金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病大鼠JNK/SAPK信号通路的影响

目的探究金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病(DKD)模型大鼠肾脏保护作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、恩格列净组(10 mg/kg)、金雀根组(3.1 g/kg)、黄芪组(3.1 g/kg)、金雀根加黄芪组(6.2 g/kg),除正常组外,各组大鼠行左侧肾摘除手术并腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)建立DKD模型,各组分别给予相应药物灌胃8周。期间定期检测FBG、24 h尿微量蛋白(24 h U-mAlb)。给药8周后处死大鼠,检测Scr、BUN、Cystatin C水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,免疫组织化学法检测巨噬细胞标志蛋白CD68、iNOS表达,Western blot法检测肾组织JNK/SAPK通路蛋白JNK、p-JNK和TNF-α、IL-1β、ICAM-1表达,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平。结果与正常组比较,模型组大鼠FBG、24 h U-mAlb、BUN、Scr、Cystatin C水平均升高(P<0.01),肾组织出现病理损伤,肾组织和血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平升高(P<0.01),肾组织JNK和p-JNK蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠FBG、24 h U-mAlb、BUN、Scr、Cystatin C水平均降低(P<0.05,P<0.01),肾组织病理损伤减轻,肾组织和血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平降低(P<0.01),肾组织JNK和p-JNK蛋白表达降低(P<0.01);金雀根组与黄芪组比较各指标均无明显变化(P>0.05);与金雀根组或黄芪组比较,金雀根加黄芪组各指标均有不同程度的改善(P<0.05,P<0.01)。结论金雀根、黄芪及其配伍可改善DKD大鼠肾功能,抑制M1型巨噬细胞,减少炎症因子分泌,减轻肾脏病理损伤,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路激活有关,金雀根与黄芪配伍药效较好。

JNK/SAPKs信号转导通路在榄香烯抗肝癌效应中的作用

目的:探讨JNK/SAPKs信号转导通路在榄香烯抗肝癌效应中的作用,为阐明榄香烯抗癌效应的分子机制提供参考。方法:气相色谱法检测榄香烯在Hea-F肝癌细胞内的分布。透射电镜观察SMMC7721凋亡细胞的超微结构变化。利用Western-blotting对榄香烯处理的HepG2肝癌细胞JNK/SAPKs进行的活性分析。利用RT-PCR检测榄香烯处理的SMMC7721 肝癌细胞的DAXX基因表达。结果:榄香烯标准品在8.42 min时出现洗脱峰。榄香烯处理3 b后,SMMC7721细胞开始发生具有凋亡特征的变化。榄香烯处理组HepG2细胞的JNK/SAPKs激酶活性次于热休克处理组,高于对照组。榄香烯处理的SMMC7721细胞组未见DAXX基因的表达。结论:榄香烯能够进入细胞内。其引起的肿瘤细胞凋亡可能是通过活化JNK/ SAPKs来诱导的。DAXX传人途径在榄香烯诱导的JNK/SAPKs活化过程中可能不起主要作用。

JNK/SAPK和p38信号转导通路在高渗透压介导的兔髓核细胞凋亡中的作用

目的观察高渗透压对兔髓核细胞活性的影响及JNK/SAPK(c-Jun N-terminal kinases/stress-activated protein kinases)和p38信号转导通路在此过程中的作用。方法根据不同渗透压及时间段处理髓核细胞将实验分为对照组、刺激组和阻断组后采用流式细胞仪检测各组髓核细胞凋亡情况,同时利用免疫荧光和Western blot技术检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38mitogen-activated protein kinases,P-p38MAPK)、磷酸化JNK/SAPK激酶(phospho-JNK/SAPK,P-JNK/SAPK)的亚细胞定位及表达水平,观察其对髓核细胞凋亡的影响。结果高渗透压[600mOsm/kg H2O(mOsm)]可导致髓核细胞显著凋亡及P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK蛋白表达水平改变。600mOsm时各刺激组凋亡细胞与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P<0.01),而阻断组凋亡细胞明显减少;而400mOsm时各刺激组和阻断组凋亡细胞与对照组相比差异均无统计学意义;免疫荧光结果显示P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK在髓核细胞质和细胞核中均有表达;经高渗透压(600mOsm)刺激后P-p38MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著高于对照组(P<0.01),而相应阻断组P-p38MAPK和P-JNK/SAPK表达均显著降低。结论高渗透压通过激活JNK/SAPK和p38信号转导通路导致体外培养的兔髓核细胞凋亡,同时髓核细胞对轻度的渗透压升高具有一定的适应性。

JNK/SAPK和p38MAPK途径在CCL21/CCR7趋化类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞过程中的作用

目的通过对JNK/SAPK和p38MAPK信号转导通路在外周血淋巴细胞迁移过程中作用的研究,探讨类风湿关节炎(RA)的发病机制。方法选择20例RA患者,均符合1987年美国风湿病学会推荐的RA分类标准;正常对照20名,为健康体检者。分离出外周血淋巴细胞,应用Western-blot方法检测JNK/SAPK和p38MAPK的表达。结果 RA患者外周血淋巴细胞内p-JNK和p-p38MAPK的表达均高于正常对照组(P<0.05);加入CCL21作用后,正常对照者和RA患者的淋巴细胞表达p-JNK和p-p38MAPK均比CCL21作用前明显增加,且RA患者与正常对照者相比增加更多;而加入抗CCR7抗体后,p-JNK和p-p38MAPK的表达均明显下降(P<0.01)。结论 CCL21/CCR7作为胞外信号分子能够通过激活外周血淋巴细胞的JNK和p38MAPK通路,介导淋巴细胞的迁移,在RA患者淋巴细胞向炎症部位聚集的过程中发挥重要作用,也为控制RA病情的发生发展开辟了新的思路。

JNK/SAPK信号转导通路在镉引起的Hormesis中的作用

目的研究重金属镉对Hek293细胞的低剂量兴奋效应及JNK/SAPK信号转导通路在其中所起的作用。方法以0,1.0,3.0,9.0,27.0μmol/L浓度的氯化镉(CdCl2)染毒Hek293细胞24和36 h;在研究JNK/SAPK信号转导通路特异性抑制剂作用时,在染毒前先用SP600125预处理1 h。用MTT法测定细胞的增殖。用Western Blot方法检测磷酸化JNK/SAPK蛋白水平的变化。结果1.0μmol/L剂量的CdCl2染毒Hek293细胞24和36 h,其增殖率与对照组相比分别升高了9.96%和33.3%,差异均具有统计学意义,加入SP600125后,与对照组相比增殖率没有明显的升高;而在3.0μmol/L剂量以上染毒浓度时,增殖率随剂量增加而降低。1.0,3.0μmol/L剂量CdCl2作用于Hek293细胞对磷酸化JNK蛋白无明显影响,高于3.0μmol/L剂量时可以使JNK蛋白持续磷酸化激活至少12 h。当加入SP600125后,以上变化趋势不受影响。结论低剂量CdCl2作用于Hek293细胞可以引起Hormesis效应,该效应可以被JNK/SAPK信号转导通路特异性抑制剂SP600125阻断。JNK/SAPK信号转导通路对Hormesis效应的影响可能主要是JNK蛋白下游转录因子的作用。

MNNG对哺乳类细胞JNK/SAPK及p38MAPK作用及其信号源研究(英文)

目的 :研究低浓度烷化剂N -甲基 -N’ -硝基 -N -亚硝基胍 (MNNG)对JNK/SAPK及p38MAPK通路的作用及其信号源。方法 :分别测定完整Vero细胞和脱核Vero细胞的JNK/SAPK及p38MAPK酶活性 ,并比较其结果。结果 :低浓度MNNG在完整Vero细胞和脱核Vero细胞中均抑制JNK/SAPK酶活性 ;在p38MAPK通路中 ,完整Vero细胞表现酶活性升高 ,而脱核Vero细胞该激活作用消失。结论 :低浓度MNNG抑制JNK/SAPK的作用不依赖于核内信号 ,而对p38MAPK的激活作用依赖与于核内信号。

肾小球系膜细胞的JNK/SAPK活性及其对ICAM-1表达的调控研究

目的 检测体外培养的系膜增生性肾小球肾炎 (MSPGN)肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,并探讨其对细胞间粘附分子 1(ICAM- 1)的调控作用。方法 选取 6例正常人和 7例 MSPGN患者的肾组织 ,分别采用免疫沉淀和免疫印迹法检测体外培养的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,RT- PCR检测 ICAM- 1m RNA表达 ,流式细胞仪检测细胞表面 ICAM- 1平均荧光强度。结果 在自发培养条件下 ,与正常对照组相比 ,MSPGN组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK明显增高 (P<0 .0 5 )。在 TNFα诱导下 ,两组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性均有增加 ,但 MSPGN组仍高于正常对照组 (P<0 .0 5 )。经 TNFα诱导后 ,随着 JNK/ SAPK活性增强 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度也均增加 (P<0 .0 5 )。经蛋白激酶抑制剂 DMAP阻断后 ,随着 JNK/ SAPK活性下降 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度亦下降 (P<0 .0 1)。 MSPGN的 JNK/ SAPK活性与 ICAM- 1m RNA表达和ICAM- 1平均荧光强度呈正相关关系 (r=0 .6 94,P<0 .0 1)。结论 MSPGN的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK存在异常活化 ,这种异常活化可能介导了 ICAM- 1的过度表达。

益气除痰方调控JNK/SAPK信号通路干预A549细胞的试验研究

目的:研究益气除痰方含药血清对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及对JNK、p-JNK等表达的影响。方法:采用MTT法检测益气除痰方含药血清对A549细胞增殖的影响,流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染色法)测定细胞凋亡率,Western blotting检测JNK和p-JNK的蛋白表达。结果:MTT结果显示益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的时间-浓度依赖性;流式细胞术结果显示益气除痰方含药血清可诱导A549细胞凋亡;Western blotting结果显示益气除痰方含药血清干预A549细胞后可减少p-JNK的蛋白表达,但对JNK蛋白表达无明显影响。结论:益气除痰方含药血清可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路有关。

P2X7受体激活乳腺癌JNK/SAPK信号通路的研究进展

P2X7受体是ATP门控的离子通道,对二价阳离子有较强的选择性,属于嘌呤受体P2X家族。P2X7受体参与细胞信号转导、细胞因子的分泌等多种生理功能。近年研究发现P2X7受体通过增加氧化磷酸化及细胞内ATP的储备,介导细胞的存活与生长。在乳腺癌中P2X7受体表达异常,并能激活JNK/SAPK途径,诱导乳腺癌细胞凋亡。本文综述了P2X7受体与乳腺癌发生发展分子机制的相关研究。

Caspase和JNK/SAPK、p38 MAPK与细胞凋亡

Caspase酶系作为细胞凋亡的中枢效应器,在细胞凋亡的启动及进程中发挥着极为重要的作用。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是真核生物信号传递网络中的重要途径之一,其中JNK/SAPK和p38 MAPK信号转导通路在炎症与细胞凋亡等应激反应中发挥重要作用。本文主要综述了Caspase和JNK/SAPK、p38 MAPK在细胞凋亡中的关系,并对其可能的作用机制进行简要的阐述。

丙型肝炎病毒核心蛋白与JNK/SAPK信号转导通路

丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白是一种多功能的病毒核衣壳蛋白,对细胞信号转导途径具有明显作用,从而影响相关的靶基因。JNK/SAPK信号转导通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生与发展中起着至关重要的作用,是正常与疾病状态时细胞的一个重要调节靶点。

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱发的vero细胞JNK/SAPK通路的激活

目的和方法 :为了研究DNA损伤剂N -甲基 -N -硝基 -N -亚硝基胍 (MNNG)诱发vero细胞非定标性突变发生的信号转导机制 ,我们观察了MNNG诱发vero细胞c -JunNH2 -terminalkinase/stressactivatedproteinkinase(JNK/SAPK)通路激活的情况 :分别用Western印迹法和固相激酶活性测定法检测JNK1磷酸化和JNKs激酶活性。结果 :发现用 0 2 μmol/LMNNG和 1mg/L放线菌素酮 (CHM )分别处理vero细胞 2 5h和 1h后 ,都引起细胞抽提液中磷酸化JNK1的比例明显增高。同时通过测定JNKs的底物c -Jun的磷酸化程度 ,发现这两种处理也都可引起JNKs激酶活性显著增高 (分别增高 6 7和 3 0倍 )。结论 :证明 0 2 μmol/LMNNG和 1mg/LCHM分别处理vero细胞 2 5h和 1h都可引起vero细胞内JNK/SAPK通路被激活。

PSMA对JNK/SAPK通路的激活及对前列腺癌细胞凋亡的调控

目的:探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)是否通过c-Jun氨基末端激酶/应激激活的蛋白激酶(JNK/SAPK)通路对前列腺癌细胞凋亡进行调控。方法:利用前期研究中建立的高效阻断PSMA表达的shRNA慢病毒载体,阻断前列腺癌细胞中PSMA的表达作为实验的干扰组;同时利用构建的PSMA载体转染前列腺癌细胞,促进前列腺癌细胞中PSMA的表达作为阳性实验组;不做任何处理的细胞株作为空白组;加入JNK/SAPK抑制剂SP600125作为阴性对照。Western blotting及免疫细胞化学方法观察各组细胞p-JNK/SAPK的表达量,CCK-8法检测细胞生长情况、流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果:Western blotting及细胞免疫化学提示抑制PSMA表达后,p-JNK/SAPK表达水平下降;增强PSMA表达后p-JNK/SAPK表达水平上升;在SP600125作用下,3组细胞p-JNK/SAPK均处于较低水平,且彼此无明显差异。CCK-8法和流式细胞术检测细胞周期提示PSMA表达受抑制后细胞增殖能力下降,细胞S期百分比减少;增加PSMA表达,细胞增殖能力增强,S期百分比增加;在SP600125作用下,3组细胞增殖和S期百分比均处于低水平,无明显差异。在抑制PSMA表达组中,前列腺癌细胞的凋亡率明显升高;而在增强PSMA表达组,细胞凋亡率明显降低;加入SP600125后,细胞凋亡率均低于常规培养组。结论:PSMA通过上调JNK/SAPK信号通路对前列腺癌细胞的增殖、细胞周期及凋亡产生影响,但JNK/SAPK并不是唯一通路。

高糖腹透液通过神经酰胺经JNK/SAPK通路介导腹膜间皮细胞凋亡

目的观察葡萄糖腹膜透析液(peritoneal dialysis solution,PDS)对人腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelium cells,PMCs)凋亡的影响,探讨神经酰胺在高糖PDS诱导的PMCs凋亡中的作用机制。方法 PMCs分别在正常对照、1.5%PDS、4.25%PDS条件下培养,以4.25%甘露醇作为高渗对照。高压液相串联质谱法(LC/MS/MS)检测细胞内神经酰胺的变化,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot检测p-JNK、p-c-Jun、Bax、Bcl-2蛋白水平。结果 PDS呈浓度、时间依赖性上调PMCs细胞内神经酰胺,正常对照组、高渗对照组细胞内神经酰胺无明显变化;相比1.5%PDS组,4.25%PDS可诱导PMCs细胞凋亡,促进JNK及其下游c-Jun磷酸化,而酸性鞘磷脂酶抑制剂地昔帕明可显著抑制高糖PDS的此类作用;JNK阻断剂SP600125可明显抑制高糖PDS诱导的JNK和c-Jun活化、进而抑制Bax的上调和Bcl-2的下调。结论细胞内神经酰胺增加可能经JNK/SAPK通路参与高糖PDS诱导的PMCs凋亡。

KGF对IEC-6的辐射防护作用与抑制JNK/SAPK的激活研究

目的利用离体培养肠上皮细胞(IEC-6)观察角质细胞生长因子(KGF)的辐射防护作用,并从c-Jun氨基末端激酶(JNK)/应激活化蛋白激酶(SAPK)细胞信号传导途径的变化来探讨其作用的分子机制。方法离体培养IEC-6分别经过KGF不同处理,接受剂量率为0.589Gy/min,^(60)Coγ射线一次性照射,进行细胞增殖活性、蛋白磷酸激酶活性和JNK/SAPK蛋白磷酸检测。结果 KGF(10ng/mL)预处理IEC-6 24h可显著地降低细胞辐射敏感性,增高辐射抗性;KGFl预处理抑制辐射诱导JNK/SAPK(thr183/thr185)磷酸化激活。结论抑制JNK/SAPK分子的激活是KGF对小肠上皮辐射防护作用重要环节。

27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡

目的:实验以MDA-MB-231为研究对象,观察27-O-(E)-香豆酰基-乌索酸(DY-17)诱导细胞凋亡作用。方法:采用MTT检测12,24,36,48,60,72 h细胞增殖活性。采用荧光染色技术检测DY-17诱导凋亡实验。运用流式细胞仪测定MDAMB-231的凋亡坏死率。采用Western blotting检测对照组、EGF组、EGF+DY-17 40μmol·L-1组、EGF+SP600125组的JNK,磷酸化JNK,Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达变化。结果:DY-17抑制MDA-MB-231细胞增殖呈剂量和作用依赖性。流式细胞仪检测DY-17(20,40μmol·L-1)诱导MDA-MB-231细胞凋亡坏死率分别为31.86%,49.91%,荧光显微镜下DY-17(20,40μmol·L-1)与对照组比较细胞发生凋亡坏死明显增加。与对照组比较,EGF组磷酸化JNK蛋白表达上调;与EGF组比较,EGF+DY-17组磷酸化JNK蛋白表达下调。与EGF组比较,EGF+DY-17组Bax,剪切PARP和剪切caspase-3蛋白表达均上调。结论:DY-17通过调控JNK/SAPK通路诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞凋亡。

JNK/SAPK信号传递途径与细胞应激反应

c-JunNH_2-末端激酶(JNK)又称为应激活化蛋白激酶(SAPK),是有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员之一。大量研究证实,JNK/SAPK信号传递途径在细胞应激反应中起重要作用。JNK/SAPK信号传递途径的激活促进细胞凋亡发生,其机制与诱导FasL表达、调控凋亡相关基因差异表达和改变细胞内Ca^(2+)环境与激活caspases家族有关;在某些情况下,JNK/SAPK信号传递途径的激活并不导致细胞凋亡,相反还可能与细胞增殖有关。JNK/SAPK信号传递途径在细胞应激反应中的作用表现出复杂性和多样性。

SAPK/JNK信号通路在脑梗死后神经元凋亡中的作用

目的:观察脑梗死后SAPK/JNK及Bcl-2/Bax信号途径中关键蛋白质的变化,以探寻各种病理因素引发神经元凋亡的分子机制。方法:SD大鼠36只随机分为脑梗死组和假手术组。光化学法制作大脑皮层局灶缺血梗死模型,称作光血栓皮层损伤(PCI)。7 d后取梗死灶同侧的大脑皮层行电镜检查,以Western blotting分析p-JNK1、p-JNK2、p-c-Jun、p-ATF-2、total JNK1、total JNK2、Bcl-2和Bax等关键蛋白的水平变化。结果:光化学法可以成功复制大脑皮层局灶缺血梗死模型。在PCI后7 d,脑梗死组可见到神经元细胞凋亡和广泛的细胞器病变,p-JNK-1、p-JNK-2以及其下游的p-c-Jun、p-ATF-2的水平较假手术组显著升高,Bcl-2/Bax的比值显著降低(P<0.05)。结论:脑梗死发生后在较长的一段时间内都存在着以神经元凋亡为表现形式的迟发性神经细胞死亡,而这一过程可能与缺血缺氧性损伤激活了SAPK/JNK信号通路,及调节凋亡相关蛋白(如Bcl-2/Bax)等机制有关。