低表达ACOT4促进草酸钙对HK2细胞损伤和结晶形成

目的探讨酰基辅酶A硫代酯酶4(acyl-CoA thioeaterase 4,ACOT 4)的表达对草酸钙结石形成的影响。方法以人肾小管上皮细胞HK2细胞为研究对象,使用草酸钙处理HK2细胞,并使用siRNA干扰HK2细胞中ACOT4的表达。qPCR和Western blot法检测HK2细胞中基因的表达水平;CCK-8法检测细胞活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;LDH实验检测细胞损伤情况;晶体黏附实验检测HK2细胞对草酸钙结晶的黏附能力。结果草酸钙可以调节HK2细胞中ACOT4的表达;干扰ACOT4可以显著抑制HK2细胞的增殖能力,并且增强草酸钙对HK2细胞的活性降低、损伤和凋亡的影响;同时,干扰ACOT4可以显著促进HK2细胞对草酸钙晶体的黏附能力。结论敲低ACOT4可以促进草酸钙对HK2细胞的损伤并促进HK2细胞对草酸钙晶体的黏附能力。

circ_UBE2C通过调控miR-107/HK2分子轴促进肺癌细胞增殖和糖酵解

目的探讨circ_UBE2C对肺癌细胞增殖和糖酵解的影响及其作用机制。方法基于TCGA数据库分析circ_UBE2C、miR-107和己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)在肺癌组织和正常肺组织中的表达情况。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析circ_UBE2C/miR-107/HK2表达量和肺癌患者生存期的相关性。常规培养人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)和人肺癌细胞株(A549、NCI-H460和NCI-H1299),采用qRT-PCR检测circ_UBE2C和miR-107的表达量,Western blot检测HK2和PCNA蛋白的表达量。将A549和NCI-H1299细胞分为空白组(NC)、circ_UBE2C敲减组(si-circ)、HK2敲减组(si-HK2)、同时敲减miR-107+HK2组(miR-inhibitor+si-HK2)和同时敲减circ_UBE2C+miR-107组(si-circ+miR-inhibitor)。CCK-8和克隆形成实验分析细胞增殖活力。葡萄糖摄取比色测定试剂盒、乳酸检测试剂盒和ATP含量测定试剂盒分析A549和NCI-H1299细胞葡萄糖摄取量、乳酸生成量和ATP产生量。Seahorse XF糖酵解应激测试试剂盒和Seahorse XF细胞线粒体应激测试试剂盒检测细胞外酸化率(extracellular acidification ratio,ECAR)和细胞耗氧率(oxygen consumption ratio,OCR)。双荧光素酶报告基因实验评估circ_UBE2C和miR-107、miR-107和HK2的靶向关系。结果与正常组织相比,肺癌组织中circ_UBE2C和HK2表达上调,miR-107表达下调(P<0.05)。与BEAS-2B细胞相比,A549和NCI-H1299细胞中circ_UBE2C和HK2表达量升高,miR-107表达下调(P<0.05)。生存分析显示,circ_UBE2C和HK2高表达或miR-107低表达肺癌患者的生存期较短(P<0.05)。相比于NC组,si-circ或si-HK2组A549和NCI-H1299细胞增殖活力、葡萄糖摄取量、乳酸生成量、ATP产生量、ECAR和OCR均显著减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因证实,circ_UBE2C靶向负调控miR-107,且HK2是miR-107的靶基因。与si-HK2组相比,miR-inhibitor+si-HK2组和si-circ+miR-inhibitor组中A549和NCI-H1299细胞增殖活力和糖酵解水平显著增加。结论敲减circ_UBE2C可显著抑制肺癌细胞增殖和糖酵解水平,其机制是通过靶向上调miR-107抑制HK2表达。

硫氢化钠对大鼠肺缺血/再灌注引发的细胞焦亡及HK2-NLRP3-GSDMD通路的影响

目的:探讨硫氢化钠(NaHS)对大鼠肺缺血/再灌注(I/R)引发的细胞焦亡及己糖激酶2(HK2)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)-消皮素D(GSDMD)通路的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为6组,每组6只:对照(control)组、control+NaHS组、I/R组、低剂量NaHS+I/R(L+I/R)组、中剂量NaHS+I/R(M+I/R)组和高剂量NaHS+I/R(H+I/R)组。于造模前30 min腹腔注射1.5 mL NaHS溶液。在缺血30 min、再灌注1 h时立即取左肺组织,记录并计算肺湿/干重比和总肺含水量;HE染色观察肺组织形态;试剂盒检测丙二醛、髓过氧化物酶和乳酸水平;ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18水平;Western blot、qRT-PCR和免疫荧光染色检测糖酵解和细胞焦亡相关指标表达变化。结果:与control组相比,control+NaHS组各项检测指标均无显著差异(P>0.05),I/R组可见明显肺损伤,氧化应激反应和乳酸含量显著增加,糖酵解和细胞焦亡相关指标上调(P<0.05或P<0.01);与I/R组相比,L+I/R组以上检测指标显著下降(P<0.01)或无显著差异(P>0.05),M+I/R组以上检测指标不同程度降低(P<0.05或P<0.01),而H+I/R组以上各项指标均无显著差异(P>0.05)。结论:中剂量(56μmol·L^(−1)·kg^(−1))NaHS通过抑制HK2-NLRP3-GSDMD通路减少细胞焦亡的发生,从而减轻大鼠肺I/R损伤。

HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨HK2和VDAC1在二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡中的作用。方法采用剂量递增方法,建立二乙酰吗啡成瘾大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为3组,正常组(Control,n=10)皮下注射等量生理盐水;模型组(Model,n=15)首次皮下注射二乙酰吗啡剂量为5 mg/kg,以后逐日递增剂量2.5 mg/(kg·d),连续注射20 d;模型+10 D组(Model+10D,n=15)在模型组基础上继续递增剂量至第10天。采用ELISA法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT)含量;采用HE染色观察各组心肌组织病理变化;采用TUNEL染色检测各组心肌组织细胞凋亡;采用免疫组化、RT-qPCR和Western blot检测HK2、VDAC1及凋亡相关因子的mRNA和蛋白的表达变化。结果HE染色发现随着二乙酰吗啡干预时间的延长,心肌组织表现出不同程度的损伤。与正常组相比,模型组中血清LDH、GOT含量及心肌凋亡率升高,HK2和抗凋亡因子Bcl-2的mRNA和蛋白水平下降,VDAC1和促凋亡因子Bax、Caspase-3的mRNA和蛋白水平升高,Clevead Caspase-3蛋白水平升高;与正常组相比,模型+10 D组中以上指标,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二乙酰吗啡可导致心肌细胞凋亡,HK2和VDAC1可能参与了二乙酰吗啡致心肌细胞凋亡的过程。

麝香酮抑制低氧下胃癌细胞中HIF-1α以及HK2、VEGF的表达

目的探究麝香酮在低氧状态下对胃癌细胞中缺氧诱导因子1(HIF-1α)以及己糖激酶-2(HK2)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达的影响。方法通过CEPIA数据库在线分析HIF-1α、HK2、VEGF在胃癌STAD(Stomach adenocarcinoma)与癌旁组织中的表达情况。利用KM-plotter网站的Log-rank、Breslow检验分析基因表达与胃癌预后的关系。利用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测三种基因的mRNA表达情况。用蛋白质印迹法(Western Blot)分析胃癌HGC27细胞在低氧(由CoCl_(2)形成)时,麝香酮对HIF-1α、VECF、HK2 mRNA和蛋白表达的影响。结果HIF-1α和HK2在胃癌组织呈现高表达(P<0.01),预后评估提示VECF为胃癌风险基因(P<0.05),与胃癌患者预后不良相关。qRT-PCR结果显示,用麝香酮干预低氧状态下的HGC27细胞8h后,VECF的mRNA表达量下调,24h后,HIF-1α、HK2的mRNA表达量下调;WesternBlot结果显示,用麝香酮干预低氧状态下的HCC27细胞24h后,HIF-1α蛋白表达量降低(P<0.05)。结论麝香酮可能对低氧状态下的HIF-1α、HK2和VECF的mRNA和蛋白表达产生抑制作用.

HK2在初治急性髓系白血病患者骨髓中的表达及对预后的影响

目的:检测HK2基因在初治急性髓系白血病(AML)骨髓中的表达水平并探讨其对患者临床特征及预后的影响。方法:采用RT-q PCR法检测90例初治AML患者骨髓中HK2基因的表达情况,并与18例异基因造血干细胞移植供者进行对比,进一步分析HK2基因的表达水平与临床特征及预后的关系。结果:相较于正常对照组,初治AML组的HK2基因表达量显著增高(P<0.01);相较于2个疗程诱导化疗达到总反应(OR,完全缓解+完全缓解伴血细胞不完全恢复)的患者,未达到OR的患者HK2基因的表达量显著增高(P<0.05);2个疗程诱导治疗是否达到OR的患者HK2基因相对表达量比较存在显著差异(P<0.001);HK2高表达患者中位生存时间显著短于HK2低表达患者(P<0.05);Cox多因素分析结果显示,预后分层、HK2基因表达量、2个疗程诱导治疗是否达到OR均是AML患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论:初治AML患者骨髓中HK2基因的表达水平相较于异基因造血干细胞移植供者显著升高,高表达HK2基因患者预后较差,HK2基因表达量是AML患者预后的独立影响因素。

短链脂肪酸乙酸钠减轻低氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞系HK2损伤

目的研究短链脂肪酸乙酸钠对低氧/复氧(H/R)导致人肾小管上皮细胞系(HK2)的保护作用及作用机制。方法体外建立H/R细胞模型,经乙酸钠(SA)提前预处理HK2细胞2 h,CCK8试剂盒检测细胞存活率,试剂盒检测炎性因子、细胞活性氧和ATP产量;流式细胞术测定线粒体膜电位(MMP)和线粒体氧化应激产物(mitoSOX)浓度;电镜观察线粒体超微结构;Western blot检测炎性信号通路IκB-α/NF-κB和线粒体能量障碍信号通路AMPK/PGC-1α的表达;结果与对照组相比,H/R组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞内ROS、mitoSOX、炎性因子表达显著升高(P<0.05),线粒体超微结构严重受损,ATP含量和MMP显著降低(P<0.05),p-IκB-α,NF-κB-p-P65蛋白表达显著升高,p-AMPK和PGC-1α蛋白表达显著降低(P<0.05);与H/R组相比,乙酸钠显著增加HK2细胞的存活率(P<0.05),抑制细胞内ROS、mitoSOX和炎性因子的释放,抑制线粒体超微结构损伤,ATP和MMP的下降(P<0.05),同时促进p-AMPK和PGC-1α蛋白表达,抑制p-IκB-α和NF-κB-p-P65蛋白表达(P<0.05)。结论乙酸钠通过抑制IκB-α/NF-κB、激活AMPK/PGC-1α信号通路对H/R诱导的HK2细胞发挥抗炎、抗氧化应激、线粒体结构和功能的保护作用。

毛蕊花糖苷通过抑制AKT/mTOR通路减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡

目的 探讨毛蕊花糖苷(acteosides,Act)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK2)凋亡的影响及其作用机制。方法 采用CCK-8法检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和不同葡萄糖浓度组(33,40,50,60 mmol/L)HK2细胞活性,筛选最佳高糖干预浓度;检测对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(mannitol,Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、不同浓度Act组(50 mmol/L葡萄糖+25,50,75,100,150,200μmol/L Act)和卡托普利(captopril,Cap)组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)HK2细胞活性,筛选最佳Act干预浓度。HK2细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+44.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、Act组(50mmol/L 50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Act)、卡托普利组(50 mmol/L葡萄糖+100μmol/L Cap)和Ly294002(PI3K抑制剂)组(50 mmol/L葡萄糖+50μmol/L Ly294002)分别干预48 h。荧光染色法和流式细胞术检测各组HK2细胞凋亡情况,Western blot法检测各组Bcl-2、Bax、Caspase-3、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR的表达。结果 与对照组相比,50 mmol/L葡萄糖组HK2细胞活性最差(P<0.000 1);相比于高糖组,100μmol/L Act组细胞活性最强(P<0.000 1)。与对照组和甘露醇组相比,高糖组TUNEL阳性表达增加,凋亡细胞数量增加(P<0.05),Bcl-2表达降低,Bax,cleaved Caspase-3,p-mTOR,p-AKT表达均升高(P<0.05);相比于高糖组,Act组和Cap组TUNEL阳性表达减少,凋亡细胞数量减少(P<0.05),Bcl-2表达升高,Bax、cleaved Caspase-3、p-mTOR和p-AKT表达均降低(P<0.05);相比于高糖组,Act组和Ly294002组Bcl-2表达增加,Bax、Caspase-3表达降低(P<0.05)。结论 Act可以通过抑制AKT/mTOR信号通路的激活减轻高糖诱导的HK2细胞凋亡。

铁皮石斛通过GLUT4和HK2对肺癌及肺癌细胞糖酵解的影响机制

目的 研究铁皮石斛通过葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和己糖激酶2(HK2)对肺癌及肺癌细胞糖酵解的影响机制。方法 采用MTT法检测铁皮石斛提取物对人肺癌细胞A549活力的影响,并分析A549细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量;建立LLC肺癌细胞荷瘤小鼠模型,设立对照组、灌胃铁皮石斛提取物低剂量组及高剂量组,观察各组小鼠体重变化和肿瘤生长,通过免疫印迹法(Western blot)检测铁皮石斛提取物对A549细胞、肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中GLUT4、HK2和PKM2蛋白表达水平的影响。结果 与空白对照组相比,25.0~800.0 mg/L铁皮石斛提取物作用于A549细胞的活力呈剂量依赖性降低(P<0.05),且能够明显降低A549细胞中葡萄糖消耗量和乳酸生成量(P<0.05);肺癌荷瘤小鼠体内实验结果表明,200.0 mg/kg和400.0 mg/kg铁皮石斛提取物能够抑制肺癌荷瘤小鼠体内肿瘤生长,并且不引起小鼠体重变化,表现出良好的药物安全性;铁皮石斛提取物能够下调A549细胞和肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中GLUT4和HK2蛋白表达,对PKM2表达影响不明显。结论 铁皮石斛提取物治疗肿瘤的作用,可能与下调GLUT4和HK2、抑制肿瘤组织糖酵解有关。

白藜芦醇苷对缺氧复氧HK2细胞损伤保护作用的研究

目的探讨白藜芦醇苷(polydatin,PD)对缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法在缺氧仓中充入95%N2、5%CO2混合气体模拟缺氧环境,将人近曲肾小管上皮细胞(human kidney proxi-mal tubular epithelial cell,HK2)根据不同处理分为4组:正常对照组、H/R组、PDTC组和PD处理组,除对照组外每组均予以先缺氧24h后复氧6h处理;MTT法检测细胞成活数,免疫组化法检测NF-κBp65蛋白表达情况,RT-PCR检测ICAM-1 mRNA转录,ELISA法检测ICAM-1蛋白表达情况。结果PD处理组各对应时间点HK2细胞数量明显增多于H/R组,统计学差异显著(P<0.05)。PD处理组NF-κBp65蛋白阳性表达,ICAM-1 mRNA转录及ICAM-1蛋白表达均明显低于对照组,有统计学差异(P<0.05)。PD处理组与PDTC组各对应时间点的各项检测指标比较均无显著统计学差异(P>0.05)。结论PD对H/R诱导的HK2细胞损伤具有一定的保护作用。

人参养荣汤对Lewis肺癌糖酵解途径相关酶LDH-A、HK2基因表达的影响

目的探究人参养荣汤对Lewis肺癌细胞糖酵解途径中乳酸脱氢酶-A (lactate dehydrogenase-A,LDH-A)和己糖激酶2 (hexokinase-2,HK2)基因表达的影响。方法 SPF级雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为空白组10只,实验组50只。于实验组小鼠右侧前肢腋下接种Lewis肺癌细胞(LLC)悬液建立Lewis肺癌模型,模型建立后将实验组小鼠随机分为模型组、CTX组(环磷酰胺组)、人参养荣汤低剂量组、人参养荣汤中剂量组、人参养荣汤高剂量组,每组10只。造模次日计为第1天,空白组和模型组用生理盐水灌胃,CTX组腹腔注射环磷酰胺,人参养荣汤各剂量组使用相应浓度中药灌胃,持续干预21 d。小鼠于第22天采用脱颈椎法处死,完整剥离小鼠的肿瘤、胸腺和脾脏,测定各组小鼠体质量、瘤质量、抑瘤率、胸腺指数、脾指数,采用qRT-PCR检测LDH-A和HK2 mRNA的表达水平。结果与模型组相比,CTX组小鼠体质量明显降低(P<0.01);与CTX组相比,人参养荣汤高、中、低剂量组小鼠体质量显著上升(P<0.01)。与模型组相比,人参养荣汤高剂量组小鼠的瘤质量、胸腺指数、脾指数显著下降(P<0.01);人参养荣汤高剂量组和CTX组LDH-A mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);人参养荣汤高、中、低剂量组HK2 mRNA表达差异无统计意义。与CTX组相比,人参养荣汤中剂量组LDH-A mRNA表达水平升高(P<0.05),人参养荣汤中剂量组HK2 mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论人参养荣汤能够通过下调糖酵解途径LDH-A的基因表达,从而减缓肺癌细胞的糖酵解进程。

HK2基因表达与泌尿系肿瘤的发生、免疫细胞浸润及预后的相关性分析

目的:利用数据库和生物信息学的方法分析己糖激酶2(HK2)在泌尿系肿瘤中表达水平、预后及与肿瘤免疫细胞浸润的相关性.方法:研究HK2在癌组织和癌旁组织mRNA表达水平,其表达水平与肿瘤预后的相关性,分析HK2表达水平与肿瘤免疫细胞浸润、免疫细胞标志物表达水平、肿瘤微环境免疫细胞和基质细胞浸润的相关性.结果:HK2表达在泌尿系肿瘤组织中均显著性升高,在膀胱癌(BLCA)中随肿瘤分级增加而降低,在高级别肾乳头状细胞癌(KIRP)和前列腺癌(PRAD)中HK2表达水平显著高于低级别表达水平;BLCA和肾透明细胞癌(KIRC)中HK2低表达的患者总体生存率显著低于高表达患者,而KIRP中则相反.HK2表达水平与BLCA和KIRP中多数免疫细胞浸润水平无明显相关性,与KIRC和PRAD中多数免疫细胞浸润水平呈显著正相关.与免疫细胞标志物表达相关性分析发现,HK2在BLCA中表达与免疫细胞标志物表达呈显著负相关,而在KIRC、KIRP和PRAD中大多呈显著正相关.HK2在BLCA和KIRC中表达水平与肿瘤微环境呈显著正相关,在PRAD和KIRP中则无显著相关性.结论:HK2表达水平与BLCA、KIRC和KIRP患者的预后相关;HK2表达水平与免疫细胞浸润性、免疫细胞标志物表达、肿瘤微环境免疫细胞和基质细胞浸润等相关.

重组海葵肽类毒素hk2a对慢性充血性心力衰竭新西兰兔左心功能的影响

目的观察重组海葵肽类毒素hk2a对慢性充血性心力衰竭(CCHF)新西兰白兔左心功能的影响。方法采用腹主动脉缩窄术建立新西兰兔CCHF模型,利用超声心动图评价静脉注射hk2a前后不同时段兔左心功能的变化情况,并设立对照组进行比较。结果hk2a能够在给药后即刻明显增加实验兔的左室射血分数(P<0.05),作用时间持续60 min以上(P<0.05)。与西地兰治疗相比具有起效快、作用强等特点。结论新型海葵肽类毒素hk2a能够明显改善CCHF新西兰兔的左心功能。

血清hK2 ELISA方法的建立及在前列腺癌诊断中的应用

目的通过建立血清hK2 ELISA检测方法,探讨血清hK2水平对前列腺癌的诊断意义,为临床鉴别前列腺癌与前列腺增生提供一种特异、敏感、实用的方法.方法利用hK2单克隆抗体建立检测血清hK2水平的ELISA方法,并利用本实验建立的方法对30例前列腺癌患者,26例前列腺增生患者,30例正常对照的血清进行hK2水平的检测.结果 1)血清hK2水平测定值(A450nm)分别为:a.前列腺癌组(0.701±0.113);b.前列腺增生组(0.212±0.145);c.正常对照组(0.198±0.015).前列腺癌组血清hK2水平与前列腺增生、正常对照组相比较有显著差异(P<0.01).2)本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法的敏感度为83.3%,特异度为94.6%,准确度为87.2%.结论 1)前列腺癌患者血清hK2水平与前列腺增生患者及正常人血清hK2水平差异显著,不存在重叠.血清hK2水平能够对前列腺癌、前列腺增生进行鉴别诊断.2)在鉴别前列腺癌和前列腺增生方面,本研究建立的检测血清hK2水平的ELISA方法,与临床上应用的病理学诊断方法符合率高,具有临床实用价值.

HK2在肝癌中的差异表达及其对肝癌细胞的影响

目的探究己糖激酶2(HK2)在肝癌组织中的差异表达及其对肝癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法收集48例肝癌组织及对应的癌旁组织,免疫组化检测HK2表达量;Western blot法检测人肝癌细胞Hep G2及正常肝细胞L-02中HK2表达量。统计并分析HK2表达与肝癌临床病理特征关系。构建4个HK2小发卡RNA(shRNA)载体,Western blot法检测干扰效率,选择沉默最优的建立稳定转染的细胞株。针对空白组(正常培养、未转染质粒)、control shRNA组(转染control shRNA)、HK2 shRNA组(转染shRNA_3) Hep G2细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡。结果 HK2在肝癌组织中表达显著升高,其表达与肿瘤直径、TNM分期、组织病理分级存在相关性。HK2表达的降低可显著降低Hep G2细胞增殖活性,使得细胞周期发生明显转变,更少停滞在S期;显著升高Hep G2细胞凋亡率。结论HK2表现出了较强的抗肿瘤潜能,具有一定的临床意义,为将来基于HK2进行肝癌临床诊断、预后判断及分子靶向治疗提供新的思路和理论依据。

HK2通过Akt1/p-Akt1上调Cdc42表达促进宫颈癌细胞迁移和侵袭

目的:探究己糖激酶2(HK2)通过Akt1/p-Akt1/Cdc42促进宫颈癌细胞迁移和侵袭的作用机制。方法:G418压力筛选并获取稳定表达HK2蛋白的HeLa和SiHa细胞系;Western blot和细胞免疫化学鉴定HK2蛋白在HeLa和SiHa细胞系中的表达水平;细胞划痕实验检测HK2对HeLa和SiHa体外划痕愈合能力的影响;Transwell迁移、侵袭实验检测HK2对HeLa和SiHa细胞体外迁移和侵袭能力的影响;GEPIA数据库分别分析宫颈癌中HK2的表达与Akt1、Cdc42表达的相关性;Western blot检测Akt1、p-Akt1、Cdc42蛋白在HK2过表达的HeLa细胞和SiHa细胞中的表达情况;在HK2过表达的HeLa、SiHa细胞中应用Akt1/p-Akt1抑制剂MK2206观察Cdc42的表达及细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:成功构建HK2稳定表达的HeLa、SiHa细胞系;过表达HK2促进了HeLa、SiHa细胞的划痕愈合能力,促进了HeLa、SiHa细胞的体外迁移和侵袭;GEPIA在线数据库结果显示在宫颈癌中HK2表达与Akt1、Cdc42表达均呈正相关;过表达HK2上调了Akt1、p-Akt1、Cdc42蛋白在HeLa、SiHa细胞中的表达;在HK2过表达HeLa、SiHa细胞中,MK2206的使用抑制了HK2对Cdc42表达上调及细胞迁移和侵袭的促进作用。结论:HK2可能通过Akt1/p-Akt1途径上调Cdc42蛋白的表达促进HeLa和SiHa细胞的迁移和侵袭。

补阳还五汤对高盐致HK2细胞凋亡保护作用机制研究

目的 探究补阳还五汤水提物冻干粉对高盐诱导的人肾小管上皮细胞(HK2)损伤的保护作用。方法 采用高盐(150 mmol/L)干预HK2细胞,诱导细胞损伤,通过加入不同剂量的补阳还五汤(0.5%、1%、2%)作用后,分别采用细胞增殖毒性检测法(CCK-8法)检测补阳还五汤对细胞的保护作用,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧表达,ELISA检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量。结果 与空白组相比,高盐组细胞数目明显减少,形态出现异常改变,同时培养液中漂浮细胞明显增多,细胞活性显著降低(P<0.05);细胞凋亡结果显示,高盐组细胞凋亡比例显著提高(P<0.05);ROS检测结果表明,高盐组细胞ROS表达显著增高(P<0.05);ELISA检测结果表明,高盐组细胞上清液中IL-1β、IL-18含量显著降低。与高盐组相比,补阳还五汤可以显著促进细胞增殖,抑制ROS表达及高盐诱导的细胞凋亡反应,减少IL-1β、IL-18等反应(P<0.05),治疗作用呈现一定的剂量依赖性。结论 补阳还五汤能够抑制高盐诱导的HK2细胞凋亡而发挥细胞保护作用。

miR-125b靶向调控HK2表达增强乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的研究

目的:探讨miR-125b靶向调控HK2对乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响。方法:将miR-125b模拟物及其阴性对照转染至乳腺癌MCF-7细胞,分别记为miR-125b组和miR-NC组,采用RT-PCR检测MCF-7细胞中miR-125b和HK2mRNA的表达,Western blotting检测HK2蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-125b和HK2的靶向关系。另外将miR-125b模拟物和pcDNA3.1-HK2质粒共转染至MCF-7细胞中,记为miR-125b+HK2组,通过克隆形成实验和流式细胞仪检测miR-NC组、miR-125b组和miR-125b+HK2组细胞的存活分数和凋亡率。结果:与miR-NC组相比,转染miR-125b模拟物后MCF-7细胞中miR-125b表达升高(P<0.01),而HK2mRNA和蛋白的表达降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实HK2是miR-125b的潜在靶基因。与miR-NC组相比,miR-125b组细胞的存活分数降低、凋亡率升高(P<0.01);与miR-125b组相比,miR-125b+HK2组存活分数降低明显升高而凋亡率降低(P<0.01)。结论:miR-125b可通过靶向调控HK2表达增强乳腺癌MCF-7细胞的放射敏感性。

猪HK2基因的克隆及序列分析

为克隆猪己糖激酶2基因,分析其生物功能,采用已报道的人及小鼠HK2的cDNA序列为依据,利用电脑克隆策略获得的ESTs设计引物,扩增新的猪HK2基因cDNA序列。将PCR产物克隆测序,分析获得的核苷酸序列及其编码蛋白的特性,分离的开放阅读框全长2754bp,编码917个氨基酸,与人和小鼠的核苷酸序列同源率分别为90%和87%,与人和小鼠的氨基酸序列同源率分别为96%和94%,利用生物信息学软件分析出此蛋白的理化特性并预测了其蛋白结构,为进一步开展猪HK2基因的结构功能、表达调控的相关研究奠定了基础。

hK2及其相关指标在前列腺癌诊断中的应用

血清hk2、hk2 /f PSA以及hk/2 (f PSA/t PSA)是一类新的前列腺癌的筛选诊断指标 ,与PSA以及f PSA/t PSA比较 ,对前列腺癌的诊断可能更准确、更具有特异性 ,能使更多的非前列腺癌患者免受前列腺活检之苦。本文就hk2的生物学性质、常用的检测方法以及hk2及其相关指标在前列腺癌诊断中的应用作一综述。