当归贝母苦参丸对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对血清HIF-1α和LDH的影响

目的探讨当归贝母苦参丸(当归、浙贝母和苦参)对顺铂化疗H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对血清低氧诱导因子HIF-1α和乳酸脱氢酶(LDH)的影响。方法将雌雄各32只荷H22肝癌移植瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、当归贝母苦参丸组、当归贝母苦参丸与顺铂联合组,另设正常对照组(n=16)。观察各组小鼠一般状况,检测有效体质量变化及抑瘤率、q值、肿瘤指数、肝脏、脾脏、胸腺、和肾脏的器官指数。血常规检测白细胞计数,ELISA检测血清HIF-1α的水平,血生化检测LDH活力。结果当归贝母苦参丸组与联合组的一般状况优于模型组和顺铂组;各治疗组瘤体质量均低于模型组瘤体质量(P<0.05),联合组的抑瘤率高于单用当归贝母苦参丸或顺铂的抑瘤率,联合用药疗效具有相加效应;当归贝母苦参丸组有效体质量增加、脾脏和胸腺指数高于顺铂组(P<0.05);当归贝母苦参丸组和联合组血清HIF-1α水平低于模型组(P<0.05),两组血清LDH活性低于顺铂组(P<0.05)。结论当归贝母苦参丸具有抑瘤作用和对顺铂化疗的增效减毒作用,抑瘤作用可能与降低小鼠血清中HIF-1α水平和降低顺铂引起的LDH活性升高所致的组织损伤。

TIM2基因修饰的H22细胞体内成瘤作用的研究

目的观察小鼠TIM2基因修饰的H22肝癌细胞在小鼠体内的成瘤作用,初步研究TIM2基因在肿瘤生物治疗中的作用。方法构建TIM2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,脂质体法转染H22细胞,体外筛选得到稳定表达TIM2基因的阳性单克隆H22细胞株,用以建立小鼠肝癌移植瘤模型,同时以转染了pIRES2-EGFP空载体的H22-EGFP细胞和H22细胞做为对照,观察不同处理的H22细胞对小鼠的成瘤情况。结果重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2转染H22细胞后,经体外筛选和鉴定,得到稳定表达EGFP和TIM2基因的阳性单克隆细胞株H22-TIM2,免疫接种小鼠后可明显抑制小鼠肿瘤的发生和发展,小鼠肿瘤组织块的体积明显小于接种H22-EGFP细胞和H22细胞组。此外,接种H22-TIM2细胞组小鼠的生长情况也明显好于其他各组。结论TIM2基因转染H22细胞后可显著降低小鼠H22肝癌细胞的成瘤性,抑制小鼠体内肿瘤的生长。本研究为进一步探讨TIM2在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据。

小剂量奥沙利铂化疗对小鼠H22肝癌乏氧的影响

目的观察小剂量奥沙利铂化疗对小鼠H22肝癌乏氧动态变化的影响,并探讨乏氧改变与其抗血管生成效应的关系。方法建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,将成瘤小鼠随机分成对照组(5%葡萄糖20ml/kg)和治疗组(奥沙利铂1.5mg/kg),分别隔日腹腔给药(设为d0、d2、d4、d6)。于d1、d3、d5、d7行99mTc-HL91乏氧显像,在平面图像上通过核医学感兴趣区(ROI)技术,计算肿瘤与对侧相应部位放射性比值(T/NT)。两组于d1、d3、d5、d7分别处死小鼠,取瘤体,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中CD34表达,连续观察d1、d3、d5、d7治疗组与对照组血管形态差异,并比较肿瘤微血管密度(MVD)的动态变化。结果对照组d1、d3、d5、d7T/NT比值分别为3.416±0.264、3.883±0.346、4.105±0.371和4.439±0.428,治疗组d1、d3、d5、d7T/NT比值分别为3.369±0.100、2.195±0.106、3.367±0.214和4.262±0.214,治疗组d3T/NT最低。对照组d1、d3、d5、d7MVD分别为30.17±1.17、33.50±1.05、37.50±1.05和40.83±1.47,治疗组d1、d3、d5、d7MVD分别为28.83±1.47、23.07±1.47、20.17±1.94和18.33±1.21。结论小剂量奥沙利铂化疗能够一过性改善乏氧,并与其抗血管生成作用一致,有可能增强肝癌放疗的疗效。

苦参碱对TIM2转基因小鼠肝癌细胞的作用研究

目的:观察苦参碱对TIM2转基因修饰小鼠H22肝癌细胞瘤苗的体内作用。方法:构建小鼠TIM2基因真核表达载体并用以转染H22细胞,经体外稳定筛选后获得TIM2转基因H22肝癌细胞全细胞瘤苗(H22-TIM2),用以建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察该瘤苗在小鼠体内的成瘤性和免疫原性;加用药物苦参碱(matrine,M)治疗后,观察苦参碱对其体内抗癌活性的影响。结果:筛选得到的TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗有TIM2 mR-NA及EGFP的稳定表达,此瘤苗接种后,在小鼠体内的成瘤率为41%,远低于H22对照组和H22-EGFP空载体组(H22-EGFP)(后两者成瘤率在92%以上),对小鼠肿瘤的抑制率为69.2%,明显高于苦参碱治疗组(67.5%)和其他各组。同时苦参碱可进一步增强H22-TIM2瘤苗的肿瘤抑制率。H22-TIM2组小鼠的脾指数,CD4+T细胞亚群和CD4/CD8较其他实验组明显增高。结论:TIM2基因修饰H22细胞瘤苗可显著降低H22肝癌细胞在小鼠体内的致瘤性,在体内具有一定的免疫原性,苦参碱可明显改善其体内抗癌活性,为进一步研究TIM2基因在肿瘤免疫中的作用及苦参碱的抗癌机制奠定了基础。

羧甲基化裂褶多糖抗肝癌作用的实验研究

目的:从细胞水平和整体水平探讨羧甲基化裂褶多糖的抗肝癌作用。方法:将两种不同取代度羧甲基化裂褶多糖加入H22小鼠肝癌细胞液中分别培养24、48、72h,用台盼蓝拒染法测试作用后的细胞死亡率;建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型,将其分为空白对照组、阳性对照组和3种不同取代度羧甲基化裂褶多糖给药组,腹腔注射给药,各组小鼠均连续给药10d后处死并称瘤重,计算抑瘤率。结果:不同取代度、不同时间羧甲基化裂褶多糖作用于H22肝癌细胞的细胞死亡率差异无统计学意义。取代度为0.67和0.93的羧甲基化裂褶多糖,对荷H22肝癌肿瘤小鼠的抑瘤率分别为41.3%和37.9%;取代度为1.14的羧甲基化裂褶多糖则未表现出抑瘤作用。结论:羧甲基化裂褶多糖在细胞水平上对H22小鼠肝癌细胞株无抑制作用;取代度为0.67和0.93的羧甲基化裂褶多糖对小鼠H22肝癌具有一定的抗癌作用,其机制并不是直接抑制癌细胞,而是通过机体因素后间接抑制肿瘤的生长,是一种具有开发潜力的新的候选抗癌药物。

保肝延年注射液抗肝癌作用的实验研究

目的研究保肝延年注射液的抗肝癌作用。方法选择小鼠肝癌H22癌模型、MTT法和集落形成法,观察保肝延年注射液对荷瘤鼠和人肝癌SMMC-7721细胞株的作用。结果腹腔注射保肝延年注射液80mg/kg、160mg/kg、320mg/kg,肿瘤受到明显抑制,抑制率分别为72.5%、90.1%和94.6%(P<0.05,P<0.01);小鼠生存时间显著延长;在体外保肝延年注射液对人肝癌细胞有明显的细胞毒作用,其IC50为2.04μg/ml;同时保肝延年注射液可抑制人肝癌SMMC-7221克隆原细胞形成集落,其IC50为2.35μg/ml。结论保肝延年注射液在体内和体外均具有抗肝癌作用。

TIM2基因修饰对H22细胞的抑制作用及苦参碱的增强作用

目的观察苦参碱对TIM2基因修饰小鼠H22肝癌细胞瘤苗的体内作用。方法以携带小鼠TIM2基因的真核表达载体脂质体法转染H22细胞，经体外稳定筛选获得TIM2转基因H22细胞瘤苗。建立小鼠肝癌移植瘤模型，接种TIM2转基因H22细胞瘤苗（H22-TIM2组），观察成瘤情况，并设空载体转染的H22细胞稳定表达株和H22细胞作为对照（H22-EGFP组和H22组）；同时，分别加用药物苦参碱治疗，观察苦参碱对不同处理组小鼠肿瘤生长情况的影响。结果成功得到TIM2转基因修饰H22细胞，鉴定有TIM2基因mRNA及EGFP的稳定表达。免疫接种小鼠后，在小鼠体内的成瘤率为41．6％，明显低于H22组和H22-EGFP组（后两者成瘤率在91．6％以上）（P〈0．01），小鼠肿瘤的生长速率也较其他各组明显缓慢，实验结束时H22-TIM2组小鼠肿瘤平均体积为（31．344-9．21）mm^3，明显小于H22-EGFP组和H22组[（98．25±25．23）mm^3和（114．08±36．45）mm^3；P〈0．01]。接种H22-TIM2细胞对小鼠肿瘤的抑制率为69．2％，加用苦参碱后，抑瘤率达90．6％，明显高于单用苦参碱组（67．5％）及H22-EGFP和苦参碱联用组（70．8％）。结论TIM2基因修饰H22细胞可显著降低H22肝癌细胞在小鼠体内的致瘤性，抑制小鼠体内H22移植瘤的发生和发展，而苦参碱可明显改善其体内抗癌活性。

氧化白藜芦醇体内外抑制肝癌细胞增殖的研究

目的:研究氧化白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞以及小鼠移植性肿瘤H22的抑制作用及其抗肝癌作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测氧化白藜芦醇对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖的抑制效果。流式细胞术测定肝癌SMMC-7721细胞的凋亡率。建立小鼠H22肝癌细胞移植瘤模型,分为对照组、环磷酰胺组、氧化白藜芦醇80、40、20 mg/kg剂量组,以实体瘤瘤块生长曲线及抑瘤率为指标评价氧化白藜芦醇对小鼠移植瘤生长的抑制作用;取用不同剂量组作用后的瘤块组织,采用免疫组织化学法检测Bax,bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结论:MTT结果显示,氧化白藜芦醇对肝癌7721肿瘤细胞的IC50值为58.13μg/ml,抗肿瘤活性良好;流式细胞术结果显示氧化白藜芦醇促进肝癌7721细胞凋亡;体内试验显示氧化白藜芦醇对移植瘤的抑制作用明显,80、40、20 mg/kg三个剂量组对H22移植瘤抑制率为76.88%、65.90%和45.99%,呈一定量效关系,氧化白藜芦醇增加caspase-3表达量及Bax/Bcl-2比值。结论:氧化白藜芦醇具有明显的体内外抑制肿瘤作用,作用机制可能与诱导细胞凋亡有关。