白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤T淋巴细胞的影响

目的观察白花蛇舌草对H22肝癌细胞移植瘤鼠瘤体T淋巴细胞亚群的影响。方法将中药处理后的H22肝癌细胞,采用HSP70单抗封闭技术分为白花蛇舌草和党参未封闭、封闭及RPMI-1640空白对照共5组;观察各组CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况。结果与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+、封闭组CD4+表达明显上调;党参封闭组CD4+表达也明显上调;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+T淋巴细胞表达明显上调。结论白花蛇舌草诱导恶性肿瘤瘤体HSP70的高表达,增强机体对肿瘤的免疫作用,其机理可能与提高瘤体CD4+、CD8+CTL表达有关。

软骨多糖抑制H22肝癌细胞生长的作用及机制研究

探讨软骨多糖(CA)在体内抑制H22肝癌细胞生长的作用及其机制。以H22细胞腹水瘤模型为研究对象,设对照组﹑CA组两组,分别考察CA对各组小鼠的生活状态的影响。并且应用苏木素伊红(HE)染色、原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)、流式细胞术(FCM)及免疫荧光法对肿瘤细胞的生长和凋亡进行研究。CA可以在一定程度上促进H22细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,延长小鼠的生存时间。并且,随着用药时间的延长,CA组的P21表达增强,而CyclinD1表达水平降低。软骨多糖有促进肿瘤细胞凋亡的作用,是一种新型的抗癌药物,具有广泛的应用前景。

培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长的抑制作用

目的:观察培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长抑制作用以及对癌相关成纤维细胞(CAFs)调节作用和对细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8的影响。方法:制备H22肝癌细胞腹水型瘤株悬液,在健康小鼠腋下接种瘤细胞悬液造模,造模成功后随机分为模型组、替加氟组、中西结合组,分别予0.9%的氯化钠溶液、替加氟、培元抗癌汤联合替加氟进行药物干预。观察各组小鼠一般情况,连续用药两周后处死小鼠取瘤组织称重,并计算抑瘤率;Western blot法检测转移瘤中α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达水平。结果:干预后,中西结合组较其他两组比较,一般情况较好,小鼠进食、饮水状况良好,体重有所增加,对外部刺激反应敏感,活动无明显异常。替加氟组、中西结合组的瘤体重量明显低于模型组;中西结合组瘤体重量较替加氟组低,差异有统计学意义(P<0.05)。替加氟组、中西结合组小鼠α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05);中西结合组的上述指标均低于替加氟组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:培元抗癌汤联合替加氟能调节肿瘤微环境中CAFs及细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8,抑制小鼠H22肝癌细胞生长。

H22肝癌细胞与正常小鼠肝细胞胰岛素受体表达的对比

本实验采用氯胺 T法进行了胰岛素的 12 5I标记。通过体外受体饱和结合实验及竞争结合实验观察了 H2 2肝癌细胞与正常小鼠肝细胞胰岛素受体的结合特性 ,并进行 Scatchard分析 ,计算出两种细胞的最大结合容量 ( Bmax)与平衡解离常数 ( Kd)。H2 2肝癌细胞胰岛素受体 Bmax为每个细胞 5.61± 1.10 amol,Kd 为 1.81± 0 .56nmol/L ;正常小鼠肝细胞胰岛素受体 Bmax为每个细胞 3.2 2± 0 .81amol,Kd 为 2 .10± 0 .91nmol/L。H2 2肝癌细胞胰岛素受体 Bmax显著高于正常肝细胞 ( P<0 .0 5) ,而两种细胞胰岛素受体与 12 5I-胰岛素的亲和力无显著性差异 ( P>0 .0 5)。

海藻色素糖蛋白对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究麒麟菜海藻色素糖蛋白(seaweed pigment glycoprotein,SPG)对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:将不同浓度SPG与小鼠H22肝癌细胞共同培养,用MTT法测定癌细胞增殖活性。建立H22移植瘤小鼠肝癌模型,随机分为SPG高、中、低剂量组,对照组及环磷酰胺组。实验组小鼠每天分别给予不同剂量(100、50、10mg/kg)的SPG灌胃,连续10d,对照组同法给予等量生理盐水,环磷酰胺组小鼠腹腔注射20mg/kg环磷酰胺,隔日一次。各组小鼠均于末次给受试物后24h处死,取肿瘤组织用免疫组化法检测各组Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:SPG高剂量组瘤细胞增殖活性(0.545±0.002)明显高于对照组(0.404±0.008)(P<0.05);SPG高剂量组Bcl-2和Bax蛋白阳性表达率分别为16.78%和38.1%,对照组分别为65.16%和4.68%,两组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:SPG具有抑制小鼠H22肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用。

中药仙鹤复方水提取物对S180肉瘤和H22肝癌细胞在小鼠体内的抗肿瘤作用研究

目的观察中药仙鹤复方水提取物对移植型鼠源S180肉瘤和H22肝癌细胞在荷瘤动物体内抗肿瘤作用。方法昆明种受试小鼠,接种S180肉瘤和H22肝癌细胞后随机分为空白对照组、阳性对照组及中药仙鹤复方水提取物高、中、低3个剂量组。观察中药仙鹤复方水提取物对肿瘤的抑制作用及动物体质量、免疫器官重量的影响。结果中药仙鹤复方水提取物对鼠源移植型S180肉瘤细胞和H22肝癌细胞在荷瘤小鼠体内的增殖均有明显的抑制作用;且对两种荷瘤小鼠的免疫器官脾脏及胸腺均有显著性的保护作用影响。结论中药仙鹤复方水提取物在动物体内具有较好的抑瘤作用,且对荷瘤小鼠免疫器官有保护作用,具备减毒的功效。

磷酸吡哆醛对H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的影响

为建立DNA拓扑异构酶活性测定方法和探讨磷酸吡哆醛(PLP)抑制肿瘤细胞增殖的可能机制,本实验以DNA琼脂糖凝胶电泳EB荧光法测定了H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶I(TOPOI)的活性。结果表明维生素B6的活性形式PLP能有效地抑制TOPOI松弛负超螺旋的作用,且抑制效应与PLP剂量呈正相关。从而证实PLP能明显抑制TOPOI的活性并在分子水平上调节细胞周期活动和肿瘤细胞增殖活动。

不同浓度H22肝癌细胞株对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模差异的影响

目的:使用H22肝癌细胞株建立C57BL/6J小鼠原位肝癌模型,比较不同浓度H22肝癌细胞悬液对C57BL/6J小鼠原位肝癌造模成瘤率、肿瘤病理学特征及其体重变化情况的影响。方法:将66只C57BL/6J小鼠随机分为4个组,分别对应1×10~6、1×10~8、1×10^(10)、1×10^(12)4个细胞浓度。在无菌条件下,将不同浓度的H22肝癌细胞悬液注入60只C57BL/6J小鼠的肝左叶。从注射之日起,连续21 d测量小鼠体重,于第21 d时脱颈椎处死,测肝脏的重量,并行肝脏外观及病理组织学观察。结果:1×10~6、1×10^(10)、1×10^(12)组成瘤率40%(6/15),1×10~8组为27%(4/15)。病理检查证实为肝细胞性肝癌。结论:不同浓度H22肝癌细胞株对成瘤影响差异不明显,造模中可根据实际情况自行选择。

五倍子酸对H22肝癌细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的观察五倍子酸（trihydroxybenzoic acid，TBA）对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法建立移植性H22肝癌细胞荷瘤小鼠模型，每组10只，TBA高、中、低剂量组TBA溶液0．50g／kg、0．25g/kg、0．13g／kg灌胃给药；对照组0．5％羧甲基纤维素钠溶液0．2mL／10g灌胃给药；阳性对照组CTX20mg／kg腹腔注射，每天固定时问给药一次，连续给药10d。观察各组小鼠实体瘤重，计算抑瘤率，HE染色检测肿瘤组织细胞形态变化。结果TBA0．50g／kg、0．25gZkg和0．13g／kg组小鼠平均瘤重不同程度下降，其中TBA0．25g／kg组平均瘤重与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），TBA三组抑瘤率分别为24．83％、45．52％和15．86％。结论TBA灌胃给药可以不同程度抑制H22肿瘤的生长。

基于AQP9和线粒体细胞凋亡途径相关性探讨健脾活血祛湿方对体外培养H22肝癌细胞的影响

目的:观察健脾活血祛湿方对体外培养H22肝癌细胞的影响,探讨健脾活血祛湿方基于通过干预水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)调控肝癌细胞线粒体凋亡途径,从而发挥抗肿瘤的作用及可能机制。方法:培养小鼠H22肝癌细胞株,取对数生长期细胞,与高、中、低不同剂量健脾活血祛湿方和环磷酰胺(CTX)共同培养,分别采用比色法(MTT)测定H22细胞增殖抑制率,Annexin V-FICT/PI法检测H22细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测H22细胞AQP9的表达,免疫印迹法(western blotting,WB)检测H22细胞AQP9、B细胞淋巴瘤-2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(bcl-2 associated x protein,Bax)表达,共聚焦显微镜观察JC-1法检测细胞线粒体膜电位变化。结果:与空白组比较,CTX组在48h、72h和96h对小鼠H22肝癌细胞的抑瘤率明显升高,凋亡率、AQP9mRNA转录水平和AQP9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平明显增加;CTX组Merge图显示绿色荧光增多(箭头所示),提示线粒体膜电位有明显降低;与CTX组比较,健脾活血祛湿方各剂量组的抑瘤率呈时间/剂量依赖性增高,高剂量组的AQP9mRNA转录水平明显增高,中、低剂量组的AQP9mRNA转录水平下降,AQP9、BAX蛋白表达水平呈剂量依赖性增高,Bcl-2表达呈剂量依赖性下降,整体凋亡率均明显增加。结论:健脾活血祛湿方可以抑制小鼠H22肝癌细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与调控AQP9表达、激活线粒体细胞凋亡通路有关。

复方苦参注射液通过调节小鼠肝癌H22细胞自噬抑制肿瘤生长的实验研究

目的 该实验旨在探究复方苦参注射液对小鼠肝癌H22细胞自噬的影响,为进一步探究可能发生机制奠定基础。方法 建立肝癌H22细胞荷瘤小鼠模型;将荷瘤小鼠模型随机分为模型对照组(生理盐水组)、复方苦参注射液组(低剂量7.5 g生药/kg、中剂量15 g生药/kg、高剂量30 g生药/kg),每组8只,建模48 h后开始给药,各组均为腹腔注射给药,连续给药12 d,对比观察各组小鼠生长情况,记录瘤体大小,绘制瘤体生长曲线;计算各组小鼠的平均瘤重及抑瘤百分率,通过透射电镜观察自噬体、自噬泡的形成(自噬金标准),Western blot检测自噬因子LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ的蛋白表达,并计算二者比值,以检验自噬水平。结果 与模型组相比,复方苦参注射液各组均能抑制小鼠瘤体增长,抑瘤率和复方苦参注射输液浓度之间呈正相关(P<0.05);复方苦参注射液各组自噬体、自噬泡明显增多,且自噬体、自噬泡和复方苦参注射输液剂量之间存在浓度依赖关系;复方苦参注射输液各组LC3-Ⅱ表达明显增高(P<0.05),复方苦参注射液各组肿瘤组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均明显增高(P<0.05),且复方苦参注射液各组间存在明显量效关系(P<0.05)。结论 复方苦参注射液可改善肝癌细胞H22荷瘤小鼠的生长情况,减缓瘤体生长速度,提高肿瘤抑瘤率,促进肝癌细胞H22自噬而抑制肿瘤生长,并且和复方苦参注射输液剂量之间存在一定的量效关系。

芝麻素对肝癌H22细胞增殖及H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的观察芝麻提取物芝麻素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响及其对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法用MTT法检测不同质量浓度的芝麻素对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响;同时将移植H22瘤株的昆明种小鼠分成:模型组(生理盐水)、环磷酰胺(30 mg/kg)组、芝麻素高、低剂量(150、15 mg/kg)组、观察芝麻素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果芝麻素在体外对H22肝癌细胞的增殖有显著的抑制作用,以8、16、32μg/mL组在48 h的抑制率最显著;芝麻素在体内对H22肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,芝麻素低剂量组的小鼠皮下瘤质量较模型组低(P<0.05),但仍比环磷酰胺组高(P<0.05),芝麻素高剂量组和模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论芝麻素有明显抑制肝癌H22细胞增殖的作用。

重组人Hsp70提呈的H22肝癌细胞混合抗原肽治疗小鼠肿瘤的研究

目的 探讨H2 2肝癌细胞混合抗原肽体内抑制小鼠肿瘤的最佳方式。方法 采用冻融、低渗振荡、加热沉淀及酸处理等方法从H2 2肝癌细胞中制备抗原肽 ;将接种过H2 2瘤细胞的小鼠分别给予Hsp70 H2 2肽复合物注射、复合物 +pCH5 10质粒注射或化疗后给予复合物 +质粒注射 ,观察肿瘤抑制情况。结果 上述方法制备的抗原肽为混合肽 ,其与Hsp70形成的复合物体内能够抑制小鼠肿瘤生长 ,并且这种复合物可与pCH5 10质粒协同完全抑制 10 5接种的瘤细胞形成肿瘤 ,但不能完全抑制 10 6接种的瘤细胞形成肿瘤 ,然而这种双因素与化疗进行衔接则可完全抑制 10 6接种的瘤细胞形成肿瘤。结论 H2 2肝癌细胞肿瘤混合抗原肽经rhHsp70提呈可诱导H2 2荷瘤小鼠产生特异性免疫保护作用 。

树舌多糖GF对小鼠肝癌H_(22)细胞P53及RB基因的影响

目的:为探明树舌多糖GF对肝癌H22瘤细胞RB基因及P53基因的影响。方法:用ELISA法检测RB基因及P53基因用药前后表达的差异。结果:树舌多糖GF组中P53基因、RB基因的表达量均显著高于荷瘤组(P<0.01)。树舌多糖组、环磷酰胺组无显著差异。结论:树舌多糖GF能使肝癌H22细胞P53及RB基因的表达上调。

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。

白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍对小鼠H_(22)肝癌细胞PCNA表达的影响

目的探讨白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍对小鼠H22肝癌细胞PCNA表达的影响,初步探讨其抗H22肝癌的机理。方法建立H22肝癌移植性肿瘤小鼠模型,连续给药10 d后,取瘤称重,计算抑瘤率;用免疫组化法观察对小鼠H22肝癌细胞PCNA表达的影响;并比较白花蛇舌草和半枝莲配伍微粉与普通粉药效的差异。结果与模型对照组比较,白花蛇舌草和半枝莲配伍各组H22肿瘤均明显减小,抑瘤率均大于30%,PCNA表达显著减少。与普通粉组相比,微粉3组H22肿瘤重量和PCNA表达均明显减少;微粉1组无统计学差异。结论白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍能够抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,其机制可能与影响肿瘤细胞的周期,抑制细胞增殖有关。同等抑瘤效果时微粉约为普通粉用量的1/2。

芪灵益肝煎对小鼠H_(22)肝癌细胞CDK4表达的影响

目的:观察芪灵益肝煎对小鼠肝癌的抑制作用及其对CDK4表达的影响,以明确其对细胞周期调控的影响。方法:将腹水型H22细胞株接种于小鼠右前腋窝皮下,造成实体瘤模型,将30只小鼠随机分为3组,芪灵益肝煎组、灵芝煎剂组和盐水对照组,每组10只。从荷瘤次日起,芪灵益肝煎组、灵芝煎剂组分别以芪灵益肝煎、灵芝煎剂0.4 mL(约含生药0.4 g)灌胃,盐水对照组以0.9%生理盐水0.4 mL灌胃,连续给药20 d后取瘤称重,计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测CDK4的表达。结果:芪灵益肝煎、灵芝煎剂对小鼠H22肝癌细胞的生长均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为36.33%、24.18%,与盐水对照组比较有显著性差异(P<0.05),且芪灵益肝煎抑瘤作用优于灵芝煎剂;CDK4在3组均呈阳性表达,芪灵益肝煎组CDK4表达减弱,与盐水对照组比较有显著性差异(P<0.05),灵芝煎剂组CDK4表达无明显变化,与盐水对照组比较无显著性差异(P>0.05),芪灵益肝煎组与灵芝煎剂组比较CDK4表达有显著性差异(P<0.05)。结论:芪灵益肝煎对小鼠H22肝癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,其作用机制可能与降低肝癌细胞内CDK4的表达有关。

天花粉蛋白诱导H_(22)肝癌细胞凋亡的研究

目的 :观察天花粉蛋白 (trichosanthin,TCS)在体外诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡的效果。方法 :以不同剂量的 TCS加入到H2 2 肝癌细胞溶液中 ,在 2 4孔培养板上培养 72 h后荧光染色并涂片 ,激光共聚焦显微镜下观察 TCS诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡的作用效果。结果 :10 μg/ml浓度的 TCS就可诱导 H2 2 肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征。经统计学分析 ,10 0 μg/ml TCS组与 5 0 μg/ml TCS组间差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,其余各组间差异均有统计学意义 (P<0 .0 1)。TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系 (r=0 .9713,P<0 .0 1)。结论 :TCS在体外可诱导 H2 2 肝癌细胞发生凋亡 ,诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡是 TCS抗肝癌作用的机制之一 ,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值。

癌痛消胶囊调节小鼠荷H_(22)移植性肝癌细胞VEGF表达的实验研究

目的 :通过观察癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的调节作用 ,探讨该药抑制肿瘤的作用是否与抑制肿瘤血管生成有关。方法 :于昆明种雄性小鼠前肢右腋皮下接种0 2mlH22 肿瘤细胞悬液(浓度为1×107/ml)进行造模。利用造模动物观察瘤块重量 ,计算肿瘤生长抑制率 ,用免疫组化法检测瘤细胞中VEGF的表达程度。结果 :与阴性对照组相比 ,癌痛消胶囊组有明显的抑瘤作用(P<0 05) ,抑瘤率为36 34 % ;病理检测显示 ,造模各组VEGF阳性表达率为100% ,但程度不同 ,癌痛消胶囊组可使肿瘤组织VEGF的表达明显下调 ,与阴性对照组比较 ,差异有显著性意义(P<0 01)。结论 :癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞的生长有抑制作用 ,能减少血管生成调控基因VEGF的表达。

骆驼蓬总碱软胶囊对S_(180)肉瘤和H_(22)肝癌细胞体内增殖生长的影响

目的观察骆驼蓬总碱软胶囊对移植型鼠源S180肉瘤和H22肝癌细胞在荷瘤动物体内生长增殖的影响。方法 通过对昆明种受试小鼠右腋皮下接种S180肉瘤和H22肝癌细胞,分别建立体内两种不同移植型肿瘤病理模型,观察骆驼蓬总碱软胶囊在浓度为60 mg/kg、30 mg/kg及15 mg/kg连续ig给药10 d,对荷瘤小鼠体内瘤细胞裂殖生长增重的抑瘤作用及对脾脏指数、胸腺指数的影响。结果 骆驼蓬总碱软胶囊对鼠源移植型S180肉瘤细胞在三批次荷瘤小鼠体内的增殖生长均具有明显的抑制作用,抑瘤率在25.44%～48.81%之间,剂量组30 mg/kg抑瘤作用相对较好;对移植型H22肝癌细胞在三批次荷瘤小鼠体内的抑瘤率在21.91%～28.23%之间,剂量组60mg/kg抗癌作用相对较好;且显示对两种不同荷瘤小鼠的脾脏指数、胸腺指数均未见有显著性异常影响。结论 骆驼蓬总碱软胶囊对鼠源S180肉瘤细胞和H22肝癌细胞在荷瘤小鼠体内增殖生长均具有较好的抑瘤作用,且对荷瘤小鼠免疫器官亦未见有明显异常性毒性损伤的影响。