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利用Hoechst 33342-PI荧光双染法评价氰氨化钙对茄病镰刀菌生物活性的影响 被引量:1
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作者 贲海燕 霍建飞 +5 位作者 姚玉荣 高苇 王万立 郝永娟 曲红云 张雪岩 《山东农业科学》 北大核心 2023年第2期127-134,共8页
本试验以茄病镰刀菌(Fusarium solani)为研究对象,探索了Hoechst 33342及PI荧光染剂对病菌不同活性孢子的色泽差异,明确了病原菌经Hoechst 33342染色后的活孢子发蓝色荧光,最佳染色浓度和时间为1μg/mL、20 min;碘化丙啶(PI)染色后的死... 本试验以茄病镰刀菌(Fusarium solani)为研究对象,探索了Hoechst 33342及PI荧光染剂对病菌不同活性孢子的色泽差异,明确了病原菌经Hoechst 33342染色后的活孢子发蓝色荧光,最佳染色浓度和时间为1μg/mL、20 min;碘化丙啶(PI)染色后的死孢子发红色荧光,最佳染色浓度和时间为3μg/mL、10 min。并由此建立了Hoechst 33342-PI荧光双染技术,应用该技术可快速、清晰地甄别出不同浓度氰氨化钙对茄病镰刀菌孢子活性和萌发的影响,结果表明,氰氨化钙对茄病镰刀菌的灭杀效果随着浓度增高而增强,且与处理时间呈正相关。2000 mg/L氰氨化钙处理3 h,孢子致死率高达83.97%;500~1000 mg/L处理3 h,孢子致死率为7.15%~26.80%,孢子萌发率为2.40%~3.59%,处理48 h时,孢子致死率达92.07%~100%。250 mg/L氰氨化钙对茄病镰刀菌的致死效果微弱或没有影响。本研究通过菌丝速率法和生物量法进一步验证了应用Hoechst 33342-PI荧光双染法评价氰氨化钙对茄病镰刀菌孢子活力的影响是可行的。这为突破植物病原微生物药剂室内常规筛选方法提供了新的思路和技术手段。 展开更多
关键词 hoechst 33342-PI荧光双染法 氰氨化钙 茄病镰刀菌 生物活性
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Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色技术检测神经细胞凋亡的对比研究 被引量:14
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作者 杨细飞 贺春娥 +3 位作者 汤瑞华 田生礼 刘建军 田生礼 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2014年第3期180-184,共5页
目的:利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法(TUNEL染色检测纳米二氧化硅(nm-SiO2)对神经细胞凋亡的影响,比较两种检测方法的优缺点。方法:以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象,15和30 nm粒径的nm-SiO2(剂量为2.5... 目的:利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法(TUNEL染色检测纳米二氧化硅(nm-SiO2)对神经细胞凋亡的影响,比较两种检测方法的优缺点。方法:以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象,15和30 nm粒径的nm-SiO2(剂量为2.5、5、10μg/mL)分别处理细胞24 h,另设1-5 m SiO2组和溶剂对照组,采用Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色检测各处理组对SK-N-SH细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,两种检测方法分析均显示了nm-SiO2处理组SK-N-SH细胞凋亡率显著增加(P〈0.05),且具有尺寸、剂量依赖性,而微米级SiO2对凋亡的影响不显著(P〉0.05)。结论:nm-SiO2能诱导SK-N-SH细胞凋亡。Hoechst33342/PI双染法特异性高,简单易行;TUNEL法灵敏度高,能检测少量的细胞凋亡,但成本较高,两种方法可结合使用以便更加准确的检测神经细胞的凋亡。 展开更多
关键词 纳米二氧化硅 神经细胞 凋亡 hoechst33342 PI双染 TUNEL
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Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较 被引量:49
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作者 张伟 梁智辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1209-1212,共4页
目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡... 目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。 展开更多
关键词 凋亡 ANNEXIN V-FITC/PI hoechst33342/PI 流式细胞术
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355nm和407nm激光激发Hoechst 33342检测细胞凋亡的比较研究 被引量:5
4
作者 李雪 吴亚兰 +2 位作者 黄鑫 黄巧容 孟文彤 《华西医学》 CAS 2013年第6期875-878,共4页
目的比较使用流式细胞仪355 nm和407 nm激光器激发Hochest33342检测细胞凋亡。方法通过ATO药物诱导急性早幼粒白血病细胞(NB4)及血清饥饿法诱导人肺癌细胞(NCl-H292)细胞凋亡,取24、48 h时间点收集细胞,进行Hoechst33342-碘化丙啶(PI)双... 目的比较使用流式细胞仪355 nm和407 nm激光器激发Hochest33342检测细胞凋亡。方法通过ATO药物诱导急性早幼粒白血病细胞(NB4)及血清饥饿法诱导人肺癌细胞(NCl-H292)细胞凋亡,取24、48 h时间点收集细胞,进行Hoechst33342-碘化丙啶(PI)双染,分别在配置有两种激光器的流式细胞仪上检测细胞凋亡。结果细胞经处理后24 h,355 nm激光器检测NB4细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-(:28.20±4.80)%;NCl-H292细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-:(22.47±2.78)%。407 nm激光器检测NB4细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-(:25.10±6.19)%。NCl-H292细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-:20.47±1.46%。处理后48 h,355 nm激光器检测NB4细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-(:33.60±3.75)%。NCl-H292细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-(:26.77±1.16)%。407 nm激光器检测NB4细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-:(29.47±2.33)%。NCl-H292细胞凋亡率Hoechst33342+/PI-:(31.47±3.05)%。两种细胞处理后比处理前凋亡率明显升高,但355 nm激光器与407 nm激光器检测的凋亡结果差异不明显(P>0.05)。结论 407 nm激光器激发Hoechst33342可检测细胞凋亡。 展开更多
关键词 355nm激光 407nm激光 流式细胞仪 凋亡 hoechst 33342
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Hoechst33342对大鼠骨髓间充质干细胞的标记 被引量:3
5
作者 谢兴文 侯费祎 +2 位作者 李宁 李盛华 宋敏 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第49期9146-9151,共6页
背景:hoechst33342可以用于对骨髓间充质干细胞的标记,但是其标记的最佳浓度的研究目前尚未见报道。目的:观察不同浓度的Hoechst33342对大骨髓间充质干细胞的增殖、标记率的影响,以及其荧光持续时间。方法:贴壁筛选提取大鼠骨髓间充质... 背景:hoechst33342可以用于对骨髓间充质干细胞的标记,但是其标记的最佳浓度的研究目前尚未见报道。目的:观察不同浓度的Hoechst33342对大骨髓间充质干细胞的增殖、标记率的影响,以及其荧光持续时间。方法:贴壁筛选提取大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第3代,流式细胞仪检测其表面抗原,成骨、成脂诱导后染色,用不同浓度Hoechst33342标记大鼠骨髓间充质干细胞后,检测标记后的大鼠骨髓间充质干细胞增殖率、标记率,荧光显微镜下观察其持续时间。结果与结论:①hoechst33342可以用于骨髓间充质干细胞的标记,其最佳标记浓度为5mg/L,标记持续时间较长,30d未见猝灭。②其荧光激发后对细胞有损伤作用,标记浓度超过10mg/L时,可致细胞死亡。③标记浓度在7.5mg/L时,细胞增殖受到抑制;标记浓度在2.5mg/L时,标记时间较短,7d时荧光减弱,14d荧光消失。结果表明,hoechst33342可用于骨髓间充质干细胞的标记,其对骨髓间充质干细胞标记的最佳浓度为5mg/L;细胞表型鉴定CD45阴性,CD44,CD90均呈阳性表达。 展开更多
关键词 细胞标记 骨髓间充质干细胞 hoechst33342 最佳浓度 标记率 干细胞
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Hoechst33342与DAPI标记细胞核对胞内活性氧检测效果的比较 被引量:2
6
作者 周玉环 刘树迎 +4 位作者 平苏宁 王晶晶 陈大堤 黄锦桃 李朝红 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期75-78,共4页
目的探讨Hoechst 33342与DAPI两种荧光染料标记细胞核后对细胞内活性氧水平的影响。方法静息培养的血管平滑肌细胞加入晚期糖基化终末产物作用10 min,加入标记活性氧的荧光探针H2DCFDA,再分别加入Hoechst 33342和DAPI不同荧光染料进行... 目的探讨Hoechst 33342与DAPI两种荧光染料标记细胞核后对细胞内活性氧水平的影响。方法静息培养的血管平滑肌细胞加入晚期糖基化终末产物作用10 min,加入标记活性氧的荧光探针H2DCFDA,再分别加入Hoechst 33342和DAPI不同荧光染料进行核标记。荧光显微镜下观察细胞核被标记的数目与细胞内活性氧的荧光水平。结果 Hoechst 33342染料标记5 min后即可见细胞核被标记上,随着时间的延长被标记的核数目并不发生改变;而与之明显不同的是,DAPI染料标记5 min时,只有几个细胞核被标记上,但随着时间的延长被标记的核数目越来越多。Hoechst 33342标记后细胞内活性氧的荧光强度并不随时间的延长发生变化,而DAPI标记后细胞内活性氧绿色荧光的细胞数就越少,DAPI标记的细胞核数与显示活性氧绿色荧光的细胞数呈反比。这些结果提示,DAPI染料在标记细胞核时破坏了活性氧在细胞内的储存,干扰了实验结果。结论检测细胞内活性氧时,应使用Hoechst 33342核标记染料而不能用DAPI。 展开更多
关键词 活性氧 血管平滑肌细胞 hoechst 33342 DAPI
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Hoechst33342标记大鼠骨髓间充质干细胞及其在大鼠体内的迁移 被引量:1
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作者 侯费祎 谢兴文 +2 位作者 席芳琴 李盛华 宋敏 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期618-622,共5页
目的检测外源性的BMSCs是否可向骨缺损处迁移,Hoechest3342标记BMSCs,从而跟踪外源性BMSCs在体内的迁移,研究其归巢机制可行性。方法贴壁筛选提取大鼠BMSCs,培养至第三代,用Hoechst33342标记后,尾静脉回植于颅骨缺损的大鼠体内,14d后处... 目的检测外源性的BMSCs是否可向骨缺损处迁移,Hoechest3342标记BMSCs,从而跟踪外源性BMSCs在体内的迁移,研究其归巢机制可行性。方法贴壁筛选提取大鼠BMSCs,培养至第三代,用Hoechst33342标记后,尾静脉回植于颅骨缺损的大鼠体内,14d后处死大鼠,取颅骨,切片,荧光显微镜下观察细胞迁移情况。主要观察指标:光学显微镜下观察不同时期细胞形态和表面抗原检测;荧光显微镜下观察Hoechst33342标记后细胞形态,以及细胞增殖率;组织切片上Hoechst33342标记的阳性细胞。结果筛选纯化的BMSCs呈均一的成纤维细胞样,贴壁生长,以长梭形为主。CD45阴性,CD44、CD90均呈阳性表达;组织切片上可见Hoechst33342标记大鼠的BMSCs。结论外源性的BMSCs可向骨缺损处迁移;Hoechst33342可以标记BMSCs,从而跟踪外源性BMSCs在体内的迁移,进而研究其归巢机制。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞迁移 hoechst33342
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Hoechst33342与DAPI标记细胞核对细胞内活性氧检测的影响比较
8
作者 周玉环 刘树迎 +4 位作者 平苏宁 王晶晶 陈大堤 黄锦桃 李朝红 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期I0045-I0045,共1页
目的探讨Hoechst33342与DAPI两种荧光染料标记细胞核后对细胞内活性氧水平的影响。方法静息培养的血管平滑肌细胞加入晚期糖基化终末产物作用10min,加入标记活性氧的荧光探针H2DCFDA,再分别加入Hoechst33342和DAPI两种荧光染料进行核... 目的探讨Hoechst33342与DAPI两种荧光染料标记细胞核后对细胞内活性氧水平的影响。方法静息培养的血管平滑肌细胞加入晚期糖基化终末产物作用10min,加入标记活性氧的荧光探针H2DCFDA,再分别加入Hoechst33342和DAPI两种荧光染料进行核标记。荧光显微镜下观察细胞核被标记的数目与其细胞内活性氧的荧光水平,比较两种染料标记细胞核后细胞内活性氧的荧光强度。结果Hoechst33342染料标记5min后即可见细胞核被标记上,并且随着时间延长被标记的核数目并不发生改变;而与之明显不同的是,DAPI染料标记5min时,只有几个细胞核被标记上,但随着时间的延长,被标记的核数目越来越多。Hoechst33342标记后细胞内活性氧的荧光强度并不随时间延长发生变化,而DAPI标记随时间延长,被标记的细胞核数目越多,显示活性氧绿色荧光的细胞数就越少,DAPI标记的细胞核数与显示活性氧绿色荧光的细胞数呈反比。这些结果提示,DAPI染料在标记细胞核时破坏了活性氧在细胞内的储存,干扰了实验结果。结论检测细胞内活性氧时,应使用Hoechst33342核标记染料而不能用DAPI核标记染料。[作者简介]周玉环,硕士研究生,研究方向为血管重构的分子机制与防治。 展开更多
关键词 活性氧 晚期糖基化终末产物 hoechst33342标记 DAPI标记
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甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的RIN-m细胞凋亡的影响 被引量:28
9
作者 傅静奕 李焱 +3 位作者 严励 张淼 陈黎红 傅祖植 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期413-416,共4页
【目的】研究甘精胰岛素(insulinglargine)对游离脂肪酸诱导的β细胞凋亡是否具有保护作用。【方法】不同浓度的甘精胰岛素、普通人胰岛素以及IGF-1与0.3mmol/L棕榈酸分别加入RIN-m细胞培养液中,24h后,采用Hoechst33342染色、流式细胞... 【目的】研究甘精胰岛素(insulinglargine)对游离脂肪酸诱导的β细胞凋亡是否具有保护作用。【方法】不同浓度的甘精胰岛素、普通人胰岛素以及IGF-1与0.3mmol/L棕榈酸分别加入RIN-m细胞培养液中,24h后,采用Hoechst33342染色、流式细胞仪以及ELISA方法检测RIN-m细胞的凋亡。【结果】0.3mmol/L棕榈酸诱导RIN-m细胞凋亡率达42.10%±4.24%,同时加入甘精胰岛素或者普通胰岛素(均为100nmol/L)的凋亡率分别为32.00%±3.08%和35.97%±3.14%,甘精胰岛素对凋亡的抑制作用明显强于普通胰岛素,并呈剂量依赖性。【结论】甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞凋亡具有呈剂量依赖性的保护作用。 展开更多
关键词 甘精胰岛素 游离脂肪酸 hoechst33342 Β细胞凋亡 普通胰岛素 剂量依赖性 保护作用 细胞培养液 IGF-1 流式细胞仪 细胞凋亡率 mol/L 不同浓度 人胰岛素 抑制作用 棕榈酸 24h m细胞
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淫羊藿苷对缺氧诱导血管内皮细胞损伤的保护作用 被引量:36
10
作者 吉瑞瑞 李付英 +2 位作者 张雪静 段重高 周亚伟 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期525-530,共6页
目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对缺氧所致血管内皮细胞(vascularendothelialcells,VECs)损伤的影响。方法建立体外细胞缺氧模型,用MTT法观察ICA对缺氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及... 目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对缺氧所致血管内皮细胞(vascularendothelialcells,VECs)损伤的影响。方法建立体外细胞缺氧模型,用MTT法观察ICA对缺氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活力,并对细胞进行Hoechst33342荧光染色、电镜观察细胞超微结构,运用流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂情况,以观察ICA对缺氧诱导的内皮细胞凋亡的影响。结果ICA能抑制缺氧引起的血管内皮细胞的减少,降低LDH活力,并抑制缺氧条件下MDA生成,提高SOD活力;缺氧能诱导血管内皮细胞凋亡,表现为细胞核浓缩,沿核膜排列成块状,DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型“梯形条带”,流式细胞仪分析呈现典型凋亡亚二倍体峰。ICA能显著抑制缺氧诱导的内皮细胞凋亡。结论ICA具有保护缺氧诱导的血管内皮细胞损伤的作用,其作用机制与抗脂质过氧化物产生、提高SOD活力以及抗细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 血管内皮细胞损伤 缺氧诱导 淫羊藿苷 保护作用 超氧化物歧化酶(SOD) hoechst33342 DNA琼脂糖凝胶电泳 内皮细胞凋亡 丙二醛(MDA) 流式细胞仪分析 抗脂质过氧化物 SOD活力 内皮细胞活性 细胞超微结构 凝胶电泳分析 cells
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施万细胞长期植入中枢神经系统后存活及迁移的实验研究 被引量:5
11
作者 万虹 李德志 +2 位作者 杨飞 历俊华 王身国 《中国康复理论与实践》 CSCD 2006年第8期645-646,i0001,共3页
目的观察施万细胞长期移植入中枢神经系统后是否存活。方法取大鼠施万细胞体外培养,一部分经5'溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植至电针损伤的大鼠中脑网状结构,另一部分经Hoechst33342标记后置于PLGA支架内再移植至大鼠全横断脊髓损伤... 目的观察施万细胞长期移植入中枢神经系统后是否存活。方法取大鼠施万细胞体外培养,一部分经5'溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后移植至电针损伤的大鼠中脑网状结构,另一部分经Hoechst33342标记后置于PLGA支架内再移植至大鼠全横断脊髓损伤处,分别于移植后的8个月和11个月处死动物,行BrdU免疫组织化学染色及荧光显微镜观察。结果施万细胞移植入脑内8个月后仍可见较多BrdU阳性细胞,褐色椭圆形,并向大脑皮层迁移;移植于脊髓11个月后荧光显微镜下可见许多Hoechst33342阳性细胞,发蓝色荧光,形态不规则,在PLGA支架内及其头、尾端脊髓实质内都可见到。结论施万细胞移植入中枢神经系统后可长期存活,并向远端迁移。 展开更多
关键词 施万细胞 中枢神经系统 5-溴脱氧尿嘧啶 hoechst 33342 大鼠
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氟尿嘧啶引起大鼠气管损伤修复过程中干细胞的定位 被引量:13
12
作者 丁强 贾心善 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期328-330,共3页
目的 气管干细胞的原位观察。 方法 使用 5 氟尿嘧啶 (5 FU)造成大鼠离体气管环的严重损伤 ,采用光镜、PCNA免疫组织化学 ,以及Hoechst33342染色观察气管黏膜的修复过程。 结果  5 FU作用 12h后 ,气管上皮脱落 ,可见少量间隔分... 目的 气管干细胞的原位观察。 方法 使用 5 氟尿嘧啶 (5 FU)造成大鼠离体气管环的严重损伤 ,采用光镜、PCNA免疫组织化学 ,以及Hoechst33342染色观察气管黏膜的修复过程。 结果  5 FU作用 12h后 ,气管上皮脱落 ,可见少量间隔分布的类似裸核的细胞呈钉状位于基底膜上 ,PCNA染色阴性 (G0 期细胞 ) ,其中少数细胞Hoechst33342染色阴性。去除 5 FU 6h后 ,气管黏膜由扁平上皮覆盖 ;4 8h后 ,气管环恢复假复层纤毛柱状上皮。结论  5 FU能杀死处于细胞周期的气管上皮细胞 ,对G0 期细胞作用很小 ,残留于基底膜上的裸核样的G0 期细胞中含有干细胞 ,其Hoechst33342染色阴性 ,并具有排出荧光染料的能力 ,正是这些细胞的增殖分化 ,修复了损伤的气管环。 展开更多
关键词 气管干细胞 hoechst33342 损伤 修复 大鼠
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边缘细胞的研究进展 被引量:3
13
作者 曹志飞 李新平 +3 位作者 陈志欣 顾振纶 周文轩 郭次仪 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1405-1408,共4页
边缘细胞(side population cel1s)是一类可以特异性地将Hoechst33342染料快速泵出细胞外的细胞,广泛分布于多种正常组织、肿瘤组织和细胞系中,被作为一种通用的干细胞表型标记。近年来对边缘细胞的研究和应用都取得了很大的进展,该文就... 边缘细胞(side population cel1s)是一类可以特异性地将Hoechst33342染料快速泵出细胞外的细胞,广泛分布于多种正常组织、肿瘤组织和细胞系中,被作为一种通用的干细胞表型标记。近年来对边缘细胞的研究和应用都取得了很大的进展,该文就边缘细胞的生物学特征、分子机制、分选方法和应用等方面的研究进展作如下综述。 展开更多
关键词 边缘细胞 Hoeehst 33342 ATP结合盒转运体 多药 耐药性 干细胞
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凋亡精子DNA两种染色法的比较 被引量:2
14
作者 余文辉 李卓华 +3 位作者 杨为民 李光昭 周小梅 李康生 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期101-103,共3页
 目的:对荧光素Hoechst33342和Hoechst33342/碘化丙啶(PI)两种评价精子质量的染色法进行比较分析。 方法:将已分离提取的精子悬液与DNA拓扑异构酶抑制剂浓度为0、0.15、15μmol/L喜树碱(CAM)或浓度为0.37、 3.7mmol/Lgenistein(GEN...  目的:对荧光素Hoechst33342和Hoechst33342/碘化丙啶(PI)两种评价精子质量的染色法进行比较分析。 方法:将已分离提取的精子悬液与DNA拓扑异构酶抑制剂浓度为0、0.15、15μmol/L喜树碱(CAM)或浓度为0.37、 3.7mmol/Lgenistein(GEN)混合后,置37℃孵育4h。通过Hoechst3342单染或Hoechst3342/PI复染,荧光显微镜检 查,对具独立细胞周期的凋亡和坏死精子进行分析,以比较这两种染色方法的效果。 结果:单染法不能区分精子 活率;复染法能鉴定经不同剂量CAM和GEN处理后精子活率下降程度和坏死精子的增加量。CAM和GEN处理可 使凋亡精子数量增多两倍。 结论:精子凋亡和剂量依赖性坏死增多与两种拓扑异构酶抑制剂相关。Ho echst33342/PI复染比Hoechst33342单染法对精子的分析敏感度更高,并可对精子坏死和凋亡作出定量分析。 展开更多
关键词 精子 凋亡 坏死 hoechst33342 碘化丙啶 DNA拓扑异构酶
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利用405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的流式细胞技术 被引量:3
15
作者 户乃丽 徐晓雪 +1 位作者 邹林樾 杨巍巍 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第33期6406-6409,共4页
目的:探讨流式细胞仪上405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的效果及影响检测结果的因素。方法:SW480和A549两种细胞经Hoechst33342染色后,流式细胞仪405 nm激光激发检测DNA含量,利用软件计算出处于G0/G1期、S期和G2/M期细胞的百分比... 目的:探讨流式细胞仪上405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的效果及影响检测结果的因素。方法:SW480和A549两种细胞经Hoechst33342染色后,流式细胞仪405 nm激光激发检测DNA含量,利用软件计算出处于G0/G1期、S期和G2/M期细胞的百分比,以PI染色法结果作为对照。结果:SW480和A549细胞经Hoechst33342染色后各期的细胞百分比与PI染色法基本一致,无明显差异(P>0.05)。结论:405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA结果可靠,可作为紫外检测的替代方法。 展开更多
关键词 405 nm激光 hoechst33342 流式细胞术 细胞周期
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鼻咽癌细胞株侧群细胞染色条件的优化及其表面标记物的测定 被引量:2
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作者 焦锋 邱际华 +2 位作者 张千兵 姚开泰 刘求真 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期499-501,共3页
目的探讨鼻咽癌细胞株侧群细胞所需荧光染料Hoechst33342最佳的孵育时间和浓度;研究细胞密度对侧群细胞比例的影响;测定其表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。方法荧光染料Hoechst33342孵育细胞,选择不同的时间(30、60、90、120、150、1... 目的探讨鼻咽癌细胞株侧群细胞所需荧光染料Hoechst33342最佳的孵育时间和浓度;研究细胞密度对侧群细胞比例的影响;测定其表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。方法荧光染料Hoechst33342孵育细胞,选择不同的时间(30、60、90、120、150、180min)及不同的浓度(3、4、5、6、7、8mg/L),用流式细胞仪检测,倒置荧光显微镜观察选择合适的孵育时间和浓度。选取不同生长密度(70%、100%)的细胞,流式细胞仪检测侧群细胞比例的变化。荧光抗体CD133和ABCG2共孵育Hoechst33342,流式细胞仪测定细胞表面标记物CD133和ABCG2蛋白的表达。结果Hoechst33342孵育时间为70min,侧群细胞染色效果较佳。不同的鼻咽癌细胞株,合适孵育终浓度不同,如CNE2为6mg/L,而CNE1为2mg/L。另外,侧群细胞的比例呈生长密度依赖性。CD133蛋白总含量恒定在0.1%~0.2%,侧群细胞和主群细胞表达量没有显著差异,CD133并不富集于侧群细胞中。而侧群细胞ABCG2蛋白较主群细胞优势表达,比例达80%以上。结论鼻咽癌细胞株侧群细胞最佳的荧光染料染色时间为70min,不同细胞株孵育终浓度不同。侧群细胞的比例呈密度依赖,与ABCG2密切相关。 展开更多
关键词 侧群细胞 主群细胞 肿瘤干细胞 流式细胞术 hoechst33342 鼻咽肿瘤
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卵巢癌侧群细胞流式分选方法的建立及探讨 被引量:4
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作者 孟泳圳 李力 +1 位作者 钟艳平 张玮 《广西医科大学学报》 CAS 2013年第2期175-180,共6页
目的:探讨分选卵巢癌细胞株SKOV3中的侧群(side population,SP)细胞的荧光染料Hoechst33342的最佳染色浓度及SKOV3的最适细胞密度。方法:制备SKOV3细胞悬液,以荧光染料Hoechst33342和7-AAD染色,维拉帕米拮抗对照,选择不同浓度的Hoechst3... 目的:探讨分选卵巢癌细胞株SKOV3中的侧群(side population,SP)细胞的荧光染料Hoechst33342的最佳染色浓度及SKOV3的最适细胞密度。方法:制备SKOV3细胞悬液,以荧光染料Hoechst33342和7-AAD染色,维拉帕米拮抗对照,选择不同浓度的Hoechst33342(2.5,3,4,5,6mg/L)孵育1×106个/mL SKOV3细胞90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例;选取不同细胞密度的SKOV3细胞悬液(6×105,7×105,8×105,9×105,1×106个/mL),3mg/L的Hoechst33342孵育90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例。结果:通过Hoechst33342蓝光和红光双参数图,SP细胞位于左下角两种荧光均很弱的区域。Hoechst33342浓度不变时,SP细胞比例随细胞密度的增加而升高;SKOV3细胞密度不变时,SP细胞比例及细胞活性随hoechst33342浓度升高而降低。卵巢癌SKOV3细胞株在细胞密度为8×105个/mL,加入终浓度为3mg/L的Hoechst33342,37℃水浴90min,为最佳染色条件,此时SP细胞比例为(1.12±0.104)%,且细胞保持良好的活性。结论:人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞,Hoechst33342浓度及SKOV3细胞密度是影响SP细胞比例及细胞活性的重要因素。 展开更多
关键词 卵巢癌 肿瘤干细胞 SP细胞 hoechst33342 染色浓度 细胞密度
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CD55高表达在分离乳腺癌SP细胞中的作用研究 被引量:1
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作者 徐静娴 刘冰阳 +3 位作者 森井英一 青世克之 贾心善 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期325-327,共3页
目的探讨应用细胞CD55高表达的特性替代Hoechst33342染色来分离乳腺癌SP细胞的可行性。方法应用Hoechst 33342及抗CD55抗体对两种乳腺癌细胞株进行荧光染色,应用FACS-Vantage和FACSVantageSE分选SP和MP细胞、CD55高表达(CD55hi)和CD55... 目的探讨应用细胞CD55高表达的特性替代Hoechst33342染色来分离乳腺癌SP细胞的可行性。方法应用Hoechst 33342及抗CD55抗体对两种乳腺癌细胞株进行荧光染色,应用FACS-Vantage和FACSVantageSE分选SP和MP细胞、CD55高表达(CD55hi)和CD55低表达(CD55lo)细胞,对比2组细胞对血清缺失诱导的凋亡的耐受性及CD55hi和CD55lo细胞的克隆形成能力。结果对分选的CD55hi和CD55lo细胞行Hoechst 33342染色,2组细胞分别位于SP和MP区域中。在血清缺失情况下,SP细胞和CD55hi细胞分别比MP细胞和CD55lo细胞对凋亡刺激具有更高的耐受性。CD55hi细胞较CD55lo细胞具有更强的克隆形成能力。结论细胞CD55高表达的特性可以替代Hoechst33342染色用于分离乳腺癌SP细胞。 展开更多
关键词 CD55 hoechst 33342 乳腺癌 SP细胞
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侧群细胞与肿瘤干细胞研究进展 被引量:4
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作者 钟永 张叔人 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第24期1914-1918,共5页
目的:总结国内外采用侧群细胞分析法(side populations analysis)研究肿瘤干细胞的现状。方法:应用检索PubMed数据库检索系统,以"侧群细胞"和"肿瘤干细胞"等为关键词,检索1996-01-2008-12侧群细胞法研究肿瘤干细胞... 目的:总结国内外采用侧群细胞分析法(side populations analysis)研究肿瘤干细胞的现状。方法:应用检索PubMed数据库检索系统,以"侧群细胞"和"肿瘤干细胞"等为关键词,检索1996-01-2008-12侧群细胞法研究肿瘤干细胞的文献。资料选择:选择所有侧群细胞法研究肿瘤干细胞的文献。纳入标准:1)侧群细胞法分离肿瘤干细胞;2)侧群细胞法鉴定肿瘤干细胞。根据纳入标准,精选80篇文献,最后纳入分析36篇文献。结果:采用SP法可以有效的分离和富集大部分类型的肿瘤干细胞,但是某些肿瘤SP细胞不具有肿瘤干细胞特性,此外,SP法还存在细胞毒性的问题。结论:采用SP分析法研究肿瘤干细胞存在许多问题,但是当无法确认到某种类型的肿瘤干细胞的表面标志时,它仍然是分离和富集肿瘤干细胞的有效方法之一。 展开更多
关键词 侧群细胞 肿瘤干细胞 hoechst33342
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Persistence of side population cells with high drug efflux capacity in pancreatic cancer 被引量:13
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作者 Jing Zhou Chun-You Wang +8 位作者 Tao Liu Bin Wu Feng Zhou Jiong-Xin Xiong He-Shui Wu Jing Tao Gang Zhao Ming Yang Shan-Miao Gou 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第6期925-930,共6页
AIM: To investigate the persistence of side population (SP) cells in pancreatic cancer and their role and mechanism in the drug resistance. METHODS: The presentation of side population cells in pancreatic cancer cell ... AIM: To investigate the persistence of side population (SP) cells in pancreatic cancer and their role and mechanism in the drug resistance. METHODS: The presentation of side population cells in pancreatic cancer cell line PANC-1 and its proportion change when cultured with Gemcitabine, was detected by Hoechst 33342 staining and FACS analysis. The expression of ABCB1 and ABCG2 was detected by real- time PCR in either SP cells or non-SP cells. RESULTS: SP cells do exist in PANC-1, with a median of 3.3% and a range of 2.1-8.7%. After cultured with Gemcitabine for 3 d, the proportion of SP cells increased significantly (3.8% ± 1.9%, 10.7% ± 3.7%, t = 4.616, P = 0.001 < 0.05). ABCB1 and ABCG2 expressed at higher concentrations in SP as compared with non-SP cells (ABCB1: 1.15 ± 0.72, 5.82 ± 1.16, t = 10.839, P = 0.000 < 0.05; ABCG2: 1.16 ± 0.75, 5.48 ± 0.94, t = 11.305, P = 0.000 < 0.05), which may contribute to the efflux of fluorescent staining and drug resistance. CONCLUSION: SP cells with inherently high resistance to chemotherapeutic agents do exist in pancreatic cancers, which may be candidate cancer stem cells contributing to the relapse of the tumor. 展开更多
关键词 Side population cells hoechst 33342 Drug resistance Cancer stem cells Pancreatic cancer
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