扁舵鲣鱼低聚肽对HT-22细胞的神经保护和抗氧化作用

为了评价扁舵鲣鱼低聚肽(Auxis thazard peptides,ATP)的神经保护作用和抗氧化作用,以皮质酮和谷氨酸为诱导剂构建HT-22细胞损伤模型,以细胞形态学、细胞活力、细胞功能和生化指标等指标探究扁舵鲣鱼低聚肽对HT-22损伤细胞的保护作用。结果表明,0.9 mmol/L的皮质酮和15.0 mmol/L的谷氨酸诱导HT-22细胞24 h,细胞存活率为50%左右。在该条件下,10、20、40μg/mL的扁舵鲣鱼低聚肽均能显著抑制皮质酮和谷氨酸引起的HT-22细胞存活率下降,可提高血清素、乙酰胆碱酯酶和胆碱浓度,降低乙酰胆碱活性,抑制皮质酮诱导的细胞损伤,抑制谷氨酸诱导细胞产生的氧化应激,增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽酶与谷胱甘肽过氧化物酶的活性,减少氧化产物丙二醛和活性氧的产生。

哈蟆油酶解物激活MAPK/ERK信号凋亡途径修复皮质酮诱导HT-22细胞损伤作用

为研究哈蟆油(Oviductus Ranae,OR)对海马神经元细胞保护作用机制,该研究通过皮质酮(Corticosterone,CORT)诱导HT-22细胞损伤模型探究哈蟆油酶解物对小鼠海马神经元细胞(HT-22)细胞损伤模型的保护作用及其作用机制。采用CORT与HT-22细胞共同培养建立HT-22细胞损伤模型,给予哈蟆油酶解物再次孵育,将ERK信号通路抑制剂PD98059加入HT-22细胞中。采用MTT法、Hochest 33258染色、流式细胞术、Western blot技术检测HT-22细胞凋亡情况和相关蛋白表达以及MAPK/ERK信号通路蛋白表达。结果显示高水平CORT能够诱导HT-22细胞损伤,哈蟆油酶解物能够使CORT诱导的HT-22细胞活力提升62.5%~87.5%,凋亡比例降低50%~70%。哈蟆油酶解物能够上调BCL-2、P-ERK1/2蛋白表达,同时下调BAX、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达。上述结果表明,高水平CORT是通过抑制MAPK/ERK信号通路促进凋亡的发生从而诱导HT-22细胞损伤,哈蟆油酶解物能够通过激活MAPK/ERK信号通路调节BLC-2、BAX、Caspase-3、Caspase-9凋亡相关蛋白的表达进而抑制凋亡的发生减轻神经元损伤,该作用机制为哈蟆油发挥抗抑郁作用的关键途径之一。

细叶远志皂苷调控PPARγ/PGC-1α信号通路保护D-半乳糖协同Aβ_(1-42)损伤的HT-22细胞

以D-半乳糖协同Aβ_(1-42)诱导HT-22细胞损伤建立AD体外模型,旨在研究PPARγ/PGC-1α信号通路在D-半乳糖协同Aβ_(1-42)诱导HT-22细胞损伤中的作用及细叶远志皂苷的干预机制。采用MTT法检测细胞存活率;台盼蓝染料排斥实验检测细胞死亡率;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;Mito-Tracker荧光标记观察线粒体损伤程度;罗丹明123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;比色法检测超微量总ATP酶含量改变;Western Blot法检测PPARγ、PGC-1α、COX-2和NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测炎性因子TNF-α和IL-6的含量。结果显示,与模型组相比,细叶远志皂苷(10、20、40μmol/L)能显著提高D-半乳糖协同Aβ1-42诱导的HT-22细胞存活率,降低β-半乳糖苷酶阳性表达,增加细胞内ATP酶活性,阻止线粒体膜电位下降,抑制炎症因子TNF-α和IL-6水平的增加,下调NF-κB和COX-2蛋白的表达同时上调HT-22细胞中PPARγ、PGC-1α蛋白的表达。结果提示细叶远志皂苷在一定剂量范围内对D-半乳糖协同Aβ_(1-42)损伤的HT-22细胞具有保护作用,其保护机制可能与上调PPARγ/PGC-1α信号通路、增强线粒体能量代谢、阻止炎症反应有关。

甲基叔丁基醚诱导的HT-22细胞氧化应激体外研究

目的探讨甲基叔丁基醚(MTBE)能否诱导HT-22细胞发生氧化应激。方法 MTT法检测不同浓度的MTBE(0,0.5,1.0,2.5,5,10,25,50 mmol/L)染毒6 h,对HT-22细胞存活率的影响;用不同浓度的MTBE(0,0.5,1.0,2.5,5 mmol/L)处理细胞后6 h,检测细胞中氧化应激指标(ROS、SOD、GSH/GSSG)的变化。结果随着染毒剂量的增加,HT-22细胞存活率显著下降(P<0.05)。相对于对照组,仅0.5,1.0,2.5,5 mmol/L四个剂量组细胞的存活率在80%以上;选取这四个剂量组作为染毒剂量,检测MTBE染毒后6 h各剂量组细胞内氧化指标的改变,结果显示,与对照组相比,各剂量组内ROS荧光强度逐渐增强,氧化型GSSG含量明显升高(P<0.05),抗氧化酶SOD酶和GSH含量活力显著下降(P<0.05),呈明显的剂量反应关系。结论 MTBE可诱导HT-22细胞发生氧化应激,该作用可能是MTBE致神经系统损伤的重要途径。

运动血清对海马HT-22细胞突触形成及BDNF、TrkB蛋白表达的影响

目的:探讨运动血清对海马HT-22细胞突触形成和BDNF、TrkB蛋白表达量的影响。方法:测定运动员和无运动习惯人血清睾酮、皮质醇、肌酸激酶和尿素含量,分别采用运动员血清、无运动习惯人血清干预离体培养的海马HT-22细胞,观察不同血清培养下海马HT-22细胞的形态,并测定海马HT-22细胞BDNF和TrkB两种蛋白的表达量。结果:在进行运动训练后,血清中生化指标有了一定的变化;运动血清培养的HT-22细胞间的连接数量多于无运动习惯人;男性运动血清组细胞BDNF和TrkB含量均显著大于无运动习惯男性血清组(P<0.05);女性运动血清组细胞TrkB含量显著大于无运动习惯型女性血清组(P<0.05)。结论:运动血清能够增加HT-22细胞间的连接数量以及BDNF、TrkB的表达,对海马产生有益的影响。

PJ34对谷氨酸诱导的HT-22细胞损伤保护作用的研究

目的：探讨多聚ADP核糖聚合酶抑制剂PJ34对谷氨酸（Glu）诱导的神经毒性的保护作用，为PJ34在缺血性脑血管病的临床应用方面提供借鉴。方法：将培养后的ITT-22细胞用5mmol／LGlu诱导处理，分为Pf34组和对照组。PJ34组随后给予50umol／LPARP的特效抑制剂PJ34进行保护处理。观察各组细胞抑制率和PARP活性改变。结果：PJ34组培养24h后HT-22细胞抑制率较对照组明显下降（P〈0．05）。PJ34组PARP活性较对照组明显降低（P〈0．05）。结论：PJ34通过降低PARP活性，增加谷氨酸诱导的HT-22细胞的存活率，从而对细胞起到保护作用。

DNA损伤诱导转录因子4过表达可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制HT-22细胞增殖并促进其凋亡

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一种由细胞增殖凋亡紊乱引起的先天缺陷性疾病。本室前期利用RNA-Seq技术,发现小鼠神经管畸形胚胎脑组织中DNA损伤诱导转录因子-4(DNA damage-inducible transcript 4,Ddit4)表达水平增加,但其在神经管畸形中的作用尚不清楚。本文拟探索Ddit4过表达对海马神经元HT-22细胞增殖和凋亡的影响及相关机制,从而为后续研究Ddit4在小鼠神经管畸形中的作用奠定基础。本研究首先根据小鼠Ddit4序列构建真核表达载体pEX-3-Ddit4,限制性酶切分析和测序结果表明pEX-3-Ddit4构建成功。qRT-PCR和Western印迹检测显示转染pEX-3-Ddit4后,HT-22细胞中DDIT4的表达水平明显增加(P<0.01)。CCK-8和Western印迹结果显示,Ddit4过表达导致HT-22细胞增殖下降(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,转染pEX-3-Ddit4后,G0/G1期细胞比例增加、S期比例下降(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.05)。Western印迹检测发现,转染pEX-3-Ddit4能够显著上调切割胱天蛋白酶3(cleaved caspase3)水平(P<0.05),表明Ddit4过表达促进HT-22细胞凋亡。细胞免疫荧光及Western印迹结果显示,过表达Ddit4显著降低细胞β-联蛋白(β-catenin)、T细胞因子4、细胞周期蛋白D1和C-myc的表达水平(P<0.05),核内β-联蛋白减少,提示Ddit4过表达抑制了Wnt/β-catenin信号通路。过表达Ddit4的同时加入Wnt/β-catenin信号通路激动剂LiCl处理细胞可逆转上述现象,表明Ddit4过表达可能通过Wnt/β-catenin信号通路对HT-22细胞发挥抗增殖和促凋亡作用。

不同浓度葡萄糖对小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡的影响

目的探讨不同浓度葡萄糖对小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡的作用及机制。方法体外培养小鼠海马神经元HT-22细胞,使用不同浓度的高糖培养液(25、35、45、55、65、75 mmol/L)分别作用细胞24、48、72 h,以25 mmol/L糖浓度为对照组,其余组为实验组。采用CCK-8法检测各组细胞活力变化,筛选出最佳作用时间。HT-22细胞经不同浓度葡萄糖作用48 h后,微板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率;光学显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax蛋白表达量的变化。结果CCK-8结果显示,高糖可抑制HT-22细胞的活力,其抑制作用具有剂量和时间依赖性。高糖作用时间48 h时,细胞活力≥80%,可满足后续实验要求。随着葡萄糖浓度的增高,出现细胞数目减少,胞体变大,部分胞核溶解,突触断裂等改变,并且LDH释放率及凋亡率也明显增高(P<0.05),Western blot结果显示凋亡蛋白Bcl-2表达下降(P<0.05),Bax表达增高(P<0.05)。结论高糖能显著抑制HT-22细胞生长和活力,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与Bcl-2、Bax表达有关。

姜黄素对冈田酸损伤的HT-22细胞的保护作用

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)对冈田酸(okadaic acid,OA)损伤的小鼠海马神经元细胞保护作用的机制,为阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的治疗提供新的理论基础。方法:小鼠海马神经元HT-22细胞经OA处理,分为对照组、Cur组、OA组、OA+Cur组,MTT检测各组细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染色荧光显微镜及流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;DCFH-DA探针荧光显微镜及流式细胞仪测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;免疫印迹法检测Cleaved-caspase-3、Bcl-2、总微管相关蛋白Tau(t-Tau)、磷酸化的微管相关蛋白Tau(p-Tau)蛋白的水平。结果:与对照组相比,不同浓度的OA作用HT-22细胞24 h后,细胞活力呈剂量依赖性下降,差异有统计学意义。OA损伤持续一定时间后细胞内ROS水平升高,OA损伤后细胞凋亡增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低、凋亡蛋白Cleaved-caspase-3蛋白表达升高且t-Tau、p-Tau蛋白表达异常增加。姜黄素作用OA损伤的HT-22细胞后,与OA组相比,OA+Cur组细胞活性增加,凋亡率降低,细胞内ROS生成减少,同时Bcl-2表达增加、Cleaved-caspase-3蛋白和t-Tau、p-Tau蛋白表达减少。结论:姜黄素可以保护OA损伤的小鼠海马神经元细胞,为阿尔茨海默病相关神经元细胞的保护提供了新的理论依据。

表没食子儿茶素对小鼠离体脑片及氧糖剥夺损伤HT-22细胞系的保护作用

目的研究表没食子儿茶素(EGC)对小鼠离体脑片及海马神经元HT-22细胞系氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法采用小鼠脑片及海马神经元HT-22细胞系离体培养,应用OGD建立缺血损伤模型,分为正常对照组、模型对照组、 EGC小剂量组(1 mg·L^-1)、EGC中剂量组(3 mg·L^-1)、EGC大剂量组(10 mg·L^-1)。2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,CCK-8细胞活力测定,检测脑片和HT-22细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与正常对照组比较,模型对照组小鼠皮层及海马TTC染色吸光度值(A490)显著降低,LDH释放显著增高,SOD活力明显下降。与模型对照组比较,EGC小、中、大剂量组TTC染色A490的降低明显逆转(P<0.01),LDH释放量减少(P<0.01或P<0.05)。EGC干预可剂量依赖性地提高OGD后海马及皮层中SOD的活力(P<0.01)。3 mg·L^-1 EGC可逆转细胞模型缺血引起HT-22细胞活力下降及SOD活力降低。结论 EGC对小鼠离体脑片及HT-22细胞系OGD损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与提高组织及细胞中的SOD活力有关。

不同干预因素对糖氧剥夺诱导海马神经元HT-22细胞损伤的影响

目的 探究胰岛素、雌激素、脯氨酸羟化酶2（PHD-2）抑制剂IOX2和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）抑制剂2-甲氧基雌二醇（2-MeOE2）对糖氧剥夺诱导海马神经元HT-22细 胞损伤的影响。 方法 选取小鼠海马神经元HT-22细胞建立糖氧剥夺模型，并采用噻唑蓝（MTT）法确定糖氧剥夺和复糖、复氧时间。将细胞分为正常对照组、糖氧剥夺组、胰 岛素组（0.004、0.02、0.1、0.5 μmol/L）、雌激素组（0.1、1、10、100 μmol/L）、IOX2组（0.001、0.01、0.1、1 μmol/L）和2-MeOE2组（0.05、0.5、5、50 μmol/L）。 糖氧剥夺组进行糖氧剥夺处理和0.1%二甲基亚砜干预；其他实验组进行糖氧剥夺处理，在复糖、复氧阶段，将不同浓度胰岛素、雌激素、IOX2和2-MeOE2作用于经糖氧剥夺处理的 HT-22细胞进行干预，MTT法检测不同干预因素对HT-22细胞损伤的作用。 结果 与正常对照组比较，糖氧剥夺组14 h后细胞缺糖缺氧效果最佳，细胞存活率降至（41.3±0.6）% 。糖氧剥夺组复糖、复氧后0～3、3～6和6～9 h的细胞倍增时间均长于正常对照组［（16.8±0.7）h比（6.0±1.0）h、（14.4±1.8）h比（7.8±2.0）h、（14.2±1.1）h比（7.2 ±0.6）h］（均P＜0.01），而9～12 h时间段2组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。MTT结果表明，0.004、0.02、0.1、0.5 μmol/L胰岛素组细胞活力均明显高于糖氧剥夺组（P ＜0.01或P＜0.05）；0.1、1 μmol/L雌激素组细胞活力明显高于糖氧剥夺组（P＜0.01或P＜0.05），10、100 μmol/L雌激素组细胞活力与糖氧剥夺组比较，差异无统计学意义（均P ＞0.05）；0.001、0.01、0.1、1 μmol/L IOX2组细胞活力与糖氧剥夺组差异均无统计学意义（均P＞0.05）；0.05、0.5、5、50 μmol/L 2-MeOE2组细胞活力均明显低于糖氧剥夺 组（均P＜0.01）。 结论 14 h是糖氧剥夺模型缺糖缺氧的最佳时间，复糖、复氧阶段药物干预的适宜时间为9 h。胰岛素和低浓度的雌激素能够促进损伤细胞的恢复，IOX2对损 伤细胞的恢复无效，而2-MeOE2对损伤细胞的生长有不利作用。

应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型的实验研究

目的应用细胞应力加载系统建立HT-22细胞损伤模型。方法采用Bioflex细胞培养板接种HT-22细胞，应用FX-5000TFL细胞应力加载系统进行牵张损伤（形变率为13．4％、频率为5．0Hz）。并按照时间的长短分为对照组和6、12、24h组。应用数字全息显微镜（DHM）动态检测细胞平均面积和平均厚度值，采用锥虫蓝染色法和乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞存活率和LDH的释放情况，并通过流式细胞术检测细胞周期和Sub-G1期峰的变化。结果（1）DHM检测结果显示：与对照组比较，损伤6h后HT-22细胞面积由（603．9±28．5）μm2降至（182．9±4．5）μm2（t=21．93，P〈0．01），细胞厚度由（4．0±0．2）μm升至（8．3±0．3）μm（t=16．65，P〈0．01）。（2）细胞存活率结果显示：对照组细胞存活率为（95．0±1．6）％，而损伤后6h[（59．7±4．5）％]较对照组显著下降（t=10．44，P〈0．01）。损伤后12h和24h的细胞存活率[分别为（77．0±2．9）％、（85．0±3．3）％]虽较6h组上升（分别为t=4．56，P〈0．05；t=6．45，P〈0．01），但仍低于对照组（分别为t=7．56，P〈0．01；t=3．873，P〈0．05）。（3）LDH检测结果显示：细胞应力加载损伤后6h，LDH的释放水平[（273．9±4．6）ng／L]显著高于对照组[（51．7±5．8）ng／L，t=42．48，P〈0．01]，而12h组和24h组LDH的释放水平[分别为（255．2±4．4）ng／L、（240．2±6．0）ng／L]均低于6h组（分别为t=4．14，P〈0．05；t=6．28，P〈0．01）。（4）流式细胞术检测结果显示：与对照组[（0．6±0．3）％]相比，损伤6h组Sub—G1凋亡峰比例[（6．5±0．6）％]显著上升（t=14．90，P〈0．01），而细胞死亡比例随时间的延长而减少，尤以损伤24h后[（2．1±0．5）％]的峰值较6h组降低最为显著（t=9．61，P〈0．01）。结论应用细胞应力加载系统成功建立HT-22体外细胞损伤模型，该模型重复性好，操作简便，为进一步研究颅脑创伤的病理生理机制提供了一种精确、有效、可控的模型制作方法。

RIP3介导的坏死性凋亡在HT-22细胞牵张损伤模型中的作用

目的探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)介导的坏死性凋亡在HT-22细胞牵张损伤模型中的作用及其机制。方法将HT-22细胞接种在Bioflex培养板,采用细胞损伤控制仪(CIC),设定损伤参数(阀门压力30 PSI、气体脉冲压力3.5~4.5 PSI、气体脉冲时间50 ms),建立HT-22细胞牵张损伤模型。分别采用数字全息显微镜(DHM)、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、流式细胞术、western blot法检测牵张损伤后6 h Ctrl组、CIC组、GSK’872组间细胞形态差异,LDH浓度变化,细胞周期分布,RIP3/受体相互作用蛋白1(RIP1)/混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)、Akt/p-Akt/m TOR/p-m TOR、Caspase-8/X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)蛋白表达变化。结果与CIC组相比,应用GSK’872后细胞平均数量[(244.67±11.68)vs(190.67±15.28),t=4.865,P<0.01]、细胞平均面积[(260.14±16.81)μm2vs(175.91±15.00)μm2,t=6.476,P<0.01]有所增加,细胞平均厚度有所减小[(6.12±0.47)μm vs(8.04±0.48)μm,t=4.942,P<0.01];LDH浓度有所下降[(222.74±11.06)ng/l vs(275.93±12.26)ng/l,t=5.581,P<0.01];细胞周期有所恢复[Sub-G1:(0.33±0.15)%vs(6.51±0.63)%,t=16.530,P<0.01;G0/G1:(46.67±2.96)%vs(33.04±7.07)%,t=3.085,P<0.05];能够降低RIP3[(0.73±0.04)vs(1.09±0.09),t=6.239,P<0.01]、RIP1[(0.75±0.05)vs(0.91±0.05),t=4.211,P<0.05]、MLKL[(0.56±0.03)vs(0.70±0.04),t=4.785,P<0.01]、Akt[(0.49±0.05)vs(0.77±0.05),t=6.763,P<0.01]、p-Akt[(0.88±0.05)vs(1.06±0.05),t=4.509,P<0.05]、m TOR[(0.81±0.02)vs(0.90±0.05),t=2.813,P<0.05]、p-m TOR[(0.65±0.05)vs(1.00±0.05),t=8.413,P<0.01]、XIAP[(0.50±0.05)vs(0.73±0.05),t=5.814,P<0.01]蛋白表达,并可促进Caspase-8蛋白表达持续升高[(0.96±0.05)vs(0.75±0.05),t=5.351,P<0.01],差异具有统计学意义。结论 RIP3介导的坏死性凋亡在HT-22细胞牵张损伤模型中起到重要作用,应用GSK’872可减轻HT-22细胞牵张损伤的程度,提示RIP3有可能成为将来临床上治疗颅脑创伤新的靶点。

红参-制何首乌药对对神经细胞保护作用的谱效关系

目的建立红参-制何首乌药对不同提取工艺的超高效液相色谱(UHPLC)指纹图谱,并研究其对Aβ_(1-42)诱导HT22细胞模型保护作用的谱效关系。方法制备红参-制何首乌药对30%乙醇回流提取物、30%乙醇渗漉提取物、70%乙醇回流提取物、70%乙醇渗漉提取物和水提取物。采用UHPLC法进行测定并结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)建立不同工艺提取物的UHPLC指纹图谱,并进行共有峰指认。采用Aβ_(1-42)诱导海马神经元HT22细胞,利用MTT法评估不同工艺提取物对模型的保护,考察红参-制何首乌药对不同提取工艺对神经细胞的保护作用;采用灰色关联度分析法、偏最小二乘法(PLS)分析不同提取工艺UHPLC指纹图谱中共有峰与神经细胞保护的相关性。结果红参-制何首乌药对不同提取工艺有19个共有峰,通过化学对照品指认13个成分。经灰色关联度分析发现,14个共有峰与神经细胞保护的关联度均大于0.6,呈相关性。经PLS分析发现10个成分对神经细胞保护作用的影响较大。结论建立红参-制何首乌药对不同提取工艺UHPLC指纹图谱并指认了19个共有峰成分;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚、20(S)-人参皂苷Rg2、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd和14、17、18号峰所代表的化学成分可能是神经细胞保护作用的药效物质。

食欲素在细胞氧化应激中的神经保护作用及其机制研究

目的 探讨食欲素(Orexin)在氧化应激中的具体作用及其机制。方法 培养海马神经元细胞系HT-22细胞,随机分为对照组、H_(2)O_(2)(hydrogen peroxide)组、OA(Orexin A)组、OB(Orexin B)组、H_(2)O_(2)+OA组及H_(2)O_(2)+OB组,通过H_(2)O_(2)处理HT-22细胞建立氧化应激体外模型,采用显微镜分析方法检测各组细胞数量变化;利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)及蛋白印迹(Westernblotting)等方法探究转录因子Nrf2在HT-22细胞氧化应激模型中的表达水平及其作用。结果 与对照组相比,H_(2)O_(2)显著增强HT-22细胞的死亡(P<0.05);给予OA及OB处理后,与H_(2)O_(2)组相比,OA及OB均显著降低H_(2)O_(2)引起的HT-22细胞的死亡(P<0.05);与对照组相比,H_(2)O_(2)处理的HT-22细胞Nrf2的基因表达水平显著升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,OA和OB显著增加HT-22细胞内的Nrf2的表达水平(P<0.05)。结论 食欲素可通过增强HT-22细胞内Nrf2的表达水平降低H_(2)O_(2)引起的HT-22细胞的神经损伤,进而发挥神经保护作用。

基于Cer通路探讨肝豆汤对Wilson病模型高铜诱导海马神经元细胞损伤的保护作用

目的:探讨肝豆汤调控海马神经元内神经酰胺(Cer)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验采用海马神经元HT-22细胞,分为正常组,模型组,10%,15%及20%肝豆汤组5个组,模型组为硫酸铜(CuSO_4)孵育HT-22细胞所得,正常组加入空白含药血清,10%,15%及20%肝豆汤组分别加含不同体积分数(10%,15%,20%)肝豆汤兔血清的培养基培养。噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量CuSO_4作用不同时间点对HT-22细胞生长和增殖的影响;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Cer信号通路相关蛋白表达情况。结果:MTT结果显示CuSO_4在一定时间和浓度范围内对HT-22细胞生长和增殖有明显抑制作用;流式细胞仪检测发现,与正常组比较,模型组ROS荧光强度显著增加(P <0. 01),肝豆汤组较模型组可显著降低细胞内ROS的释放量(P <0. 01)。Western blot检测结果显示与模型组比较,肝豆汤组可明显降低细胞内酸性鞘磷脂水解酶(ASM),Cer,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK),细胞色素C(Cyt C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达(P <0. 05,P <0. 01)。结论:高铜可诱导HT-22细胞内线粒体氧化应激并引起Cer信号通路失活,从而诱导海马神经元损伤的发生。肝豆汤可能通过促进过量铜排出而抑制细胞内ASM,Cer,p38 MAPK,Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达,从而减轻高铜对海马神经元的损伤作用。肝豆汤可通过减少脑内铜含量,进而调控Cer信号通路达到减轻高铜诱导海马神经元损伤的治疗效果。