胡黄连苷Ⅱ调节HMGB1/RAGE信号通路对冠心病大鼠内皮细胞损伤的影响

目的:初步探讨胡黄连苷Ⅱ(P-Ⅱ)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞损伤的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为control组、CHD组、P-Ⅱ低、中、高剂量组、P-Ⅱ高剂量+DEX组(P-Ⅱ高剂量+HMGB1/RAGE信号通路激活剂DEX),除control组外,采用高脂饮食联合腹腔注射垂体后叶素法建立CHD大鼠模型,灌胃或腹腔注射相应药物,1次/d,连续4周。生化分析仪分析大鼠血脂水平;ELISA检测血清血管内皮损伤标志物一氧化氮(NO)、内皮素(ET)-1、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及血清和冠状动脉组织TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平;试剂盒检测大鼠冠状动脉组织活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;HE染色观察大鼠冠状动脉组织病理损伤;TUNEL染色观察血管内皮细胞凋亡;Western blot检测冠状动脉组织中血管内皮生长因子(VEGF)、HMGB1、RAGE蛋白表达。结果:相较于control组,CHD组大鼠TC、TG、LDL-C、ET-1、AngⅡ、TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、内皮细胞凋亡率及HMGB1、RAGE表达显著升高,HDL-C、NO、GSH-Px及VEGF表达显著降低(P<0.05);相较于CHD组,P-Ⅱ低、中、高剂量组TC、TG、LDL-C、ET-1、AngⅡ、TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、内皮细胞凋亡率及HMGB1、RAGE表达显著降低,HDL-C、NO、GSH-Px及VEGF表达显著升高(P<0.05);HMGB1/RAGE信号通路激活剂DEX可减弱P-Ⅱ对CHD大鼠内皮细胞损伤的保护作用。结论:P-Ⅱ能有效减轻CHD大鼠内皮细胞损伤,其作用机制可能与抑制HMGB1/RAGE通路激活有关。

连翘苷抑制HMGB1/RAGE信号通路减轻大鼠糖尿病周围神经病变坐骨神经损伤

目的 基于高迁移率族蛋白Box-1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨连翘苷(PHI)对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经损伤的影响。方法 利用高脂高糖饮食并注射链脲佐菌素(STZ)建立DPN大鼠模型,随机分为模型组、连翘苷低剂量(PHI-L)(50 mg/kg)组、连翘苷中剂量(PHI-M)(100 mg/kg)组、连翘苷高剂量(PHI-H)(200 mg/kg)组、阳性药物(甲钴胺,250μg/kg)组;另取正常饲料喂养大鼠为对照组。每组10只。采用BL-420S生物机能实验系统测定坐骨神经传导速度;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;ELISA试剂盒检测血清HbAlc、IL-6、TNF-α水平;电镜观察坐骨神经超微结构形态;试剂盒检测坐骨神经中ROS、SOD、MDA、MBP水平;RT-qPCR、Western blot法检测坐骨神经中HMGB1、RAGE mRNA和蛋白水平。结果 与模型组比较,PHI-M组、PHI-H组、阳性药物组大鼠病理损伤明显减轻,坐骨神经传导速度、MBP、SOD水平显著恢复,FBG、HbAlc、IL-6、TNF-α、ROS、MDA、HMGB1、RAGE的mRNA及蛋白水平显著下降(P均<0.05)。结论 PHI可降低炎症反应,减轻大鼠DPN,发挥治疗作用,其机制可能与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

槲皮素通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路减轻糖尿病引起的大鼠肾脏损伤

目的探究槲皮素对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠的肾脏炎症反应和细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法采取腹腔一次性注射STZ建立糖尿病SD大鼠模型,并设置正常对照组(NC组,n=6)、高糖高脂组(HC组,n=6)、糖尿病模型组(DM组,n=6)、槲皮素组(DMQ组,n=6),DMQ组每日给予100 mg/kg的槲皮素灌胃处理。通过HE染色观察肾组织的病理学形态变化;ELISA检测血清炎症反应;免疫组化观察NF-κB的表达情况;血糖分析仪检测FBG;磷酸甘油氧化酶法、脲酶法、肌氨酸酶氧化酶法、双缩脲法等方法测定各组大鼠血清TG、BUN、Scr含量以及24 h尿蛋白含量;Western blotting检测各组大鼠肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达情况。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠FBG、TG、BUN、Scr、肾脏肥大指数和24 h尿蛋白均显著升高(P<0.01);血清炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01);肾脏结构产生典型的病理性变化;肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Caspase-3的表达量明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达量明显降低(P<0.01)。与糖尿病组相比,经过槲皮素干预后上述情况得到相反的结果。结论槲皮素能够改善糖尿病引起的肾脏损伤,其保护作用可能与抑制HMGB1/RAGE/NF-κB炎症信号通路,进而减轻肾脏的炎症反应、细胞凋亡等。

槲皮素通过HMGB1/RAGE/NF-κB通路减轻癫痫大鼠神经炎症的实验研究

目的:探讨槲皮素是否通过调控高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子κB(NF-κB)参与减轻癫痫大鼠神经炎症,探究HMGB1/RAGE/NF-κB通路作为槲皮素作用新靶点的可能性。方法:将60只SD大鼠随机选取12只作为健康组,剩余大鼠构建癫痫大鼠实验模型,将造模成功的大鼠分为模型组、槲皮素高剂量组、槲皮素低剂量组、槲皮素+通路激活剂组,每组12只。观察大鼠海马组织病理变化;评估大鼠的神经行为学功能;检测大鼠海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β水平及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健康组大鼠海马组织结构完整;与健康组相比,模型组大鼠海马组织结构分散,存活神经元数显著降低,凋亡指数显著上升,Racine等级显著升高,海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著升高;与模型组相比,槲皮素低、高剂量组大鼠海马组织结构较为完整,存活神经元数显著上升,凋亡指数显著降低,Racine等级显著降低,TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著降低,且槲皮素高剂量组的改善效果更佳;与槲皮素高剂量组相比,槲皮素+通路激活剂组存活神经元数显著降低,凋亡指数显著上升,Racine等级显著升高,海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著升高。结论:槲皮素可通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路,降低相关基因mRNA和蛋白表达,从而有效减轻癫痫大鼠的神经炎症。

益母草碱通过调节HMGB1/RAGE信号通路对重症急性胰腺炎大鼠的改善作用

目的 研究益母草碱对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺损伤的影响,并基于高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨其作用机制。方法 采用胰胆管注射5%牛磺胆酸钠构建SAP大鼠模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量益母草碱组(8 mg/kg)、高剂量益母草碱组(16 mg/kg)、HMGB1过表达组(8μg/kg)、高剂量益母草碱+HMGB1过表达组(16 mg/kg益母草碱+8μg/kg HMGB1),每组14只;另取14只大鼠作为假手术组。各组大鼠腹腔或尾静脉注射相应药物或生理盐水,每日1次,连续5 d。末次给药后,检测大鼠血清中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)水平;观察其胰腺组织病理损伤;检测其胰腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平以及HMGB1、RAGE mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,低、高剂量益母草碱组大鼠胰腺组织结构逐渐恢复、炎症细胞浸润逐渐减少,病理损伤评分和AMS、LPS、TNF-α、IL-6、MDA水平以及HMGB1、RAGE mRNA和蛋白表达水平均显著降低,SOD水平均显著升高(P<0.05),且高剂量益母草碱组改善效果更明显(P<0.05);HMGB1过表达组大鼠胰腺组织病理损伤加重,除SOD水平显著降低外,其余各指标均显著升高(P<0.05)。HMGB1过表达可减弱高剂量益母草碱对SAP大鼠上述指标的改善效果(P<0.05)。结论 益母草碱可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路激活来减轻SAP大鼠的胰腺损伤和胰腺组织的炎症反应、氧化应激。

鸡血藤提取物改善缺血性脑卒中大鼠免疫抑制的作用及对HMGB1/RAGE信号通路介导AQP-4和GAP-43表达的影响

目的 探究鸡血藤提取物通过高迁移率族蛋白(HMG)B1/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路介导水通道蛋白(AQP)-4、生长相关蛋白(GAP)-43表达改善缺血性脑卒中大鼠免疫抑制的机制。方法 通过栓线法构建缺血性脑卒中大鼠模型,45只模型大鼠分为模型组、鸡血藤1.5和鸡血藤3.0组(n=15)。另取15只假手术大鼠作为对照组。鸡血藤提取物灌胃剂量为1.5和3.0 g/kg。2 w后比较各组改良大鼠神经功能评分(mNSS)、脑组织损伤、神经元凋亡、HMGB1/RAGE信号通路、AQP-4、GAP-43水平及T细胞亚群水平。结果 模型组mNSS、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA及蛋白水平明显优于对照组,而CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著低于对照组(P<0.05)。鸡血藤1.5组的mNSS评分、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA和蛋白水平显著低于模型组,CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著高于模型组(P<0.05)。鸡血藤3.0组mNSS评分、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA和蛋白水平显著低于鸡血藤1.5组,CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著高于鸡血藤1.5组(P<0.05)。结论 鸡血藤提取物具有抑制HMGB1/RAGE通路、保护缺血性脑卒中大鼠神经元、解除免疫抑制的作用。

HMGB1/RAGE通路在COPD和肺癌发病中共性机制的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是肺癌发病的独立危险因素,肺气肿是COPD和肺癌的共性临床特征,COPD合并肺癌者预后更差。气道上皮细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)可通过激活晚期糖基化终末产物受体(RAGE)诱导炎症反应及增强氧化应激反应,从而参与COPD肺气肿的形成及发展。HMGB1/RAGE通路激活也可通过增强炎症反应和氧化应激反应促进肺癌的增殖、转移,并与肺癌的进展及化疗药物耐药密切相关。深入研究HMGB1/RAGE信号通路在COPD和肺癌中的机制,可为COPD和肺癌的治疗提供新思路。

HMGB1/RAGE轴在肿瘤炎症中的作用及其治疗药物罂粟碱的研究进展

高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)在肿瘤中的作用复杂多样,它结合不同的受体发挥不同生物学功能。其中晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycationend products,RAGE)定位于细胞膜,与释放至胞外的HMGB1相结合。已知HMGB1/RAGE轴在肿瘤的发展中起到重要作用,而肿瘤的发展及其耐药强弱与炎症密切相关。本文主要综述了HMGB1/RAGE轴在胰腺癌、结直肠癌和肝癌炎症中起到促炎促瘤作用的分子机制,总结了针对肿瘤炎症中HMGB1/RAGE轴的治疗药物罂粟碱及其衍生物的研究进展,旨在为探究肿瘤炎症中分子作用机制提供新思路,为针对HMGB1/RAGE轴治疗药物的研究提供新的理论依据。

毛蕊花糖苷调节HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路对动脉粥样硬化大鼠内皮功能障碍的影响

目的 探讨毛蕊花糖苷(VB)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核因子κB(NF-κB)信号通路对动脉粥样硬化(AS)大鼠内皮功能障碍的影响机制。方法 采用高脂饲料喂养联合维生素D3溶液腹腔注射的方法建立AS大鼠模型。将大鼠分为对照组(10只),模型组(12只),毛蕊花糖苷低、中、高剂量组(VB-L、M、H,2、5、10 mg/kg,每组10只)和阳性对照组(辛伐他汀,5 mg/kg,10只)。全自动生化分析仪检测血清中血脂水平;HE染色观察大鼠主动脉组织病理变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中炎性因子及内皮细胞因子水平;微量法试剂盒检测大鼠氧化应激水平;Western blot检测主动脉HMGB1/RAGE信号通路蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠主动脉内膜增厚、血管出现斑块,并伴有脂质沉积和炎性细胞浸润,血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、内皮素1(ET-1)、内脂素、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、丙二醛(MDA)及主动脉中HMGB1、RAGE、NF-κB磷酸化水平升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平降低(P<0.05);与模型组相比,VB各组及辛伐他汀组大鼠病理学变化明显改善,血清中TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、CRP、MMP-9、ET-1、内脂素、ICAM-1、MDA及主动脉中HMGB1、RAGE、NF-κB磷酸化水平降低,血清HDL-C、NO、SOD、GSH-Px水平升高(P<0.05)。结论 VB可下调HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路蛋白表达,抑制AS大鼠炎症和氧化应激,改善脂质代谢和血管内皮功能。

泻火化瘀通窍法对感音性耳聋大鼠HMGB1/RAGE信号通路的影响

目的探讨泻火化瘀通窍法对高迁移率族蛋白B1(highy mobility group proteinboxl,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(advanced glycation end product receptor,RAGE)介导的耳蜗缺血再灌注损伤(cochlea ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠的作用效果及机制。方法36只健康SPF级SD大鼠,雌雄各半,平均体质量(220±20)g。采用随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、泻火化瘀通窍低剂量组(12.5g/kg)、泻火化瘀通窍中剂量组(25.0g/kg)、泻火化瘀通窍高剂量组(37.5g/kg)和地塞米松组(20mg/kg),每组各6只。以血管阻断法建立CIRI大鼠模型,并给予相应药物干预。测定大鼠脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)阈值,苏木精-伊红染色观察大鼠耳蜗组织病变并定量评分,酶联免疫吸附法测定耳蜗组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量及活性,蛋白质印迹法检测大鼠耳蜗组织HMGB1、RAGE、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、磷酸化核因子-κB p65(phosphorylation nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)及活化caspase-3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠耳蜗毛细胞变形、缺损严重,苏木精-伊红半定量评分均显著增加(P<0.01),SOD、CAT活性含量均显著降低(P<0.01),而BAEP阈值、MDA含量均显著升高(P<0.01),HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、p-NF-κB p65、cleaved-caspase-3/caspase-3蛋白表达均显著增加(P<0.01);与模型组相比,泻火化瘀通窍各剂量组和地塞米松组大鼠的CAT活性含量均显著上升(P<0.01),泻火化瘀通窍中、高剂量组和地塞米松组大鼠的苏木精-伊红半定量评分、BAEP阈值、MDA含量、HMGB1和cleaved-caspase-3/caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05),泻火化瘀通窍高剂量组和地塞米松组大鼠的RAGE、p-NF-κB p65、TNF-α、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论泻火化瘀通窍法对CIRI大鼠具有改善作用,其作用与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

大黄牡丹汤调控HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路干预急性胰腺炎模型大鼠的机制

旨在研究大黄牡丹汤对急性胰腺炎模型大鼠的干预作用及可能的分子机制。将96只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、阳性药物对照组和大黄牡丹汤高、中、低3个剂量试验组(n=16)。采用胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠溶液复制急性胰腺炎模型,模型组及假手术组均采用灌胃方式给予生理盐水;对照组皮下注射奥曲肽;高、中、低3个剂量试验组分别灌胃不同剂量大黄牡丹汤水煎液,1次·d-1,连续6 d。常规麻醉后脱颈椎处死,心脏取血,开腹剖取胰腺组织。在光学显微镜下对胰腺的病理学改变进行观察,采用IHC和Western blot法检测胰腺组织HMGB1、RAGE、p-NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测胰腺组织HMGB1、RAGE基因表达水平,ELISA检测胰腺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6含量。结果发现:1)与假手术组相比,模型组大鼠一般生存状况较差,镜下可见胰腺组织明显肿胀以及扩张充血,胰腺组织中HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高(P<0.05);2)与模型组相比,治疗组大鼠一般生存状况不同程度改善,镜下间质性水肿以及坏死灶明显改善,HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著下降(P<0.05),其中,尤以大黄牡丹汤高剂量组最为明显(P<0.05)。本研究表明,大黄牡丹汤能够显著缓解大鼠急性胰腺炎疾病进展,其机制与其能够抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路激活,进而阻断炎性级联反应有关。

加味补阳还五颗粒对脑梗死大鼠HMGB1/RAGE信号通路的影响

目的观察加味补阳还五颗粒对脑梗死大鼠HMGB1/RAGE信号通路的影响。方法将健康雄性SD大鼠90只,按体质量用数字表法随机分为正常组、假手术组、模型组、加味补阳还五颗粒低剂量组、加味补阳还五颗粒中剂量组、加味补阳还五颗粒高剂量组、HMGB1抑制剂组、RAGE阻断剂组、阳性药物组各10只。分别取大鼠梗死区脑组织和血清。ELASA法检测血清中HMGB1和RAGE水平;Western blotting法分析脑组织中HMGB1表达水平。结果中等剂量的加味补阳还五颗粒可降低梗死区脑组织中HMGB1表达水平,可降低脑梗死大鼠血清中HMGB1和RAGE的含量。结论加味补阳还五颗粒可能通过影响脑梗死大鼠HMGB1/RAGE信号通路而发挥脑保护作用。中等剂量的加味补阳还五颗粒,折合人体剂量后每味药剂量如下:黄芪30 g,当归10 g,川芎6 g,赤芍10 g,丹参10 g,地龙10 g,茯苓10 g,陈皮6 g,杜仲10 g,天麻10 g。成人每日1剂,分两次服用。

HMGB1/RAGE蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨HMGB1/RAGE蛋白在食管鳞癌中的表达及其对食管鳞癌预后判定的作用。方法以食管鳞癌旁正常组织40例为对照,免疫组化检测80例食管鳞癌组织HMGB1、RAGE蛋白的表达,分析HMGB1、RAGE表达与临床病理因素的关系及其对食管鳞癌预后的影响。结果HMGB1、RAGE蛋白在食管鳞癌组织和正常鳞状上皮的阳性表达率分别为47.5%vs17.5%和72.5%vs42.5%,差异均具有统计学意义;HMGB1、RAGE蛋白的阳性表达与食管鳞癌浸润深度、淋巴结转移及TNM分期正相关(P<0.05),与癌细胞分化程度负相关(r分别为-0.51、-0.242,P<0.05);HMGB1和RAGE之间的表达呈正相关(r=0.35,P=0.001);HMGB1、RAGE蛋白阳性表达食管鳞癌患者预后较差,COX分析显示HMGB1蛋白为影响食管鳞癌预后的独立因素(HR=4.853,P=0.000)。结论HMGB1和RAGE蛋白的表达与食管鳞癌的临床病理学特征密切相关,HMGB1与其受体RAGE的结合可能参与了食管鳞癌的侵袭和转移,HMGB1可作为预测食管鳞癌预后的重要指标。

Neutrophil extracellular traps mediate the crosstalk between glioma progression and the tumor microenvironment via the HMGB1/RAGE/IL-8 axis

Objective:Neutrophil extracellular traps(NETs)produced by tumor-infiltrating neutrophils(TINs)are associated with poor prognosis in patients with several types of cancer.However,the mechanisms underlying the involvement of NETs in glioma progression remain largely unknown.This study aimed to elucidate the roles of NETs in biological processes that drive the crosstalk between glioma progression and the tumor microenvironment.Methods:Neutrophil infiltration and NETs formation were investigated in glioma tissue through immunohistochemistry,and their relationships with clinicopathological features and outcomes were statistically evaluated.The effects of NETs on glioma cell progression were studied in a co-culture system.In vivo and in vitro experiments validated the reactive oxygen species activity and cytokine production of TINs,as well as the ERK signaling pathway activation and the metastasis of gliomas.Results:Neutrophil infiltration and NETs formation were induced in high-grade glioma compared with low-grade glioma.NETs induced by TINs were determined to be an oncogenic marker of high-grade gliomas and to be involved in cell proliferation and invasion.NETs overproduction promoted glioma cell proliferation,migration,and invasion.Furthermore,HMGB1 was found to bind to RAGE and activate the NF-κB signaling pathway in vitro.In addition,NETs stimulated the NF-κB signaling pathway,thus promoting IL-8 secretion in glioblastoma.Subsequently,IL-8 recruited neutrophils which in turn mediated NETs formation via the PI3 K/AKT/ROS axis in TINs.Conclusions:Our results suggest that NETs produced by TINs mediate the crosstalk between glioma progression and the tumor microenvironment by regulating the HMGB1/RAGE/IL-8 axis.Targeting NETs formation or IL-8 secretion may be an effective approach to inhibit glioma progression.

益肝胶囊对药物性肝损伤大鼠HMGB1、RAGE和NF⁃κB蛋白表达的影响

目的:研究益肝胶囊对抗结核药物性肝损伤(ATB‐DILI)中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核因子‐κB(NF‐κB)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白表达的影响,探讨其对ATB‐DILI的保护作用和机制,为益肝胶囊的临床应用提供实验依据。方法:将24只大鼠分为两组,除空白组(n=6)灌胃0.9%氯化钠溶液外,其余18只给予异烟肼(INH)+利福平(RFP)(各50 mg⋅kg^(‐1)⋅d^(‐1))连续灌胃4周。然后将18只按每组6只随机分为3组(模型组、益肝胶囊低剂量组、益肝胶囊高剂量组),空白组与模型组继续灌胃0.9%氯化钠溶液,益肝胶囊低剂量组0.468 g/kg,益肝胶囊高剂量组1.872 g/kg[1]进行灌胃给药。4周后,HE染色观察肝的病理变化;检测ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL的含量;IHC检测HMGB1、NF‐κBp65、RAGE蛋白的表达;WB检测HMGB1、NF‐κBp65、RAGE、TNF‐α和IL‐1β的表达水平。结果:HE染色显示,模型组肝的结构排列较紊乱、肝细胞出现肿胀融合、炎性细胞数量增多并伴有点状坏死,而益肝胶囊各治疗组的上述病理变化有明显的改善;模型组ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL含量较空白组上升(P<0.05);益肝胶囊各治疗组ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL含量较模型组显著降低(P<0.05);与空白组比较模型组TNF‐α和IL‐1β的表达水平升高(P<0.05),HMGB1、NF‐κBp65、RAGE的表达增加(P<0.05);与模型组比较益肝胶囊各治疗组TNF‐α和IL‐1β的表达水平降低(P<0.05),HMGB1、NF‐κBp65、RAGE的表达下降(P<0.05)。结论:益肝胶囊可能通过HMGB1/RAGE/NF‐κBp65信号通路,抑制炎性因子的分泌,从而对ATB‐DILI起到保护作用。

松萝提取物通过调节HMGB1-RAGE炎症通路治疗类风湿关节炎的机制研究

目的 探讨松萝提取物通过调节(high mobility group protein, HMGB1-RAGE)信号通路治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的机制。方法 54只CIA大鼠随机平均分为空白组,模型组,羟氯喹组,松萝提取物高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组CIA大鼠均采用免疫诱导法建立RA模型,从造模第14 d后进行灌胃干预,连续用药14天后取血清及滑膜组织。ELISA检测(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、(interleukin-1,IL-1β)、(interleukin-6,IL-6)、(interleukin-17,IL-17)、、(interleukin-23,IL-23)浓度水平,Rt-PCR检测HMGB1、RAGE mRNA的表达,Western blot法检测HMGB1、RAGE的蛋白活性。结果 模型组检测指标明显高于空白组。经过14天的干预治疗后,羟氯喹组、松萝提取物高、中、低剂量检测指标均有不同程度降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),与羟氯喹组比较,松萝提取物高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 松萝提取物可抑制HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23在CIA大鼠中的表达。提示松萝提取物可能有望通过调节HMGB1-RAGE信号通路治疗类风湿关节炎。

黄芪多糖调节HMGB1-RAGE信号通路对自身免疫性心肌炎大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨黄芪多糖(AP)调节高迁移率族蛋白Box-1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠心肌损伤的影响。方法:取50只SPF级SD大鼠,适应性喂养1周,随机分为对照组、EAM组、AP组(30 g/kg)、rHMGB1组(8μg/kgr)、AP+rHMGB1组[Ap(30 g/kg)+rHMGB1(8μg/kg)],除对照组(弗氏完全佐剂)外,其余各组通过左、右后足垫皮下注射抗原佐剂乳化液方法建立EAM大鼠模型并按照上述剂量进行干预;3周后,超声仪检测心率(HR)、左心室射血分数(LVEF)和舒张末期内径(LVEDs);酶联免疫吸附(ELISA)检测各组大鼠血清中炎症因子水平;马松(Masson′s)及苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织纤维化及病理学变化;免疫印迹(Western blotting)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达。结果:与对照组比较,EAM组心肌结构紊乱及纤维化严重,病理评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、白细胞介素-6(IL-6)水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与EAM组比较,AP组病理损伤及纤维化得到改善,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著降低,LVEF显著增加(P<0.05),但rHMGB1组病理损伤及纤维化进一步加重,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与AP组比较,AP+rHMGB1组病理损伤及纤维化稍加重,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与rHMGB1组比较,AP+rHMGB1组病理损伤及纤维化得到改善,病理评分、TNF-α、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著降低,LVEF显著增加(P<0.05)。结论:AP可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路改善EAM大鼠心肌损伤。

绞股蓝皂苷调节HMGB1-RAGE信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨绞股蓝皂苷(Gyp)调节高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法使用不同浓度(0~400μmol/L)绞股蓝皂苷处理MG63细胞,CCK-8检测细胞活力。将MG63细胞分为对照组(Control组)、绞股蓝皂苷低、中、高浓度组(Gyp-L组、Gyp-M组、Gyp-H组,50、100、200μmol/L Gyp)、绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1阴性对照组(Gyp-H+pcDNA-NC组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-NC质粒)和绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1组(Gyp-H+pcDNA-HMGB1组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-HMGB1质粒)。Edu检测细胞增殖水平;Transwell小室和划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;ELISA检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶(MMP-9)和白介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测通路、凋亡及EMT相关蛋白。随后建立骨肉瘤移植小鼠模型,在体检验绞股蓝皂苷对骨肉瘤移植瘤生长的影响。结果25~400μmol/L的绞股蓝皂苷能降低MG63细胞活力。与Control组相比,Gyp-L组、Gyp-M组和Gyp-H组细胞Edu阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率、TGF-β、MMP-9和IL-6水平及Bcl-2、HMGB1、RAGE、N-cadherin和VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05);细胞凋亡率及Bax和E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05),且呈浓度依赖性。过表达HMGB1可部分逆转绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验结果表明,绞股蓝皂苷可显著抑制小鼠骨肉瘤移植瘤的生长(P<0.05)。结论绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用可能与抑制HMGB1-RAGE信号通路有关。

Effects of Yigan Capsule on the expression of HMGB1,RAGE and NF-κB protein in rats with drug-induced liver injury

Objective:To study the effect of Yigan capsule on the expression of high mobility group protein B1(HMGB1),nuclear factor-B(NF-κB)and receptor for advanced glycation end products(RAGE)in anti-tuberculosis drug-induced liver injury(ATB-DILI),and to explore its protective effect and mechanism on ATB-DILI,so as to provide experimental basis for the clinical application of Yigan capsule.Methods:Twenty-four rats were divided into two groups.Except for the blank group(n=6),the other 18 rats were given isoniazid(INH)+rifampicin(RFP)(50 mg/kg.d)for 4 weeks.Then 18 rats were randomly divided into three groups(model group,low dose group of Yigan capsule and high dose group of Yigan capsule)according to 6 rats in each group.The blank group and the model group were given 0.9%sodium chloride solution by intragastric administration.The low dose group of Yigan capsule was 0.468 g/kg,and the high dose group of Yigan capsule was 1.872 g/kg[1].After 4 weeks,the pathological changes of liver were observed by HE staining.The contents of ALT,AST,ALP,γ-GT and TBIL were detected.The expression of HMGB1,NF-κBp65 and RAGE protein was detected by IHC.The expression levels of HMGB1,NF-κBp65,RAGE,TNF-αand IL-1βwere detected by WB.Result:HE staining showed that the structure of the liver in the model group was disordered,the liver cells showed swelling and fusion,the number of inflammatory cells increased and accompanied by punctate necrosis,while the above pathological changes in each treatment group of Yigan capsule were significantly improved.The contents of ALT,AST,ALP,γ-GT and TBIL in the model group were higher than those in the blank group(P<0.05).The contents of ALT,AST,ALP,γ-GT and TBIL in each treatment group were significantly lower than those in the model group(P<0.05).Compared with the blank group,the expression levels of TNF-αand IL-1βin the model group were increased(P<0.05),and the expression levels of HMGB1,NF-κBp65 and RAGE were increased(P<0.05).Compared with the model group,the expression levels of TNF-αand IL-1βin each treatment group of Yigan capsule decreased(P<0.05),and the expression of HMGB1,NF-κBp65 and RAGE decreased(P<0.05).Conclusion:Yigan capsule may inhibit the secretion of inflammatory factors through HMGB1/RAGE/NF-κBp65 signaling pathway,thus protecting ATB-DILI.

甲基莲心碱调节HMGB1-RAGE信号通路对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用

目的探讨甲基莲心碱对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及HMGB1-RAGE信号通路在其中发挥的作用。方法将SD大鼠分为假手术组、模型组、甲基莲心碱低剂量组、甲基莲心碱高剂量组和甲基莲心碱高剂量+rHMGB1(重组蛋白HMGB1)组,每组10只。脊背神经结扎建立神经病理性疼痛大鼠模型。机械性刺激和热敏实验检测大鼠疼痛;酶联免疫吸附法(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)、P物质(SP)、5-羟色胺(5-HT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-10水平;六胺银染色观察大鼠脊髓背角形态学变化;TUNEL染色观察脊髓背角神经元凋亡;Western blot检测脊髓背角组织HMGB1、RAGE、NF-κB、p-NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经原纤维结构严重损伤,大鼠缩爪阈值和热敏潜伏期、IL-10水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,PGE2、SP、5-HT、TNF-α、IL-1β水平、脊髓背角神经元凋亡率、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,甲基莲心碱低、高剂量组大鼠神经原纤维结构损伤显著减轻,大鼠缩爪阈值和热敏潜伏期、IL-10水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,PGE2、SP、5-HT、TNF-α、IL-1β水平、脊髓背角神经元凋亡率、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。重组蛋白rHMGB1可部分逆转甲基莲心碱对神经病理性疼痛大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论甲基莲心碱通过抑制HMGB1-RAGE信号通路可减轻神经病理性疼痛大鼠炎症因子和疼痛因子表达、降低脊髓背角神经元凋亡,进而减轻疼痛。