蟾蜍灵诱导人白血病HL60细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨中药蟾蜍灵诱导白血病HL6 0细胞凋亡作用。方法 :应用台盼蓝染色法测定HL6 0细胞的生长曲线 ,应用相差显微镜、电子显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等技术分析细胞凋亡。结果 :蟾蜍灵与HL6 0细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,细胞呈典型的凋亡形态学改变 :细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,呈新月形 ,可见由膜包被细胞内容物的凋亡小体的产生 ;细胞DNA裂解成 180～ 2 0 0bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带。结论 :蟾蜍灵诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。

补骨脂素对HL60细胞凋亡及细胞内Ca^(2+)浓度影响的探讨

目的:探讨补骨脂素对HL60细胞凋亡的影响,以及细胞内Ca2+浓度与凋亡之间关系。方法:采用MTT比色分析法测定补骨脂素对HL60的细胞毒性影响,流式细胞仪及激光共聚焦显微镜测定HL细胞内Ca2+浓度和凋亡比率。结果:补骨脂素对HL60细胞生长具有抑制作用,补骨脂素促进细胞凋亡比率,细胞凋亡与Ca2+浓度成正相关。结论:补骨脂素影响HL60细胞凋亡,Ca2+介导的细胞凋亡是补骨脂素抑制肿瘤细胞生长的可能机制之一。

通关藤诱导白血病细胞U937,HL60细胞凋亡的实验研究

目的探讨通关藤抑制白血病细胞增殖作用及其机制。方法以不同浓度的通关藤提取物制剂处理白血病细胞U937、HL60，1～5d，以四甲基偶氮唑盐（MTY）法检测对细胞增殖的影响，以Annexin V／P1双染法检测细胞的凋亡程度，Western blot检测凋亡相关蛋白caspase3，PARP改变，以JC-1染色法检测线粒体跨膜电位（△ψm）水平。结果通关藤提取物制荆呈时间和剂量依赖性抑制U937、HL60细胞增殖，50μL／mL时能明显降低线粒体跨膜电位（△Ⅲm），活化caspase3，剪切PARP，诱导细胞凋亡。结论通关藤提取物制剂对U937、HL60白血病细胞有显著的抑制和诱导凋亡作用，能通过降低线粒体跨膜电位途径触发白血病细胞凋亡。

可见光响应掺氮TiO_2的制备及对白血病HL60细胞体外杀伤效应的研究

采用硫酸钛与氨水反应制备掺氮TiO2。UV-Vis漫反射谱研究表明掺氮的TiO2在紫外区的吸收边明显红移(约20nm),并且在400nm^530nm出现新的吸收区域,光吸收阈值从380nm扩展到530nm。XPS分析表明,在TiO2掺杂的N为间隙态,而且还存在大量的氧空位。氧空位在导带下形成的窄带使得掺氮的TiO2在400nm^530nm出现新的吸收区域。用MTT法测量了掺氮TiO2杀伤白血病HL60细胞的活性。结果显示,无论有无可见光照射,掺氮TiO2对白血病肿瘤细胞杀灭效果明显好于未掺杂TiO2。

甲磺酸甾醇类药物诱导HL60细胞分化及其蛋白质组表达差异的研究

目的研究新的甲磺酸甾醇类药物(NSC67657)对HL60细胞的诱导分化作用,并对HL60细胞在药物诱导分化前后的蛋白质组表达差异进行分析。方法首先在基因和蛋白水平验证NSC67657对CEBPα的诱导作用;然后采用MTT法探索在不同药物浓度作用下HL60细胞的增殖水平;采用细胞化学染色了解HL60细胞药物作用后的大概分化方向;然后采用流式细胞仪检测细胞在不同时间、不同药物浓度作用下细胞表面分化抗原的表达,筛选最佳药物诱导浓度和时间;再用流式细胞技术和电镜观察,对以最佳的药物浓度和诱导时间作用下HL60细胞进行细胞周期和超微结构观察,以及预测在该药物作用浓度和时间下是否有凋亡发生;最后应用改良双向电泳技术对药物作用前后HL60细胞蛋白质组进行分离,并对差异蛋白点进行质谱分析。结果NSC67657可以促进CEBPα基因和蛋白的表达增高。通过比较可见药物处理后的HL60细胞增殖受抑,细胞化学染色的结果表明NSC67657处理后的HL60细胞向单核系分化,并以药物浓度为10μmol·L-1、连续诱导5d为最佳。处理后的细胞G0～G1期数目增多,流式细胞检测和电镜观察都显示无凋亡现象发生。经过双向电泳分离药物处理前后的HL60细胞全蛋白质组,发现有14个蛋白点仅在分化细胞检测到,20个蛋白点仅在未分化细胞检测到。结论NSC67657可以促进CEBPα基因和蛋白的表达升高,并可诱导HL60细胞向单核系分化,分离分析处理前后细胞的蛋白表达差异,为后续关键蛋白的筛选及其功能研究奠定了基础。

enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制作用

目的研究enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制活性。方法应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的细胞毒活性。结果enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株都有一定程度的抑制作用,其抑制活性呈现剂量-效应关系,其中以serrin B和nodosin效果较为显著。结论enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin是中药溪黄草拮抗白血病和结肠癌的有效成分,溪黄草具有一定的防治白血病和结肠癌的作用。

人参皂甙-Rh2对Ara-c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响

目的探讨人参皂甙单体Rid（GS—Rh2）对阿糖胞苷（Ara—c）抗白血病作用的影响。方法体外培养人髓性白血病细胞株（HL60）并随机分为三组，其中Ara．C组加入终质量浓度分别为5．0-40．0μg／ml的Ara-c，GSRh2组加入终质量浓度为4．0～32．0μg／ml的GS-Rh2，联合组加入终质量浓度为4．0μg／ml的GS—Rh2及上述质量浓度Ara—C。48h后采用MTT法测定三组HL60细胞的增殖抑制率（IR），并计算半数抑制浓度（IC50）、合用指数（CI）、增效倍数及合并效应与期望合并效应的比值（q）；倒置显微镜及常规瑞-吉染色法观察细胞凋亡形态。结果Ara-c组、GSRh2组的IC如分别为32．0、13．0，联合组Ara-c的IC50为14．5μg／L，显著低于Ara-c组（P〈0．001）；联合组CI为0．76，4．0μg／ml GSRh2对Ara—c的增效倍数为2．21，Ara-c质量浓度为5．0、10．0、20．0、40．0μs／ml时的q分别为1．42、1．39、1．36、1．21；联合组细胞凋亡形态较其他两组明显。结论GSRh2可提高HL60细胞对Am-c的敏感性，减少Ara—C的临床用药剂量和毒副作用，加强Ara-c的疗效；此为临床治疗白血病提供了新的思路。

siRNA对VEGFR_2的表达抑制及对HL60细胞和人内皮细胞的影响

目的为探索治疗白血病的新思路研究了小干扰RNA(siRNA)对肿瘤细胞株HL60和人血管内皮细胞(EC)株EA.hy926血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因表达的抑制作用。方法制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链,构建pENTRTM/U6干扰表达载体。瞬时转染细胞,采用MTT法、RT-PCR法及Westernblot测定VEGFR2表达抑制情况。结果VEGFR2siRNAa、b、c抑制HL60细胞效率分别为77.5%、45.0%、80.9%,以siRNAc最高,利用其shRNA和pENTRTM/U6构建的入门克隆转染HL60,抑制细胞效率达99.1%;此入门克隆对VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达抑制在HL60和EA.hy926细胞均显著。结论在体外shRNA表达载体可有效抑制HL60细胞VEGFR2自分泌和旁分泌,有效抑制白血病细胞生长。

K562和HL60细胞分化抗原的表达

目的:研究髓系白血病细胞系K562和HL60分化抗原的表达,分析其免疫学表型特征。方法:收集RP MI1640培养3d的对数生长期K562和HL60细胞,用流式细胞仪测定细胞膜表面CD7、CD11b、CD13、CD14、CD33、CD34、CD38、CD64、CD41a、CD117和HLA DR11种分化抗原表达百分率,了解其免疫学表型,同时进行瑞特姬姆萨(Wright Giemsa)染色观察细胞形态和髓过氧化物酶染色(MPO)。结果:K562白血病细胞的髓系特征分化抗原CD13和CD117表达率较低,为5.3%和5.2%,其他分化抗原CD11b、CD14、CD33、CD64、CD41a和反映细胞阶段性特征的分化抗原CD7、CD34、CD38和HLA DR表达均处于极低水平,MPO染色为阴性;HL60白血病细胞的髓系特征分化抗原CD13表达率高达94.0%,仅伴随有少量CD11b、CD64和CD41a表达,祖细胞特征的CD38表达率为36.7%,MPO染色为阳性;细胞形态学上K562细胞原始未分化特性比较明显,HL60细胞质内已有嗜天青颗粒和空泡等细胞分化特征。结论:K562细胞的免疫学表型和形态学均表现出未分化细胞特征,因其具有多项分化潜能,因此更适合进行细胞多向分化研究。HL60的髓系祖细胞特性明显,适合进行粒系、单核系分化研究。

全反式维甲酸诱导HL60细胞凋亡及相关信号途径的改变

目的 研究全反式维甲酸 (ATRA)诱导早幼粒细胞白血病细胞株 (HL60细胞 )凋亡及其分子机制。方法 HL60细胞经ATRA诱导不同时间 ,用活细胞记数法检测细胞增殖情况 ;用流式细胞术 (FCS)检测HL60细胞凋亡及细胞周期的改变 ;用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA分子的变化 ;用透射电镜技术观察了凋亡细胞的结构改变 ;用Westernblot技术检测了ATRA诱导HL60细胞与凋亡有关的分子改变。结果 ATRA诱导HL60细胞第 3天出现细胞增殖抑制且FCS发现细胞出现S期阻滞 ,开始出现凋亡 ,第 5天出现明显的细胞增殖抑制及更高的凋亡比例 ,核酸电泳发现DNA“梯带”现象 ;对照组细胞在透射电镜下核大而圆 ,折光性低 ,染色质均匀 ;而ATRA处理 5d的细胞出现核固缩、染色质浓缩边集及出现凋亡小体。同时细胞内ATRA核受体在诱导第 3天开始表达增加 ,相应地与细胞凋亡相关的酶———半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)也表达增加 ,而磷酸化的Erk/STAT水平明显下调。结论 ATRA可以诱导HL60细胞发生凋亡 ,其机制可能为 :ATRA诱导细胞后 ,RAR信号途径被激活 ,导致与凋亡相关的信号途径被激活(Caspase 3表达上调 ) ,而与细胞增殖相关的信号途径被阻断 (p Erk/p STAT水平下降 ) ,引起细胞增殖阻滞 ,发生凋亡。

下调GINS2表达抑制HL60细胞周期调控因子

目的观察下调GINS2的表达后对人白血病细胞系HL60周期调控因子的变化并探讨其机制。方法脂质体介导并稳定转染干扰质粒的细胞为干扰组,转染阴性对照质粒的细胞为阴性对照组,只加入脂质体的细胞为空白对照组,未转染的HL60细胞为未处理组。集落形成实验测定细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期;3H-TdR掺入实验检测细胞DNA合成;Western blot检测CDK1、cyclinB1等蛋白;RT-PCR检测ATM,CHK2,P53等mRNA水平;Western blot检测其蛋白水平。结果和其他3组相比,干扰组细胞G2期细胞数明显增加、DNA合成受阻、增殖减慢。与G2期相关周期调控蛋白CDK1,cyclinB1的表达随时间变化而明显降低。和其他3组相比,干扰组细胞ATM,CHK2,P53转录水平和翻译水平显著上调。结论下调GINS2表达后可抑制HL60细胞DNA复制并影响其G期进程,机制可能与ATM,CHK2,P53等基因相关。

人白血病HL60细胞的分化状态对细胞凋亡的影响

用细胞培养和流式细胞术等方法，研究人白血病ＨＬ６０细胞诱导分化后，对三尖杉酯碱（Ｈａｒ）和喜树碱（Ｃａｍ）诱导细胞凋亡的影响。结果表明，１２豆蔻酰及１３乙酸佛波酯以１６ｎｍｏｌ·Ｌ－１浓度处理ＨＬ６０细胞２４ｈ，细胞向单核／巨噬细胞方向分化，阻断于Ｇ１期；分化细胞抗Ｈａｒ和Ｃａｍ诱导的细胞凋亡，但其ｃｍｙｃ基因的表达无变化。１４％二甲基亚砜处理ＨＬ６０细胞４８ｈ，细胞向粒细胞方向分化，阻断于Ｇ１期；分化细胞抗Ｃａｍ，而不抗Ｈａｒ诱导的细胞凋亡；分化细胞的ｃｍｙｃ基因表达明显下降。结果提示，人白血病ＨＬ６０细胞的分化状态，明显影响三尖杉酯碱和喜树碱诱导的细胞凋亡。

CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpC基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MIT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase 3、Bel-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCPG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。

阿糖胞苷对HL60细胞增殖和凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对急性早幼粒白血病细胞HL60增殖、凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法 Ara-c与HL60细胞共同孵育后,应用光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化,通过四唑盐(MTT)法分析不同剂量Ara-C对细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析Ara-C对细胞凋亡和Bcl-2蛋白的影响,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究bcl-2基因表达的影响。结果 250μg／ml Ara-C对HL60细胞作用48 h后,光学显微镜下可见细胞呈核固缩、深染及染色质边集等多种形态改变,透射电子显微镜下可见典型的凋亡细胞,MTT检测显示Ara-C能明显抑制细胞的生长。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随作用时间的延长而增加,而Bcl-2蛋白则随之下降。RT-PCR结果显示,bcl-2 mRNA的表达亦随着药物作用时间的延长而下降。结论 Ara-C能诱导HL60细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA水平。

微囊藻毒素-LR对HL60细胞遗传毒作用的研究

目的探讨微囊藻毒素-LR对HL60细胞的遗传毒性效应。方法不同剂量的MCLR作用HL60细胞24h或48h后，应用彗星实验及微核实验分别检测DNA链断裂和染色体损伤情况。结果10-100μg／ml剂量的MCLR引起HL60细胞明显的DNA链断裂，染毒量与DNA链断裂之间呈现剂量-反应关系。相同剂量的MCLR还引起HL60细胞微核率升高，随着染毒剂量的增加，微核率呈增高趋势。结论MCLR可引起HL60细胞DNA和染色体损伤，具有细胞遗传毒性。

镓转铁蛋白与HL60细胞的结合

用125I示踪法测定了不同形式的镓转铁蛋白(GaC-Tf,Ga2-Tf,GaC-Tf-FeN)与HL60细胞的结合作用.结果表明0℃、pH=7.4时GaC-Tf,Ga2-Tf和GaC-Tf-FeN均与细胞膜结合,表观结合常数分别为(1.2±0.14)×108,(1.1±0.19)×108和(1.8±0.42)×108L/mol;同时测定了125I标记的脱铁转铁蛋白(apoTf)与HL60细胞的表观结合常数为(0.97±0.20)×108L/mol;HL60细胞的平均受体数为(4.8±0.11)×105.通过体外研究表明,不同形式的镓转铁蛋白与受体的结合能力次序为apoTf≈GaC-Tf≈Ga2-Tf<GaC-Tf-FeN.

全反式维甲酸诱导HL60细胞分化的细胞周期时相性研究

目的 探讨全反式维甲酸诱导分化的HL6 0细胞周期变化 ,进一步揭示细胞分化在细胞周期中的时相特异性。方法 以分化诱导剂全反式维甲酸 (终浓度为 10 μmol/L)影响下不同时间点的HL6 0细胞为检测对象 ,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志 ;碘化丙啶 (PI)染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态从而对已分化细胞进行确认 ;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化 ,检测G1期的Ki6 7表达水平 ;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态。结果 ①随着药物诱导时间的延长 ,细胞的体积逐渐增大 ,被诱导的细胞出现髓系细胞表面的分化标志物CD11b。②全反式维甲酸导致HL6 0细胞周期的G0 /G1峰升高 ,S期水平下降。③随着药物诱导时间的延长 ,G1期的Ki6 7的表达水平逐渐下降。④只在G1期细胞中可见到已分化细胞。结论 全反式维甲酸可以诱导HL6 0细胞周期的G1早期→G1晚期阻滞 ,并诱导HL6 0沿着粒系方向分化 ,细胞分化完成于细胞周期中的G1早期。

bcl-2反义核酸提高白血病HL60细胞对米托蒽醌的敏感性

目的 探讨下调HL6 0细胞bcl 2基因表达对米托蒽醌 (MIT)细胞毒作用的影响。方法 将针对bcl 2基因编码区 141 147密码子的反义寡核苷酸 (ASODN)作用于HL6 0细胞 ,测定其mRNA表达 ,细胞生长 ,细胞凋亡。结果 12 5μmol/LASODN作用于HL6 0细胞 48h可以下调bcl 2mRNA表达 40 %。 0 5 μmol/LMIT作用于经ASODN预处理 48h的HL6 0细胞 5h ,5 0 9%的细胞发生凋亡 ,明显高于MIT单独作用诱导的细胞凋亡 (2 5 6 % ) ;当ASODN与 0 7nmol/LMIT共同作用时 ,细胞存活率 (4 8h)由MIT单独作用时的 73 7%降至 2 5 6 %。结论 bcl 2ASODN可下调bcl 2基因表达 ,促进细胞凋亡而增加MIT抗肿瘤作用。

土槿乙酸诱导HL60细胞凋亡及其与半胱氨酸蛋白酶-3活化的关系

目的 探讨土槿乙酸 (PLAB)的抗癌活性及其机制。方法 对用不同浓度PLAB处理的HL 60细胞 ,或半胱氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )抑制剂DEVD fmk预处理的HL 60细胞。采用MTT法检测HL60细胞抑制增殖作用 ,采用Hoechst3 3 3 42 /PI双荧光活细胞染色和原位末端标记 (TUNEL)方法检测细胞凋亡 ,CPP3 2colorimetrickit检测caspase 3酶活性。 结果 PLAB以剂量依赖的方式抑制HL60细胞的生长 ,其IC50 值为 1μmol/L。PLAB诱导HL60细胞死亡的形式以细胞凋亡为主 ,且该凋亡可被caspase 3抑制剂所遏制。PLAB诱导的caspase 3酶的活化与剂量和作用时间呈依赖关系。 结论 PLAB能有效诱导HL 60细胞凋亡 ,该凋亡过程伴有caspase

低功率毫米波辐照对HL60细胞增殖的影响

目的为探讨低功率毫米波对HL60细胞活力影响的机制。方法应用细胞培养、活细胞计数、光镜、电镜及增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫组化染色及图像分析等方法,检测低功率(功率密度约2mW/cm2)及频率41.32GHz的毫米波辐照HL60白血病细胞增殖的影响;分为辐照时间15、30、45、60min组和对照组(0min组)共5组。结果与对照组比较,毫米波辐照45min和60min组,HL60细胞活性增加和PCNA阳性细胞增多,光镜观察各组未见明显差别,超微结构显示HL60细胞形态呈增殖改变。结论低功率毫米波辐照对HL60细胞有促进增殖的作用。