和厚朴酚抑制IDO1表达改善老年小鼠术后认知功能障碍的实验研究

目的探讨和厚朴酚对术后认知功能障碍防治作用的机制。方法将18月龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:Control组(溶剂预处理7 d,不进行手术)、HNK组(10 mg/kg和厚朴酚预处理7 d,不进行手术)、Surgery组(溶剂预处理7 d,脾切除术建模)和Surgery+HNK组(10 mg/kg和厚朴酚预处理7 d,脾切除术建模)。运用Morris水迷宫评估空间记忆功能,免疫荧光染色观察海马凋亡神经元比例,检测海马Bcl-2、Bax、活化Caspase-3以及吲哚胺2,3双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)表达水平,高效液相色谱检测色氨酸毒性代谢产物含量。结果与Surgery组相比,Surgery+HNK组水迷宫测试期第1、3、7天目标象限停留时间和平台穿越次数增加;术后第7天海马凋亡神经元比例降低;术后第1天Bcl-2表达增高、Bax表达水平降低、活化Caspase-3水平降低,IDO1表达降低;色氨酸毒性代谢物降低。结论和厚朴酚可通过抑制IDO1表达,调控色氨酸代谢,减轻海马神经元损伤,改善小鼠术后认知功能障碍。

IDO1抑制剂对肺癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)抑制剂对肺癌细胞增殖、迁移的影响及其相关机制。方法使用不同浓度梯度的IDO1抑制剂处理肺癌细胞A549和H460细胞系,通过细胞毒性和克隆形成实验检测细胞的增殖情况;通过Transwell和划痕愈合实验检测细胞的迁移情况;通过Western blot实验检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和铁死亡相关蛋白表达变化情况。结果与对照组对比,IDO1抑制剂组A549和H460细胞增殖和迁移能力明显受到抑制(P均<0.05);在EMT相关蛋白中,Snail、Slug、N-cadherin、Vimentin和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)蛋白表达量显著下调,而E-cadherin蛋白表达显著上调(P均<0.05);在铁死亡相关蛋白中,血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)和转铁蛋白(transferrin,Tf)的蛋白表达显著上调,而铁死亡负调控蛋白(SLC40A1、SLCTA11、GLS、GPX4)表达显著下调(P均<0.05)。结论IDO1抑制剂通过抑制EMT及诱导铁死亡,从而抑制肺癌细胞的增殖和迁移。

逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠海马TPH2与IDO1的调节作用

目的:观察肝郁脾虚证模型大鼠海马色氨酸羟化酶2(TPH2)与吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)表达的变化并探讨逍遥散的调节作用。方法:雄性SD大鼠随机分成4组,分别是正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组,每组6只。采用慢性束缚应激的方法制备大鼠肝郁脾虚证模型,造模持续21 d。通过荧光定量PCR与Western-blot方法检测各组大鼠海马TPH2与IDO1的表达情况。结果:模型组大鼠海马TPH2 mRNA的表达水平低于其余3组大鼠(P<0.05),逍遥散与氟西汀对TPH2 mRNA的表达有一定的上调作用;模型组大鼠海马IDO1 mRNA的表达显著增加(P<0.01),逍遥散与氟西汀对IDO1 mRNA表达的下调作用明显(P<0.01),且逍遥散对IDO1 mRNA的下调作用更明显。模型组、逍遥散组、氟西汀组大鼠海马TPH2的蛋白的表达低于正常组(P<0.01),逍遥散组TPH2蛋白表达高于模型组(P<0.05);模型组大鼠海马IDO1的蛋白表达显著高于其余3组(P<0.01)。结论:肝郁脾虚证模型大鼠海马TPH2的表达减少,IDO1的表达增多,逍遥散可能通过调节海马TPH2与IDO1的表达水平进而影响5-HT的含量,起到治疗作用。

IDO1和IL-10在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系研究

目的探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)和白细胞介素-10(IL-10)的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取2015年7月—2017年7月邯郸市中心医院行喉部肿瘤切除术治疗,且术中病理确诊为LSCC的患者89例,留取LSCC组织及癌旁组织标本各89份。比较LSCC组织及癌旁组织中IDO1、IL-10的表达情况,以及LSCC患者不同临床病理特征间IDO1、IL-10表达的差异。绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较生存时间和生存率。采用Cox多因素风险回归模型分析LSCC患者预后的影响因素。结果LSCC组织中IDO1、IL-10表达阳性率与癌旁组织比较,差异有统计学意义(P<0.05),LSCC组织高于癌旁组织。不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移的LSCC患者IDO1、IL-10表达阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤位置的LSCC患者IDO1、IL-10表达阳性率,差异无统计学意义(P>0.05)。IDO1、IL-10阳性患者的生存时间短于IDO1、IL-10阴性患者(P<0.05)。Cox多因素风险回归模型分析结果显示,TNM分期较高[R^R=1.351(95%CI:1.055,1.730)]、分化程度较低[R^R=0.734(95%CI:0.562,0.959)]、淋巴结转移[R^R=1.448(95%CI:1.095,1.915)]、远处转移[R^R=1.246(95%CI:1.035,1.500)]、IDO1阳性表达[R^R=1.575(95%CI:1.156,2.146)]、IL-10阳性表达[R^R=1.771(95%CI:1.250,2.508)]是LSCC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论LSCC组织中IDO1、IL-10阳性表达率异常升高,且与患者的临床病理特征及预后密切相关,可能是导致LSCC病情加重、预后不佳的重要分子机制之一。

基于虚拟筛选发现4-羟基喹啉类新型IDO1抑制剂

目的采用药效团模型和分子对接方法对ZINC、Chembridge数据库进行虚拟筛选,并通过酶活性测试进行验证,以发现新骨架结构的IDO1抑制剂。方法通过分子对接方法靶向IDO1酶活性位点,对ZINC数据库进行虚拟筛选,得到苗头化合物,进行酶活性测试,发现酶活性较好的先导化合物;随后用已进入临床研究的3个IDO1抑制剂构建药效团模型,以此模型对先导化合物类似物进行虚拟筛选,并测定化合物的抑酶活性;通过分子动力学模拟探究化合物与IDO1的结合模式。结果通过分子对接方法对超过200万个虚拟化合物进行筛选得到11个先导化合物并测酶活性,其中ZINC91657208抑酶活性较好,IC50约为77.15μmol/L,活性骨架为4-羟基喹啉。亚结构检索4-羟基喹啉的结构得到31个类似物,利用药效团虚拟筛选出10个化合物,并测酶活性,其中3个4-羟基喹啉类化合物均具有明显的抑酶活性,而Chembridge29374490为酶活性最好的IDO1抑制剂,其IC50约为37.78μmol/L。经分子动力学模拟平衡后,其骨架原子均方差偏根(root mean square deviation, RMSD)分别为1?和2.4?。结论从ZINC和Chembridge数据库中发现了新型4-羟基喹啉类IDO1抑制剂。

芳乙烯类化合物的合成及其细胞IDO1酶抑制活性研究

以4-氯-3-硝基苯乙酮为起始原料,经取代、 witting反应、还原、与相应取代的异氰酸酯缩合,制备了9种带有芳乙烯结构的新型IDO1抑制剂。并基于HeLa细胞的犬尿氨酸(kyn)测定法评估了它们对IDO1酶抑制活性。其结构经1H NMR确证。

卵巢上皮性癌中IDO1和p53的表达及意义

目的探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)在卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer,EOC)中的表达及其与临床病理特征、p53突变、预后的关系。方法采用免疫组化法检测111例EOC中IDO1和p53蛋白的表达;肿瘤细胞p53蛋白阳性百分数作为卵巢癌TP53突变的替代标志物。结果IDO1在EOC中阳性率为54.1%,p53突变在EOC中占77.5%。单因素分析显示,IDO1表达与EOC患者年龄、临床分期、腹膜转移无关,IDO1表达与EOC组织亚型、p53突变相关。多因素分析显示,IDO1表达与p53突变相关。Kaplan-Meier生存分析显示,IDO1高表达组的总生存率低于低表达组,但差异无统计学意义。结论IDO1表达与p53突变有关,IDO1和p53可能共同参与EOC的发生、发展。

构建LPS诱导的急性炎症小鼠模型用于IDO1抑制剂药效动力学评价

目的构建急性炎症小鼠模型用于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)抑制剂的药效动力学评价。方法采用尾静脉注射或腹腔注射给予小鼠脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),构建IDO1活性上调的急性炎症小鼠模型。模型小鼠灌胃给予IDO1抑制剂L-1-甲基色氨酸(L-1-methyl-tryptophan,L-1-MT)或TQ016,给药后不同时间点取血,HPLC检测小鼠血清中色氨酸(tryptophan,Trp)和犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)含量,计算Kyn/Trp比值。采用IDO1活性上调引起的Trp浓度降低、Kyn浓度升高及Kyn/Trp比值增大,来评价IDO1抑制剂L-1-MT和TQ016对急性炎症小鼠血清中上调的IDO1活性的抑制效果。结果尾静脉注射0.66 mg/kg LPS或腹腔注射5 mg/kg LPS均显著上调小鼠血清中IDO1活性。100 mg/kg L-1-MT在灌胃给药4 h后显著抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。100 mg/kg TQ016在灌胃给药1、6、12、24和30 h后均显著抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。TQ016呈剂量依赖性抑制模型小鼠血清中上调的IDO1活性。结论LPS诱导的急性炎症小鼠模型适用于IDO1抑制剂的药效动力学评价。IDO1抑制剂TQ016具有良好的IDO1活性抑制效果。

吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)抑制剂的研究进展

吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)是人体内催化色氨酸代谢分解的限速酶之一,广泛存在于人体内各种组织内,并在肿瘤组织中过表达,是肿瘤发生免疫逃逸的重要影响因素。对IDO1进行抑制可以减少色氨酸代谢,增强效应T细胞的活性进而增强人体自身免疫能力以达到治疗癌症的目的。这种通过自身免疫系统来杀伤杀灭肿瘤细胞的治疗方法具有毒性小可以与其他抗癌药物联用的特点。

可用于IDO1抑制剂药效学研究的KPIC原位胰腺癌小鼠模型的构建

目的构建KPIC原位胰腺癌小鼠模型用于吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)抑制剂药效学研究。方法采用实时定量荧光PCR和Western blot等方法鉴定KPIC细胞中IDO1的表达情况;使用HPLC检测IDO1抑制剂1-甲基-L-色氨酸(1-methyl-L-tryptophan,1-L-MT)对KPIC细胞中IDO1活性的抑制作用及KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性;接种KPIC细胞到小鼠胰腺构建KPIC原位胰腺癌小鼠;免疫组化法检测KPIC原位胰腺癌小鼠肿瘤中IDO1、肿瘤增殖指数Ki67、胆系标志物Sox9的表达。结果经mRNA及蛋白质水平鉴定,KPIC细胞内有IDO1及其同工酶的表达;1-L-MT能够下调KPIC细胞中IDO1活性;KPIC原位胰腺癌小鼠构建成功,在原位肿瘤中IDO1、Ki67和Sox9均有表达,小鼠血清中IDO1活性上调。结论 KPIC原位胰腺癌小鼠表达IDO1,可用于IDO1抑制剂的筛选及药效学评价。

IDO1抑制剂在实体肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤发生与免疫逃逸密切相关,免疫治疗已成为重要的肿瘤治疗方法之一。吲哚胺-2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)在肿瘤微环境中的肿瘤细胞和抗原递呈细胞上过表达,IDO1激活促进色氨酸分解产生犬尿氨酸,后者诱导T细胞耗竭,因此有望成为一种新的免疫治疗靶点。IDO1抑制剂逐渐进入肿瘤临床应用,它不仅作为肿瘤免疫调节剂,也可联合免疫治疗和化学治疗。目前,已有数种IDO1抑制剂进入各期临床试验,本文系统综述IDO1抑制剂在实体肿瘤治疗中的研究进展。

IDO1在人肺腺癌组织的表达及其临床意义

目的:探讨IDO1蛋白在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)组织中的表达及其临床病理意义。方法:采用免疫组化方法检测120例LUAD患者的肿瘤组织区域的IDO1表达情况,分析其表达模式与临床主要的病理参数之间的相互关系。结果:在肺腺癌组织中,IDO1蛋白的阳性表达率为40%(48/120),显著高于癌旁肺组织,其在LUAD中的高表达与性别、淋巴结转移显著相关(分别为P=0.006、P=0.011)。结论:在LUAD中,IDO1在不同组织学类型的肺腺癌中表达情况不同,并与肺腺癌的发生和恶性进展紧密相关。

食管癌组织中IDO1的表达及犬尿酸对间皮素CAR-T细胞功能的影响

目的:探讨食管癌组织中吲哚加双氧酶1(IDO1)的表达,及其代谢产物犬尿酸对间皮素嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)功能的影响。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中数据分析食管癌组织中IDO1的表达对患者生存的影响;采用密度梯度离心法获得健康供者外周血单个核细胞,并用细胞免疫磁珠分选出CD8+T细胞;采用病毒感染的方法制备间皮素CAR-T细胞,用200μmol/L犬尿酸处理48 h后,采用流式细胞术检测细胞表面标志物的表达和细胞内因子分泌的水平,检测其对KYSE510细胞的杀伤能力。以未用犬尿酸处理的间皮素CAR-T细胞作对照。结果:高表达IDO1的食管癌患者预后较差。与对照组相比,犬尿酸处理组间皮素CAR-T细胞表面抑制性分子PD-1表达上调(P <0. 05),而激活性分子CD28表达下降(P <0. 05),效应因子IFN-γ和IL-2分泌减少(P <0. 05);与KYSE510细胞共孵育后,间皮素CAR-T细胞CD107a表达降低,杀伤能力下降(P <0. 05)。结论:犬尿酸可以抑制间皮素CAR-T细胞的功能。

清肠化湿方通过影响IDO1调节Th17/Treg细胞因子表达平衡治疗溃疡性结肠炎

目的:采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立小鼠溃疡性结肠炎模型,观察清肠化湿方对肠炎小鼠的治疗作用,并探讨清肠化湿方通过吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)调节溃疡性结肠炎小鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子表达平衡的相关机制。方法:将24只健康的SPF级雄性C57BL6/J小鼠随机分为空白组、模型组、清肠化湿方低剂量组[12 g(/kg·d)]和清肠化湿方高剂量组[24 g(/kg·d)]。第1~13天,空白组自由饮用纯水,模型组小鼠给予纯水灌胃,清肠化湿方低剂量组及高剂量组给予中药灌胃。实验第4天,模型组、清肠化湿方低剂量组及高剂量组小鼠给与2.5%DSS自由饮用,每日观察小鼠一般情况,记录小鼠体质量,粪便性状及便血情况,计算疾病活动指数(DAI)评分。采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学改变。实时荧光定量(RT-qPCR)法检测结肠组织RORγt、IL-17、IL-22、IL-23、Foxp3、IL-10、TGF-β、IDO1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测结肠组织RORγt、Foxp3、IDO1蛋白表达。结果:清肠化湿方可有效治疗UC小鼠,降低小鼠DAI评分,增加结肠长度,改善病理损伤。qPCR结果显示,与模型组相比,清肠化湿方可有效降低UC小鼠结肠组织RORγt、IL-17、IL-22、IL-23 mRNA及IDO1 mRNA表达水平,促进Foxp3 mRNA表达,升高IL-10、TGF-β mRNA表达。Western Blot结果显示,UC小鼠给与清肠化湿方干预后,低剂量组RORγt、IDO1蛋白表达降低,Foxp3蛋白表达升高;高剂量组RORγt、IDO1蛋白表达降低,Foxp3蛋白表达显著升高。结论:清肠化湿方能够有效治疗溃疡性结肠炎,高剂量组治疗效果更明显,其机制可能与下调IDO1表达,调节Th17/Treg细胞因子表达平衡相关。

新型IDO1抑制剂HS-10319的合成工艺研究

目的优化新型IDO1抑制剂HS-10319的合成工艺。方法以丙二腈为起始原料,经硝化、重排、肟化、脱水缩合、重氮化反应得到4-氨基-N′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-亚甲酰氯(4);另以二甲基二硫醚为起始原料,经氧化反应后与二丙酮-D-葡萄糖在碱性条件下反应得到高立体选择性的S构型甲基亚砜化合物(7),7经取代、胺化反应后与中间体4发生取代反应,然后经重排、重氮化、取代、环合、缩合和水解反应得到目标化合物HS-10319。结果与结论目标化合物及其关键中间体的结构经1H-NMR、13C-NMR和MS谱确证,总收率为8.06%(以丙二腈计),纯度为98.9%(HPLC法)。优化后的工艺参数设置合理、工艺稳定性好、产品质量稳定且易于控制,适合工业化生产。

CKD非透析患者的血清IDO1、β-catenin水平对冠脉血管钙化的诊断效能

目的探讨慢性肾脏病(CKD)非透析患者的血清吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、β-连环蛋白(β-catenin)水平对冠状血管钙化的诊断效能。方法选取2021年1月至2022年12月郴州市第一人民医院收治的106例CKD非透析患者设为研究组,另选取同期入院治疗的100例健康人群作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测所有研究对象的血清IDO1、β-catenin水平。根据冠状动脉钙化积分(CACs)结果将研究组患者分为无钙化组(67例)和钙化组(39例)。比较所有研究对象的血清IDO1、β-catenin水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清IDO1、β-catenin水平对CKD非透析患者冠状血管钙化的诊断价值。采用多因素logistic回归分析CKD非透析患者冠状血管钙化的影响因素。结果研究组患者的血清IDO1水平低于对照组,β-catenin水平高于对照组(均P<0.001);钙化组患者的血清IDO1水平低于无钙化组,β-catenin水平高于无钙化组(均P<0.001)。血清IDO1、β-catenin预测CKD非透析患者冠状血管钙化的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.751(95%CI:0.706~0.819)、0.835(95%CI:0.785~0.877),两者联合预测的AUC为0.906(95%CI:0.861~0.958)。钙化组的糖尿病史、CKD分期(3~5期)例数、血钙、血磷、血钾、白蛋白值高于无钙化组(均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,CKD分期、IDO1、β-catenin均是CKD非透析患者冠状血管钙化的影响因素(均P<0.05)。结论发生冠状血管钙化的CKD非透析患者血清IDO1水平降低、β-catenin水平升高,二者联合有望作为CKD非透析患者冠状血管钙化诊断的生物标志物。

IDO1影响外阴阴道念珠菌病小鼠阴道组织中巨噬细胞功能变化的研究

目的通过调控吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO1)观察外阴阴道念珠菌病(VVC)小鼠模型中巨噬细胞功能的变化。方法40只无特定病原级雌性ICR小鼠按完全随机法分为4组:空白组、VVC模型组、VVC模型+1-甲基色氨酸组(简称1-MT组)、VVC模型+γ干扰素组(简称IFN-γ组),每组10只。除空白组外,在造模前6 d,每隔1天予小鼠腹部皮下注射苯甲酸雌二醇油剂诱导假发情;发情成功后开始建模,继续皮下注射苯甲酸雌二醇油剂,予小鼠阴道接种2×109 CFU/ml白念珠菌菌悬液,每天1次,连续5 d;1-MT组和IFN-γ组分别在接种菌悬液前1 d予1-MT或IFN-γ预处理,之后每天1次,连续干预6 d;空白组和VVC模型组给予相应的生理氯化钠溶液。在造模第5天时,观察小鼠阴道情况,并进行阴道症状评分;收集阴道灌洗液涂片镜检和真菌载荷计数;随后处死小鼠,收集阴道组织,分别进行苏木精-伊红(HE)染色及过碘酸希夫(PAS)染色,免疫荧光法检测组织中IDO1和巨噬细胞表面标志物F4/80的表达;实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织中IDO1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)mRNA表达水平,Western印迹检测组织中IDO1蛋白表达。采用单因素方差分析检验组间各指标的差异,Tukey检验进行两两多重比较。结果造模第5天,小鼠阴道灌洗液涂片镜检,VVC模型组中菌丝细长,见少量孢子;1-MT组大量细长菌丝聚集成团,周围可见孢子;IFN-γ组见少量细短菌丝,孢子较多。小鼠阴道灌洗液载菌量计数显示,与VVC模型组载菌量(360.0±15.9)相比,1-MT组较高(523.7±67.7,P=0.002),而IFN-γ组较低(258.3±27.6,P=0.026)。HE染色和PAS染色显示,VVC模型组表皮局灶可见小脓肿形成,表皮及真皮全层见以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润,且存在大量孢子,伴少量菌丝;1-MT组表皮增生、增厚,真皮可见大量以中性粒细胞为主的炎症细胞弥漫性浸润,表皮及真皮全层大量菌丝和孢子聚集成团,以菌丝为主;IFN-γ组表皮聚集孢子,未见明显菌丝,真皮见少量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润。免疫荧光检测显示,IFN-γ组IDO1相对荧光强度最高,而1-MT组F4/80相对荧光强度最高。Western印迹结果显示,VVC模型组IDO1蛋白表达显著高于空白组(P<0.001)和1-MT组(P<0.05),低于IFN-γ组(P<0.05)。qPCR检测显示,VVC模型组iNOS mRNA表达高于空白组(P<0.01),IFN-γ组高于空白组、VVC模型组和1-MT组(均P<0.001);VVC模型组Arg-1 mRNA表达显著高于空白组(P<0.001)及IFN-γ组(P<0.01),1-MT组显著高于空白组、VVC模型组和IFN-γ组(均P<0.001)。结论在VVC小鼠模型中上调IDO1可能引起巨噬细胞向M1极化,抑制IDO1引起巨噬细胞募集增多,炎症反应加剧。

干酪乳杆菌对母婴分离诱导子代抑郁大鼠外周及中枢神经炎症的影响

目的观察干酪乳杆菌对产后进行母婴分离(maternal separation,MS)诱导子代大鼠抑郁样行为的影响,探索益生菌改善抑郁样行为潜在的中枢神经炎症的作用机制。方法采用母婴分离应激方法建立子代抑郁动物模型,并将SD子鼠采用随机数字表法分为对照组(CON组)、母婴分离组(MS组)、母婴分离+干酪乳杆菌组(MS+干酪乳杆菌组),每组8只。其中对照组雌鼠在产后与子鼠不进行母婴分离干预;母婴分离组雌鼠在正常分娩后与子鼠每天分离3 h,连续分离14 d;MS+干酪乳杆菌组的子鼠在MS组基础上给予为期4周的干酪乳杆菌干预,每天按体质量灌胃8×10^(8) CFU/(kg·d)。采用糖水偏好实验(SPT)和强迫游泳实验(FST)评估各组子代大鼠的抑郁样行为,采用ELISA法测定各组子代大鼠血清和海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10的水平,采用荧光实时定量PCR法检测各组子代大鼠海马组织中IDO1及5-HT mRNA的表达水平。结果与对照组相比,母婴分离组子代大鼠的糖水偏好百分比明显降低(P<0.05),虽然自发活动实验中穿格次数的减少差异无统计学意义,但强迫游泳实验中的不动时间显著延长(P<0.05),说明母婴分离组子代大鼠产生了明显的抑郁样行为。而干酪乳杆菌显著改善了母婴分离应激引起的子代大鼠的行为学变化,明显提高了糖水偏好百分比(P<0.05),缩短了强迫游泳的不动时间(P<0.05)。与MS组相比,MS+干酪乳杆菌组子代大鼠海马和外周血中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量显著降低(P<0.01),IL-10的含量显著增加(P<0.05);子代大鼠海马中IDO1 mRNA的表达显著降低(P<0.01),5-HT mRNA的表达显著升高(P<0.01)。结论母婴分离诱导子代大鼠产生了抑郁样行为,干酪乳杆菌通过调节外周血和海马炎性因子的表达,抑制海马中IDO1的表达、增加海马中5-HT的表达,可改善子代大鼠抑郁样行为。

新型IDO1/TDO抑制剂SHR9146的有关物质检测

目的:建立高效液相色谱法进行肿瘤免疫治疗的新型高选择性吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)/色氨酸2,3-加氧酶(TDO)抑制剂(S)-2-(4-(4-(4-(6-氟-5H-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-基)哌啶-1-基)苯基)-1H-吡唑-1-基)乙醇(SHR9146)的有关物质检测。方法:采用Kromasil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.01 mol·L^(-1)磷酸二氢钾缓冲溶液(含0.3%三乙胺,磷酸调节pH至3.0)(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),紫外检测波长270 nm。结果:SHR9146与各有关物质的色谱分离良好,色谱响应在0.01~5.0μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好(r>0.999),检测限和定量限分别约为21.95和73.16 ng·mL^(-1)。利用上述方法,对3批产品的有关物质进行分析,并采用加校正因子的主成分自身对照法计算含量,杂质SHR9146Z-399含量在0.46%~0.60%,SHR9146Z-333含量不超过0.11%,其他单个杂质含量均不超过0.10%,有关物质含量总和低于1.0%。结论:建立的HPLC-UV方法专属性好,检测灵敏度高,可用于SHR9146原料药的质量控制。

特异性靶向肿瘤组织的IDO1抑制剂前药的研究

本文基于在羟基脒类IDO1抑制剂化合物B与epacadostat分子的主要代谢位点羟基上键合一个能够在肿瘤缺氧的微环境中降解的硝基芳环载体分子,设计合成特异性靶向肿瘤组织的IDO1抑制剂前药,检测其对肿瘤生长的影响。共合成了11个前药化合物,其结构通过1H NMR和HR-MS确证。通过MTT实验、体外硝基还原酶还原实验、稳定性实验和体内肿瘤组织缺氧降解实验筛选出稳定性、释药速度等结果较好的化合物F-1、F-6用于体内药效评价。实验结果初步表明,前药F-1对小鼠肝癌的生长抑制率为67.41%,明显高于原药组的42.31%,提示特异性抑制肿瘤组织的IDO1与全面抑制机体内IDO1的抗肿瘤效果明显不同。动物实验遵循中国医学科学院药物研究所动物实验中心标准操作规程。