一种被毛孢(Hirsutella sp.)培养液中自由基清除剂的分析、分离和制备

【目的】在一次对虫生真菌代谢物进行大规模的清除自由基活性物质筛选中,发现一种被毛孢(Hirsutella sp.)菌株RCEF0881发酵液中存在有较强的清除自由基活性物质。本研究目的是初步搞清这些活性成分的具体组成,并制备出一定量的纯品用于进一步的结构鉴定。【方法】用有机溶剂法提取活性成分;用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)酶标仪法和薄层色谱法进行活性测定;用高分辨液质联用方法进行活性成分初步分析和鉴定;用反相制备色谱法制备活性组分。【结果】提取实验结果表明具清除自由基活性的物质能较好地被乙酸乙酯提取出来;液相色谱-质谱-活性测定分析表明提取物中活性组分的可能分子式分别为C7H6O4、C8H8O3和C12H14N2O。结合色谱特性、紫外光谱特征、质谱碎片和数据库查询可初步推断它们分别为二羟基苯甲酸、羟基甲基苯甲酸和生物碱类物质,但具体结构还有待于进一步确认。从高效液相色谱和质谱离子流的峰面积可知上述3种活性物质中C12H14N2O的含量最高。本研究成功地用反相制备色谱制备出该天然活性组分的纯品。该3种清除自由基活性物质都是首次发现存在于虫生真菌的代谢物中。

一种被毛孢中天然色素的提取分离和结构鉴定

利用二氯甲烷和乙酸乙酯混合物(体积比1:1)提取出了一种被毛孢RCEF0851菌丝体中的色素,用高效液相色谱方法从提取物中分离纯化出一种橘黄色纯化合物Hh-2。该色素用显色反应、质谱、紫外和核磁共振谱等方法鉴定为醌茜素(skyrin)。虽然该化合物是一已知化合物,但是该物质在虫生真菌中发现尚属首次。

一种被毛孢菌丝体提取物的免疫调节活性研究

经多菌株的虫生真菌生物活性筛选,发现一株被毛孢菌株RCEF0851发酵物具有较强的免疫增强作用,进一步采用荧光定量PCR方法研究RCEF0851不同提取物对体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7的IL-1β、IL-6和TNF-α转录水平的影响。结果表明,乙酸乙酯提取物能显著提高TNF-a转录水平的表达,但对IL-1β和IL-6的转录调节作用不明显;水提物和甲醇提取物能明显提高小鼠巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平,表明它们具有免疫增强作用。

生防真菌被毛孢的研究进展

介绍生防真菌被毛孢的分类、形态特征、种类、分布,对昆虫、螨类及植物寄生线虫等农业害虫的侵染机制、生防效果及分子生物学在被毛孢研究方面的应用,重点介绍了汤普森被毛孢、洛斯里被毛孢和明尼苏达被毛孢。

泰山虫草无性型的分子研究

目的:从基因水平确定泰山虫草的无性型。方法:以rDNA ITS区为分子指标,采用PCR扩增、测序及与其它已知虫草ITS区的序列对比的方法。结果:经GenBank的Blast搜索,该序列与细脚拟青霉(Paecilomyces te-nuipes)的ITS序列完全相同(100%)。结论:首次对泰山虫草的无性阶段进行比较分析,从分子水平证明泰山虫草为棒束孢(Isariafarinosa),是淡黄虫草无性型,不是冬虫夏草的无性型(中国被毛孢Hirsutella sinensis)。

冬虫夏草寄主昆虫选育及生殖退化研究

选育发育速度快、繁殖能力强、中国被毛孢侵染率和冬虫夏草产出率高的寄主昆虫品系是冬虫夏草培植的基础,同时明确冬虫夏草的寄主昆虫蝙蝠蛾退化机制是保证冬虫夏草培植的条件。本文从冬虫夏草产区采集蝙蝠蛾种群种质资源,分别针对蝙蝠蛾发育速度、繁殖能力、中国被毛孢侵染率、冬虫夏草产出率4个方面通过杂交及四代选育,获得新种群(A1),该种群对冬虫夏草繁育环境的适应力强,发育整齐度高,繁育一代的种群扩繁倍数从8.2倍提高至26.3倍;对中国被毛孢的敏感性较好,侵染率高,冬虫夏草产出率从原始种群的11.2%提高至18.5%。同时,仿照高原生态环境长期饲养冬虫夏草的寄主昆虫蝙蝠蛾,其子代出现雌雄比失调、发育历期分化、生殖力降低等退化现象。经过研究分析得知卵孵化率下降的主要原因是雄性的生殖力下降。组织切片观察蝙蝠蛾雄性生殖系统,在幼虫后期、蛹、成虫期会出现生精囊减少及畸形等异常情况,推测此为雄性生殖力降低、卵孵化率下降的生理原因。研究结果为高效、稳定地饲养蝙蝠蛾保证冬虫夏草培植具有重要意义。