CAHB诱导成人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡机制的研究

目的 探讨二乙酰己二胺(diacetyl hexamethylene diamine,CAHB)诱导成人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的机制,为CAHB应用于临床提供理论依据。方法 采用流式细胞仪分析CAHB处理后Jurkat细胞AnnexinⅤ^(+)/PI^(-)细胞率,观察应用胱天蛋白酶(caspase)-9抑制剂Z-LEHD-FMK处理后AnnexinⅤ^(+)/PI^(-)细胞率的变化;蛋白质印迹法观察凋亡相关蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-3的表达变化。结果 CAHB诱导后Jurkat细胞体积缩小、胞膜皱缩、染色质浓染、核固缩或碎裂等,可见典型凋亡小体。CAHB通过激活caspase-9、caspase-3诱导Jurkat细胞发生凋亡,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性,caspase-9抑制剂可在一定程度上抑制CAHB的凋亡诱导作用。结论 CAHB诱导Jurkat细胞凋亡与激活caspase-9及caspase-3有关。

miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制

目的探讨miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制。方法取对数生长期人淋巴瘤Jurkat细胞,分别向培养基中加入5 ml生理盐水配制的浓度为0、0.5、1.0、1.5μg/ml的多柔比星,取健康体检者(对照组)的单个核细胞。采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-106a以及视网膜母细胞瘤1(RB1)、E2F转录因子1(E2F1)、胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA的表达水平,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测RB1、E2F1、caspase 3蛋白的表达水平。结果0μg/ml多柔比星干预人淋巴瘤Jurkat细胞miRNA-106a的表达水平明显高于对照组单个核细胞(P﹤0.01)。随多柔比星浓度升高、作用时间延长,miRNA-106a表达水平逐渐降低,光密度(OD)值逐渐降低,细胞增殖抑制率(IR)和凋亡率均逐渐升高,RB1、caspase 3 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐升高,E2F1 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,miRNA-106a与RB1、caspase 3的表达均呈负相关(P﹤0.01),与E2F1的表达呈正相关(P﹤0.01)。结论miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中高表达,其可能通过调控RB/E2F1通路相关蛋白的表达来调节淋巴瘤进展。

中度寻常性银屑病患者血浆对Jurkat细胞作用的研究

目的:探究中度寻常性银屑病患者血浆微环境对Jurkat细胞炎症因子分泌、增殖及凋亡活性的影响。方法:分别采用中度寻常性银屑病患者(试验组)和正常人(对照组)的血浆培养Jurkat细胞,48 h后采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RTqPCR)检测Jurkat细胞分泌白细胞介素(IL)-8、IL-10、增殖核抗原(Ki-67)、细胞死亡受体1(Fas)、Fas配体(FasL)、胱天蛋白酶(Caspase)-3及Caspase-8的mRNA相对表达水平。结果:RT-qPCR结果显示与对照组相比,试验组Jurkat细胞表达促炎因子IL-8水平增高,抑炎因子IL-10水平降低(P<0.05);Fas、FasL、Caspase-3及Caspase-8表达水平均显著上调(P<0.05);而Ki-67表达差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析显示,试验组中高表达的IL-8水平与胞内Fas(r=0.72,P<0.05)、FasL(r=0.54,P<0.05)、Caspase-3(r=0.62,P<0.05)、Caspase-8(r=0.69,P<0.05)mRNA表达均呈正相关;低表达的IL-10水平与胞内Fas(r=-0.40,P<0.05)、Caspase-3(r=-0.46,P<0.05)、Caspase-8(r=-0.62,P<0.05)mRNA表达均呈负相关。结论:银屑病患者血浆可诱导Jurkat细胞IL-8及IL-10表达异常,并增强Fas/FasL凋亡途径;且IL-8与Fas/FasL凋亡呈正相关,IL-10与Fas/FasL凋亡呈负相关,提示银屑病血浆微环境异常可能是T细胞活性异常的形成机制之一。

徐长卿中的天然产物XCQ-9对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨徐长卿中天然产物XCQ-9抑制人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的作用及可能机制。方法以Jurkat细胞作为白血病细胞模型,采用MTT法测定0(空白对照)、2.5、5、10、20、40μmol/L XCQ-9作用24、48、72 h后对Jurkat细胞增殖的抑制作用。用0(空白对照)、2.5、5、10μmol/L XCQ-9作用于Jurkat细胞24、48 h后,利用流式细胞术分析XCQ-9对细胞周期和细胞凋亡的影响,并通过Western blot实验检测上述药物作用24 h后细胞中胱天蛋白酶9(Caspase-9)、活化的Caspase-9(Cleaved Caspase-9)、Caspase-3、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)、活化的PARP(Cleaved PARP)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)的表达情况。结果与空白对照比较,不同浓度XCQ-9均可显著降低Jurkat细胞的存活率(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性趋势。5、10μmol/L XCQ-9作用48 h后均可显著诱导Jurkat细胞凋亡(P<0.05或P<0.01),将细胞周期阻滞在G2期(P<0.01)。10μmol/L XCQ-9作用24 h后,可显著下调细胞中CDK1、Caspase-9蛋白的表达(P<0.01),上调细胞中Cyclin B1、Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论XCQ-9通过诱导G2期阻滞抑制Jurkat细胞增殖,并激活Caspase通路促进细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤作用。

异藤黄酚对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨异藤黄酚(ISO)对急性淋巴细胞白血病(ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法人ALL Jurkat细胞和人正常肝细胞HL-7702分别培养至对数生长期,0[二甲基亚砜(DMSO)]、10、15、20及25μmol/L ISO处理2种细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞处理后24、48及72 h的光密度(OD)并计算细胞存活率;取对数生长期Jurkat细胞,分别用0(DMSO)、10、15及20μmol/L ISO处理,采用流式细胞术检测各浓度ISO组Jurkat细胞24、48 h的凋亡率,采用Hoechst 33258染色法验证各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的凋亡率,采用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的MMP,采用RNA高通量测序(RNA-seq)分析ISO组Jurkat细胞24 h的细胞内基因转录水平,采用Western blot检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h时凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、剪切的Caspase3(Cleaved-caspase3)、剪切的Caspase9(Cleaved-caspase9)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、细胞色素C(Cytc)、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、重组人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)、截断的Bid(t-Bid)、磷酸化的信号转导和转录激活因子-3(p-STAT3)、Janus激酶2(JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、剪切的PARP(Cleaved-PARP)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38)蛋白的表达。结果MTT检测结果显示,与DMSO组相比,10、15、20及25μmol/L ISO组Jurkat细胞活力下降(P<0.05),且具有时间依赖性;流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞凋亡率升高(P<0.05),且具有时间依赖性;Western blot结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9、Cleaved-PARP、t-Bid、Apaf-1及Cytc的表达上调(P<0.05),p-JAK2、p-STAT3及c-Myc的表达下调(P<0.05);RNAseq分析结果,与DMSO组相比,15μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,299个基因上调、57个基因下调,且主要影响了Jurkat细胞中MAPK及PI3K/Akt等信号途径,进一步细胞实验结果表明,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞中p-p38的表达上调(P<0.05),p-PI3K、p-Akt的表达下调(P<0.05)。结论ISO可抑制Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3/c-Myc、PI3K/Akt信号通路及激活p38 MAPK信号通路有关。

雷公藤红素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

探讨雷公藤红素对人急性髓性白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤红素作用于两种细胞后对其生长增殖、凋亡、周期及形态等方面的影响。结果表明雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半抑制浓度(IC50)分别为(0.46±1.05)μmol/L和(0.88±1.13)μmol/L。以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G1期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。

Jurkat细胞TCR基因重排对BV CDR3的影响

目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCRBVCDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCRBV8家族的单克隆细胞株Jurkat,在增殖传代过程中,以及经刺激诱导48或72h后,未监测到有TCRBV8以外的新的BV亚家族出现,BV8CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCRBVCDR3改变,因而对TCRBVCDR3区抗原识别特异性(即抗原特异性漂移)并未产生影响,但并不排除TCR发生改变的可能性。

薏苡仁诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡及其机制

本研究探讨薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖和凋亡效应及其作用机制。分别用0.4,0.8,1.6mg/ml的薏苡仁油作用Jurkat细胞24小时,用CCK法检测细胞增殖,应用Hoechst33258染色、PI及PI/Annexin V染色后流式细胞仪来检测细胞凋亡,然后采用JC-1染色分析线粒体膜电位。结果表明:0.8和1.6mg/ml的薏苡仁油能显著抑制Jurkat细胞增殖;随着薏苡仁油浓度的增加,凋亡细胞数目增多,线粒体膜电位降低。结论:薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,而且此效应与线粒体膜电位降低有关,本研究结果为临床应用薏苡仁油治疗白血病提供了实验依据。

雷公藤甲素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

为了研究雷公藤甲素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖和凋亡效应,用不同浓度的雷公藤甲素作用于Jurkat细胞,用CCK法检测细胞存活率,选取使细胞增殖抑制率为50%的雷公藤甲素作用于细胞,然后在应用Hoechst 33258染色、DNA电泳、PI以及PI/Annexin V染色后用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果表明:雷公藤甲素抑制Jurkat细胞的生长增殖,半数细胞抑制剂量为4μg/L。4μg/L雷公藤甲素作用于Jurkat细胞12小时后,出现明显的细胞凋亡特征(Hoechest 33258染色显示细胞核呈亮蓝色;DNA断裂产生DNA ladder,细胞凋亡的亚二倍体峰出现,细胞磷脂酰丝氨酸发生转位),细胞凋亡比率明显增加,24小时后细胞凋亡进一步增加。结论:雷公藤甲素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,这为临床应用雷公藤甲素治疗白血病提供了实验依据。

夏枯草提取物作用Jurkat细胞的蛋白质组学研究

目的:研究夏枯草提取物作用于Jurkat细胞后蛋白质组的变化。方法:体外培养Jurkat细胞,用MTT法观察不同浓度夏枯草提取物对细胞的增殖抑制作用。加入20μg/mL夏枯草提取物作用于细胞48 h,提取总蛋白,进行双向电泳测定,凝胶银染显色,用ImageMaster 2D Platium 5.0软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质。切取差异点,胶内酶切后进行MALDI-TOF-MS分析和数据库搜索,实现对蛋白点的定性鉴定。结果:夏枯草提取物可显著抑制Jurkat细胞的生长,且具有一定的量效关系。经双向电泳和质谱后,成功鉴定了11个蛋白质,包括glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、coagulation factor VII、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L、heat shock 70 kDa protein 8 isoform 2、immunoglobulin heavy chain variable region、heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1、heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L(为heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1不同亚型)、zinc finger protein 43、chaperonin containing TCP1、subunit 6A (zeta 1)、isoform CRA-b。结论:夏枯草提取物可显著抑制Jurkat细胞的生长,并引起Jurkat细胞蛋白质组的改变,这可能是夏枯草提取物抗肿瘤作用的机制之一。

浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

目的 :研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的作用及机理。方法 :采用MTT法测定IC50 值及生长曲线 ,流式细胞仪 (FCM )AnnexinⅤFITC/PI法检测细胞凋亡发生率 ,PI染色法检测细胞周期 ,同时用流式细胞汁FCM及Western blot检测Bcl 2蛋白表达。结果 :浙江蝮蛇毒能抑制Jurkat细胞生长 ,且呈剂量依赖关系 ,并能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡 ,4 8h时作用最强 ,此时Bcl 2蛋白表达下降 ,随后此作用减弱 ,低浓度作用下细胞逐渐恢复生长。结论 :浙江蝮蛇毒能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡 ,且呈剂量依赖关系 ,此作用与Bcl

交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究

目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果:DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论:交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。

eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

抗人DR5功能性抗体mDRA-6诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的机制

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)及其死亡受体的功能性单克隆抗体具有杀伤肿瘤细胞的活性。我们研制了抗人死亡受体5(death receptor,DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6),本研究对其诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase分子机制进行初步探讨。方法:mDRA-6作用后,琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测细胞存活情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况;观察Caspase-10、-9、-8、-3等的抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspase-10、-9、-8、-3,多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、BH3相关结构域死亡激动剂(BH3interactingdomain death agonist,Bid)、短缩的Bid(truncated Bid,tBid)、细胞色素C(cytochrome c,Cyto C)等活化裂解的情况。结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的诱导凋亡作用且呈量-效关系。2.0μg/mL mDRA-6作用Jurkat细胞0.25h、0.5h、1h、2h,其凋亡率分别为16.2%、28.3%、69.2%、78.2%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA-6诱导的细胞凋亡,抑制率为77.9%,Caspase-3和Caspase-9抑制剂作用的抑制率分别为54.2%、8.7%,而Caspase-10的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、-3、-9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,PARP的降解片段亦增加,Bid激活降解为tbid,Cyto C大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现。结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是通过激活Caspase路径和线粒体路径来完成的。

As_2O_3对Jurkat细胞株hdpr1基因去甲基化作用机制的研究

本研究探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株hdpr1抑癌基因去甲基化的影响及其作用机制。采用CCK8法检测As2O3对Jurkat细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测As2O3作用前后细胞周期的变化,甲基化特异性PCR(MSP)检测As2O3对hdpr1基因甲基化模式的影响,用半定量RT-PCR检测As2O3对hdpr1基因、DNA甲基转移酶基因dnmt1、dnmt3a、dnmt3b mRNA表达水平的影响。结果表明:As2O3可明显抑制Jurkat细胞的增殖并呈时间-浓度依赖性;As2O3阻滞Jurkat细胞周期于G0/G1期(p<0.05),呈浓度依赖性;As2O3能够逆转Jurkat细胞株hdpr1基因的高甲基化并诱导其mRNA重新表达,同时下调dnmt1、dnmt3a、dnmt3b mRNA的表达水平,亦呈浓度依赖性。结论:As2O3抑制Jurkat细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,其机制可能为下调dnmt1、dnmt3a、dnmt3b基因的表达,诱导Jurkat细胞中异常甲基化的hdpr1基因去甲基化并使其恢复表达。

夏枯草提取物对Jurkat细胞凋亡的影响

目的:探讨夏枯草提取物对人T淋巴瘤白血病Jurkat细胞株凋亡的影响及其机制。方法:取对数生长期Jurkat细胞配制成2.0×105个mL-1密度的单细胞悬液,接种到96孔板,培养24h,加入不同质量浓度的夏枯草提取物,以生理盐水处理为空白对照,继续培养48h,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定夏枯草提取物对Jur-kat细胞的生长抑制作用;琼脂糖凝胶电泳法观察Jurkat细胞凋亡;用免疫细胞化学法检测夏枯草提取物对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。结果:夏枯草提取物对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,半数抑制率(IC50)为(53.59±3.10)mg/L;琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯形凋亡条带。免疫细胞化学显示:与空白对照相比,夏枯草提取物处理组Bcl-2蛋白表达减弱((12.31±1.21)%vs(40.76±1.64)%),而Bax蛋白表达增强((18.14±0.39)%vs(4.77±0.16)%)。结论:夏枯草提取物可以抑制Jurkat细胞增殖和诱导Jurkat细胞凋亡,且这一作用可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调Bax蛋白表达有关。

乌索酸诱导Jurkat细胞凋亡及其机制的初步研究

本研究旨在探讨乌索酸(ursolic acid,UA)对Jurkat细胞的诱导凋亡作用及其分子机制,为UA应用于血液系统恶性肿瘤治疗提供理论依据。培养Jurkat细胞,用Water Solubility Tetrazolium-8(WST-8)法检测不同浓度UA对Jurkat细胞的细胞毒作用,观察caspase-9抑制剂对UA细胞毒作用的抑制情况;分别收集20、40μmol/L UA处理2小时和4小时的Jurkat细胞,用Annexin/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;收集不同浓度UA作用不同时间的Jurkat对数生长期细胞,提取蛋白,用Western blot分析caspase-9和-3及细胞色素C活化、Akt磷酸化情况。结果表明:UA能明显降低Jurkat细胞的生存率,能够诱导Jurkat细胞凋亡,caspase-9抑制剂能够抑制UA的细胞毒作用。在UA诱导Jurkat细胞凋亡过程中,caspase-9、caspase-3和细胞色素C被活化,Akt磷酸化受到抑制。结论:UA对Jurkat细胞具有明显的细胞毒作用,并能诱导其凋亡;UA诱导Jurkat细胞凋亡是通过线粒体途径实现的,其机制可能与抑制细胞生存因子Akt磷酸化过程相关。

姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡时MAPKs及MMPs家族的表达

目的：探讨姜黄素体外诱导人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞凋亡时MAPKs及MMPs家族成员的表达，揭示其可能的分子机制。方法以不同浓度姜黄素作用Jurkat细胞不同时间，MTT检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞周期变化，Western-blot检测MAPKs家族成员的表达，明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMPs的活性。结果姜黄素呈时间-剂量依赖性抑制Jurkat细胞增殖，使细胞阻滞于G0/G1期。以6.25、12.50及25.00μmol/L姜黄素分别处理Jurkat细胞，胞内JNK和P-JNK的表达均呈浓度依赖性上升（P〈0.01），而ERK1/2及P38 MAPK的表达与阴性对照组相比无明显改变。另细胞培养上清中MMP-2及MMP-9的活性在各药物处理组中也基本不变。结论姜黄素在（6.25~25.00）μmol/L浓度范围时，可体外诱导Jurkat细胞的凋亡，阻滞细胞于G0/G1期。其分子机制可能与激活MAPKs家族中的JNk信号通路有关，而与MMPs家族成员的活性无关。

eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用实时PCR法和Western blot法分别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达。构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、AnnexinⅤ-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P<0.01,P<0.05);构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达。与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

IL-2和IL-15刺激脐血NK细胞对K562/Jurkat细胞的杀伤活性研究

本研究旨在探讨脐血(cord blood,CB)NK细胞的杀伤功能及细胞因子IL-2和IL-15对NK细胞杀伤K562/Jurkat细胞活性的影响。采用autoMACS及CD3阴选后CD56阳选两步免疫磁珠分选法从脐血单个核细胞纯化NK细胞,分选后NK细胞用流式细胞仪测定纯度,通过IL-2及IL-2和IL-15两种细胞因子组合培养3天,用LDH释放法检测培养前后脐血NK细胞对白血病细胞株K562和Jurkat的细胞毒活性(效靶比10∶1),并记录不同细胞因子培养体系条件下NK细胞的生长状况。结果表明,CB-MNC中CD3-CD56+细胞含量为(14.88±9.2)%,分选后CD3-CD56+细胞含量为(92.39±0.8)%;培养3天后,IL-2组NK细胞形成集落数为148.60±13.0,IL-2复合IL-15组NK细胞形成集落数为831.80±23.0,两者比较,有显著性差异;以K562为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK的杀伤活性为(27.76±8.8)%,IL-2组杀伤活性为(61.9±9.1)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(87.62±3.7)%,差别有统计学意义;以Jurkat为靶细胞时,新鲜纯化CB-NK细胞的杀伤活性为(29.32±2.5)%,IL-2组杀伤活性为(69.43±4.4)%,IL-2复合IL-15组杀伤活性为(92.95±3.2)%,差别有统计学意义。结论:脐血新鲜纯化NK细胞对K562、Jurkat细胞有一定的杀伤作用,但自发细胞毒活性较低,IL-2/IL-15刺激后杀伤活性显著提高,IL-15复合IL-2对促进脐血NK细胞的生长和提高其细胞毒活性明显优于单用IL-2。