊管理,预防呼吸机相关性肺炎(VAP)的发生。观察患者有无反流及误吸,做好胃残余量的监测,保证营养供给。监测感染指标,预防导管相关感染。

槲皮素对甲型H1N1流感病毒诱导的A549细胞凋亡效应酶Caspase-3的影响

目的观察银杏叶主要活性成分槲皮素对甲型H1N1流感病毒感染的人肺上皮瘤细胞A549凋亡效应酶Caspase-3的影响。方法采用MTT法测定H1N1毒力、槲皮素细胞毒性作用、槲皮素对H1N1致A549细胞病变的抑制作用。然后用100 TCID50甲型H1N1感染A549 2 h后换用含10 mg/L槲皮素维持液继续培养,于感染后4、12、24、48 h收集细胞,提取细胞总蛋白,采用Western blot方法,应用Image-Pro Plus测定Caspase-3与β-actin灰度值,两者灰度比值为Caspase-3的相对表达量。结果甲型H1N1 A549的TCID50为10-4.75,槲皮素A549的最大无毒浓度为40 mg/L,槲皮素抑制甲型H1N1致A549细胞病变的最小有效浓度为10 mg/L。在甲型H1N1感染A549细胞后4～48 h内,槲皮素可显著抑制Caspase-3蛋白表达,具有明显的抗凋亡作用。结论槲皮素可通过抑制Caspase-3含量或活性而发挥抗病毒感染作用。

单管高灵敏度等温扩增技术快速检测甲型H1N1流感病毒

建立了单管逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)快速检测甲型H1N1流感病毒的方法。针对甲型H1N1流感病毒的M基因和HA基因的保守区,设计了两组特异性引物,分别用于筛选甲型流感病毒及鉴定甲型H1N1流感病毒。对反应体系中的关键因素进行优化,反应结果可直接通过浊度或者SYBR GreenⅠ荧光进行判定。本方法最低可检测到10拷贝/管的甲型H1N1流感病毒。为验证方法的可行性,对30例临床样本进行了检测,与美国疾病控制与预防中心(CDC)的TaqMan方法进行对比,检测的灵敏度和特异性分别为92%和100%。本方法实现了单管快速检测甲型H1N1流感病毒,为甲型H1N1流感病毒的现场检测提供了新方法。

甲型H1N1流感病毒性肺炎并发Ⅰ型呼吸衰竭伴2型糖尿病3例诊治分析

目的总结甲型H1N1流感病毒性肺炎并发Ⅰ型呼吸衰竭伴2型糖尿病的诊治经验。方法回顾性分析3例H1N1病毒性肺炎患者的临床资料,分析诊断治疗过程。结果 3例患者均伴有2型糖尿病,以高热、咳嗽入院;患者病情进展迅速,很快出现胸闷憋气症状,血氧饱和度下降,抗感染治疗效果差;血常规淋巴细胞比例均呈下降趋势,淋巴细胞计数减少;血气分析提示,Ⅰ型呼吸衰竭;胸部CT双肺出现广泛渗出性病变,以肺实变为主,影像学呈多样性。考虑病毒性肺炎,及早给予奥司他韦、甲强龙、丙种球蛋白及高流量面罩吸氧、抗感染、补液、降糖等综合治疗后,患者病情好转,影像学检查减轻,疾控中心呼吸道分泌物病毒学检测为甲型H1N1病毒。结论对高热、咳嗽、肺内湿啰音、胸部CT示病灶明显且白细胞及中性粒细胞不高的2型糖尿病患者,在无病毒学诊断依据情况下,及早行以抗病毒为主的综合治疗可达到较好疗效。

淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂作用

目的研究探讨淫羊藿多糖对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的免疫佐剂活性。方法淫羊藿多糖G1和G4,生理盐水分别与流感病毒裂解疫苗配伍免疫小鼠,初次免疫后2周收集小鼠血清,ELISA法检测血清中抗体的滴度;MTT法测定脾淋巴细胞增殖反应;ELISA测定IFN-γ和IL-4的水平,流式细胞术测定脾淋巴细胞CD4+、CD8+、CD3+和CD19+亚群。结果初次免疫后,淫羊藿多糖G1和G4能显著提高免疫小鼠血清的抗体滴度;能明显增强脾T淋巴细胞的增殖反应,可以显著提高脾淋巴细胞CD4+、CD8+和CD3+的含量及CD3+/CD19+的比值,诱导分泌IFN-γ的水平升高。结论淫羊藿多糖可增强小鼠对H1N1的免疫应答,可以作为甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的一种新型免疫佐剂。

一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒

目的建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术。方法针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系。通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性。结果琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强。50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%。结论建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术。

山银花水提物体外抗甲型H1N1流感病毒的作用研究

目的:考察山银花水提物(SYHW)体外抗甲型H1N1流感病毒(H1N1病毒)的作用。方法:以H1N1病毒感染体外培养的犬肾小管上皮细胞(MDCK细胞),计算病毒的半数组织培养感染剂量(TCID_(50));以不同质量浓度SYHW作用MDCK细胞24 h,考察其最大无毒浓度。然后将试验分为正常细胞组、病毒对照组和SYHW预防给药组、治疗给药组和直接杀灭给药组(均给予最大无毒浓度的SYHW,并以100 TCID_(50)H1N1病毒感染细胞),测定SYHW的抗病毒有效率(ER);将试验分为正常细胞组、病毒对照组和SYHW治疗给药组、直接杀灭给药组(给药及病毒感染方法同上),分别测定细胞增殖指数(PI)和细胞凋亡率的变化。结果:H1N1病毒的100 TCID_(50)为1.26×10^(-7),SYHW对MDCK细胞的最大无毒浓度为50μg/m L(细胞存活率为91.3%)。SYHW预防给药组、SYHW治疗给药组和SYHW直接杀灭给药组的ER分别为0、80.3%、52.7%。与正常细胞组比较,病毒对照组细胞的PI值显著降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率显著升高(P<0.05);与病毒对照组比较,SYHW直接杀灭给药组细胞的PI值显著升高、早期凋亡率显著降低(P<0.05),SYHW治疗给药组细胞的早期凋亡率显著降低(P<0.05)。结论:SYHW具有体外抗H1N1病毒的作用,且以治疗给药和直接杀灭给药抗病毒作用较好。

清热解毒软胶囊体内抗甲型H1N1流感病毒的作用研究

目的:观察清热解毒软胶囊(ADSC)体内抗甲型H1N1流感病毒作用,为其用于临床治疗甲型H1N1流感病毒感染提供实验依据。方法:将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型对照组,阳性药物高、中、低剂量组[磷酸奥司他韦胶囊,0.04、0.02、0.01g/(kg·d)]和ADSC高、中、低剂量组[1.5、0.75、0.375 g/(kg·d)]。除正常对照组外,其余各组小鼠均经鼻腔滴入滴度为1.6×10-5.2的甲型H1N1流感病毒悬液复制染毒小鼠模型,造模6~8 h后ig相应药物,每天1次,连续5 d。给药结束后,观察7 d内小鼠体质量变化,计算15 d内小鼠的死亡率、死亡保护率及平均存活天数。另取小鼠,分组、给药同上,末次给药8 h后,测定小鼠肺指数和肺指数抑制率。结果:模型组小鼠体质量从第5天开始明显下降,第8天开始出现死亡(15 d内死亡率为85.7%),肺指数较正常对照组明显升高(P<0.01)。ADSC和磷酸奥司他韦胶囊均可减缓染毒小鼠体质量下降趋势,降低小鼠死亡率和肺指数,延长小鼠的平均存活天数。其中ADSC高剂量组和阳性药物高、中剂量组小鼠的平均存活天数显著高于模型对照组(P<0.05);除ADSC低剂量组外,其余各给药组小鼠的肺指数均显著低于模型对照组(P<0.05)。结论:ADSC对小鼠具有一定的体内抗甲型H1N1流感病毒的作用。

胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性分析

目的了解胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性。方法分别用甲型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)和甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)对171例疑似甲型H1N1流感(2009)患者鼻咽拭子标本进行检测,以实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)核酸检测结果为参考,比较胶体金免疫层析试剂盒对不同病程以及不同病毒核酸载量标本检测的敏感性。结果 2种试剂盒的检测敏感性与标本的病毒核酸载量呈正相关(P<0.01),病毒载量≥108拷贝/mL时均可达73.3%。同时,2种试剂盒的阳性检出率与标本的病程呈负相关(P<0.01),发病1～2 d时分别为66.7%和62.5%,推测其在实际应用中的理论敏感性分别可达77.3%和74.6%。结论胶体金免疫层析试剂盒检测甲型H1N1流感病毒(2009)在发病初期及病毒载量较高时有较好的检测效果,可帮助临床早期诊断和海关口岸等机构的现场筛查。但鉴于胶体金免疫层析法自身的局限性,其结果只能作为初步参考,最终的确认结果应以PCR结果为准。

交叉引物恒温扩增法检测甲型H1N1流感病毒及临床应用

目的建立交叉引物恒温扩增（Cross Priming Amplification,CPA）技术对甲型H1N1流感病毒进行检测的方法,并对该方法通过临床标本进行评价。方法根据甲型H1N1流感病毒的保守序列设计特异性引物,并在同一温度下实现RNA的逆转录和DNA扩增,该扩增产物可通过全封闭式核酸检测装置进行检测。14份健康人咽拭子标本、7个其他呼吸道病毒和6个虫媒病毒株被用来检测CPA反应的特异性;已知病毒滴度的甲型H1N1毒株进行对照梯度稀释,以测试CPA的敏感性;102份甲型H1N1临床咽拭子标本为检测对象,评估其临床的检测的可行性。结果 CPA反应未出现对健康样本以及其他病毒产生交叉反应;对已知滴度的病毒进行梯度稀释检测,证明CPA的敏感性为10拷贝/μL。对甲型H1N1流感临床病例发病1~3d临床标本新建检测方法的检出率为100%,4~6d临床标本检出率为79.31%,≥7d临床标本检出率为9.09%。讨论CPA具有较高的敏感性、特异性,对设备要求低,适合基层医疗单位对甲型H1N1流感发病早期诊断使用。