小黄鱼jnk1和jnk2基因克隆及响应高温应激的表达特征分析

JNKs(c-Jun氨基末端激酶)具有调节细胞凋亡的功能,可对多种细胞外信号刺激产生反应。为研究高温对小黄鱼(Larimichthys polyactis)肝脏细胞凋亡的调控机制,对细胞凋亡相关基因jnk进行研究。以NCBI中大黄鱼(Larimichthys crocea)jnk1和jnk2的CDS序列作为参照,克隆获得小黄鱼这两个基因的CDS序列。通过生物信息学分析,发现小黄鱼jnk1 ORF(开放阅读框)序列共1155 bp,编码384个氨基酸;jnk2 ORF序列共1263 bp,编码420个氨基酸。通过对结构域进行预测,发现jnk1与jnk2均有一个保守的STKc结构域和一个双磷酸化TPY催化位点。序列比对和系统进化结果分析表明,小黄鱼jnk1与jnk2均与大黄鱼亲缘关系较为接近。利用三级结构分析,发现jnk1与jnk2结构均比较保守。利用实时荧光定量方法检测jnk1与jnk2在组织中的分布情况,结果表明小黄鱼jnk1与jnk2在脑中的表达量最高。进一步分析jnk1与jnk2在高温处理不同时间的小黄鱼肝脏中的表达模式,发现随着高温处理时间的增加,jnk1表达量未发生显著变化;而jnk2在水温达到32℃时,其表达量即显著高于对照组,随着高温处理时间的增加,基因表达量逐渐下降,说明jnk2在高温胁迫过程中发挥了重要的调节作用。研究结果为探究小黄鱼肝脏响应高温胁迫及细胞凋亡的分子机制提供了分析基础。

五味甘露药浴散加减方对佐剂型关节炎大鼠血清RF和滑膜组织JNK1的影响

观察五味甘露药浴散加减方对佐剂型关节炎大鼠的疗效及对大鼠血清RF和踝关节滑膜组织JNK1的的影响.采用弗氏完全佐剂关节炎(Adjuvant Arthritis Rats,AA)大鼠模型,用大鼠致炎侧足跖肿胀率评价五味甘露药浴散加减方对AA大鼠的治疗效果,ELISA法测定血清中RF的水平,免疫组化法测定踝关节滑膜组织蛋白激酶JNK1的表达.实验结果表明,与模型组比较,给药四周,五味甘露药浴散加减方高剂量能有效减少致炎侧足跖肿胀率(P<0.05);给药两周和四周,五味甘露药浴散加减方高剂量能明显降低血清中RF的水平(P<0.05).五味甘露药浴散加减方各剂量均能显著降低踝关节滑膜组织JNK1的表达(P<0.05或P<0.01).五味甘露药浴散加减方能有效的减小佐剂性关节炎大鼠致炎侧足跖肿胀率,其作用机制可能与其降低血清中RF的水平和滑膜组织JNK1的表达有关.

金鱼JNK1基因的克隆及表达研究

JNKs(c-Jun N-terminal kinases)是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中的成员,参与应急反应和动物体轴的构建.利用Smart RACE技术首次分离和克隆了金鱼JNK1基因,其cDNA全长2 016 bp,其中阅读框1 115 bp,编码385个氨基酸.对JNK1基因序列进行了同源性分析,结果显示其在脊椎动物较为保守.RT-PCR检测结果显示JNK1基因在金鱼成体组织中的表达存在显著差异,尤其在肝脏中表达量最高,精巢组织中的表达量最低;在不同发育时期的胚胎中,其表达模式为"低-高-低-高-低"的波浪形.研究表明,JNK1基因在鱼类胚胎发育和组织器官形成及发育过程中具有重要作用.

RAGE-MKK4/MKK7-JNK1通路在2型糖尿病合并肝细胞癌中的作用

目的探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)、丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)及c-Jun氨基末端蛋白激酶1(JNK1)在2型糖尿病合并肝细胞癌中的表达及意义。方法收集肝胆外科手术切除的2型糖尿病合并肝细胞癌(DMHC组)癌组织和相应癌旁组织标本18例及30例肝细胞癌(HCC组)癌组织和相应癌旁组织,用Western blot法检测其RAGE、MKK4、MKK7及JNK1的蛋白表达情况。结果 (1)DMHC及HCC组癌组织中RAGE、MKK7及JNK1蛋白表达均较相应癌旁组织高,MKK4蛋白表达水平均较相应癌旁组织表达低,差异均有统计学意义(P<0.01)。DMHC组癌组织中MKK7和JNK1蛋白表达高于HCC组癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)HCC组低分化的癌组织RAGE、MKK7和JNK1蛋白表达水平均较高分化的癌组织高,而DMHC组低分化的癌组织MKK7和JNK1蛋白表达水平较高分化的癌组织表达高,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)DMHC组发生转移的患者癌组织MKK4蛋白表达水平较未发生转移者降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)DMHC及HCC组癌组织RAGE与MKK7、RAGE与JNK1、MKK7与JNK1蛋白表达水平均呈显著正相关关系(P<0.05),且DMHC组的相关性更显著。结论 RAGE蛋白表达增加可能参与了肝细胞癌的发生和发展;MKK4降低可能是单纯肝细胞癌及2型糖尿病合并肝细胞癌的危险因素之一;糖尿病状态下MKK7、JNK1蛋白更高的表达可能促进了2型糖尿病时肝细胞癌的发生和发展,MKK4降低可能导致了肝癌细胞的转移。MKK7和JNK1可能在一定水平上受RAGE的调控。

乌芪通络胶囊对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节JNK1/2和p38MAPK蛋白表达的影响

目的:研究乌芪通络胶囊对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节中JNK1/2和p38MAPK蛋白表达的影响,从氧化应激的角度探讨乌芪通络胶囊治疗糖尿病周围神经病变的机制。方法:实验用雄性SD大鼠80只,随机选择14只为正常对照组,其余66只用来造模。后者经腹腔注射链脲佐菌素(STZ),成功造模51只。将造模成功的大鼠随机分为模型组、弥可保组及乌芪通络胶囊组,每组17只。弥可保组和乌芪通络胶囊组连续给药8周,对照组和模型组正常饮食8周,将8周后的四组大鼠处死,取背根神经的L4/L5神经节,提取总蛋白,采用Western杂交的方法检测背根神经节中JNK1/2和p38MAPK蛋白的表达水平。结果:模型组JNK1/2和p38MAPK蛋白的表达比正常组显著增高(P<0.05)。乌芪通络胶囊组和弥可保组JNK1/2和p38MAPK蛋白表达较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乌芪通络胶囊可降低大鼠背根神经节中的JNK1/2和p38MAPK蛋白的表达,这可能是乌芪通络胶囊从氧化应激方面治疗和缓解糖尿病周围神经病变各种症状的机制之一。

氯沙坦对心肌成纤维细胞基质金属蛋白酶-2、JNK1/2表达及增殖活性的影响(英文)

目的:研究氯沙坦通过影响高血压大鼠心肌成纤维细胞间质成分抑制心室重构的药理机制。方法:培养心肌成纤维细胞,免疫细胞化学法鉴定细胞,MTT法测氯沙坦和AngⅡ对细胞增殖活性影响的量效关系,Western Blotting测AngⅡ刺激成纤维细胞心肌JNK1/2、磷酸化JNK1/2表达的时效关系。根据实验所得AngⅡ刺激心肌成纤维细胞增殖活性作用的EC50值、氯沙坦抑制心肌成纤维细胞活性作用的IC50值和AngⅡ刺激JNK1/2表达的最佳时间,心肌成纤维细胞分为无血清DMEM组、AngⅡ100 nmol/L组、AngⅡ100 nmol/L+losartan 100 nmol/L组、losartan 100 nmol/L组,药物干预后分别收集各组蛋白质、培养上清液,Western blotting检测各组MMP-2、JNK1/2、磷酸化JNK1/2蛋白表达,ELISA检测分泌至培养上清液中MMP-2的量。结果:AngⅡ刺激心肌成纤维细胞增殖活性作用的EC50为53 nmol/L,氯沙坦抑制心肌成纤维细胞增殖活性作用的EC50为56.3 nmol/L。JNK1/2蛋白表达在AngⅡ刺激2 min达高峰,随后表达逐渐降低。AngⅡ增加JNK1/2表达,氯沙坦降低AngⅡ刺激导致的JNK1/2表达。AngⅡ组MMP-2蛋白表达较无血清DMEM组明显增高,氯沙坦降低AngⅡ刺激增高的MMP-2表达。AngⅡ组MMP-2分泌较无血清DMEM组增高,氯沙坦减少AngⅡ刺激所致MMP-2分泌增高。结论:氯沙坦防治高血压引起的心室重构,可能与其对抗AngⅡ刺激心肌成纤维细胞增殖活性、MMP-2合成、分泌有关,信号通路涉及JNK1/2。

JNK1在2型糖尿病大鼠股动脉纤维病变中的表达及中药桃仁干预研究

[目的]观察2型糖尿病大鼠下肢股动脉血管中c-Jun氨基末端激酶(JNK1)的表达及中药桃仁的干预作用。[方法]雄性SD大鼠50只,随机分组为:空白对照组、模型对照组、早期干预组、桃仁高剂量组、桃仁低剂量组各10只;造模成功后,实验组予药物连续干预3周,取材进行实验检测,观察各项指标表达情况。[结果] 1)模型组JNK1的表达较空白对照组明显升高;2)中药桃仁可有效降低JNK1表达,可明显改善糖尿病大鼠股动脉病变情况,减缓纤维化进程,以早期干预组效果最为明显,桃仁高剂量组效果良好,桃仁低剂量组效果欠佳。[结论] 1)糖尿病股动脉病变可能与JNK1的表达、JNK1磷酸化及JNK1基因的表达相关;2)中药桃仁对糖尿病股动脉病变有明显改善作用,可有效预防并抑制股动脉病变的发展进程。

基于JNK1/AQP5通路研究杞参方颗粒对高渗诱导的角膜上皮细胞的效应机制

目的:基于JNK1/AQP5通路观察杞参方颗粒对高渗诱导的角膜上皮细胞(HCECs)保护作用,阐明其治疗干眼的作用机制。方法:通过500mOsm/L浓度渗透压作用于HCECs制造干眼细胞模型。空白组:正常条件培养的角膜上皮细胞;模型组:模型细胞加入10%空白血清;西药组:模型细胞加入0.3%玻璃酸钠滴眼液;杞参方高剂量组:模型细胞加入15%杞参方高剂量含药血清;杞参方中剂量组:模型细胞加入15%杞参方中剂量含药血清:杞参方低剂量组:模型细胞加入15%杞参方低剂量含药血清。CCK-8法检测不同药物干预对HCECs存活率的影响;ELISA法检测各组细胞外液炎性因子TNF-α、IL-6的表达;免疫细胞化学法检测各组HCECs凋亡因子caspase-1与AQP5的蛋白表达变化;Western blotting法检测各组HCECs的JNK1、p-JNK1、AQP5表达情况。结果:与空白组相比,各组HCECs存活率均显著减少(均P<0.01),各组细胞外液炎症因子TNF-α、IL-6及HCECs中caspase-1、p-JNK1、AQP5蛋白表达水平均显著增高(均P<0.01);与模型组相比,各用药组HCECs存活率均显著增加(均P<0.01),各用药组的细胞外液中TNF-α、IL-6及HCECs中AQP5、p-JNK1蛋白表达水平及西药组及杞参方高中剂量组caspase-1、AQP5蛋白表达均减少(均P<0.05);与西药组相比,杞参方高剂量组HCECs存活率显著增加(P<0.01),杞参方各剂量组的TNF-α、IL-6表达水平均减少(均P<0.05),杞参方高剂量组caspase-1及杞参方高、中剂量组的AQP5蛋白表达水平减少(均P<0.05)。Western blotting法检测HCECs的JNK1蛋白表达各组比较无差异(P>0.05)。结论:杞参方颗粒可降低高渗诱导HCECs的JNK1的磷酸化和AQP5的蛋白表达,降低细胞外液炎症因子TNF-α、IL-6和HCECs凋亡因子caspase-1的表达,最终有效抑制炎症反应和细胞凋亡。

干预DAG-PKC信号转导通路对糖尿病大鼠心肌细胞JNK1和IRS1基因表达的影响

目的干预二酰甘油-蛋白激酶C(DAG-PKC)信号转导通路后观察JNK1、IRS1等在糖尿病大鼠心肌中的表达情况。方法采用HE染色,masson染色、电镜观察大鼠心肌的病理变化,应用免疫组化、Real-Time PCR检测PKCβ2、JNK1及IRS1在大鼠心肌的表达情况。结果糖尿病模型组PKCβ2、JNK1、p-JNK、IRS1表达明显高于对照组,干预DAG-PKC信号转导通路后明显下调其表达水平。结论 DAG-PKC通路可能是通过G蛋白受体和胰岛素受体途径的共同信号点JNK1影响下游的信号传导而导致糖尿病心肌病的发生发展,DAG-PKC-JNK1-IRS1-Akt/PKB-mTOR-p70S6K1等一系列信号位点可能是DAG-PKC信号转导通路引起糖尿病心肌病可能的潜在途径。

JNK1基因在金鱼性腺不同发育时期的表达分析

为探明JNK1(c-Jun N-terminal kinase 1)在鱼类性腺发育过程中的相关性,以模式动物金鱼为实验对象,采用实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)技术检测JNK1基因及其蛋白在金鱼精巢和卵巢不同发育时期的表达水平。结果表明:金鱼雄鱼和雌鱼的性腺指数(GSI)显示性腺在发育过程中呈明显的季节变化规律,其中在性腺成熟期GSI最高(P<0.05)。q PCR检测结果显示JNK1在卵巢发育时期的表达量表现为先升高后降低的趋势,其在卵巢成熟期的表达量最高(P<0.05),为成熟前期、退化吸收期和修整恢复期表达量的4.0、1.4和2.1倍;JNK1在精巢不同发育时期的表达量总体呈现出微量变化的趋势;在精巢成熟前期表达最低,成熟期、退化吸收期和修整恢复期表达量较成熟期有微量升高,且精巢发育全过程中的表达变化均无显著性差异。Western blotting检测结果显示其蛋白水平表达模式与mRNA的表达水平吻合。研究表明,JNK1在一定程度上与鱼类卵巢发育相关,可能在促进卵细胞的成熟方面具有重要作用。

利拉鲁肽对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织中胰岛素JNK1信号通路的影响

目的探究利拉鲁肽对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏组织中胰岛素JNK1信号通路的影响。方法选取40只6周龄SPF级大鼠,采用高脂饮食喂养12周建立NAFLD大鼠模型。将NAFLD大鼠随机分为空白对照组(control)、模型组(model)、低剂量利拉鲁肽组(low lira)和高剂量利拉鲁肽组(high lira)。利拉鲁肽干预18 d后,测量大鼠体质量及肝指数变化;全自动生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和血清胰岛素(FINS)变化;酶联免疫吸附法测定大鼠肝组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MAD)及游离脂肪酸(FFAs)含量; Western blot检测大鼠肝脏组织中胰岛素受体(IR)、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、C-Jun氨基端激酶1(JNK1)及磷酸化C-Jun氨基端激酶1(p-JNK1)表达情况; HE染色观察大鼠肝脏组织病理学变化。结果与对照组相比,模型组大鼠体质量,肝指数,血清ALT、TG、TC、FINS、TNF-α、MAD、FFAs含量,p-IRS1、JNK1、p-JNK1蛋白表达量显著升高,SOD含量显著降低,差异有统计学意义(P <0. 01);血清FBG含量和IR蛋白表达量无显著变化(P> 0. 05);相比模型组,利拉鲁肽组大鼠体质量,肝指数,血清ALT、TG、TC、FINS、TNF-α、MAD、FFAs含量,p-IRS1、JNK1、p-JNK1蛋白表达量显著降低,且高剂量组显著低于低剂量组(P <0. 01); SOD含量显著升高,且高剂量组显著高于低剂量组(P <0. 01);血清FBG含量和IR蛋白表达量无显著变化(P> 0. 05)。结论利拉鲁肽可以缓解大鼠脂肪肝的发展,其作用机制可能与抑制JNK1信号通路及JNK1磷酸化相关,且在一定范围内呈浓度依赖性。

Egb761对大鼠局灶脑缺血/再灌注诱导JNK1/2活化的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血/再灌注后丝裂原活化蛋白激酶家族中JNK1/2(c-Jun氨基末端激酶1/2)的活化情况以及银杏叶提取物Egb761对其影响。方法雄性成年SD大鼠随机分成3组(n=5):假手术组、生理盐水对照组和Egb761组。分别于缺血前6天每天用生理盐水4 m l和Egb761 150 mg/kg(Egb761用4 m l生理盐水溶解)灌胃。采用线栓法致大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,在脑缺血再灌注后处死大鼠,对缺血侧海马进行免疫印迹法检测JNK1/2磷酸化水平。结果局灶脑缺血/再灌注可以诱导JNK1/2激活,30 m in达第1个高峰,3天达第2个高峰;Egb761可显著抑制脑缺血再灌注后JNK1/2的激活(P<0.05),JNK1/2的蛋白表达量在以上不同处理条件下没有明显变化。结论局灶性脑缺血再灌注可诱导缺血侧海马JNK1/2活化,Egb761干预可使缺血侧海马JNK1/2活化受到抑制,减轻缺血侧海马的损伤。

苦参碱对荷4T1小鼠乳腺癌肿瘤模型JNK1/AP-1信号通路的影响

目的:探讨苦参碱对荷4T1小鼠乳腺癌肿瘤模型c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活子蛋白-1(AP-1)信号通路的影响。方法:选取SPF级健康雌性BALB/c小鼠72只,随机分为对照组12只及造模组60只。造模组采用小鼠4T1乳腺癌细胞悬液右侧腋窝处皮下注射建立乳腺癌模型,对照组予以生理盐水右侧腋窝处皮下注射。模型建立后,模型组及对照组腹腔注射无菌生理盐水10 mL·kg-1,1次/d;环磷酰胺组腹腔注射2.5 mg·mL-1的环磷酰胺溶液10 mL·kg-1,1次/d;苦参碱低、中、高浓度组分别腹腔注射3.5、5.0、7.5 mg·mL-1的苦参碱溶液10mL·kg-1,1次/d。各组小鼠均给药10 d。检测比较各组肿瘤质量、抑瘤率、肿瘤组织细胞凋亡数目、肿瘤组织p53、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)及JNK1 mRNA、AP-1 mRNA表达水平。结果:与模型组比较,各组小鼠抑瘤率较高,肿瘤组织细胞凋亡数目均较高,肿瘤组织Bax蛋白及JNK1 mRNA、AP-1 mRNA表达水平较高,且苦参碱低浓度组<苦参碱中浓度组<苦参碱高浓度组和环磷酰胺组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,各组小鼠肿瘤质量较低,肿瘤组织p53蛋白表达水平较低,且苦参碱低浓度组>苦参碱中浓度组>苦参碱高浓度组和环磷酰胺组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱能明显抑制荷4T1小鼠乳腺癌肿瘤模型肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,且药物浓度越高作用效果越明显,其作用可能与激活JNK1/AP-1信号通路,调控p53、Bax等凋亡相关蛋白表达有关。

JNK1基因沉默对肺成纤维细胞增殖的影响

目的研究C-Jun氨基末端激酶1(JNK1)基因表达沉默对肺成纤维细胞MRC-5增殖的影响。方法设计针对JNK1基因的小RNA分子(siRNA),以脂质体转染法将双链siRNA转入MRC-5细胞后,采用流式细胞术检测最佳转染浓度,RT-PCR检测JNK1 mRNA表达变化,Western blot检测总JNK、磷酸化JNK(P-JNK)蛋白表达,用CCK-8法检测siRNA对MRC-5细胞增殖的影响。结果 siRNA转染MRC-5细胞的最佳浓度为50nmol/L;设计的两个靶位点siRNA,均可有效降低JNK1 mRNA表达,其中siRNA1抑制效果较siRNA2明显;siRNA1降低总JNK及P-JNK蛋白表达,有效抑制MRC-5细胞的增殖。结论 体外合成的siRNA可降低MRC-5细胞中JNK1基因的表达,降低JNK磷酸化水平,明显抑制细胞增殖。

miR-33-5p靶向调控JNK1/c-Jun通路降低口腔鳞状细胞癌多重耐药性

目的探讨miR-33-5p调控c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)通路对人口腔鳞状细胞癌多重耐药性的影响。方法 CAL-27细胞分为CAL-27组、CAL-27/CBP组、CAL-27/CBP+scramble inhibitor组、CAL-27/CBP+miR-33-5p inhibitor组,卡铂(CBP)诱导耐药细胞株,根据组别转染scramble inhibitor或miR-33-5p inhibitor,MTT检测细胞的多重耐药性,RT-PCR检测miR-33-5p的表达,荧光素酶报告实验检测miR-33-5p和JNK1靶向作用,Western blot检测JNK1/c-Jun通路的激活以及MDR1的表达,流式细胞术检测Rh123聚集结果。结果与CAL-27组比较,CAL-27/CBP的多重耐药性提高(P<0.01),miR-33-5p表达水平升高(P<0.01),JNK1/c-Jun通路活化水平降低(P<0.01),Rh123阳性细胞百分比降低(P<0.01),MDR1蛋白水平升高(P<0.01),同时荧光素酶报告实验结果显示miR-33-5p靶向作用于JNK1;与CAL-27/CBP组比较,CAL-27/CBP+miR-33-5p inhibitor组细胞的多重耐药性降低(P<0.05),miR-33-5p表达水平降低(P<0.01),JNK1/c-Jun通路活化水平升高(P<0.01),Rh123阳性细胞百分比升高(P<0.01),MDR1蛋白水平降低(P<0.01)。结论 miR-33-5p通过靶向调控JNK1/c-Jun通路降低CAL-27/CBP耐药细胞株的多重耐药性。

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364表达JNK1蛋白的影响

目的探讨雷公藤多甙(Tripterygium Glycosides,TG)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364JNK1的影响,进一步阐明雷公藤多甙治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法运用Western-blot检测不同浓度的雷公藤多甙(0、5、10、20mg/L)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364JNK1蛋白的表达。结果雷公藤多甙明显地抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达。结论雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达,可能是其治疗类风湿性关节炎的重要作用机制之一。

肠道病毒71型激活人横纹肌肉瘤细胞中JNK1/2信号转导通路

目的探讨c-Jun N端激酶(JNK)信号转导通路在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法台盼蓝染色法检测不同浓度抑制剂SP600125对人横纹肌肉瘤细胞(RD)活性的影响;实时荧光定量PCR及western blot检测EV71感染RD细胞后VP1 mRNA及蛋白质的表达水平;western blot检测JNK1/2、c-Fos、c-Jun蛋白及其磷酸化水平,并分析JNK1/2抑制剂SP600125对EV71复制及JNK1/2信号通路的影响。结果台盼蓝染色结果表明,与空白对照组比较,5和10μmol/L实验组存活率差异无统计学意义(P均>0.05),而20μmol/L抑制剂组细胞存活率明显降低(P<0.05);实时荧光定量PCR及western blot结果表明,与对照组相比,实验组在EV71感染RD细胞8 h后,其VP1 mRNA及蛋白质的表达水平均明显下降(P均<0.01)。此外,western blot检测结果证实EV71感染RD细胞后,其JNK1/2、c-Fos和c-Jun的蛋白质磷酸化水平均明显升高(P均<0.05)。而经抑制剂SP600125处理可明显下调其JNK1/2、c-Fos、c-Jun磷酸化水平(P均<0.05)。结论 JNK1/2信号通路可被EV71感染有效激活,并与EV71复制有关。

肝细胞性肝癌组织中Galectin-7、JNK1的表达及相互关系

目的探讨半乳糖凝集素-7(Galectin-7,Gal-7)和JNK1在肝细胞性肝癌癌组织中的表达及其相互关系。方法石蜡包埋切片SP免疫组织化学法测定和分析上述指标的变化。结果 1Gal-7、JNK1在42例肝细胞性肝癌组织中的阳性表达率分别为66.7%、73.8%,其评分值分别为(2.83±2.16)、(2.79±1.89),在正常肝组织中阳性率分别为6.3%和12.5%,其评分值分别为(0.71±1.02)和(0.68±1.35)。肝细胞性肝癌组织中的Gal-7和JNK1表达阳性数及其评分明显高于正常肝组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。2癌组织中Gal-7和JNK1的表达水平与肝细胞性肝癌患者的年龄、性别(P>0.05),而与肿瘤病理类型、组织学分级、邻近脏器有无浸润、附近淋巴结有无转移密切相关(P<0.05)。3肝细胞性肝癌组织中的Gal-7与JNK1表达呈明显正相关(P<0.05)。结论 Gal-7、JNK1的表达特征与肝细胞性肝癌发生发展、生物学行为及其预后有密切关系。

磷酸化-JNK1/2在高温处理后的鼠胚心脏的表达变化

目的探讨p-JNK1/2高温处理后金黄地鼠胚胎心脏之表达变化。方法将金黄地鼠孕鼠在受孕8d时置42℃水浴20min,在高温处理后12h,24h,36h,48h剖腹取胎,制备为石蜡切片。利用免疫荧光染色技术,观察心脏正常发育与异常分化过程中磷酸化JNK(p-JNK)的表达。结果 高温处理后12h,24h,36h,48h,实验组鼠胚心脏p-JNK1/2的表达较对照组均减弱,其中36h和48h两个时间点差异显著。结论 高温可致金黄地鼠胚胎心脏磷酸化JNK1/2(p-JNK1/2)表达减低,p-JNK1/2对心脏正常发育具有重要作用。

香鱼(Plecoglossus altivelis)JNK1基因克隆及其在成熟卵过熟进程中的表达变化

c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNKs)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)蛋白超家族成员之一,参与细胞骨架构建、细胞凋亡等多种细胞活动。本研究克隆了香鱼(Plecoglossus altivelis)JNK1基因cDNA序列,并检测了其成熟卵在排入体腔保存不同时间(0-96h)的过熟过程中JNK1基因的表达变化。结果显示,香鱼JNK1基因cDNA序列全长1670bp,含一个长度1155bp的开放读码框,编码384个氨基酸,预测蛋白分子质量约44.2kDa、理论等电点6.61。氨基酸序列多重比对显示硬骨鱼类中JNK1氨基酸序列高度保守,香鱼与黄鳝的JNK1序列相似性最高(97.6%)。系统进化树分析显示各种脊椎动物的JNK1、JNK2、JNK3分别聚为一簇;本研究获得的香鱼JNK1位于JNK1大簇中并与黄鳝JNK1优先相聚,表明二者进化关系较近。RT-PCR检测结果显示健康香鱼JNK1基因在脑和性腺中高表达,肝和鳃中无表达。实时荧光定量PCR检测显示香鱼成熟卵JNK1基因的表达变化与卵的受精率、孵化率随保存时间延长而降低之间存在相关性:成熟卵随保存时间的延长JNK1表达量逐渐升高、在48h时达到峰值(24h、48h时的表达量分别为0h时的1.49倍和2.55倍),在此期间卵有较高的受精率和孵化率(48h时分别为88.99%和67.32%);保存时间继续延长时卵内JNK1基因都处于高表达水平,72h和96h时的表达量分别为0h时的2.32倍和1.53倍,而卵的质量也在保存超过48h后急剧下降(72h时受精率和孵化率分别为50.2%和25.54%)直至基本失去受精、孵化能力(96h时受精率和孵化率分别为10.83%和0.54%)。综上,香鱼JNK1基因表达上调与香鱼成熟卵的过熟凋亡过程密切相关,为深入研究香鱼JNK1基因的功能及卵过熟机制提供了基础资料。