NF-κB的活性和iNOS基因表达在低氧性肺动脉高压中的变化

目的 :探讨NF -κB的活性及iNOS基因表达在低氧性肺动脉高压 (HPH)发病过程中的变化。方法 :复制低氧性肺动脉高压大鼠模型 ,用免疫组化、原位杂交、半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)和Westernblot等方法进行检测。结果 :iNOSmRNA在腺泡内肺动脉 (IAPA)的表达 ,低氧 2 8d(H2 8d)组染色强于正常 (N)组、低氧 5d(H5d)组和低氧 1 4d(H1 4d)组。半定量RT -PCR证实低氧肺组织iNOSmRNA含量在H2 8d组分别是N组、H5d组和H1 4d组的 2 1倍、1 9倍和 1 8倍。H2 8d组肺组织NF -κB的核染色增多 ,I-κBa的含量在N组、H5d组和H1 4d组分别是H2 8d组的 2 7倍、2 8倍和 2 5倍。结论 :在HPH中NF -κB的激活可能与低氧肺血管构建及iNOSmRNA的表达有关。

DHPLC方法对中国人iNOS基因Tsp多态性的发现与初步证实(英文)

目的 : 探讨中国人iNOS基因是否存在单核苷酸多态性及其在中国人中的频率。方法 :DHPLC方法结合直接测序和PCR RFLP技术 ,在有代表性的中国人中进行筛查。结果 :在iNOS基因全部被测外显子中 ,有 6个外显子发现可疑双峰图型 ,可能存在杂合突变 ,对其测序后在iNOS基因第 16外显子发现C→T突变 (称为Tsp多态性 ) ,使编码的氨基酸由丝氨酸 (serine,Ser)改变为亮氨酸 (leucine ,Leu) ,设计PCR RFLP方法并监测全部测序样本 ,PCR RFLP与测序结果一致。在有代表性的 43例中国人中 ,Ser和Leu等位基因频率分别为 75 .5 8% (6 5 / 86 )和 2 4.42 % (2 1/ 86 ) ;三种基因型观察频率分别为Ser/Ser :6 2 .79% ;Ser/Leu :2 5 .5 8% ;Leu/Leu :11.6 3% ,与期望频率 (分别为 5 7.12 % ,36 .91%和 5 .96 % )差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,说明符合Hardy Weinberg遗传平衡定律。 结论 :中国人群中存在iNOS基因Tsp多态性 。

大鼠iNOS基因上游调控区在转录激活中的作用

为了探讨大鼠ｉＮＯＳ基因上游调控区不同部位在对细胞因子诱导应答中所起的作用，将调控区不同部位插入ｐＳＶ０－ＣＡＴ报告基因载体，转染体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），经ＩＬ－１β诱导后，采用氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）活性测定和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交，检查了调控区各部位在ＩＬ－１β诱导ｃａｔ表达中所起的作用．结果表明，被转染的细胞在未经ＩＬ－１β刺激时，各种调控区序列启动ｃａｔ表达的活性均很低．在ＩＬ－１β作用下，调控区远端序列（－１０３７～－４３８）、近端序列（－４３７～＋４６）和全长序列（－１０３７～＋４６）均能独立激活ｃａｔ表达，其中以全长序列的作用最强，表明ｉＮＯＳ基因表达调控区远端和近端序列均具有启动子和增强子样功能．同时证实，远端序列和近端序列单独启动ｃａｔ表达的活性分别为全长序列的９１．３％和６７．１％，揭示大鼠ｉＮＯＳ基因调控区远端序列在介导ＩＬ－１β的应答反应中发挥更重要作用．

8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc,wtp53,iNOS基因和EGFR表达的影响

目的 :探讨 8 Br cAMP对Eca 10 9细胞c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 2组 :①实验组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 -5mol/L ,培养 2 4h ;②对照组 :不加 8 Br cAMP ,培养 2 4h。对 2组的细胞涂片和硝酸纤维素膜 (NCM)标本进行c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达检测 ,并对扫描数值进行统计学处理。结果 :原位杂交及免疫组化反应信号皆定位于Eca 10 9细胞的胞质 ,扫描数值显示 :①c mycmRNA :实验组为 3.38± 0 .99,对照组为 5 .18± 1.39;②wtp5 3mRNA :实验组为 2 .74± 0 .83,对照组为 0 .38±0 .2 7;③iNOSmRNA :实验组为 4 .5 2± 0 .74 ,对照组为 2 .6 3± 0 .13;④EGFR IR :实验组为 2 .37± 1.0 5 ,对照组为 4 .38±0 .4 8。以上实验组与对照组比较差异有统计学意义 (P均 <0 .0 5 )。结论 :c myc、wtp5 3和NO均可参与 8 Br

HCMV先天性感染胎鼠脑组织中iNOS基因的表达

目的 研究人巨细胞病毒 (HCMV)先天性感染小鼠及在不同剂量诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂和促进剂的干预下脑组织中的iNOS基因表达情况。方法 将 6～ 8周龄BALB/c小鼠分为 6组 ,每组 6只 ,♀♂各半。A组腹腔注射HCMV 1 0ml,B组、C组腹腔注射HCMV 1 0ml后2d ,分别每天腹腔注射氨基胍 (AG) 2 0 0mg/kg、2 0mg/kg ,D组、E组腹腔注射HCMV 1 0ml后 2d ,分别每天腹腔注射左旋精氨酸 (L Arg) 30 0mg/kg、30mg/kg ,F组为DMEM对照组 ,每天每只 0 2ml。持续 17d。以上各组在孕鼠受孕第19天 ,剖腹取胎鼠 ,观察各组胎鼠生长发育及体重 ,有无皮下出血、淤血等情况 ,同时取胎鼠脑组织 ,作以下检测 :①硝酸还原酶法测定脑组织匀浆中NO代谢产物亚硝酸盐的含量。②RT PCR测iNOSmRNA的转录。结果 HCMV感染各组孕鼠在孕 19d ,其体重明显低于对照组 ,有部分胎鼠发育迟缓并可见明显的出血现象。感染各组胎鼠脑组织匀浆NO代谢产物明显高于DMEM对照组 (P <0 0 0 1) ,以B组尤为明显 ,A、C、E组间无差异显著性。RT PCR在感染各组均扩增出iNOSmRNA特异性条带表达 ,B组信号量最高 ,D组信号最弱。DMEM对照组未检测到iNOS特异性条带。结论 HCMV先天性感染可刺激胎鼠脑组织iNOS的表达 ,其表达产物NO可能参与了脑组织病理损伤?

砷对大鼠胚胎p16和iNOS基因表达的影响

为进一步阐明三氧化二砷的发育毒性和致畸作用机制,本实验用非放射性原位杂交等技术研究了砷诱导畸胎发生过程中p16和iNOS基因表达的变化。腹腔注射砷剂量依次为0、1、4和10mg/kg。结果发现砷对SD大鼠胚胎的发育毒性与剂量正比关系,10mg/kg时,发育正常胚胎仅为16.7％。原位杂交结果显示在对照和1mg/kg砷组可见p16mRNA阳性表达信号,但iNOSmRNA表达阴性;在4和10mg/kg组p16mRNA阳性杂交信号未检出,而iNOSmRNA大量表达。p16蛋白缺失与胚胎细胞分裂周期有关;iNOS过表达可导致内源性NO产量增高,进而对胚胎造成氧化性损伤。扫描电镜下,可见≥4mg/kg砷对胚胎表皮细胞、卵黄囊胎盘间皮和内皮细胞表面的微绒毛及细胞膜均有明显的损害作用。

IL-1β对正常和自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞iNOS基因转录调控因子的影响

用ＩＬ－１β处理体外培养的ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），比较两种大鼠ｉＮＯＳ基因表达活性的变化，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，ＶＳＭＣ受ＩＬ－１β刺激后，两种细胞的ｉＮＯＳ基因均表现出极高的转录活性，并且ＳＨＲ的ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平高于ＷＫＹ大鼠．以大鼠ｉＮＯＳ基因转录调控区上游６００ｂｐ（－１０３７～－４３８）和下游５００ｂｐ（－４３７～４６）ＤＮＡ片段为探针，与ＶＳＭＣ核蛋白孵育后，进行凝胶电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ），结果显示，两种大鼠的ＶＳＭＣ被ＩＬ－１β处理后，其核蛋白可分别与转录调控区上游或下游序列结合形成一条电泳滞后带．但是，转录调控区上游序列和下游序列与核蛋白形成的复合物具有明显不同的电泳迁移率．与ＷＫＹ大鼠相比，ＳＨＲ的ＶＳＭＣ核蛋白与ＤＮＡ结合活性较高．提示ＳＨＲ的ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因及其转录调控因子对ＩＬ－１β的反应与ＷＫＹ大鼠明显不同．

大鼠隐睾固定后生殖细胞发育凋亡与iNOS基因表达

目的 :研究大鼠隐睾固定后生殖细胞的发育和凋亡 ;探讨诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达与生殖细胞发育和凋亡的关系。方法 :SD雄性大鼠 ,日龄 2 2d时复制双侧隐睾模型 ,术后 14d复制隐睾固定模型。用生物素 dUTP 酶标亲和素测定法检测生殖细胞凋亡 ;用免疫组化SP法检测iNOS基因表达。结果 :与对照组相比 ,隐睾组发生凋亡的生殖细胞数显著增加 (P <0 .0 1) ,隐睾固定组发生凋亡的生殖细胞数无显著变化 (P >0 .0 5 )。发生凋亡的生殖细胞胞浆中iNOS基因表达明显增强。结论 :手术建立的隐睾生殖细胞凋亡增加。隐睾固定后生殖细胞凋亡减少。

肢体缺血-再灌注大鼠脑组织iNOS基因表达的半定量检测

目的 检测大鼠肢体缺血 再灌注后脑组织iNOS基因表达的变化。方法 SD大鼠 ,随机分为肢体缺血 再灌注 (I R)组、肢体单纯缺血 (I)组及正常对照 (N)组 ,通过夹闭腹主动脉末端 4h ,或 和开放 2～ 2 4h ,复制I、I R组动物模型 ,半定量RT PCR方法检测脑组织iNOSmRNA表达的变化 ,免疫组化染色法观测脑组织内iNOS及过氧亚硝基阴离子 (ONOO- )的硝基化产物硝基酪氨酸 (NT)的生成与分布。结果 N组脑组织iNOSmRNA未检出 ,I组及I R组脑组织iNOSmRNA均有表达 ,再灌注 2h ,iNOSmRNA表达量显著升高 (P <0 .0 1,vsN组 ) ,再灌注 6h达到高峰 ,随后下降 ,2 4h仍有少量表达 ;I及I R组脑组织均有iNOS阳性细胞 ,I R组见于大脑皮层各区、海马、尾状核 ,I组仅见于皮层后肢区及尾状核。I R组脑组织可见弥散分布的NT阳性神经元 ,I组偶见NT阳性神经元。结论 大鼠肢体缺血 再灌后脑组织iNOS基因表达显著增强 。

哈萨克羊iNOS基因多态性与布鲁菌易感性的关系

【目的】探究哈萨克羊诱导型一氧化氮合酶基因(iNOS)多态性与布鲁菌易感性的关系。【方法】使用虎红平板凝集试验(RBPT)进行哈萨克羊布鲁菌病血清学检测。参考GenBank中绵羊iNOS基因序列,针对其2,4,5外显子及其邻近内含子片段(exon 2/intron,exon 4/intron and exon 5/intron)设计引物,采用PCR-SSCP和DNA测序技术对231只哈萨克羊的iNOS基因进行多态性检测,分析其单核苷酸多态性(SNPs)与布鲁菌易感性之间的关系。【结果】经检测发现67只哈萨克羊为布鲁菌感染阳性,阳性检出率为29.00%。在哈萨克羊iNOS基因的exon 2/intron片段上检测出F2-C1910T多态位点,检测到CC、CT 2种基因型,优势等位基因和基因型分别是C和CC,其频率分别是0.924和0.848。在exon 4/intron片段上检测出F4-T11519C和F4-A11546G两个多态位点,其中F4-T11519C位点有2个等位基因T、C,有TT、CC、TC 3种基因型,优势等位基因和基因型分别是T和TC,其频率分别是0.714和0.528;F4-A11546G位点有2个等位基因A、G,有AA、AG、GG 3种基因型,优势等位基因和基因型分别是A和AG,其频率分别是0.714和0.528。在exon 5/intron片段上检测出F5-C12707T位点,有2个等位基因C、T,有CC、TT、CT 3种基因型,优势等位基因和基因型分别是C和CT,其频率分别是0.600和0.506。F2-C1910T位点为低度多态性位点,F4-T11519C、F4-A11546G和F5-C12707T位点为中度多态性位点。χ~2检验表明,哈萨克羊iNOS基因F2-C1910T和F5-C12707T位点与布鲁菌易感性的相关性不显著(P>0.05),F4-T11519C和F4-A11546G位点与布鲁菌易感性的相关性极显著(P<0.01)。哈萨克羊iNOS基因F2-C1910T位点的易感基因型为CC,F4-T11519C位点的易感基因型为TT、TC,F4-A11519G位点的易感基因型为AA、AG,F5-C12707T位点的易感基因型为CC、CT。【结论】哈萨克羊iNOS基因F2-C1910T和F5-C12707T位点与布鲁菌易感性无相关性,F4-T11519C和F4-A11546G位点与布鲁菌易感性存在相关性。

miRNA-451表达质粒的构建及其对iNOS基因表达的抑制

目的:探讨miRNA-451对肾小球系膜细胞中诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因表达的影响。方法:依据miRBase数据库中mmu-miR-451序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建pGenesil-1-miRNA-451质粒及阴性对照质粒pGenesil-1-control。将pGenesil-1-miRNA-451及pGenesil-1-control质粒分别转染小鼠肾小球系膜细胞,经G418筛选,建立稳定表达pGenesil-1-miRNA-451及pGenesil-1-control的细胞株。采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学检测iNOS基因表达的差异。结果:经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的小鼠肾小球系膜细胞和稳定表达pGenesil-1-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-1-miRNA-451的小鼠肾小球系膜细胞中,细胞增殖受到抑制,iNOS基因的蛋白表达明显受到抑制,而iNOS基因的mRNA水平无明显变化。结论:miRNA-451在翻译水平抑制了iNOS基因的表达,并对小鼠肾小球系膜细胞生长具有显著的抑制作用。

哈萨克羊iNOS基因多态性与布鲁氏菌病的相关性分析

试验旨在探讨哈萨克羊诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因多态性与布鲁氏菌病的相关性。使用虎红平板凝集试验(RBPT)方法对231只哈萨克羊血清进行布鲁氏菌病血清学检测,参考GenBank中绵羊iNOS基因序列,针对其第6、7、8外显子及其邻近内含子片段设计引物,利用PCR-SSCP技术和DNA测序技术对231只哈萨克羊的iNOS基因进行多态性检测,分析其SNPs与哈萨克羊布鲁氏菌病易感性的相关性。结果表明,67只哈萨克羊为布鲁氏菌感染阳性,阳性检出率为29.00%。在哈萨克羊iNOS基因的外显子6和8片段上未检测到多态位点,在外显子7片段上检测出F7-T18054C和F7-C18084T 2个多态位点,在F7-T18054C多态位点上检测到3种基因型(TC、TT、CC),优势等位基因和基因型分别是C型和CT型,其等位基因频率和基因型频率分别是0.660和0.446。在F7-C18084T多态位点上检测到2种基因型(CT、CC),优势等位基因频率和基因型分别是C和CC型,其等位基因和基因型频率分别是0.946和0.892。F7-C18084T属于低度多态(PIC<0.25),F7-T18054C属于中度多态(0.25<PIC<0.5)。相关性分析表明,F7-T18054C和F7-C18084T多态位点与布鲁氏菌病易感性无显著相关性(P>0.05)。试验结果表明,哈萨克羊iNOS基因F7-T18054C和F7-C18084T多态位点与布鲁氏菌病易感性不存在相关性。

绵羊iNOS基因突变与布鲁杆菌侵染率的关系分析

探究绵羊诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因多态性与布鲁菌易感性的关系。使用虎红平板血清凝集试验检测哈萨克羊布鲁菌患病情况。参考GenBank中绵羊iNOS基因序列,针对其15、16、17外显子及其邻近内含子片段设计引物,PCR扩增出目的基因片段。采用SSCP凝胶电泳检测不同基因型分型,DNA测序进行多态性检测,分析其SNPs与哈萨克羊布鲁菌易感性之间的关系。经检测发现阳性羊数67只,占比29.00%。在哈萨克羊iNOS基因的exon 15片段上有F15-C29002T和F15-G29076A两个多态位点。在exon 16片段上有F16-A30045G位点。在exon 17片段上有F17-T31213G位点。卡方检验表明,F15-C29002T和F15-G29076A多态位点与布鲁菌易感性的相关性不显著(P>0.05),F16-A30045G和F17-T31213G多态位点与布鲁菌易感性的相关性极显著(P<0.01)。哈萨克羊iNOS基因F15-C29002T和F15-G29076A与布鲁菌易感性没有相关性,F16-A30045G和F17-T31213G与布鲁菌易感性存在相关性。

iNOS基因微卫星多态性与中国汉族人群糖尿病肾病相关

诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因 (CCTTT) 14 等位基因频率在糖尿病肾病组 (0 .0 44 )显著低于糖尿病无肾病组 (0 .170 ,P <0 .0 1)和对照组 (0 .14 3 ,P <0 .0 5 ) ,提示iNOS基因 (CCTTT) n 微卫星多态性与中国汉族 2型糖尿病肾病有关。

TNF-αⅠ型受体对小鼠脑血管内皮细胞iNOS和HO-1基因表达的影响

目的探讨TNFαⅠ型受体(TNFR1)对小鼠脑血管内皮细胞iNOS、HO1基因表达水平的影响。方法体外培养TNFR1基因敲除的小鼠脑血管内皮细胞(BVECTNFR1)和野生型小鼠脑血管内皮细胞(BVEC),分别给予5ngmLTNFα刺激24h后,用实时荧光定量PCR技术及Westernblot方法检测两种细胞iNOS基因和HO1mRNA和蛋白表达量。结果给予TNFα刺激后,iNOSmRNA和蛋白表达仅在野生型脑血管内皮细胞内明显增高,而在受体敲除脑血管内皮细胞无明显变化。HO1mRNA和蛋白表达量在野生型小鼠脑血管内皮细胞和受体敲除小鼠脑血管内皮细胞均明显增高。结论TNFα可能作用于脑血管内皮细胞TNFR1,增加iNOS表达,HO1表达增高并非由TNFR1介导,而由TNFα的其他受体介导。

急性坏死性胰腺炎大鼠心肌ET-1、eNOS和iNOS基因的表达及丹红注射液对其表达的影响

重症急性胰腺炎（SAP）是常见的危重急症，常并发多器官功能障碍综合征（MODS），但对SAP并发急性心肌损害（acute myocardial injury，AMI）的研究并不多见。本研究观察急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠心肌的损害，并应用丹红注射液进行干预，探讨ANP并发AMI的可能发生机制和丹红注射液的防治作用。

靶基因iNOS、EPO表达对卵巢上皮性肿瘤发生发展的影响机制研究

目的研究靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、促红细胞生成素(EPO)在卵巢上皮性肿瘤中的表达对卵巢上皮性肿瘤发生发展的影响机制。方法随机选取2014年3月~2016年12月我院手术切除并经病理证实的卵巢上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织标本共84例。患者均由手术切除取标本切片,经甲醛固定,石蜡包埋,作4μm连续切片,分别进行HE染色及免疫组化染色。综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行半定量处理,计数肿瘤细胞总数和阳性细胞个数,计算阳性百分率。结果正常卵巢组织上皮细胞中i NOS和EPO几乎没有表达,从良性卵巢肿瘤-卵巢交界性肿瘤-恶性卵巢肿瘤,iNOS表达阳性率分别为17.39%、47.06%、87.50%,EPO表达阳性率分别为73.91%、88.24%、100.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤的组织学分级与EPO及i NOS的表达有关,肿瘤分化程度越低,EPO及iNOS的表达含量越高,且EPO与患者的临床分期有关,差异有统计学意义(P<0.05);而iNOS与患者的临床分期无关(P>0.05)。分析发现,恶性卵巢上皮性肿瘤中EPO蛋白表达和iNOS蛋白表达之间呈正相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 EPO蛋白和iNOS蛋白在卵巢上皮性肿瘤能促进肿瘤细胞的增殖及血管生成,对卵巢上皮肿瘤的发生、发展具有一定的预测作用。

pVAX-iNOS真核表达载体的构建及其抗肺癌作用研究

背景与目的 iNOS与NO介导的抗肿瘤效应有关。本研究旨在构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞,检测其基因的表达并初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用。方法应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的CDS片段,构建pVAX-iNOS载体后转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测目的基因的表达;采用M法、Hoechst 3235染色和划痕实验分别检测iNOS高表达在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移作用的影响。结果真核表达质粒载体pVAX-iNOS构建成功,iNOS蛋白在转染后的A549细胞中表达升高。pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后能明显诱导细胞发生凋亡并抑制肿瘤细胞的生长和迁移。结论本研究成功构建pVAX-iNOS真核表达质粒,高表达iNOS能明显抑制A549细胞的增殖、迁移并促进细胞发生凋亡。本研究有望为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略。

INO1基因在粟酒裂殖酵母中的表达及对蔗糖酶分泌和磷脂合成的影响

分别用含有INO1基因的两个质粒pADH -INO和pSPIN - 2 2对天然肌醇营养缺陷型的粟酒裂殖酵母 (Schizosaccharomycespombe)进行转化 ,得到的转化子分别命名为Sch .P94 4和Sch .P10 2 5 .通过对Sch .P94 4和Sch .P10 2 5的研究 ,发现两个质粒均能在粟酒裂殖酵母中自主复制并使其变成肌醇原养型 ,但肌醇分泌的速度和数量Sch .P94 4均高于Sch .P10 2 5 .用该两菌株研究肌醇合成与细胞生长及可分泌蔗糖酶比活的关系 ,结果显示 :细胞的生长与肌醇的合成紧密相关 ;而蔗糖酶的比活 ,当葡萄糖含量小于 1%时 ,菌株Sch .P94 4的蔗糖酶分泌是解葡萄糖阻遏的 ,而Sch .P10 2 5在实验范围内 ,蔗糖酶的比活都受到葡萄糖的阻遏作用 .对Sch .P94 4和Sch .P10 2 5膜磷脂的组成进行分析比较发现 ,膜磷脂中磷脂酰肌醇 (PI)的含量Sch .P94 4比Sch .P10 2 5高 ,而磷脂酰丝氨酸(PS)的含量Sch .P94 4比Sch .P10 2 5低 .这意味着肌醇通过磷脂酰肌醇参与了蔗糖酶分泌的解阻遏作用 .

过表达INO1基因提高酿酒酵母乙醇耐受性

为获得燃料乙醇生产菌株,通过基因工程改造,构建能够利用能源甘蔗汁发酵、乙醇产率高的酿酒酵母工程菌株。即过表达肌醇-3-磷酸合成酶基因ino1,敲除kanMX抗性基因,获得重组菌。对过表达菌株的乙醇耐受性进行分析。利用甘蔗汁进行发酵培养,采用气相色谱(GC)对发酵产物乙醇进行检测。结果显示过表达菌株YI2-1能够耐19%(V/V)的乙醇,利用20oBx甘蔗汁厌氧发酵乙醇积累量为13.10%(V/V),较出发菌提高了8.55%。而过表达菌株YI2-1△KP的最大乙醇积累量为13.17%(V/V),较出发菌提高了9.16%。研究表明通过过表达酿酒酵母ino1基因能够有效提高菌株细胞活力、乙醇耐受性。构建的工程菌可利用甘蔗汁发酵,具有较高的乙醇产量。