酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠海马内质网应激IRE1α/ASK1/JNK通路的影响

目的基于内质网应激(ERS)肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)/凋亡信号调节激酶1(ASK1)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路探讨酸枣仁-合欢花对孤养结合慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁模型大鼠的干预作用。方法将144只大鼠随机分为正常组、模型组及酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组和文拉法辛组。除正常组外,其他各组进行21 d的孤养结合CUMS制备大鼠抑郁模型。用旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学变化;用透射电镜观察海马神经细胞超微结构变化;用TUNEL染色法观察海马神经细胞凋亡情况;用Western Blot法检测海马组织IRE1α、磷酸化(P)-IRE1α、ASK1、P-ASK1、JNK、P-JNK、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;用Real-Time PCR法检测海马IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组旷场实验中水平运动和垂直运动得分下降(P<0.01);水迷宫实验中逃避潜伏期增加、跨越原平台次数减少(P<0.01);海马神经细胞凋亡数增加(P<0.01);海马P-IRE1α/IRE1α、P-ASK1/ASK1、P-JNK/JNK、Bax、Caspase-3蛋白及IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平升高、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁-合欢花各组及文拉法辛组旷场实验中水平运动和垂直运动得分升高(P<0.01);水迷宫实验中逃避潜伏期缩短、跨越原平台次数增加(P<0.01);海马神经细胞凋亡数减少(P<0.01);海马P-IRE1α/IRE1α、P-ASK1/ASK1、P-JNK/JNK、Bax、Caspase-3蛋白及IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),且酸枣仁-合欢花中剂量组较高、低剂量组效果更好。结论酸枣仁-合欢花可能通过调节内质网应激IRE1α/ASK1/JNK通路发挥抗抑郁作用。

健脾益气方干预内质网应激IRE1α-XBP1通路诱导腹膜间皮细胞自噬防治PF的机制

目的 研究健脾益气方通过干预腹膜透析(PD)大鼠内质网应激IRE1α-XBP1通路,诱导自噬以减轻腹膜间皮细胞(PMC)上皮间充质转化(EMT)的作用及机制。方法 SD大鼠72只,采用5/6肾切除联合腹膜透析液制备腹膜纤维化(PF)模型,随机分为假手术组、模型组、西药组、中药高、中、低剂量组,每组12只,进行28 d药物干预。苏木素-伊红(HE)染色观察腹膜组织形态学改变,免疫组化、Western印迹及RT-聚合酶链反应(PCR)测定IRE1α-XBP1通路自噬及纤维化标志蛋白表达。结果 与模型组比较,假手术组、西药组、中药高、中、低剂量组葡萄糖调节蛋白(GRP)78、XBP1s、微管相关蛋白1轻链(LC)3-Ⅱ、自噬相关蛋白Beclin-1、E-钙黏蛋白(cadherin)、α-肌动蛋白(SMA) mRNA及蛋白、pIRE1α蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 健脾益气方能够通过干预内质网应激通路IRE1α-XBP1诱导PMC自噬,激活其适应性保护作用,达到减轻PMC的EMT、改善腹膜功能,最终起到拮抗PF作用。

IRE1α/Xbp1s靶向调控NKp46改善NK细胞杀伤功能清除HIV感染细胞的思路探析

自然杀伤细胞的杀伤活性无MHC限制,不依赖抗体,是抵御肿瘤和病毒感染的第一道防线。肿瘤或慢性病毒感染后,固有免疫NK细胞与适应性免疫T细胞共同发挥免疫功能对抗肿瘤及感染,但由于免疫系统无法迅速根除病灶,免疫细胞内质网稳态被打破,使其无法发挥正常的免疫杀伤及清除功能,导致病情迅速恶化甚至死亡。NKp46是仅表达在NK细胞上的特异性活化受体,它直接影响NK细胞的活化程度与杀伤作用的强弱。艾滋病是一种目前无法根治的慢性传染病之一,病毒持续感染引起NK细胞内质网应激,IRE1α/Xbp1s信号通路的启动导致NKp46蛋白翻译大部分被抑制,影响NK细胞活化发挥功能,因此基于IRE1α/Xbp1s靶向调控NKp46寻求改善NK细胞杀伤功能的新靶点成为研究的新思路。

基于IRE1/GPR78信号通路研究三黄益肾胶囊抑制DKD大鼠肾组织细胞凋亡的作用机制

[目的]探讨三黄益肾胶囊对糖尿病肾病(DKD)模型大鼠的治疗作用,同时研究三黄益肾胶囊对DKD模型大鼠肌醇酶1(IRE1)/G蛋白偶联受体78(GPR78)信号通路的影响。[方法]将30只大鼠平均分为正常组、模型组、阳性药组、三黄益肾低剂量及三黄益肾高剂量组,每组6只。除正常组外,其余各组运用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)注射建立DKD模型,造模后正常组与模型组每天灌胃生理盐水,阳性药组每天灌胃厄贝沙坦11.51 mg/kg,三黄益肾低剂量及三黄益肾高剂量组每天分别灌胃三黄益肾胶囊0.81、1.62 g/kg,分别干预8周。通过观察给药期间各组大鼠血糖、体质量水平,检测造模给药后生化指标水平及肾组织病理学染色评估三黄益肾胶囊对DKD的治疗作用;其次,运用试剂盒及酶联免疫吸附(ELISA)法研究三黄益肾胶囊对DKD大鼠肾组织中氧化应激及炎症因子水平的影响;最后运用免疫荧光、Tunel染色、蛋白免疫印迹(Western blot)等方法研究三黄益肾胶囊对DKD大鼠肾组织细胞凋亡以及IRE1/GPR78信号通路的影响。[结果]经三黄益肾胶囊干预后,DKD大鼠体质量显著增加,血糖水平降低,血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白水平下降,同时也可改善DKD大鼠肾组织病理学变化,肾组织炎细胞浸润及纤维化减轻。此外,三黄益肾胶囊可显著升高DKD模型大鼠肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性、降低丙二醛(MDA)水平,并降低DKD大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。Western blot结果显示,三黄益肾胶囊显著降低了DKD模型大鼠肾组织中内质网应激标志性因子GRP78、IRE1蛋白表达水平,同时有效降低了模型大鼠肾组织中促凋亡蛋白BcL2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的表达,提高了抑制凋亡蛋白BcL2的表达。[结论]三黄益肾胶囊对DKD模型大鼠具有显著治疗作用,其作用机制可能与抑制肾组织中IRE1/GPR78信号通路激活,改善内质网应激有关。

益母草碱调节IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠炎症反应的影响

目的探究益母草碱调节IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠炎症反应的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、益母草碱低剂量组、益母草碱高剂量组、联用HY-N2485组(高剂量益母草碱+NLRP3激活剂)。检测大鼠肺功能;血气分析仪检测氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2));ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;检测肺组织干湿比;检测肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;HE染色观察大鼠肺组织病理形态;Western blotting检测肺组织中IRE1α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与空白组相比,模型组肺组织形态有明显损伤,PEF、FVC和FEV0.3/FVC水平、PaO_(2)、OI水平、肺泡灌洗液IL-10水平、肺组织CAT和SOD活性降低,PaCO_(2)水平、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、肺组织病理评分、肺组织MDA含量、IRE1α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,益母草碱低、高剂量组大鼠肺组织损伤明显减轻,PEF、FVC和FEV0.3/FVC水平、PaO_(2)、OI水平、肺泡灌洗液IL-10水平、肺组织CAT和SOD活性升高,PaCO_(2)水平、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、肺组织病理学评分、肺组织MDA含量、IRE1α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05);HY-N2485可减弱益母草碱对ARDS大鼠的改善作用(P<0.05)。结论益母草碱可降低ARDS大鼠炎症和氧化应激,减轻肺组织损伤,改善肺功能,可能与抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路有关。

内质网应激IRE1α/XBP-1通路在多巴胺能神经元变性死亡中的作用

目的探讨内质网应激1型跨膜蛋白激酶α(IRE1α)/X盒结合蛋白1(XBP-1)通路在多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法利用内质网应激诱导剂Thapsigargin观察小鼠原代成纤维细胞中IRE1α/XBP-1通路活性。利用IRE1α抑制剂KIRA8探究IRE1α/XBP-1通路在原代中脑多巴胺能神经元变性死亡中作用。结果相比于未处理组细胞,Thapsigargin处理后原代成纤维细胞中内质网应激IRE1α/XBP-1通路明显上调。Thapsigargin处理可显著降低原代中脑多巴胺能神经元的存活率,而KIRA8处理可显著改善Thapsigargin导致的多巴胺能神经元存活率降低。结论内质网应激通过IRE1α/XBP-1通路介导多巴胺能神经元的变性死亡。

p-IRE1、β-catenin及XIAP在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤临床诊断及预后评估中的意义

目的探讨磷酸化需肌醇酶1蛋白(p-IRE1)、β-连环素(β-catenin)及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP)中的表达及其在临床诊断和预后评估中的意义。方法选取2017年1月至2022年1月平顶山市第一人民医院收治的SNIP患者102例为SNIP组;另选取本院同时间段因鼻中隔偏曲对侧下鼻甲代偿性肥大而行下鼻甲黏膜部分切除术的患者99例,经病理确诊为正常鼻腔黏膜组织(设为对照组)。比较两组组织中p-IRE1、β-catenin及XIAP的表达强度情况;102例SNIP患者出院后,行2年门诊复查随访,比较SNIP组不同预后情况患者一般资料及p-IRE1、β-catenin及XIAP阳性表达;采用多元Logistic回归模型分析影响SNIP患者预后的危险因素。结果两组间p-IRE1、β-catenin及XIAP表达强度比较,差异具有统计学意义(P<0.05);且SNIP组p-IRE1、β-catenin及XIAP阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。据随访统计,预后良好组81例,预后不良好组21例。两组性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组Krouse临床分期、病理分化程度、p-IRE1、β-catenin及XIAP阳性表达比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。多元Logistic回归模型结果显示,Krouse临床分期为T_3期-T_4期、病理分化程度伴恶变SNIP、p-IRE1、β-catenin及XIAP表达为阳性均是影响SNIP患者的预后不良的危险因素(P<0.05)。结论在SNIP组织中,p-IRE1、β-catenin及XIAP的表达强度及阳性表达率均显著高于正常鼻腔黏膜组织;通过检测上述指标阳性表达,可以预测SNIP预后情况,有利于SNIP后续治疗。

天麻素经IRE1α/TRAF2/NF-κB通路调控大鼠急性心肌梗死诱导的炎性反应及机制研究

目的探讨天麻素对大鼠急性心肌梗死(AMI)诱导的炎性反应的影响,并分析其作用机制。方法50只SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(AMI)组、天麻素低剂量(L-GAD)组、天麻素高剂量(H-GAD)组、卡托普利(CAP)组,每组10只。采用超声心动图检测大鼠心功能,TTC染色评估大鼠心肌梗死面积比,HE染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化,ELISA法和qRT-PCR法分别检测大鼠血清及心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量及mRNA表达,Western blot法检测大鼠心肌组织中肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)/肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)/核因子(NF)-κB通路蛋白表达。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心肌组织受损,存在明显心肌梗死,LVEF降低,LVDs和LVDd升高,血清和心肌组织中TNF-α、IL-6、MCP-1水平及mRNA表达升高,心肌组织中TRAF2蛋白表达量、p-IRE1α/IRE1α和p-p65/p65比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与AMI组比较,L-GAD、H-GAD组和CAP组大鼠心肌组织损伤减轻,心肌梗死面积比减小,LVEF升高,LVDs和LVDd降低,血清和心肌组织中TNF-α、IL-6、MCP-1水平及mRNA表达降低,心肌组织中TRAF2蛋白表达量、p-IRE1α/IRE1α和p-p65/p65比值下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论天麻素可通过调控IRE1α/TRAF2/NF-κB通路减轻AMI大鼠心肌组织损伤及心肌梗死面积,改善大鼠心功能,抑制炎性反应。

黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠肾组织IRE1α及GRP78表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠肾组织IRE1α及GRP78表达的影响。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为黄芪甲苷组(40 mg/kg)、糖尿病肾病组与白藜芦醇组(20 mg/kg)并设立空白对照组,每组各10只,干预时长8周。实验过程中记录大鼠一般情况,定期测量血糖、体重,收集大鼠的尿液,测定24 h尿蛋白定量、尿微量白蛋白浓度。8周末检测血肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油并观察肾组织病理变化;采用免疫组化检测各组间GRP78、IRE-1α表达情况。结果:相较正常组,8周末,糖尿病肾病组大鼠肾组织病理损伤,IRE1α与GRP78表达显著增加;相较糖尿病肾病组,黄芪甲苷组大鼠GRP78、IRE-1α表达明显下降,肾组织病理损伤明显减轻。结论:黄芪甲苷可能通过改善内质网应激状态参与缓解糖尿病肾病的作用。

杨桃根DMDD对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2内质网应激IRE1α通路及炎症反应的抑制作用

目的研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2内质网应激及炎症反应的抑制作用。方法体外培养HK-2细胞,并分为正常组、高糖组、内质网应激抑制剂4-PBA组(5 mmoL·L^(-1))和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol·L^(-1))。各组细胞培养结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6的水平;AO/EB染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平、内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP的表达水平以及IRE1α通路相关蛋白(IRE1α、JNK)的磷酸化水平。结果与高糖组比较,DMDD各浓度组细胞存活率明显升高;TNF-α、IL-6水平,Bax/Bcl-2、GRP78、CHOP蛋白表达水平和IRE1α、JNK蛋白磷酸化水平均明显降低,细胞中橙红色荧光明显减少。结论DMDD可能部分通过抑制内质网应激及IRE1α通路相关蛋白的表达,减少炎症反应,达到HK-2细胞的保护作用。

糖络宁通过外泌体调控IRE1α诱导细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨糖络宁(以下简称TLN)通过外泌体对雪旺细胞(schwann cells,SCs)IRE1α诱导的细胞凋亡的调控作用。方法:将30只SD大鼠分为空白组、模型组和糖络宁组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病模型。空白组及模型组灌胃给予蒸馏水,TLN组灌胃给予糖络宁溶液,12周后处死大鼠并收集血清。差速离心法分离血清中的外泌体,将SCs分为3组并分别与3组大鼠血清外泌体共培养。收集SCs,提取细胞中的总蛋白和总RNA,采用Western blot法测定TRAF2、p-JNK、Bcl-2、Bax、Cyto C和cleaved-Caspase-3的蛋白表达,采用RT-PCR法测定ASK1和Caspase-9的mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组TRAF2、p-JNK、Bax、Cyto C和cleaved-Caspase-3的蛋白表达显著升高,Bcl-2的蛋白表达显著降低,ASK1和Caspase-9的mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,TLN组TRAF2、p-JNK、Bax、Cyto C和cleaved-Caspase-3的蛋白表达显著降低,Bcl-2的蛋白表达显著升高,ASK1和Caspase-9的mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:糖络宁能够通过外泌体抑制IRE1α-TRAF2-ASK1复合体,进而抑制JNK的磷酸化,然后分别抑制Bax表达,促进Bcl-2表达,以及抑制Cyto C、Caspase-9和Caspase-3的表达,从而抑制细胞凋亡。

内质网应激通路相关蛋白IRE1、PERK、ATF6在舌鳞癌中的表达及其功能的生物信息学分析

目的:本研究旨在通过生物信息学方法系统分析肌醇需求酶1(Inositol-Requiring Enzyme 1,IRE1)、蛋白激酶R样内质网激酶(Protein Kinase R-like Endoplasmic Reticulum Kinase,PERK)、激活转录因子6(Activating Transcription Factor 6,ATF6)在舌鳞癌中的表达及意义。方法:使用GEO、Kaplan-Meier Plotter、GeneMANIA、DAVID等多个数据库对IRE1、PERK、ATF6在舌鳞癌中的表达与预后价值、相互蛋白作用网络及功能富集进行综合分析。结果:ATF6在舌鳞癌组织中表达高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P <0.05)。IRE1及PERK高表达组患者总生存率(OS)高于低表达组,ATF6高表达组患者OS低于低表达组,差异均具有统计学意义(P <0.05)。本研究筛选出与IRE1、PERK、ATF6相互作用的蛋白质各20个并进行GO富集分析。IRE1及相关蛋白富集于内质网、线粒体等细胞组分中,具有蛋白质结合、蛋白磷酸酶结合等分子功能,参与内质网应激反应、泛素依赖性ERAD途径等生物学过程。PERK及相关蛋白富集于胞液、细胞膜等细胞组分中,具有翻译起始因子活性、RNA结合等分子功能,参与内质网未折叠蛋白反应、细胞对葡萄糖饥饿的反应等生物学过程。ATF6及其相关蛋白富集于内质网、细胞核等细胞组分中,具有转录调控区序列特异性DNA结合、蛋白质异二聚化活性等分子功能,参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、内质网未折叠蛋白反应等生物学过程。结论:ATF6在舌鳞癌组织中呈现高表达,同IRE1、PERK与舌鳞癌患者不良预后相关。在未来抗肿瘤治疗中,IRE1、PERK、ATF6可能成为舌鳞癌的诊断和治疗的新选择。

参芪益心方对异丙肾上腺素致心肌损伤大鼠IRE1、Cleaved Caspase-3的影响及作用机制研究

目的:探讨异丙肾上腺素诱导的心肌损伤及参芪益心方对肌醇需求酶1(IRE1)、裂解凋亡蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的影响及作用机制研究。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、异丙肾上腺素组、曲美他嗪组、参芪益心方低剂量组和参芪益心方高剂量组。除对照组外,其余各组给予颈背部皮下注射异丙肾上腺素建模,实验连续2周后,对照组给予等量生理盐水,曲美他嗪组给予曲美他嗪混悬液每日5 mg/kg,参芪益心方低剂量组、高剂量组分别给予参芪益心方水煎剂每日10 g/kg、20 g/kg,对照组和异丙肾上腺素组给予等量生理盐水灌胃,实验连续2周。分别在实验给药2周末、4周末进行心电图、超声心动图检查。实验给药4周末苏木精-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理学改变,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组心肌组织IRE1、Cleaved Caspase-3蛋白水平。结果:实验4周末,异丙肾上腺素组q波振幅加深、ST段抬高,且较对照组心率明显增快(P<0.05);曲美他嗪组q波振幅减小,参芪益心方低剂量组ST段抬高幅度减小;参芪益心方高剂量组ST段位于等电位线上,无明显偏移,参芪益心方治疗组相比异丙肾上腺素组心率明显降低(P<0.05)。实验4周末,与对照组比较,异丙肾上腺素组大鼠左室前壁舒张末厚度(Dist A)、左室后壁舒张末厚度(Dist C)减小,舒张末心室内径(Dist B)、收缩期心室内径(Dist D)增加,左室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)明显减低;心肌组织IRE1、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.001)。与异丙肾上腺素组比较,各治疗组大鼠在药物干预后各项指标均有改善(P<0.05),且参芪益心方高剂量组优于参芪益心方低剂量组(P<0.05)。与异丙肾上腺素组比较,曲美他嗪组心肌间质少量炎性细胞浸润,心肌纤维轻度肿胀;参芪益心方低剂量组和参芪益心方高剂量组纤维排列相对规则,断裂与空泡变性减少,并且参芪益心方高剂量组优于参芪益心方低剂量组。结论:内质网应激参与异丙肾上腺素诱导的心肌损伤,参芪益心方能够明显降低内质网相关因子IRE1、Cleaved Caspase-3水平,改善心肌损伤,其机制可能与抑制内质网应激的启动和凋亡信号通路有关,且高剂量治疗效果更明显。

益肾汤经结肠透析对慢性肾衰竭大鼠肠上皮细胞IRE1α、GRP78表达的影响

目的:观察益肾汤经结肠透析对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肠上皮细胞IRE-1α、GRP78表达的影响。方法:随机在60只健康雄性SD大鼠中抽取45只,腺嘌呤灌胃诱导建立CRF大鼠模型,其余15只为正常组。将造模成功大鼠随机分为CRF组、尿毒清结肠透析组和益肾汤结肠透析组,尿毒清结肠透析组予尿毒清结肠透析,益肾汤结肠透析组予益肾汤结肠透析,实验周期为4周。实验过程中记录大鼠一般状况、体重、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)的变化,4周末取肾组织、结肠组织行HE染色观察组织学改变,免疫组化检测各组结肠组织IRE1α、GRP78的表达及分布情况,实时荧光定量PCR法测定IRE1α、GRP78 mRNA表达情况。结果:(1)CRF组大鼠一般情况较正常组差,体重增长减慢(P<0.05),而尿毒清结肠透析组及益肾汤结肠透析组与CRF组相比有所改善,体重增加(P<0.05);(2)与正常组比较,CRF组Scr、BUN值升高(P<0.05),免疫组化示肠上皮细胞IRE1α、GRP78表达均明显上调(P<0.05),PCR结果显示GRP78、IRE1αmRNA相对表达量明显升高(P<0.05);(3)与CRF组比较,尿毒清结肠透析组及益肾汤结肠透析组Scr、BUN值降低(P<0.05),免疫组化示肠上皮细胞IRE1α、GRP78表达水平下调(P<0.05),PCR结果显示GRP78、IRE1αmRNA相对表达量显著降低(P<0.05),但两治疗组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾汤经结肠透析可通过调节IRE1α、GRP78表达,抑制ERS保护肠黏膜屏障,从而改善CRF大鼠肾功能。

电针对脑缺血再灌注大鼠内质网应激IRE1α/TRAF2/ASK1/Caspase-12通路的影响研究

目的:观察电针“百会”“内关”对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠缺血侧大脑皮质凋亡相关蛋白IRE1α、TRAF2、ASK1及Caspase-12的影响,初步探讨电针治疗脑缺血再灌注凋亡损伤的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、针刺组(C组)和依达拉奉组(D组),每组15只。选用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型;LONGA 5级神经功能评分法评估大鼠神经功能情况;苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠缺血侧大脑皮质病理形态学变化;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测大鼠神经元细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(WB)检测大鼠大脑皮质IRE1α、TRAF2、ASK1及Caspase-12蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分,细胞凋亡率以及IRE1α、TRAF2、ASK1及Caspase-12蛋白表达量均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01),大脑皮质组织结构紊乱,细胞萎缩坏死;与模型组比较,针刺组和依达拉奉组神经功能缺损评分以及IRE1α、TRAF2、ASK1和Caspase-12蛋白表达量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),且细胞凋亡率降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),大脑皮质细胞病理状况比模型组减轻,萎缩坏死细胞变少;与依达拉奉组比较,针刺组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针能抑制CIRI大鼠脑组织细胞凋亡,促进神经功能恢复,作用机制可能与电针下调IRE1α/TRAF2/ASK1/Caspase-12通路蛋白有关。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

抑制IRE1α/NF-κB通路减轻蛛网膜下腔出血后炎症反应

目的:探讨肌醇激酶-1 (IRE1α)/核因子κB (NF-κB)通路与蛛网膜下腔出血(SAH)炎症反应的关系。方法:通过血管内穿刺法建立SAH模型。所有实验动物随机分为Sham组、SAH组、SAH + DMSO组、SAH + STF-083010 (IRE1α抑制剂)组、SAH + BAY11‐7082 (NF-κB抑制剂)组。使用改良加西亚评分评估神经功能。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IRE1α、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、NF-κB的表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的浓度。结果:SAH后改良加西亚评分降低,IRE1α、GRP78、NF-κB蛋白表达和炎症因子(TNF-α, IL-1β, IL-6)表达均增加,抑制IRE1α/NF-κB通路后所有结果正好相反。皮尔森相关分析显示炎症因子表达与改良加西亚评分呈负相关。结论:抑制IRE1α/NF-κB通路可以减轻SAH后炎症,发挥神经保护作用。

从lncRNA NEAT1和IRE1α/XBP1信号通路探讨透骨消痛胶囊改善膝骨关节炎内质网应激研究

目的基于lncRNA NEAT1和IRE1α/XBP1信号通路,探讨透骨消痛胶囊延缓膝骨关节炎(KOA)软骨退变的机制。方法48只8周龄小鼠适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为空白组12只、造模组36只,造模组动物经5%异氟醚吸入麻醉后,采用Hulth法诱导KOA模型,随机数字表法分为模型组12只、透骨消痛胶囊组12只和对照组12只。透骨消痛胶囊组予以透骨消痛胶囊368 mg/kg进行灌胃;对照组使用牛磺熊去氧胆酸500 mg/kg进行灌胃;空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续4周。干预结束后,麻醉状态下处死各组小鼠,分离与收集膝关节软骨组织,Micro-CT观察小鼠膝关节软骨组织形态变化;Western blot检测关节软骨IRE1α/XBP1通路相关蛋白表达;qPCR检测软骨组织中lncRNA NEAT1表达水平。结果与空白组比较,模型组半月板结构缺失,胫骨平台软骨面呈现凹凸不平状、伴有明显的骨赘增生,软骨组织IRE1α、XBP1、GRP78、CHOP蛋白含量、lncRNA NEAT1表达均显著升高(P<0.05);透骨消痛胶囊组、对照组小鼠内侧半月板结构缺失,2组软骨组织的IRE1α、XBP1、GRP78、CHOP蛋白含量均显著降低(P<0.05),lncRNA NEAT1表达水平均显著降低(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊可通过下调KOA小鼠关节软骨组织中lncRNA NEAT1水平,抑制软骨组织与内质网应激有关的IRE1α/XBP1通路蛋白表达发挥作用。

Bushen Yizhi Formula regulates the IRE1αpathway to alleviate endoplasmic reticulum stress in an Alzheimer’s disease rat model

While the Bushen Yizhi Formula can treat Alzheimer’s disease(AD),the yet to be ascertained specific mechanism of action was explored in this work.Methods:Different concentrations of the Bushen Yizhi Formula and amyloid-beta peptide(Aβ)were used to treat rat pheochromocytoma cells(P12)and human neuroblastoma cells(SH-SY5Y).Cell morphological changes were observed to determine the in vitro cell damage.Cell Counting Kit(CCK)-8 assay and flow cytometry were employed to identify cell viability and apoptosis/cell cycle,respectively.Western blotting and immunohistochemistry were employed to measure the expressions of endoplasmic reticulum stress(ERS)-related proteins(GRP78 and CHOP),p-IRE1α,IRE1α,ASK1,p-JNK,JNK,Bax,Bcl-2,XBP-1,and Bim.Fura 2-acetoxymethyl ester(Fura-2/AM)was used to determine the intracellular calcium(Ca^(2+))concentration.Also,an AD model was constructed by injecting Aβinto the CA1 area of the hippocampus in Sprague Dawley rats.AD model rats were gavaged with different concentrations of Bushen Yizhi Formula for 14 consecutive days.The Morris water maze experiment was conducted to test the learning and memory of rats.Hematoxylin&Eosin(H&E)and Terminal-deoxynucleotidyl Transferase(TdT)-mediated dUTP Nick-End Labeling(TUNEL)staining were done to determine histopathological changes in the brain.Results:Bushen Yizhi Formula relieved the Aβ-induced effects including cell injury,decreased viability,increased apoptosis,G0/G1 phase cell cycle arrest,upregulation of GRP78,CHOP,p-IRE1α,p-JNK,Bax,XBP-1 and Bim,as well as down-regulation of Bcl-2.These results were also seen with IRE1αsilencing.While Aβsuppressed the learning and memory abilities of rats,the Bushen Yizhi Formula alleviated these effects of Aβ.Brain nerve cell injury induced by Aβcould also be treated with Bushen Yizhi Formula.Conclusion:Bushen Yizhi Formula could influence ERS through the IRE1αsignaling pathway to achieve its therapeutic effects on AD.

基于Nrf2/HO-1信号通路研究黄连化浊胶囊对糖尿病大鼠胰岛β细胞及MCP1、IRE1α表达的影响

目的:基于Nrf2/HO-1信号通路研究黄连化浊胶囊对糖尿病大鼠胰岛β细胞及MCP1、IRE1α表达的影响。方法:选取50只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、Nrf2激动剂EGCG(5 mg/kg)组、黄连化浊胶囊(2.025 g/kg)组、黄连化浊胶囊+EGCG组,每组10只,除正常对照组外其余各组采用腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,造模成功后,各给药组灌胃相应药物,正常对照组与模型组灌胃相应体积生理盐水。HE染色检测胰腺组织病理学;醛品红-橙黄G染色观察胰岛β细胞;TUNEL法检测胰岛β细胞凋亡;ELISA法检测血清MCP1含量;免疫印迹法检测胰腺组织IRE1α及Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组胰腺结构遭到破坏,细胞出现空泡变性,胰岛体积明显变小,且边界不规则、模糊不清,胰岛出现萎缩且形状不规则,胰岛β细胞数量明显减少,胰腺组织病理评分、胰岛β细胞凋亡率及血清MCP1含量和胰岛组织IRE1α蛋白表达显著升高,胰岛组织Nrf2、HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组胰腺组织病理形态明显改善,胰岛明显增大,胰岛β细胞数量明显增多;胰腺组织病理评分、胰岛β细胞凋亡率及血清MCP1含量和胰岛组织IRE1α蛋白表达显著降低,胰岛组织Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。黄连化浊胶囊组各指标与EGCG组比较差异无统计学意义(P>0.05),黄连化浊胶囊+EGCG组各指标改善显著优于黄连化浊胶囊组和EGCG组(P<0.05)。结论:黄连化浊胶囊可显著改善胰岛β细胞损伤,并可抑制MCP1及IRE1α表达,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。