幼年型与成年型强直性脊柱炎HLA*B等位基因高分辨分型研究

目的 通过对幼年型强直性脊柱炎(JAS)和成年型强直性脊柱炎(AAS)患者HLA*B等位基因进行高分辨测序分型,了解HLA-B基因多态性与JAS是否有相关性。方法 收集2019年8月—2021年12月就诊于本院的符合JAS和AAS患者各50例,采用PCR-SBT法对HLA*B位点特异性扩增,再使用ABI 3100毛细管测序仪对外显子1正向测序,外显子2、3、4、5同时进行正反向测序,采用uTYPETMHLA测序分析软件处理测序结果。结果 JAS组中男41例,女9例,AAS组中男43例,女7例,两组男女性别比例差异无统计学意义(P=0.585);JAS组发病年龄(12.5±2.9)岁,显著低于AAS组的(29.7±6.8)岁(P<0.001)。JAS组检出HLA-B*27纯合子5例占10.0%,AAS组检出HLA-B*27纯合子4例占8.0%,JAS组中45例杂合子中B*27:04、B*27:05、B*27:15、B*27:86分别为34例、6例、3例、2例,AAS组46例杂合子中B*27:04、B*27:02分别为45例、1例;HLA-B*27阳性的JAS和AAS各检出15例HLA-B*40,高分辨分型中以B*40:01:02为主要亚型。结论 HLA-B*27纯合子与等位基因HLA-B*40对JAS的早发病并无直接相关性。HLA-B*27:04是JAS和AAS主要基因亚型,HLA-B*27:05:02:01、HLA-B*27:15,在JAS中多于AAS组,携带该等位基因的患者倾向于早发。

PCR-SSP／PCR-SBT-HLA高分辨等位基因分型比较

【目的】为了预测无关捐献者干细胞移植(HSCT)后GVHD的发生及程度和选择相容的干细胞捐献者,通过同时采用PCR-序列特异性引物扩增技术(sequence specific primer,PCR-SSP)和PCR-直接碱基序列分析基因分型技术(sequence based genotyping,PCR-SBT)的方法,提高HLA基因分型的准确性和分辨水平。【方法】采用PCR-SSP和PCR-SBT分别对57份捐献者血样进行HLA-A、B和DRB1位点的高分辨等位基因分型(即识别基因的编码达到*后4位数)。【结果】PCR-SBT实验中有27份DNA的基因分析结果模棱两可,PCR-SSP实验中有10份DNA的基因分析结果模棱两可。经两种方法相互佐证实验后,57份样本均获得结果一致、清楚和精确的HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型。【结论】PCR-SSP和PCR- SBT是HLA高分辨基因分析的标准方法,两种方法具有实验互补意义,若同时应用两种方法能够有效改善HLA等位基因高分辨分型的准确性和重复一致率。

RSCA技术应用于HLA-A,B座位高分辨基因分型的研究

目的采用参比链介导的构象分析(referencestrandmediatedconformationanalysis,RSCA)技术,建立新型、可靠的HLAA、B高分辩基因分型方法,应用于HLA基因分型及供、受者组织配型。方法采用一对座位特异性引物,扩增HLAA、B基因的第2、3外显子和第2内含子。扩增产物与单链标记荧光物质的参比链按一定比例混合,经变性、退火反应及脱水处理后,在杂交产物中掺入分子量内参标准物,用ABI377型基因测序仪电泳检测。用ABIGeneScan3.1软件分析每一泳道内异源双链波峰的迁移值、峰高及峰面积值,RSCAHLATyper1.3软件分析HLA等位基因型。应用本方法,对第13届国际组织相容性协作组(IHW)送检的20份盲检样本,以及2份HLA等位基因型已知的质控样本进行了检测。结果2份质控DNA的检测结果,与已知的HLA基因型完全相符;20份盲检样本HLAA、B座位的检测结果,与IHW公布的结果完全相同,准确率达100%。结论RSCA为新型、高分辨水平的HLA基因分型方法,并且出现模棱两可结果的情况少,分型结果准确、可靠。

741对非亲缘关系供、受者HLA高分辨基因分型结果分析

目的研究造血干细胞捐献者资料库供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1位点等位基因高分辨全相合及不相合的概率。方法采用基因测序分型(sequence based typing,SBT),序列特异性寡核苷酸探针(sequence-specific oligo nucleotide probes,SSOP),聚合酶链反应序列特异性引物(sequence-specific primers,SSP)对741对HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合的无关供、受者进行HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因高分辨检测。结果HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因位点高分辨分型供、受者全相合的概率为0.1916(142/741);1个等位基因不相合的概率为0.1930(143/741),不相合的位点频率次序为:HLA-A>-Cw>-DQB1>-B>-DRB1;2个等位基因不相合的概率为0.2362(175/741),其中仅在一个位点(loci)上的概率为0.0175(13/741),位于两个位点上的概率为0.2186(162/741),以A+Cw组合位点不相合的概率最高,其次以B+Cw和DRB1+DQB1组合位点次之。结论对判断无关供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合,而HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1、HLA-Cw、HLA-DQB1高分辨基因分型全相合或部分相合的概率有重要参考价值,并且不仅能提高非亲缘造血干细胞移植的成功率,还有助于提高造血干细胞捐献者资料库数据的使用率。

供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型的无关供者外周血造血干细胞移植32例回顾分析

目的探讨供、患者的人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1基因高分辨相合及亚型相合,无关供者外周血造血干细胞移植后效果的情况,为临床造血干细胞移植治疗选择适配供者提供理论依据。方法采用PCR-SSP或SBT技术对供、患者HLA-A、B、DRB1的基因进行高分辨分型,定期随访患者在造血干细胞移植后状况,统计分析移植后效果。结果32例患者与供者的HLA低分辨分型结果完全相合,HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型全相合的患者与HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型不相合的患者,造血干细胞植活和两年半内的移植存活率比较,无统计学差异。结论HLA低分辨分型结果完全相合是临床医生选择造血干细胞移植的重要条件之一,供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型是外周血造血干细胞移植治疗前组织配型不可少的实验之一,但HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型错配对无关供者外周血造血干细胞移植的造血干细胞植活和两年半内的移植存活率影响较小,HLA基因高分辨分型可以帮助临床医生选择合适的供者。

天水地区HLA-B27基因高分辨分型与强直性脊柱炎相关性分析研究

目的:研究天水地区HLA-B27基因高分辨分型与强直性脊柱炎(AnkylosingSpondylits,AS)相关性的分析研究。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对天水地区AS患者进行HLA-B27基因高分辨分型。结果:采用PCR-SSP法对天水地区疑似AS进行HLA-B27检测,共发现87例阳性。对阳性者用PCR-SSP法进行HLA-B2701-43基因高分辨分型;其中HLA-B270430例,占阳性总人数的34.48%;HLA-B270555例,占阳性总人数的63.22%;HLA-B27072例,占阳性总人数的2.30%,该基因型是国内首次在AS患者中发现。结论:初步发现天水地区AS患者与HLA-B2704、HLA-B2705有强相关性,偶见HLA-B2707阳性的AS患者,符合亚洲人特点。

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨等位基因频率分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1 5位点在高分辨基因分型水平上的等位基因频率特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用直接计数法计算各位点基因频率。结果在718名捐献志愿者中,共检出28个HLA-A等位基因、61个HLA-B等位基因、30个HLA-C等位基因、40个HLA-DRB1等位基因、18个HLA-DQB1等位基因;其中HLA-A位点最常见等位基因为A*1101(21.66%)、A*2402(16.37%)、A*0201(13.79%);HLA-B位点最常见等位基因为B*4001(11.49%)、B*4601(9.54%);HLA-C位点最常见等位基因为Cw*0702(15.74%)、Cw*0102(15.32%)、Cw*0304(11.56%);HLA-DRB1位点最常见等位基因为DRB1*0901(14.69%)、DRB1*1501(12.40%)、DRB1*0701(9.89%);HLA-DQB1位点最常见等位基因为DQB1*0301(20.54%)、DQB1*0303(15.81%)、DQB1*0601(10.79%)。结论本研究在高分辨基因分型水平提供了一套有关中国人群HLA-A,-B,-C,-DRB1和-DQB1 5位点基因频率数据。

江苏汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性和单体型研究

目的:分析中国江苏地区汉族人群中造血干细胞捐献志愿者人类白细胞抗原(HLA)-A、B、DRB1在高分辨基因分型水平上的基因多态性和单体型的分布特征。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)基因分型以及基因序列分型(sequence-based typing,SBT)技术,对中国造血干细胞捐献者资料库江苏分库644例无关供者的HLA-A、B、DRB1位点上的等位基因作高分辨分型,直接计数法计算等位基因频率。应用Arlequin 3.01软件,以最大似然法分析单体型频率。结果:在644例无关捐献志愿者中共检出高分辨HLA-A基因29个,HLA-B基因60个,HLA-DRB1基因36个。A位点频率最高的是A*1101(17.86%),B位点频率最高的是B*4601(9.55%),DRB1位点频率最高的是DRB1*0901(15.76%)。频率最高的HLA-A、B、DRB1单体型是A*3001-B*1302-DRB1*0701(5.98%),频率最高的HLA-A、B单体型是A*3001-B*1302(6.68%),频率最高的HLA-B、DRB1单体型是B*1302-DRB1*0701(7.22%),频率最高的HLA-A、DRB1单体型是A*3001-DRB1*0701(6.06%)。结论:本资料从高分辨水平分析了江苏地区汉族人群HLA的分布状况,对指导临床寻找HLA匹配的无关造血干细胞供者、HLA与疾病相关研究和我国人群群体遗传学研究等有重要意义。

重庆汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因多态性研究

目的分析重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1在高分辨基因分型水平上多态性及分布特征。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)基因分型以及基因序列分型(SBT)技术,对重庆地区2 067例无关供者的HLA-A、B、DRB1位点上的等位基因进行高分辨分型,直接计数法计算等位基因频率,应用Arlerquin3.1软件进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果共检出了168种HLA高分辨等位基因。其中HLA-A位点42种,频率大于0.05有A*11:01,A*24:02,A*02:07,A*02:01,A*33:03;HLA-B位点81种,频率大于0.05有B*46:01,B*40:01,B*58:01,B*13:01,B*15:02;HLA-DR位点45种,频率大于0.05有DRB1*09:01,DRB1*15:01,DRB1*12:02,DRB1*08:03,DRB1*11:01。结论获得了重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因频率数据,为人类学、法医学、移植配型及疾病相关性等研究提供可靠的参考数据。

河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析

背景:2009年开始,中华骨髓库加大HLA高分检测的力度,可缩短配型检索周期,提高配型成功率。目的:统计分析河南省骨髓捐献者HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性。方法:河南省汉族造血干细胞志愿捐献者血样3874人份,志愿捐献静脉血,EDTA抗凝。采用SSOHD荧光微珠流式高分辨HLA-A、B、DRB1基因分型检测方法,对3874份骨髓捐献志愿者血样进行高分辨分型检测,用PCR-SSP高分辨检测、SBT检测解决存在的模棱两可问题。等位基因计数法计算等位基因的基因频率。结果与结论:共检出A34个,B84个,DRB150个,A位点基因频率处于前5位的有A*0201(0.1609)、A*1101(0.1627)、A*2402(0.1602)、A*3001(0.0808)、A*3303(0.0789);B位点处于前5位的是B*1302(0.0777)、B*4001(0.0722)、B*5101(0.0628)、B*4601(0.0612)和B*0702(0.0507);DRB1位点处于前5位的是DRB1*1501(0.1469)、DRB1*0901(0.1318)、DRB1*0701(0.1211)、DRB1*1202(0.0612)、DRB1*0405(0.0582)。

广州地区献血人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性的研究

目的:研究广州地区献血人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性的分布特征。方法:应用序列特异引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence-specific primer,PCR-SSP)高分辨试剂分型,对广州地区1691名无血缘关系的健康人群HLA-A、B、DRB1进行基因分型。结果:检出HLA-A、B、DRB1等位基因分别有37、76、43种,经统计分析这3个基因座分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),A*02:07-B*46:01-DRB1*09:01(4.293%)和A*33:03-B*58:01-DRB1*03:01(3.284%)单体型是广州地区献血人群最常见单体型。结论:广州地区献血人群HLA-A、B、DRB1基因座单体型分布具有高度的遗传多态性且有其自身分布特点。研究获得的HLA-A、B、DRB1基因座单体型分布数据及相关遗传参数资料,为HLA在人类学、免疫遗传学、法医学和其它的组织器官移植方面的应用和科学研究提供和积累了基础资料。

4082名上海骨髓库汉族无关供者HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因及单体型多态性研究

目的了解上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1在高分辨分型水平上的等位基因及单体型频率分布特征。方法采用PCR-测序分型技术(Sequence-based typing,SBT)对4 082名随机、无血缘关系、健康的中华骨髓库上海分库汉族造血干细胞捐献者进行HLA-A、B、DRB1高分辨基因分型,利用计数法和最大似然性原理方法分别计算HLA-A、B、DRB1等位基因及单体型频率。结果 4 082例样本中,共观察到204个HLA等位基因,其中频率>0.1的HLA-A、B、DRB1等位基因分别有A*11∶01、A*24∶02、A*02∶01、B*46∶01、DRB1*09∶01、DRB1*15∶01。841条A-B单体型中,70条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),8条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),17条单体型的频率高于0.01;1 027条B-DRB1单体型中,99条单体型呈现显著的连锁不平衡(ALD>0,HF≥3.67×10-4,χ2>3.84),12条表现为强连锁不平衡(RLD>0.40),12条单体型的频率高于0.01;3 344条A-B-DRB1单体型中,681条单体型是"可靠的"(频率≥3.67×10-4),单体型频率高于0.001有135条。结论获得上海地区汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因频率和单体型分布数据及相关遗传参数,为临床移植供者的选择、中国人群CWD表的制订、骨髓库最适库容的评估及人类遗传学研究提供参考数据。

中国北方汉族人群HLA-Cw^＊高分辨等位基因频率分析

本研究从基因水平了解HLA-Cw*位点在中国北方汉族人群中的分布频率,分析HLA-Cw*等位基因的群体遗传学特点及基因频率分布的地区差异。采用PCR-SSP分型技术对420名中国北方汉族人群HLA-Cw*位点进行高分辨基因分型,并对其分布规律进行统计学分析。结果表明:共检出30个HLA-Cw*等位基因,分布频率最高的有Cw*0102;0702;0602(0.1776;0.1217;0.1150),其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304,0801,0303,0302,0401,1402。首次在该人群中检测到HLA-Cw*0506,0810,1510,1601和1701较少见等位基因。统计分析表明,HLA-Cw位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(p>0.05)。结论:采用高分辨等位基因分型,可准确了解HLA-Cw*位点等位基因在我国北方汉族群体中的分布规律和特征,为HLA-Cw*座位的相关研究提供了依据。

PCR-SBT技术在山东骨髓分库HLA高分辨分型工作中的初步应用

目的将基于测序分型(SBT)技术应用于中华骨髓库山东分库建设的探讨。方法使用ABI 3730 xlDNA测序仪,采用SBT直接测序法,对山东地区的3 500份志愿者血液标本进行DNA测序,其中HLAⅠ类基因对第2、3和4外显子双向测序,Ⅱ类基因对第2外显子双向测序,以得到其HLA高分辨分型结果;对部分呈现中分辨分型结果的标本,通过SSSP技术确认。结果 HLA-A、B、DRB1位点分别有48.23%、42.86%和76.91%得到高分辨结果。此3个位点均获得高分结果的比例为15.91%。在随机增选的760例中分辨标本中,659例(86.71%)经SSSP技术后,获得高分辨结果。结论 SBT技术是骨髓分库开展HLA高分辨分型工作的有力工具。

五种HLA低分辨率基因分型试剂的对比分析

目的 比较五种 HLA低分辨率分型试剂的检测效果。方法 用五种 HLA分型试剂分别检测 7份标准品 ,分析比较各种试剂的检测结果。结果 五种分型试剂基因检出率均为 1 0 0 % ,无漏检。分辨率较好 ,均能达到低分辨率的要求。但试剂 A和 D特异性略低于其它试剂。

2009-2014年全国HLA低分辨基因分型检测室间质量评价结果分析

目的为进一步提高全国临床实验室人类白细胞抗原(HLA)基因分型检测水平提供有价值的参考。方法利用常规统计方法归纳总结2009-2014年全国医疗机构和商业临床实验室HLA低分辨基因分型检测室间质量评价(EQA)结果,分析在连续6年的EQA活动中,回报结果的错误率、错误类型以及导致错误结果的原因。结果2009-2014年全国参加HLA低分辨基因分型检测EQA项目的临床实验室数目从63家增至83家;在连续6年EQA活动中,回报HLA分型数据共计7 836份,总体错误率为2.12%(166/7836);2009-2014年每年出现错误的实验室比例分别为1.59%(1/63)、11.48%(7/61)、0.00%(0/69)、2.74%(2/73)、2.82%(2/71)、10.84%(9/83);连续6年EQA活动中错误数据共计166份,主要包括HLA基因分型错误23份、血清型和基因型混淆错误14份、录入错误108份,漏报错误21份。结论目前我国临床实验室HLA低分辨基因分型整体检测水平仍不容乐观,错误比例过高;反映了从业人员在HLA基因分型技术上和规范化管理上存在不容忽视的问题。

中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原的高分辨分型

目的:通过对异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原-A,B,DRB1基因的序列分析,探讨中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原高分辨分型的必要性。方法:实验于2000-08/2004-03在深圳市血液中心完成。供者和受者114对的血样分别来源中华骨髓库和各移植医院,供者和受者均签署知情同意书。采用聚合酶链式反应-测序分型技术对114对中国汉族无关供受者间的人类白细胞抗原-A,B,DRB1等位基因进行序列分析,观察中国汉族无关供受者对间等位基因水平的配合率、各等位基因家族的配对分布和错配分布规律。某些位点的模棱两可结果,则通过相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物分型试剂进行分离并确认最后结果。结果:①高分辨与低分辨分型结果比较:114对无关供受者对中,110对人类白细胞抗原-A,B,DRB1的聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨(等位基因星号后两位数)DNA分型结果相吻合,4对聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨结果不相符。②供受者间人类白细胞抗原-A,B,DRB1高分辨配对分类结果:39%的中国汉族供受者对完全配合,但61%的供受者间存在至少一个等位基因的错配。③供受者间人类白细胞抗原-A,B,DRB1等位基因家族配对分布结果:3个座位的错配率分别为A(23%),B(10%),DRB1(17%);A和DRB1座位的错配比较集中,A座位仅见于A02,A11和A24家族,DRB1座位见于DRB104,DRB108,DRB112,DRB114和DRB115家族;而B座位的错配则比较分散,比较高的是B35,B48,B61和B62。④供受者间人类白细胞抗原-A,B,DRB1错配等位基因组合结果:3个座位的错配等位基因组合呈现较高的多样性,比较常见的几种组合为A0201/0207,A1101/1102,A0201/0206,A0203/0207,B4002/4006,DRB11201/1202和DRB11501/1502。结论:中国汉族异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原等位基因配合率低且其分布具有一定规律和特殊性,在移植前有必要对无关供受者对进行人类白细胞抗原高分辨分型。

应用中高分辨率分型方法分析中国人群HLA-B15组的多态性

目的 了解人类白细胞抗原 (HLA)系统中最常见、最复杂且最难分型的 B1 5组的多态性情况 ,并探讨其是否影响移植时供者的选择。 方法 对 1 94名随机健康人群用反向 PCR-SSO方法做 HLA-AB分型 ,同时 ,对部分样品作HLA-AB血清学分型 ,以期得到与等位基因对应的血清学特异性。 结果 本研究共得到 7种属于 B1 5组的等位基因 ,包含了 4种血清学特异性。在中国人群 HLA-B1 5组中 ,B* 1 5 0 1占绝大多数 ,B* 1 5 0 2 ,B* 1 5 1 1 ,B* 1 5 1 8,B* 1 5 2 7的分布频率相似。 结论 B* 1 5 2 7较常见 ,其与 B* 1 5 0 1 (两者均为 B62 )在供受者间错配、是否能导致移植物抗宿主反应 (GVHD)等方面 ,需要作进一步的研究。结果提示在移植时对于 HLA-B1 5组如仅做低分辨率分型是不够的。