siRNA沉默G6PD表达对人皮肤黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-U6.2/Lenti连接,转染人皮肤黑色素瘤A375细胞,Real-timePCR筛选有效的一条siRNA,经病毒颗粒包装和病毒生产并感染A375细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,Western blotting检测siRNA干扰G6PD效率为88.83%,构建成G6PD缺陷型A375稳转细胞(A375-G6PD!).与野生型A375细胞(A375-WT)比较,A375-G6PD!的G6PD活性仅为21.53%,细胞倍增时间延长,增殖被抑制,克隆形成率降低25%(P<0.05),凋亡细胞数增加2.86倍(P<0.01),SPF增加33.8%(P<0.05),PI增加59.7%(P<0.01),G0/G1期下降27.7%(P<0.01),凋亡相关蛋白P53下降54.7%(P<0.01)、Caspase-3增加2.2倍(P<0.01)和Bcl-2降低21.7%(P>0.05),提示,G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase-3的表达,抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程,促进A375的凋亡,机理有待于进一步探讨.

红景天苷对人皮肤黑色素瘤细胞A375侵袭的影响

目的探讨红景天苷对人皮肤黑色素瘤细胞A375侵袭的影响。方法采用细胞培养技术培养的人皮肤黑色素瘤细胞A375,经不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00、100.00μg/mL)红景天苷处理后,应用结晶紫染色法,检测人皮肤黑色素瘤细胞A375对基膜黏附的影响;应用tran-swell小室模型,观察人皮肤黑色素瘤细胞A375在药物影响下侵袭、迁移能力的改变;采用细胞黏附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察红景天苷对B16-BL6细胞生长、黏附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果与对照组比较,红景天苷各浓度组能显著抑制黑色素瘤细胞与基膜的黏附,抑制其迁移和侵袭,差异显著,有统计学意义(P<0.05),并且药物组之间随药物浓度的增高其抑制作用增强,组间差异显著,有统计学意义(P<0.05)。结论红景天苷对人皮肤黑色素瘤细胞A375具有抑制侵袭的功效。

实时定量PCR测定人皮肤黑色素瘤细胞G6PD的表达

目的建立一种灵敏特异、重复性和稳定性好的检测G6PD表达的方法,以探究G6PD与肿瘤的相关性及其机理.方法用Real-time PCR技术测定了野生型、siRNA干扰型和无关序列对照型人皮肤黑色素瘤A375细胞的G6PD基因表达.绘制出β-actin和G6PD的标准曲线,标定了方法的稳定性和重复性,并以内参照β-actin较对G6PD的量.结果β-actin和G6PD标准曲线的回归系数分别为1.086和0.940;稳定性及重复性验证的Ctβ-actin值变异系数分别为2.46%和1.47%,而CtG6PD值变异系数分别为1.76%和1.87%.以野生型A375细胞作对照,无关序列不干扰A375细胞内源性G6PD基因表达(P>0.05),针对G6PD基因表达的siRNA的干扰效率为49%(P<0.01).结论实时荧光定量PCR在检测细胞G6PD基因表达时具有高灵敏度、高重复性和高稳定性的特点,可进一步用于G6PD与肿瘤的相关性研究.

人乳头瘤病毒感染与非黑素瘤性皮肤肿瘤相关性研究进展

非黑素瘤性皮肤肿瘤包括基底细胞癌、鳞状细胞癌、光线性角化病、鲍温病、角化棘皮瘤等,是最常见的皮肤肿瘤,且发病率逐年上升。人乳头瘤病毒感染已作为黏膜部位肿瘤发生的一个重要诱因,但是它与非黑素瘤性皮肤肿瘤是否相关还没达成共识。本文综述人乳头瘤病毒感染与非黑素瘤性皮肤肿瘤的相关性。