LncRNA HCG18通过靶向miR-140-3p/PD-L1通路对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长非编码(lncRNA)HCG18通过微小RNA-140-3p(miR-140-3p)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 选择人鼻咽癌CNE2细胞、人正常鼻黏膜上皮细胞HNEpC细胞,将CNE2细胞分为HCG18组、pcDNA3.1组、sh-HCG18组、sh-NC组、miR-140-3p组、miR-NC组、miR-140-3p inhibitor组、Scramble组、HCG18+miR-NC组、HCG18+miR-140-3p组、miR-140-3p inhibitor+sh-NC组及miR-140-3p inhibitor+sh-PD-L1组。用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测PD-L1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1 mRNA水平,生物信息学、双荧光素酶报告实验分析lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1的靶向关系。结果 CNE2细胞lncRNA HCG18、PD-L1蛋白及其mRNA表达水平高于HNEpC细胞,miR-140-3p表达水平低于HNEpC细胞(P <0.05)。上调lncRNA HCG18或下调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力增强,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平升高(P <0.05);下调lncRNA HCG18或上调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力降低,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平降低(P <0.05)。miR-140-3p与lncRNA HCG18、PD-L1均有靶向关系。上调miR-140-3p表达可逆转上调lncRNA HCG18对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用;沉默PD-L1可逆转下调miR-140-3p对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用。结论 过表达lncRNA HCG18可通过海绵化miR-140-3p,上调PD-L1表达,促进CNE2细胞增殖、迁移与侵袭。

LncRNA HCG18/miR-125b/TP53调控牙髓干细胞向神经元细胞分化的研究

目的旨在探讨LncRNA HCG18通过负调控miR-125b上调TP53对人牙髓干细胞(DPSCs)向神经元样细胞分化的影响。方法从正畸牙拔除术中获取的前磨牙中分离人DPSCs,将DPSCs诱导分化为神经元样细胞。qRT-PCR检测分化过程不同阶段HCG18、miR-125b的表达。在DPSCs细胞中转染oe-HCG18、pcTP53、miR-125b mimic及阴性对照,以qRT-PCR及WB方法检测各组Nestin、β-Ⅲtubulin、NSE的mRNA和蛋白,高尔基染色法评定各组树突棘密度以检测神经元发育情况。结果与未经诱导的DPSCs相比,DPSCs诱导分化组细胞的Nestin在分化期间先增高后降低,NSE、β-Ⅲtubulin及miR-125b表达水平逐渐升高,HCG18水平下调(P<0.05)。HCG18能抑制DPSCs向神经元样细胞分化,而miR-125b mimic能部分逆转HCG18对DPSCs神经分化的抑制,TP53能部分逆转miR-125b mimic对DPSCs神经分化的影响。结论HCG18能够通过负调控miR-125b激活TP53,抑制人DPSCs向神经元样细胞分化。

LncRNA HCG18影响鼻咽癌细胞PD-L1表达及CD8^(+)T细胞的杀伤功能研究

目的:探究LncRNA HCG18调控CD8^(+)T细胞抗鼻咽癌细胞的功能及机制。方法:qRT-PCR检测鼻咽癌组织及癌旁组织HCG18表达以及人鼻黏膜上皮细胞HNEpC和人鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2中HCG18表达。CNE1细胞分为si-HCG18组、si-NC组、si-HCG18^(+)PD-L1组,HNE-2细胞分为HCG18组、Vector组和HCG18^(+)sh-PD-L1组,上述各组CNE1细胞和HNE-2细胞分别与CD8^(+)T细胞共孵育24h(si-HCG18^(+)CD8^(+)T组、si-NC+CD8^(+)T组、si-HCG18^(+)PD-L1+CD8^(+)T组、HCG18^(+)CD8^(+)T组、Vector+CD8^(+)T组和HCG18^(+)sh-PD-L1+CD8^(+)T组),酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度,细胞毒性试剂盒检测肿瘤细胞裂解率。Western blot检测PD-L1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证HCG18与miR-20b-5p的靶向关系,miR-20b-5p与PD-L1的靶向关系。结果:鼻咽癌组织中HCG18表达显著高于癌旁组织,CNE1、CNE2、HONE-1、HNE-2细胞中HCG18表达均显著高于HNEpC细胞(P<0.05)。si-HCG18组CNE1细胞中PD-L1表达显著低于si-NC组(P<0.05),HCG18组HNE-2细胞PD-L1表达显著高于Vector组(P<0.05),相比于si-NC+CD8^(+)T组,si-HCG18^(+)CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P<0.05),CNE1细胞裂解率显著增加(P<0.05),相比于si-HCG18^(+)CD8^(+)T组,si-HCG18^(+)PD-L1+CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P<0.05),CNE1细胞裂解率显著降低(P<0.05)。相比于Vector+CD8^(+)T组,HCG18^(+)CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著降低(P<0.05),HNE-2细胞裂解率显著降低(P<0.05),相比于HCG18^(+)CD8^(+)T组,HCG18^(+)sh-PD-L1+CD8^(+)T组共孵育体系中INF-γ、TNF-α、IL-2浓度显著增加(P<0.05),HNE-2细胞裂解率显著增加(P<0.05)。miR-20b-5p为HCG18靶基因,PD-L1为miR-20b-5p靶基因。结论:HCG18上调鼻咽癌细胞PD-L1表达并且抑制CD8^(+)T细胞的抗肿瘤活性。

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

目的:探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖及迁移的分子机制。方法:收集2017年6月至2018年6月承德市中心医院62例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18或pcDNA3.1-HMGA2转染A549和NCI-H460细胞,用CCK-8法、Transwell实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18对miR-17-5p或miR-17-5p对HMGA2的靶向调控作用。构建敲降HCG18的A549细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果:lncRNA HCG18在NSCLC组织和细胞中均高表达(均P<0.01),发生淋巴结转移及晚期NSCLC患者中HCG18的表达显著提高,且HCG18高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低(均P<0.01)。转染Si-HCG18显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力(均P<0.01),上调上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),小鼠移植瘤体积显著减小(P<0.05)。双荧光素酶报告基因验证了HCG18与miR-17-5p靶向结合,以及miR-17-5p与HMGA2靶向结合。转染miR-17-5p后NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制(均P<0.01),促进上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),而转染miR-17-5p+HCG18后可抑制miR-17-5p的作用。结论:HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。

异紫堇碱调控LncRNA HCG18/miR-380-5p通路抑制乳腺癌生长及转移

目的探讨异紫堇碱(ICDE)对乳腺癌生长及转移的影响及其对LncRNA HCG18/miR-380-5p通路的调控作用。方法采用不同剂量的异紫堇碱处理人乳腺癌细胞MDA-MB-231(ICDE 10.8μmol·L^(-1)组、ICDE 32.5μmol·L^(-1)组、ICDE 97.4μmol·L^(-1)组),正常培养的MDA-MB-231细胞记为Con组。MDA-MB-231细胞分别转染si-NC、si-HCG18(si-NC组、si-HCG18组),pcDNA、pcDNA-HCG18分别转染入MDA-MB-231细胞后加入异紫堇碱处理细胞(ICDE 97.4μmol·L^(-1)+pcDNA组、ICDE 97.4μmol·L^(-1)+pcDNA-HCG18组);采用MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;采用qRT-PCR法检测乳腺癌组织与癌旁组织以及各组MDA-MB-231细胞中HCG18、miR-380-5p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测HCG18与miR-380-5p的靶向调控关系;采用Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果与Con组比较,ICDE 10.8μmol·L^(-1)组、ICDE 32.5μmol·L^(-1)组、ICDE 97.4μmol·L^(-1)组细胞增殖抑制率降低,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP-2、MMP-9蛋白水平降低;与癌旁组织比较,乳腺癌组织中HCG18的表达水平升高,miR-380-5p的表达水平降低,而ICDE可抑制HCG18的表达及促进miR-380-5p的表达;HCG18可靶向结合miR-380-5p;与si-NC组比较,si-HCG18组细胞增殖抑制率降低(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP-2、MMP-9蛋白水平降低;与ICDE 97.4μmol·L^(-1)+pcDNA组比较,ICDE 97.4μmol·L^(-1)+pcDNA-HCG18组miR-380-5p的表达水平降低,细胞增殖抑制率升高,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数均明显增多,MMP-2、MMP-9蛋白水平升高。结论异紫堇碱可通过调控HCG18/miR-380-5p通路从而抑制乳腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

下调lncRNA HCG18靶向调控miR-34a影响口腔鳞癌SCC4细胞增殖、侵袭以及迁移的分子机制

目的研究下调长链非编码RNA(lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)靶向调控miR-34a影响口腔鳞癌细胞增殖、侵袭以及迁移的分子机制.方法Realtime PCR方法测定HCG18在口腔鳞癌CAL27、SCC4、HB96细胞和正常口腔黏膜NOK细胞中的表达变化.在口腔鳞癌SCC4细胞中转染HCG18 shRNA,Realtime PCR方法测定下调效果,MTT测定各细胞增殖变化,Transwell小室测定各细胞侵袭和迁移能力变化,Western blot测定各细胞中N-cadherin、E-cadherin蛋白表达变化.生物信息学软件发现HCG18与miR-34a可能互为靶向关系,利用荧光素酶系统鉴定二者靶向关系.将miR-34a inhibitor、inhibitor control和HCG18 shRNA分别共转染到口腔鳞癌SCC4细胞中,利用上述方法测定各细胞增殖、迁移和侵袭能力变化.结果HCG18在口腔鳞癌CAL27、SCC4、HB96细胞中的表达水平高于正常口腔黏膜NOK细胞,并且口腔鳞癌SCC4细胞中HCG18表达水平最高,差异有统计学意义(P<0.05).转染HCG18 shRNA可以下调口腔鳞癌SCC4细胞中HCG18表达水平,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞中E-cadherin蛋白表达,抑制细胞中N-cadherin蛋白表达.HCG18靶向负调控miR-34a的表达.与共转染inhibitor control和HCG18 shRNA后的细胞相比,共转染miR-34a inhibitor和HCG18 shRNA后的细胞增殖、迁移和侵袭能力升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论下调HCG18靶向调控miR-34a抑制口腔鳞癌SCC4细胞增殖、侵袭以及迁移.

马甲子提取物调控HCG18对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探索马甲子提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:分别使用0,25,50,75μg·ml^(-1)马甲子提取物处理宫颈癌细胞SiHa,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测长链非编码RNA(lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)表达。在细胞中转染si-HCG18,观察抑制HCG18对细胞SiHa增殖、凋亡的影响。在细胞中转染pc DNA 3.1-HCG18,并使用75μg·ml^(-1)马甲子提取物进行处理,探讨过表达HCG18对马甲子提取物诱导的SiHa增殖、凋亡的影响。结果:与0μg·ml^(-1)马甲子提取物组比较,25,50,75μg·ml^(-1)马甲子提取物显著提高SiHa细胞的增殖抑制率、凋亡率、P21、Bax蛋白水平,显著减少Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量及HCG18表达量,且呈浓度依赖性(P<0.05)。抑制HCG18显著减少SiHa细胞HCG18表达量及Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量,显著提高P21、Bax蛋白水平、细胞增殖抑制率、凋亡率(P<0.05)。过表达HCG18能逆转马甲子提取物抑制细胞SiHa增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达,以及促进细胞SiHa凋亡、P21、Bax蛋白表达的作用。结论:马甲子提取物通过调控lnc RNA HCG18表达抑制宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA HCG18对人卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(HCG18)对人卵巢癌细胞SKOV3及顺铂耐药细胞SKOV3/DDP耐药性的影响及其作用机制。方法采用RT-PCR检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞中HCG18和miR-449的表达水平。采用HCG18 siRNA转染细胞,经12.5μg/ml顺铂处理48 h后,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况及细胞周期,荧光素酶报告基因实验检测HCG18、miR-449和Wnt1基因之间的靶向作用。结果与人正常卵巢上皮细胞NOEC比较,SKOV3中HCG18表达明显增高(P<0.05),而miR-449的表达明显降低(P<0.05)。HCG18 siRNA转染后,顺铂处理后的SKOV3和SKOV3/DDP细胞活性均明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率和G_(2)/M期细胞占比均明显高于对照组(P<0.05)。miR-449 inhibitor转染SKOV3及SKOV3/DDP细胞后,HCG18 siRNA对细胞活性、凋亡和细胞周期的不利影响均被部分逆转(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,HCG18可靶向结合miR-449的3'-UTR区,miR-449可靶向结合Wnt1基因的3'-UTR区。转染HCG18 siRNA可明显上调miR-449的表达水平(P<0.05)。单独转染HCG18 siRNA或miR-449 mimic均可明显下调Wnt1的mRNA表达水平(P<0.05)。结论下调HCG18可通过miR-449/Wnt1信号通路抑制人卵巢癌细胞活性,促进癌细胞凋亡,诱导细胞周期G_(2)/M期阻滞,进而提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。

卵巢癌组织lncRNA HCG18、miR-152-3p表达与临床病理特征及预后的关系研究

目的:探讨卵巢癌组织中长链非编码核糖核酸(RNA)人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)、微小RNA-152-3p(miR-152-3p)的表达情况与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选择2016年1月至2021年1月我院收治的卵巢癌患者185例为研究对象。采用聚合酶链式反应(PCR)法检测并比较术中获取的卵巢癌组织与癌旁组织(距离癌组织边缘≥2 cm)lncRNA HCG18、miR-152-3p表达。分析lncRNA HCG18、miR-152-3p表达与卵巢癌患者临床病理特征之间的关系。对卵巢癌患者实施3年随访,采用Kaplan-Meier生存曲线比较lncRNA HCG18、miR-152-3p高表达、低表达的卵巢癌患者3年累积生存率。采用Cox风险模型分析卵巢癌患者预后的影响因素。结果:lncRNA HCG18表达水平比较,卵巢癌组织高于癌旁组织(P<0.05),miR-152-3p表达水平比较,卵巢癌组织低于癌旁组织(P<0.05)。卵巢癌组织中lncRNA HCG18、miR-152-3p表达水平与国际妇产科联盟(FIGO)分期、分化程度、腹腔积液、淋巴结转移有关(P<0.05)。高lncRNA HCG18组3年累积生存率为41.57%(37/89),低于低lncRNA HCG18组的70.65%(65/92),差异有统计学意义(P<0.05);高miR-152-3p组3年累积生存率75.53%(71/94),高于低miR-152-3p组的35.63%(31/87),差异有统计学意义(P<0.05)。Cox比例风险模型分析结果显示,FIGO分期III~IV期、分化程度为高、中分化、腹腔积液、淋巴结转移、lncRNA HCG18升高,miR-152-3p降低是卵巢癌患者预后不良的危险因素。结论:卵巢癌组织中lncRNA HCG18高表达,miR-152-3p低表达与恶性临床病理特征及预后不良的发生有关。

LncRNA HCG18调控miR-185-5p/AGER轴影响糖尿病肾病内质网应激和自噬

目的本研究旨在探讨LncRNA HCG18调控miR-185-5p/AGER轴对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)内质网应激和自噬的影响。方法收集DN患者肾脏组织,建立高糖(high glucose,HG)诱导的足细胞损伤模型。检测DN患者肾组织与DN细胞模型中HCG18的表达。确定HCG18在细胞中的定位表达。证实HCG18与miR-185-5p、miR-185-5p与晚期糖基化终产物特异性受体(advanced glycosylation end-product specific receptor,AGER)的调控关系。qRT-PCR和western blot检测内质网应激相关因子(CHOP、XBP1)及自噬相关因子(Beclin-1、p62)的表达。结果相对于非DN患者,DN患者肾组织中HCG18高表达(P<0.05)。相对于正常糖(normal glucose,NG)组,HG模型中内质网应激相关因子(CHOP、XBP1)的mRNA和蛋白表达增加而自噬相关因子Beclin-1的mRNA和蛋白表达被抑制,p62的mRNA和蛋白表达增强(均P<0.05)。HCG18通过调控miR-185-5p/AGER轴发挥生物学作用。敲低HCG18能减轻内质网应激,激活自噬并减少足细胞损伤,该作用被miR-185-5p抑制剂部分逆转。结论HCG18调控miR-185-5p/AGER信号轴并通过调控内质网应激和自噬促进DN的发生。