小黄鱼jnk1和jnk2基因克隆及响应高温应激的表达特征分析

JNKs(c-Jun氨基末端激酶)具有调节细胞凋亡的功能,可对多种细胞外信号刺激产生反应。为研究高温对小黄鱼(Larimichthys polyactis)肝脏细胞凋亡的调控机制,对细胞凋亡相关基因jnk进行研究。以NCBI中大黄鱼(Larimichthys crocea)jnk1和jnk2的CDS序列作为参照,克隆获得小黄鱼这两个基因的CDS序列。通过生物信息学分析,发现小黄鱼jnk1 ORF(开放阅读框)序列共1155 bp,编码384个氨基酸;jnk2 ORF序列共1263 bp,编码420个氨基酸。通过对结构域进行预测,发现jnk1与jnk2均有一个保守的STKc结构域和一个双磷酸化TPY催化位点。序列比对和系统进化结果分析表明,小黄鱼jnk1与jnk2均与大黄鱼亲缘关系较为接近。利用三级结构分析,发现jnk1与jnk2结构均比较保守。利用实时荧光定量方法检测jnk1与jnk2在组织中的分布情况,结果表明小黄鱼jnk1与jnk2在脑中的表达量最高。进一步分析jnk1与jnk2在高温处理不同时间的小黄鱼肝脏中的表达模式,发现随着高温处理时间的增加,jnk1表达量未发生显著变化;而jnk2在水温达到32℃时,其表达量即显著高于对照组,随着高温处理时间的增加,基因表达量逐渐下降,说明jnk2在高温胁迫过程中发挥了重要的调节作用。研究结果为探究小黄鱼肝脏响应高温胁迫及细胞凋亡的分子机制提供了分析基础。

锦灯笼调控PPAR/JNK2通路防治药物性肝损伤的作用机制探讨

目的基于PPAR/JNK2通路探讨锦灯笼防治药物性肝损伤(DILI)的作用机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为5组:正常组、模型组、水飞蓟宾组(44.1 mg·kg^(-1))及锦灯笼高(6.67 g·kg^(-1))、低(1.67 g·kg^(-1))剂量组。采用对乙酰氨基酚(APAP,1000 mg·kg^(-1))溶液灌胃复制DILI大鼠模型,同时给予相应药物灌胃,每日1次,连续30 d。检测大鼠血清生化指标:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX);HE染色法观察肝组织病理变化;免疫组化法检测肝组织巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)的表达情况;免疫荧光检测肝组织巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)的表达情况;Western Blot法检测肝组织c-Jun氨基末端激酶2(JNK2)、磷酸化氨基末端激酶2(p-JNK2)蛋白表达情况;qRT-PCR法检测肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和JNK2的基因表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠血清ALT、AST、DBIL及TBIL水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),TNF-α、IL-6及IFN-γ水平均显著升高(P<0.01);血清MDA水平显著升高(P<0.01),GSH、GSH-PX水平显著降低(P<0.01);大鼠肝组织的肝小叶结构被严重破坏,肝细胞排列紊乱,有明显的炎性细胞浸润,并出现不同程度的坏死和变性;大鼠肝组织MIP-1β蛋白表达量显著升高(P<0.01),MIP-2蛋白阳性表达显著增强(P<0.01),p-JNK2蛋白表达显著上调(P<0.01);大鼠肝组织PPARαmRNA表达显著下调(P<0.01),PPARγ、JNK2 mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组相比,水飞蓟宾组和锦灯笼高、低剂量组大鼠血清ALT、AST、DBIL、TBIL、TNF-α、IL-6及IFN-γ水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);血清MDA水平显著降低(P<0.01),GSH、GSH-PX水平明显升高(P<0.05,P<0.01);肝损伤程度降低,肝细胞排列较为整齐,少有炎性细胞浸润,其中以锦灯笼高剂量组肝组织损伤的改善程度最为明显;大鼠肝组织MIP-1β蛋白表达量明显降低(P<0.05,P<0.01),MIP-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01);锦灯笼高、低剂量组大鼠肝组织PPARαm RNA表达均显著上调(P<0.01),JNK2 mRNA表达显著下调(P<0.01),锦灯笼高剂量组大鼠肝组织p-JNK2蛋白表达明显下调(P<0.05),PPARγmRNA表达明显下调(P<0.05)。各组大鼠肝组织JNK2蛋白表达无明显差异(P>0.05)。结论锦灯笼可能通过调控PPAR/JNK2通路,抑制炎性因子水平,减少趋化因子产生,降低氧化应激反应,从而发挥对APAP诱导DILI大鼠的保护作用。

小鼠脑缺血-再灌注损伤中神经细胞BCL2及p-JNK2的表达

目的探讨小鼠脑缺血-再灌注中BCL2蛋白和JNK2蛋白的表达。方法 6周龄C57小鼠20只,随机分为对照组(n=10)和脑缺血再灌注组(n=10),采用动脉夹反复夹闭双侧的颈总动脉的方法建立脑缺血-再灌注模型。免疫组织化学方法检测BCL2和JNK2蛋白的定位,Western blot检测BCL2、JNK2和p-JNK2(磷酸化JNK2)蛋白的表达情况。结果免疫组织化学可见,BCL2和JNK2蛋白在大脑皮质处表达,定位于细胞核及细胞质。与对照组比较,BCL2蛋白在脑缺血再灌注组阳性表达降低,JNK2和p-JNK2蛋白阳性表达增多(P<0.05)。Western blot检测也发现,脑缺血再灌注组BCL2蛋白的表达较对照组降低,JNK2和pJNK2蛋白的表达增加(P<0.05)。结论小鼠脑缺血-再灌注后,通过BCL2/JNK2信号通路致使大脑皮质细胞凋亡。

JNK2在早期糖尿病小鼠视网膜中的表达及作用

目的探讨JNK2在早期糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠视网膜的表达和作用,为进一步深入探讨糖尿病视网膜病变的发病机制及早期治疗研究提供理论依据。方法 C57BL/6雄性小鼠60只随机分为DM组42只及正常组18只,DM组一次性腹腔注射5g·L-1STZ(150mg·kg-1体质量)诱发DM模型,正常组腹腔注射同体积的0.1mol·L-1柠檬酸钠缓冲液,于造模成功后2周、4周、8周分别处死正常组小鼠各6只,DM组小鼠各14只,取双眼眼球用于实验。其中,左眼提取视网膜用于实时定量RT-PCR,检测JNK2基因的表达变化,右眼行HE染色和TUNEL染色,分别观察视网膜在各时间点的形态学改变及视网膜神经节细胞的凋亡情况。结果正常组2周、4周、8周时JNK2基因表达水平分别为(2.31±0.53)g·L-1、(2.54±0.42)g·L-1、(2.26±0.67)g·L-1,各时间点表达无明显差异(P>0.05);DM组各时间点JNK2基因表达水平分别为(2.34±0.56)g·L-1、(4.51±0.64)g·L-1、(11.43±0.37)g·L-1,表达量随病程的延长而增加(P<0.05)。各时间点神经节细胞凋亡率在正常组分别为(0.77±0.73)%、(0.72±0.38)%、(0.87±0.76)%,差异无统计学意义(P>0.05);在DM组分别为(0.22±0.47)%、(6.87±1.17)%、(21.65±2.95)%,随DM病程延长神经节细胞凋亡率增加(P<0.05)。各时间点每高倍视野视网膜神经节细胞数在正常组小鼠分别为(47.83±3.76)个、(48.17±3.81)个、(47.74±4.16)个,各期表达无明显差异(P>0.05);在DM组分别为(45.96±4.20)个、(34.20±2.25)个、(30.19±3.54)个,神经节细胞的数量随DM病程的延长逐渐减少(P<0.05),且视网膜形态出现组织学改变。结论 JNK2参与了小鼠早期视网膜神经节细胞的凋亡过程,且有促进视网膜神经节细胞凋亡的作用。

JNK2和SHH在食管组织癌变过程中的表达及意义

目的探讨JNK2和SHH在食管组织癌变过程中的表达及意义。方法用免疫组化S-P法检测10例正常食管组织,20例食管鳞状上皮异型增生组织,19例食管早期癌组织中JNK2蛋白和SHH蛋白的表达。结果JNK2和SHH蛋白在早期癌组织的阳性率分别为63.16%、73.68%,在早期癌组织的阳性率明显高于正常食管组织、食管鳞状上皮异型增生组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论JNK2和SHH在食管早期癌组织中高表达,可能成为食管癌早期诊断新的分子标志物和治疗手段。

过表达JNK2增强SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖及抗凋亡能力

目的探讨c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)或JNK2过表达对SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法将JNK1、JNK2分别与p HBAD-EF1-MCS-3FLAG-CMV-GFP载体结合,构建JNK1和JNK2的重组腺病毒表达载体,感染SCL-1细胞,优化感染条件,实时荧光定量PCR和Western blot法鉴定过表达效果。CCK-8法测定SCL-1细胞的增殖活性,细胞克隆形成实验观察细胞集落形成能力,划痕实验检测细胞划痕愈合率;流式细胞术检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测JNK1、JNK2、c-Jun mRNA水平; Western blot法检测磷酸化c-Jun的蛋白水平。结果 JNK1、JNK2过表达腺病毒载体最佳感染条件为感染复数(MOI)=100,感染48 h后,SCL-1细胞的JNK1和JNK2的表达水平显著升高。与对照组相比,过表达JNK1对SCL-1细胞的增殖和抗凋亡能力无显著影响,过表达JNK2的SCL-1细胞增殖和抗凋亡能力明显增强,且磷酸化c-Jun蛋白水平上调。结论过表达JNK2可以增强SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖能力和抗凋亡能力。

牙鲆JNK2基因的表达分析及免疫功能探究

本研究利用实验室已建牙鲆(Paralichthysolivaceus)转录组数据库,得到牙鲆JNK2基因(Po JNK2)并利用PCR技术进行序列验证。PoJNK2的开放阅读框长度为1263 bp,编码420个氨基酸;通过SMART服务器对PoJNK2的结构域进行预测,显示PoJNK2具有典型的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶催化结构域S_TKc。利用q RT-PCR分析PoJNK2在牙鲆成体不同组织中的表达水平,发现其在牙鲆免疫组织中均有表达,因此,初步推测PoJNK2在牙鲆免疫应答方面可能发挥作用。本研究设计了体内迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)侵染实验和体外免疫刺激细胞实验以探究PoJNK2在牙鲆免疫反应中的作用。在迟缓爱德华氏菌体内注射牙鲆成体后,PoJNK2在脾脏、头肾和鳃中有不同程度的表达上调。同时,使用迟缓爱德华氏菌、Poly I:C和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激牙鲆鳃细胞系后,发现PoJNK2在不同时间点表达上调。除此之外,通过细胞转染实验在牙鲆鳃细胞系中过表达PoJNK2,发现其对下游炎症细胞因子的表达及激活蛋白Activator protein-1 (AP-1)的转录活性具有显著的上调作用,进一步阐明了PoJNK2在调节牙鲆免疫应答方面的作用。

miR-20a-5p在结核分枝杆菌感染的人巨噬细胞中负向调控Jnk2基因的表达

目的分析结核分枝杆菌(Mtb)感染的人巨噬细胞中miR-20a-5p对Jnk2基因表达的影响,探究miR-20a-5p基因调控细胞内信号通路的潜在机制。方法用miR-20a-5p、miR-20a-5p抑制剂(miR-20a-5p inhibitor,简写为miR-20a-inh)以及阴性对照(negative control,NC)慢病毒(慢病毒携带绿色荧光蛋白GFP标记)分别转染人巨噬细胞THP-1,流式细胞仪分选出GFP阳性THP-1细胞并用H37Ra感染,实时定量PCR技术(qPCR)检测AKT/JNK信号通路基因Akt1、Akt2、Jnk1、Jnk2的表达。蛋白质印迹法检测H37Ra感染的GFP+THP-1细胞中总Jnk2和p-JNK的蛋白表达水平。结果在miR-20a-5p过表达的THP-1细胞中,Jnk2基因表达水平降低,当miR-20a-5p被抑制时,Jnk2基因表达水平升高。蛋白质印迹法检测蛋白质水平上的p-JNK2(p54)表达趋势与qPCR结果相一致,即与miR-20a-5p表达呈负相关。结论在基因和蛋白表达层面证实结核分枝杆菌感染人巨噬细胞后miR-20a-5p负向调控Jnk2表达。

解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响

目的观察解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠TLR3/TNF-α/JNK2信号通路的影响。方法采用对乙酰氨基酚灌胃制作大鼠肝损伤模型。将实验大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、阳性对照组和解毒护肝方高、中、低剂量组,各给药组给予相应药液灌胃,正常组和模型组给予生理盐水灌胃。生化分析仪检测血清AST、ALT活性和总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)含量;RT-PCR和Western blot分别检测肝组织JNK2基因和蛋白的表达;酶标仪检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;免疫组化染色观察Toll样受体3(TLR3)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠ALT、AST、DBIL、TNF-α水平显著升高(P<0.01),JNK2 mRNA和p-JNK2、TLR3蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,解毒护肝方中、低剂量组大鼠AST、ALT活性显著降低(P<0.05,P<0.01),解毒护肝方低剂量组大鼠DBIL含量显著降低(P<0.05),解毒护肝方高剂量组大鼠TNF-α含量显著降低(P<0.01),解毒护肝方高、中剂量组大鼠JNK mRNA和TLR3蛋白表达均显著下调(P<0.05,P<0.01),p-JNK2蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论解毒护肝方对药物性肝损伤大鼠有明显的保护作用,以中、低剂量组效果最为明显,其机制可能与调控TLR3/TNF-α/JNK2信号通路有关。

幽门螺杆菌CagA通过B-Raf和JNK2调节原癌蛋白CIP2A表达及其细胞生物学作用研究

目的了解幽门螺杆菌CagA上调CIP2A表达的分子机制。方法培养AGS细胞和GES-1细胞,一部分细胞分别转染CagA阳性质粒WT-cagA和阴性对照质粒pcDNA3.1;另一部分细胞用B-Raf和JNK2信号抑制剂作用,然后分别转染质粒WT-cagA和质粒pcDNA3.1,Western blot检测CIP2A表达,细胞克隆形成试验检测细胞增殖能力,细胞迁移试验检测细胞迁移能力结果 AGS细胞和GES-1细胞转染CagA阳性质粒WT-cagA后CIP2A表达量增多;细胞经B-Raf和JNK2的信号抑制剂作用后转染CagA阳性质粒WT-cagA,其CIP2A表达量比仅转染质粒WT-cagA的细胞表达量少,细胞的克隆数减少,细胞迁移能力降低。结论幽门螺杆菌CagA进入细胞通过B-Raf和JNK2及其参与的信号途径调节原癌蛋白CIP2A的表达,进而影响细胞的克隆形成能力和迁移能力。

CD95、JNK1、JNK2和c-Jun在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨CD95和JUK因子在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法采用免疫组化方法检测CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白在58例肝癌组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平。结合肝癌临床病理指标分析相关性。结果 CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白在癌旁肝组织中的阳性表达率为74.1%(43/58)、72.4%(42/58)、67.2%(39/58)、79.3%(46/58),高于在癌组织中的阳性表达率25.9%(15/58)、27.6%(16/58)、32.8%(19/58)20.7%(12/58),差异均具有统计学意义(P<0.05);CD95蛋白的表达与JNK1(r=0.693,P=0.013)、JNK2(r=0.357,P=0.007)和c-Jun(r=0.670,P=0.021)蛋白的表达呈正相关。CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白表达水平和肝癌分化程度呈负相关(分别为r=-0.516,P=0.003;r=-0.364,P=0.006;r=-0.383,P=0.004;r=-0.508,P=0.003)。与性别、年龄、结节数目和有无肝硬化无关(P>0.05)。结论 CD95蛋白肝癌组织中的表达下调,通过下游重要信号传导分子JNK1、JNK2和c-Jun的表达,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制。

GL-V9 reverses adriamycin resistance in hepatocellular carcinoma cells by affecting JNK2-related autophagy

Adriamycin resistance in HCC seriously hinders the treatment of patients,it is necessary to investigate the mechanisms.Autophagy is involved in adriamycin resistance and JNK2 is related to autophagy.However,whether JNK2 inducing drug resistance though autophagy is unknown.GL-V9,a new synthesized flavonoid derivative,has been proved of its anti-tumor effects.The aim of the study is to explore the role of JNK2-related autophagy on adriamycin-induced drug resistance and the effects of GL-V9 on reversing adriamycin resistance.We concluded that JNK2 played an important role in drug resistance induced by adriamycin.The high expression of JNK2 activated protective autophagy in Hep G2-DOXR cells under non-stress condition,which protected cells from drug attacking.Furthermore,we found that GL-V9 reversed adriamycin resistance by blocking the JNK2-related protective autophagy in HCC.

2,6-二取代氨基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶类化合物的设计合成及JNK2抑制活性研究

目的设计合成2,6-二取代氨基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶类目标化合物并进行体外抑制c-Jun氨基末端激酶2(JNK2)活性测试。方法以2,4-二氯-5-硝基吡啶为起始原料,通过两次与胺类化合物的亲核取代并将硝基还原得到中间体,该中间体与不同取代的苯基异硫氰酸酯反应成环得到目标化合物;以迁移率改变法(mobility shift assay)对目标化合物进行抑制JNK2活性实验。结果与结论合成了13个未见文献报道的新化合物,其结构经~1H-NMR、ESI-MS谱确证,纯度经HPLC测定。目标化合物表现出较好的抑制JNK2活性,其中,化合物TY-1和TY-11抑制JNK2活性与先导化合物(CC-930)相当,2,6-二取代氨基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶类目标化合物具有开发为JNK抑制剂的潜力。

JNK/CCl2通路诱导巨噬细胞募集并促进PM(2.5)颗粒物暴露诱导的幼年大鼠过敏性气道炎症

目的:基于JNK/CCl2信号通路诱导的巨噬细胞募集探讨PM(2.5)暴露对幼年大鼠气道炎症的作用及其机制。方法:幼年SD大鼠50只,随机分为5组(n=10),其中对照组不进行任何处理,PM(2.5)组幼年大鼠接受PM(2.5)颗粒物暴露,PM(2.5)+茴香霉素组幼年大鼠接受PM(2.5)暴露以及静脉注射JNK的激活剂茴香霉素,PM(2.5)+SP600125组幼年大鼠接受PM(2.5)暴露以及静脉注射JNK拮抗剂SP600125,PM(2.5)+吡非尼酮组幼年大鼠接受PM(2.5)暴露以及静脉注射CCl2拮抗剂吡非尼酮。安乐死幼年大鼠取肺组织,Western blot法检测JNK、磷酸化的JNK(p-JNK)和CCl2的蛋白表达水平变化,用苏木精-伊红(HE)染色检测肺部气道组织的病理变化并进行肺支气管炎症评分。流式细胞术分析肺泡灌洗液中巨噬细胞含量的变化。ELISA检测各组幼年大鼠的肺泡灌洗液中促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果:各组间JNK、p-JNK、CCl2的表达水平(F=205.296、950.408、260.019;均P<0.001),巨噬细胞含量(F=48.414;P<0.001),肺支气管炎症评分(F=101.703;P<0.001)以及IL-6(H=44.890;P<0.001)、IL-1β(H=42.071;P<0.001)、TNF-α(F=297.154;P<0.001)的水平差异均有统计学意义。与对照组相比,PM(2.5)组JNK/CCl2通路蛋白JNK、p-JNK、CCl2的表达上调(均P<0.05),同时巨噬细胞含量增加(P<0.05),肺支气管炎症评分升高(P<0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α水平上调(均P<0.05)。与PM(2.5)组相比,PM(2.5)+茴香霉素组中巨噬细胞含量均上调(P<0.05),肺支气管炎症评分升高(P<0.05),另外IL-6、IL-1β、TNF-α的水平升高(均P<0.05),且JNK、p-JNK、CCl2的表达水平升高(均P<0.05)。与PM(2.5)组相比,PM(2.5)+SP600125组、PM(2.5)+吡非尼酮组的巨噬细胞含量均下调(P<0.05),且肺支气管炎症评分降低(P<0.05),另外IL-6、IL-1β、TNF-α的水平均下调(均P<0.05)。与PM(2.5)组相比,PM(2.5)+SP600125组的JNK、p-JNK、CCl2的表达水平下调(均P<0.05),PM(2.5)+吡非尼酮组的CCl2的表达水平下调(均P<0.05)。结论:JNK/CCl2通路诱导巨噬细胞募集促进PM(2.5)颗粒物暴露诱导的幼年大鼠过敏性气道炎症。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

JNK激酶在细胞凋亡中的作用及其与癌症的关系

JNK是MAPK蛋白激酶三级激活体系最下游的关键蛋白质,位于多个信号转导通路节点位置,它在细胞的增殖与分化、细胞凋亡等重要的细胞生物过程中发挥着决定性的作用。对癌症等重大疾病的发生、发展起到重要的调控作用。然而,由于JNK激酶3种亚型在不同种类的细胞中对细胞凋亡和肿瘤的发生发展存在较大的差异,使得以JNK为靶点的抗癌药物研发遇到巨大的困难。该文对JNK介导的细胞凋亡信号通路,JNK在细胞凋亡中的调控功能以及JNK 3种亚型对癌细胞的增殖和凋亡作用进行阐述。

神经肽P物质对高氧肺损伤的保护作用调控机制研究

目的观察JNK2信号途径在高氧肺损伤中的表达,探讨神经肽P物质(SP)在高氧肺损伤中的保护作用及机制。方法将16只早产SD大鼠分配给代母鼠并分为4组(每组n=4):空气加9g/L盐水组(A组),空气加SP组(B组)、高氧加9g/L盐水组(C组)、高氧加SP组(D组),B、D组予腹腔注射SP 1×10-6 mol·L-1·kg-1·d-1,A、C组腹腔注射同等体积的9g/L盐水。实验14d后,观察肺组织病理改变;并测定肺湿质量/干质量(W/D)值,肺组织中SP的水平;免疫组织化学观察增殖细胞核抗原(PCNA)表达和原位末端标记法(TUNEL)法观察肺组织细胞凋亡的情况;检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平;用Western blot检测JNK2蛋白水平。结果与A组相比,高氧各组均有不同程度的肺损伤,但D组肺损伤较C组有所减轻。Western blot显示,C组JNK2水平明显高于A组;干预后,D组JNK2水平低于C组。各组肺W/D值、PCNA和TUNEL组织分布表达以及SOD、MDA和GSH的表达与JNK2蛋白水平变化趋势一致。结论高氧应激可激活损伤肺组织JNK2活性;SP对高氧肺损伤保护作用机制可能是通过下调高氧诱导的JNK2的激活以抑制氧化损伤实现的。

氧化槐果碱对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制

目的探究氧化槐果碱(oxysophocarpine,OSC)对大鼠MIRI的保护作用及其作用机制。方法超声心动图仪检测心脏功能指标;HE染色观察心肌组织病变;ELISA法检测心损标记物及血清炎症因子水平;试剂盒检测氧化应激标记物;蛋白质印迹检测相关蛋白表达水平。结果与sham组相比,I/R组大鼠出现明显心肌损伤,心脏功能明显降低,CK-Mb、Mb和cTnI水平显著上调;血清SOD水平明显降低,MDA和LDH水平升高;TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10水平均明显升高,p-ERK1/2和p-JNK表达显著上调。与I/R组相比,OSC处理后明显改善心肌损伤和心肌功能;抑制心肌氧化应激和促炎性因子释放;下调p-ERK1/2和p-JNK表达。结论OSC可改善大鼠I/R导致的心脏功能障碍,并抑制氧化应激和炎症反应,其作用机制与ERK/JNK通路下调有关。

mGluR5特异性激动剂CHPG促进人NSCs增殖

目的:研究代谢型谷氨酶受体mGluR5特异性激动剂CHPG对人胚胎皮质神经干细胞(NSCs)增殖的影响以及分子机制。方法:采用MTT比色法和神经球直径测量分析CHPG对人NSCs增殖的影响;流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用免疫蛋白印迹法,观察磷酸化ERK,JNK和p38 MAPKs表达水平的变化。结果:mGluR5激动剂CHPG促进人胚胎皮质NSCs增殖;CHPG组与对照组相比,S期与G2/M期细胞数量显著增加(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著减少(P<0.05);CHPG组早期凋亡和晚期凋亡细胞显著减少(P<0.05);CHPG组与对照组相比,ERK1/2和JNK2的磷酸化水平显著增高,但是p38 MAPKs的磷酸化水平显著降低(P<0.01)。结论:mGluR5激动剂CHPG促进人胚胎皮质NSCs增殖,同时伴随着ERK和JNK的磷酸化激活。

龙生蛭胶囊中“桃仁-红花-川芎”药组治疗脑卒中网络药理学研究

目的预测龙生蛭胶囊中"桃仁-红花-川芎"药组治疗脑卒中的药效物质基础及作用机制。方法利用中医药整合药理学研究平台V2.0(TCMIP V2.0),将"桃仁-红花-川芎"药组化学信息进行靶标预测,构建与脑卒中相关疾病靶标信息的蛋白互作网络(PPI),采用通路富集分析药组干预疾病的关键靶标,并构建"桃仁-红花-川芎"药组活性成分、关键核心靶标和疾病相关通路的PPI,绘制"中药-活性成分-关键核心靶标-通路"网络图,分析与核心靶标相关的主要成分,并采用分子对接技术对活性成分进行虚拟筛选。结果共预测到活性成分19个,核心网络靶标62个,其中药物靶标27个,疾病靶标35个,疾病与药物共有靶标2个(NR3C1,APP);其药效物质基础主要为生物碱类、挥发油类、黄酮类、有机酸类等成分";桃仁-红花-川芎"药组主要活性物质与细胞外信号调节蛋白激酶2(ERK2)、Janus激酶2(JNK2)形成较好的对接模式与较高的亲和力,具有治疗脑卒中的活性。结论龙生蛭胶囊中"桃仁-红花-川芎"药组通过多成分、多靶点、多通路的形式发挥脑卒中治疗作用,其作用机制可能与调控ERK2和JNK2等核心靶标有关。