HECW2通过被CREB1转录激活而增强KIRC细胞活力并促进细胞侵袭和迁移

目的:探究E3泛素连接酶HECW2(HECT,C2 and WW domain containing E3 ubiquitin protein ligase 2)在肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)细胞活力、凋亡、侵袭和迁移中的作用及其分子调控机制。方法:借助GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库分析HECW2在泛癌中的表达水平,同时利用SangerBox数据库分析HECW2表达水平与泛癌免疫浸润和预后的关系。在此基础上,进一步通过体外实验探究HECW2在KIRC中的调控作用及相关分子机制。首先,通过RT-qPCR和Western blot分析HECW2在KIRC细胞系中的表达水平;其次,通过CCK-8实验分析敲减HECW2对KIRC细胞活力的影响;再者,通过流式细胞术分析敲减HECW2对KIRC细胞凋亡的影响;最后,通过划痕实验和Transwell实验分析敲减HECW2对KIRC细胞迁移和侵袭的影响。此外,通过Western blot和ChIP-qPCR探究HECW2是否在转录因子cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP response element-binding protein 1,CREB1)的转录激活作用下影响KIRC细胞。结果:泛癌分析结果显示,HECW2在KIRC和胰腺癌中显著高表达,而在肺腺癌和肺鳞状细胞癌中显著低表达,且HECW2表达水平与这4种肿瘤的免疫浸润水平呈显著正相关;但HECW2高表达组和低表达组相比,仅KIRC患者生存期长短有显著差异,即HECW2表达水平越高,KIRC患者总生存期、疾病特异性生存期和无进展间期越长,预后越好。体外实验结果表明,HECW2在KIRC组织和细胞系中均呈显著高表达;敲减HECW2可显著抑制KIRC细胞活力、侵袭和迁移,并促进其凋亡。敲减CREB1可显著降低KIRC细胞中HECW2的mRNA和蛋白表达水平,而过表达CREB1则观察到相反的结果。ChIP-qPCR实验结果表明CREB1能够与HECW2的启动子区域结合,提示HECW2能够被CREB1转录激活。结论:HECW2可在CREB1的转录激活作用下增强KIRC细胞活力并促进细胞侵袭和迁移。