lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤及凋亡。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-132-5p表达减轻了MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤,抑制了细胞凋亡。

Role of oncogenic long noncoding RNA KCNQ1OT1 in colon cancer

The role of lncRNA KCNQ1 opposite strand/antisense transcript 1(KCNQ1OT1)in colon cancer involves various tumorigenic processes and has been studed widely.However,the mechanism by which it promotes colon cancer remains unclear.Retrovirnl vector pSEB61 was retroftted in established HCT116 siKCN and SW480-siKCN cells to silence KCNQ1 OT1.Cellular proliferation was measured using CCK8 assay,and flow cytometry(FCM)detected cell cydle changes.RNA sequencing(RNA Seq)analysis showed differentially expressed genes(DEGs).Gene ontology(GO)and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)pathway enrichment analyses were carried out to analyze enriched functions and signaling pathways.RT-qPCR,immunofluorescence,and western blotting were carried out to validate downstream gene expressions.The effects of tumorigenesis were evaluated in BALB/c nude mice by tumor xenografts.Our data revealed that the silencing of KONQ1OT1 in HCT116 and SW480 cells slowed cell growth and decreased the number of cells in the G2/M phase.RNA-Seq analysis showed the data of DEGs enriched in various GO and KEGG pathways such as DNA replication and cell cyde.RT qPCR,immunofluorescence,and western blotting confirmed downstream CCNE2 and PCNA gene expressions.HCT116 siKCN cells signifcantly suppressed tumorigenesis in BALB/c nude mice.Our study suggests that lncRNA KCNQ1OT1 may provide a promising therapeutic strategy for colon cancer.

LncRNA KCNQ1OT1在急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义

目的:探讨LncRNA KCNQ1OT1在急性髓系白血病(AML)患者中的表达,分析其与临床预后的相关性。方法:收集68例AML患者,其中48例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者和20例达到完全缓解(complete response,CR)的AML患者及30例性别年龄相匹配的缺铁性贫血患者(作为对照组)的外周血液标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA KCNQ1OT1的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:LncRNA KCNQ1OT1在AML患者中的表达较完全缓解者及缺铁性贫血患者均明显增高(F=14.67,P<0.001),而LncRNA KCNQ1OT1在20例AML-CR组患者与30例对照组患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA KCNQ1OT1的表达与患者的NCCN风险分级及生存状态相关;高表达LncRNA KCNQ1OT1患者的中位总生存时间较低表达者明显缩短(P<0.05)。结论:LncRNA KCNQ1OT1参与调节AML的发生和发展,可作为AML患者潜在的预后标志物和治疗靶点。

糖尿病肾病患者血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p与白蛋白尿短期进展及预后的关系

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清长链非编码RNA KCNQ1反向链/反义转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)、微小核糖核酸-192-5p(miR-192-5p)与白蛋白尿短期进展及预后的关系。方法选取2021年4月—2022年12月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院内分泌风湿免疫科收治的DN患者102例为观察组,根据2次检测(间隔6个月)24 h尿白蛋白及SCr水平分为未进展亚组(n=78)和进展亚组(n=24),根据随访1年预后情况分为预后良好亚组(n=84)和预后不良亚组(n=18),选择同期医院健康体检者58例为健康对照组。采用qRT-PCR检测血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p相对表达量;Pearson法分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p的相关性;多因素Logistic回归分析患者白蛋白尿短期进展的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA KCNQ1OT1,miR-192-5p对患者预后的预测价值。结果与健康对照组比较,观察组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=17.619/<0.001、16.120/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.698/<0.001、9.485/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组患高血压比例降低及FPG、HbA_(1c)、BUN、SCr升高,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=9.835/0.002,t/P=2.593/0.011、2.356/0.020、4.582/<0.001、3.139/0.002);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.602/<0.001,9.380/<0.001);LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p呈负相关(r/P=-0.452/<0.001);高血压、血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高为患者白蛋白尿短期进展的危险因素[OR(95%CI)=1.532(1.058~2.219)、1.638(1.100~2.438)],miR-192-5p水平升高为患者白蛋白尿短期进展的保护因素[OR(95%CI)=0.671(0.517~0.871)];LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p以及二者联合预测患者预后的AUC分别为0.808、0.822、0.896,联合预测显著优于各自单独预测(Z/P=2.030/0.042、2.116/0.034)。结论DN患者血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低,两者均为DN患者发生白蛋白尿短期进展的影响因素,且对患者预后具有一定辅助预测价值。

长链非编码RNA Kcnq1ot1对小鼠糖尿病心肌病的作用

目的研究长链非编码RNA Kcnq1ot1在糖尿病心肌病中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠分为对照组和糖尿病(DM)组,注射链脲佐菌素建立DM模型后喂养8周建立糖尿病心肌病模型。DM组小鼠注射慢病毒干扰Kcnq1ot1表达。qRT-PCR检测小鼠左心室Kcnq1ot1表达。超声心动图、HE和Masson染色评价小鼠左心室结构和功能,Western blot检测collagenⅠ、Ⅲ和TGF-β1/Smads通路表达水平。免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测左心室NLRP3、caspase-1、IL-1β和GSDMD-N表达。结果与对照组相比,Kcnq1ot1在DM小鼠左心室中明显升高,注射Kcnq1ot1-shRNA慢病毒后被抑制。DM组小鼠心脏收缩和舒张功能明显下降,出现心肌细胞肥大及纤维化;干扰Kcnq1ot1后DM小鼠心脏功能和结构明显改善。此外,干扰Kcnq1ot1后胶原表达下调,TGF-β1/Smads通路被抑制,焦亡相关分子表达下调。结论LncRNA Kcnq1ot1在糖尿病心肌病小鼠中表达升高,干扰Kcnq1ot1能够通过抑制心肌焦亡,抑制TGF-β1/Smads通路,减轻糖尿病心肌间质纤维化,改善心脏结构和功能。

糖尿病肾病患者外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与氧化应激水平及TGF-β1/p38MAPK通路的关系

目的探讨分析糖尿病肾病(DN)患者外周血长链非编码RNA(LncRNA)、电压门控钾通道亚家族Q1重叠转录物(KCNQ1OT)1表达与氧化应激水平及转化生长因子(TGF)-β1/p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)通路的关系。方法选择2型糖尿病患者162例,其中2型糖尿病合并DN患者75例作为DN组,其余单纯2型糖尿病患者87例作为DM组;选择同期医院健康体检人员80例作为对照组。采用qRT-PCR检测3组受试者外周血LncRNA KCNQ1OT1、TGF-β1、P38MAPK、半胱天冬酶(Caspase)-3 mRNA相对表达及血清氧化应激指标,分析LncRNA KCNQ1OT1表达与TGF-β1/p38MAPK通路及氧化应激指标相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA KCNQ1OT1对DN诊断价值。结果糖尿病患者外周血LncRNA KCNQ1OT1相对表达量显著高于对照组(P<0.05),其中DN组外周血LncRNA KCNQ1OT1相对表达量显著高于DM组(P<0.05)。糖尿病患者外周血TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05),其中DN组外周血TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA相对表达量显著高于DM组(P<0.05)。糖尿病患者血清丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)显著高于对照组(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)显著低于对照组(P<0.05),其中DN组血清MDA、ROS显著高于DM组(P<0.05),DN组血清SOD显著低于DM组(P<0.05)。DN患者外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA、MDA、ROS呈显著正相关关系(P<0.05),外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与SOD呈显著负相关关系(P<0.05)。采用ROC曲线分析2型糖尿病患者中LncRNA KCNQ1OT1对DN的诊断价值,ROC曲线下面积为0.875。结论DN患者可出现外周血LncRNA KCNQ1OT1异常表达,且其表达情况与患者氧化应激水平及TGF-β1/p38MAPK信号转导通路激活有关,LncRNA KCNQ1OT1对DN具有良好的诊断价值。

LncRNA KCNQ1OT1在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(Lnc RNA KCNQ1OT1)在卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法实时荧光定量PCR法检测卵巢癌组织、癌旁组织及细胞中Lnc RNA KCNQ1OT1表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后的关系。通过转染si RNA下调Lnc RNA KCNQ1OT1的表达,检测细胞增殖和侵袭能力的变化。结果卵巢癌组织及细胞株中Lnc RNA KCNQ1OT1的表达水平显著高于正常卵巢上皮细胞及正常卵巢组织。高表达Lnc RNA KCNQ1OT1的患者的总生存期(P<0.001)和无进展生存时间(P<0.001)较低表达者缩短。Lnc RNA KCNQ1OT1的表达与FIGO分期、肿瘤分级和远处转移相关。下调Lnc RNA KCNQ1OT1的表达能够明显抑制细胞的增殖和侵袭。结论 Lnc RNA KCNQ1OT1参与了调节卵巢癌的发生、发展,可能作为卵巢癌患者预后的一个潜在生物标志物和治疗靶点。

lnc-KCNQ1OT1在胃癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA-KCNQ1OT1(lnc-KCNQ1OT1)在胃癌组织和细胞中的表达及临床意义。方法:收集2010年1月1日至2011年12月31日期间在哈尔滨医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的163例胃癌患者的临床资料,选取组织和细胞通过RT-PCR法检测lnc-KCNQ1OT1的表达情况,根据其表达情况及临床病例数据分析lnc-KCNQ1OT1在胃癌组织和细胞中的临床意义。结果:与癌旁组织比较,lnc-KCNQ1OT1在胃癌组织中的表达水平明显增高(P <0. 05)。在胃癌细胞株HGC-27、MGC-803中,lncKCNQ1OT1表达水平较胃永生化上皮细胞株GES-1明显升高(P <0. 05)。单因素分析显示lnc-KCNQ1OT1的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小无关(P> 0. 05),与淋巴结转移(P <0. 001)明显相关。K-M生存分析显示胃癌患者中lnc-KCNQ1OT1高表达者预后不良(P <0. 05)。结论:在胃癌组织和细胞中lncKCNQ1OT1的表达量高,其高表达与胃癌患者淋巴结转移相关,并可导致胃癌患者预后不良。lnc-KCNQ1OT1可作为潜在的胃癌预后预测的分子标志物。

LncRNA KCNQ1OT1通过调控miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制。方法于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达。以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系。结果喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)]。喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)]。与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)%比(3.79±2.37)%]。KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达。敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为。

LncRNA KCNQ1OT1降表达对顺铂耐药卵巢癌细胞耐药性的影响及其作用机制

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1OT1降表达对顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞耐药性的影响并分析其作用机制。方法选用SKOV-3人卵巢癌细胞,经DDP反复间歇冲击诱导法构建DDP耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP;以不同浓度DDP作用SKOV3、SKOV3/DDP细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况得到50%细胞生长的药物浓度(IC50)并计算SKOV3/DDP细胞耐药指数(RI);采用qRT-PCR法检测SKOV-3、SKOV3/DDP细胞中的KCNQ1OT1。将SKOV3/DDP细胞分为三组,KCNQ1OT1降表达组和转染对照组中分别转染KCNQ1OT1 siRNA、NC-siRNA 48 h,对照组不转染,采用qRT-PCR法检测KCNQ1OT1观察转染效果;以不同浓度DDP作用各组细胞,以CCK-8法检测细胞增殖情况得到IC50并计算RI观察耐药性变化;取转染后的三组细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,Western blotting法检测细胞p-AKT、p-mTOR蛋白。结果DDP对SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞IC50分别为1.224、4.920μg/mL,SKOV-3/DDP细胞RI为4.020。与SKOV-3细胞比较,SKOV-3/DDP细胞KCNQ1OT1表达量增高(P<0.05)。KCNQ1OT1降表达组细胞中KCNQ1OT1表达量均低于转染对照组及对照组(P均<0.05),转染对照组与对照组间差异无统计学意义。随DDP浓度增加,各组细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05);在相同DDP浓度下,KCNQ1OT1降表达组细胞增殖抑制率均高于转染对照组和对照组(P均<0.05)。DDP对KCNQ1OT1降表达组细胞IC50为3.613μg/mL,RI为0.734;DDP对转染对照组、对照组细胞IC50分别为9.737、8.461μg/mL,RI分别为1.979、1.720。与转染对照组和对照组比较,KCNQ1OT1降表达组G0/G1期细胞比例、p-mTOR蛋白表达量升高,S期和G2/M期细胞比例、p-AKT蛋白表达量降低(P均<0.05);转染对照组与对照组各期细胞比例及p-AKT、p-mTOR蛋白表达量差异均无统计学意义。结论干扰KCNQ1OT1表达可有效逆转卵巢癌细胞对DDP的耐药,其机制可能与阻滞耐药细胞于G0/G1期并调控AKT/mTOR信号通路活性有关。

lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-129-5p调控帕金森病细胞模型炎症和细胞凋亡的实验研究

目的 探讨lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-129-5p调控帕金森病(PD)细胞模型炎症和细胞凋亡的机制。方法 体外培养人SK-N-SH细胞,用1、2、4 mmol/L MPP+处理SK-N-SH构建PD细胞损伤模型。将si-NC、si-lncRNA KCNQ1OT1、miR-NC、miR-129-5p、si-lncRNA KCNQ1OT1与anti-miR-NC、si-lncRNA KCNQ1OT1与anti-miR-129-5p分别转染至MPP+处理SK-N-SH构建PD细胞中,记为si-NC+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+MPP+组、miR-NC+MPP+组、miR-129-5p+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-NC+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-129-5p+MPP+组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞TNF-α、IL-6、IFN-γ水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞lncRNA KCNQ1OT1和miR-129-5p表达情况;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-129-5p的靶向关系。结果 与NC组比较,1、2、4 mmol/L MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P <0.05)。与NC组比较,1、2、4 mmol/L MPP+组细胞lncRNA KCNQ1OT1表达,其水平明显较高,而miR-129-5p表达,明显更低(P <0.05)。与si-NC+MPP+组比较,si-lncRNA KCNQ1OT1+MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著降低(P <0.05)。与miR-NC+MPP+组比较,miR-129-5p+MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著降低(P <0.05)。si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-129-5p+MPP+细胞凋亡、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P <0.05)。结论 lncRNA KCNQ1OT1下调miR-129-5p表达抑制PD细胞模型炎症和细胞凋亡。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖诱导的人视网膜上皮细胞增殖与凋亡

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖(HG)诱导的人视网膜上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡与氧化应激情况。方法:运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测5、15、45、135mmol/L HG刺激的ARPE-19的细胞存活率。将ARPE-19细胞分为NC组、45mmol/L HG组、si-NC+45mmol/L HG组、si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、miR-NC+45mmol/L HG组、miR-19a-3p mimics+45mmol/L HG组、si-con+45mmol/L HG组、si-TSHZ3+45mmol/LHG组、pcDNA+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、pcDNA-TSHZ3+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组。运用CCK-8检测细胞存活率,qRT-PCR检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-19a-3p和TSHZ3 mRNA表达,Western Blot检测TSHZ3、活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)蛋白质的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平。双荧光素酶活性检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-19a-3p、miR-19a-3p和TSHZ3之间的靶向结合。结果:15、45、135mmol/L HG抑制ARPE-19细胞的存活率,后续选择细胞存活率约50%的HG浓度45mmol/L。45mmol/L HG提高ARPE-19细胞中lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3 mRNA、TSHZ3蛋白表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平,降低miR-19a-3p表达水平、细胞存活率(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3低表达或miR-19a-3p高表达提高HG诱导的ARPE-19细胞的存活率,降低凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p靶向TSHZ3,lncRNA KCNQ1OT13通过miR-19a-3p调控TSHZ3的表达。lncRNA KCNQ1OT1低表达对HG诱导的ARPE-19细胞存活率、凋亡以及氧化应激的影响被TSHZ3过表达所逆转。结论:lncRNA KCNQ1OT13低表达通过miR-19a-3p/TSHZ3,促进HG诱导的ARPE-19,并抑制其凋亡和氧化应激。

lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-486-5p调控舌鳞癌CAL-27细胞的增殖和凋亡

目的探讨lncRNA KCNQ1OT1对舌鳞癌CAL-27细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法选取我院30例舌鳞癌患者的癌组织及癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测KCNQ1OT1和miR-486-5p的表达水平;CAL-27细胞分为si-NC组、si-KCNQ1OT1组、pcDNA组、pcDNA-KCNQ1OT1组、miR-NC组、miR-486-5p组、si-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组、si-KCNQ1OT1+anti-miR-486-5p组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验和RIP实验检测KCNQ1OT1和miR-486-5p的靶向关系。结果舌鳞癌组织中KCNQ1OT1表达水平升高,miR-486-5p表达水平降低(P<0.05)。抑制KCNQ1OT1表达或过表达miR-486-5p后,CAL-27细胞OD值降低,细胞凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达水平降低,p21、Bax表达水平升高(P<0.05)。KCNQ1OT1靶向调控miR-486-5p;下调miR-486-5p表达逆转了抑制KCNQ1OT1表达对舌鳞癌CAL-27细胞增殖和凋亡的影响。结论抑制KCNQ1OT1表达可通过靶向上调miR-486-5p抑制舌鳞癌CAL-27细胞的增殖,且促进细胞凋亡。

Lnc RNA KCNQ1OT1靶向miR-506-3p调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(Lnc RNA)KCNQ1OT1通过靶向调控miR-506-3p对舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinomas,TSCC)细胞增殖、侵袭和迁移作用机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测正常牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGE)及TSCC细胞(CAL27、SCC9和SCC15细胞系)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达水平。以CAL27细胞为研究对象,构建KCNQ1OT1低表达或miR-506-3p高表达的CAL27细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9和β-连环蛋白(β-catenin)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p调控关系。结果与HGE细胞比较,TSCC细胞系CAL27、SCC9和SCC15中KCNQ1OT1表达升高(P<0.05),miR-506-3p表达降低(P<0.05)。KCNQ1OT1低表达或miR-506-3p高表达后,CAL27细胞存活率、迁移和侵袭细胞数及CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达降低(P<0.05)。KCNQ1OT1低表达还降低了CAL27细胞中β-catenin蛋白表达(P<0.05)。miR-506-3p低表达降低了KCNQ1OT1低表达对CAL27细胞存活率、迁移和侵袭细胞数及CyclinD1、MMP2、MMP9和β-catenin蛋白表达的影响(P<0.05)。结论KCNQ1OT1低表达可抑制TSCC细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制与上调miR-506-3p表达和抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

基于生物信息学分析KCNQ1OT1在胃癌中的作用

长非编码RNA KCNQ1OT1在多种肿瘤中高表达,但是在胃癌中的研究较少并且研究结果不一致,其在胃癌中具体的作用机制也缺乏相关研究。通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库分析发现:KCNQ1OT1在胃癌中普遍高表达,且高表达KCNQ1OT1的胃癌病人预后不良,它与胃癌多种临床因素密切相关,尤其是与TP53的突变有明显的相关性,而且其表达与免疫细胞浸润明显相关;KCNQ1OT1在胃癌肿瘤细胞系中普遍高表达,敲低后可抑制胃癌肿瘤细胞的增殖能力,共表达网络分析发现,其表达与肿瘤代谢有密切的相关性;谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)在胃癌中普遍高表达,与预后不良密切相关,KCNQ1OT1与GLS1的表达具有明显的相关性,敲低KCNQ1OT1的表达可抑制GLS1 mRNA的表达,而过表达GLS1可以部分逆转敲低KCNQ1OT1造成的胃癌细胞增殖能力的下降,因此推测KCNQ1OT1可能通过GLS1调控胃癌肿瘤细胞的生长。本研究通过大数据及实验验证了KCNQ1OT1在胃癌中的表达及功能,提示KCNQ1OT1有可能通过调控谷氨酰胺代谢来促进了胃癌的发生发展,这为分子靶向治疗胃癌的临床研究提供了新的靶点和思路。

下调LncRNA KCNQ1OT1对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨lncRNA KCNQ1OT1(KCNQ1OT1)对喉癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响和作用机制。方法细胞按转染质粒不同分组为:siRNA NC组、KCNQ1OT1 siRNA组;mimics NC组、miR-138 mimics组;KCNQ1OT1 wt+mimics NC组、KCNQ1OT1 wt+miR-138 mimics组、KCNQ1OT1 mut+mimics NC组、KCNQ1OT1 mut+miR-138 mimics组;pcDNA-3.1(+)+mimics NC组、pcDNA-KCNQ1OT1+mimics NC组、miR-138 mimics+pcDNA-3.1(+)组、pcDNA-KCNQ1OT1+miR-138 mimics组;FAK wt+mimics NC组、FAK wt+miR-138 mimics组、FAK mut+mimics NC组、FAK mut+miR-138 mimics组;Control组、Y15组、inhibitor NC组、miR-138 inhibitor组、miR-138 inhibitor+Y15组。分别采用CCK-8实验、细胞侵袭实验和Western blot检测细胞增殖、侵袭和EMT能力。RT-qPCR检测KCNQ1OT1在Hep-2和HLEC细胞中的表达;采用miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析KCNQ1OT1和miR-138之间的关系;TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-138和FAK的关系;采用Western blot检测过表达及下调miR-138后Hep-2细胞中FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平;检测下调miR-138激活FAK/Src/MAPK信号通路对Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT的影响。结果Hep-2细胞中KCNQ1OT1表达量明显上升(P<0.01),miR-138表达量下降(P<0.05);敲低KCNQ1OT1抑制了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT。KCNQ1OT13′UTR靶向miR-138。敲低miR-138促进了Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT,过表达miR-138则起到抑制作用。与过表达miR-138相比,同时过表达KCNQ1OT1和miR-138能部分逆转miR-138上调对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miR-138靶向FAK,敲低miR-138使FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平升高,过表达miR-138则降低FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平。沉默miR-138能够激活FAK/Src/MAPK通路促进细胞增殖、侵袭和EMT。结论下调LncRNA KCNQ1OT1通过miR-138/FAk/Src/MAPK轴抑制喉癌的增殖、侵袭和EMT。

LncRNA KCNQ1OT1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达及对肝癌干细胞自我更新能力的调节作用观察

目的观察长链非编码RNA KCNQ1OT1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达及对肝癌干细胞自我更新能力的调节作用,并探讨其机制。方法采用RT-PCR法检测肝癌组织与癌旁组织、肝癌细胞系(Huh7、SMMC7721、Hep3B)与人永生化正常肝上皮细胞LO2中KCNQ1OT1。使用肝癌细胞系Huh7筛选获得CD13+CD133+的肝癌干细胞,分为A、B、C组,B组转染小干扰RNA技术抑制KCNQ1OT1表达的KCNQ1OT1敲降质粒KCNQ1OT1 shRNA,C组转染KCNQ1OT1 shRNA后转染YAP1过表达载体。采用细胞成球实验观察各组肝癌干细胞成球能力,采用克隆形成实验观察各组肝癌干细胞克隆形成能力,采用CCK8实验观察各组肝癌干细胞增殖能力。采用RT-PCR法检测各组肝癌干细胞中Hippo-YAP通路靶基因Yap1、Birc5、Foxm1 mRNA。结果肝癌组织中KCNQ1OT1的相对表达量高于癌旁组织(P<0.05),Huh7、SMMC7721、Hep3B细胞中KCNQ1OT1的相对表达量高于L02细胞(P均<0.05)。B组肝癌干细胞成球率、克隆形成数、24、48、72、96 h时的OD值均低于A、C组(P均<0.05)。B组肝癌干细胞中Yap1、Birc5、Foxm1 mRNA相对表达量均低于A、C组(P均<0.05)。结论KCNQ1OT1在肝癌组织和肝癌细胞系中高表达;抑制KCNQ1OT1表达可以降低肝癌干细胞的自我更新能力,高表达YAP1可拮抗此过程;KCNQ1OT1可能是通过激活Hippo-YAP信号通路影响肝癌干细胞的自我更新能力。

LncRNA KCNQ1OT1在糖尿病肾病患者血清中的表达及临床意义

目的探讨LncRNA KCNQ1OT1(KCNQ1OT1)在Ⅱ型糖尿病(T2D)、糖尿病肾病(DN)患者血清中的表达及意义。方法 qRT-PCR法检测KCNQ1OT1在77例T2D患者,60例DN患者,60例健康对照组中的表达,分析其临床意义。结果 KCNQ1OT1在T2D及DN患者中的表达较健康对照组明显升高(F=19.790,P <0.001)。KCNQ1OT1在合并大量蛋白尿的DN患者中的表达明显高于合并微量蛋白尿患者(t=13.620,P <0.001)。KCNQ1OT1的表达与蛋白尿的水平呈正相关关系(r=0.690,P <0.001),与肾小球滤过率呈负相关关系(r=-0.780,P <0.001)。在T2D与DN患者中KCNQ1OT1作为糖尿病肾病患者血清标志物的潜能的ROC曲线下面积(AUC)为0.861(95%CI:0.786～0.935,P <0.001),在DN患者与健康患者中KCNQ1OT1作为糖尿病肾病的AUC为0.914(95%CI:0.828～0.980,P <0.001)。结论 KCNQ1OT1的高表达与T2D患者DN的发展有关,有望成为预测DN患者预后的生物标志物。

长链非编码RNA Kcnq1ot1促进成骨细胞分化和抑制破骨细胞分化

目的探究长链非编码RNA Kcnq1ot1对成骨细胞分化和破骨细胞分化的调控作用。方法运用荧光实时定量PCR技术分别在卵巢去势(双侧卵巢切除,n=8)、鼠尾悬吊(后肢悬空,n=14)以及自然衰老(正常饲养至18月龄,n=8)引起的骨质疏松小鼠以及各自对照小鼠(n=6)股骨组织中,小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨细胞分化过程中以及小鼠骨髓源巨噬细胞BMMs和小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7向破骨细胞分化过程中检测lnc-Kcnq1ot1、骨钙素(Bglap)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶基因(Alp)、骨涎蛋白(Bsp)、活化T-细胞核因子c1(Nfatc1)、基质金属蛋白酶9(Mmp9)、组织蛋白酶K(Ctsk)和破骨细胞相关受体(Oscar)的表达水平;运用两对特异性以慢病毒为载体的短发夹RNAs(Lv-shRNAs)或小干扰RNAs(siRNAs)在MC3T3-E1、BMMs和RAW264.7细胞诱导分化过程中沉默lnc-Kcnq1ot1,随后运用荧光实时定量PCR技术检测lnc-Kcnq1ot1、成骨相关基因(Bglap、Alp)和破骨相关基因(Ctsk、Oscar)的表达;运用ALP染色检测碱性磷酸酶活性;运用抗酒石酸磷酸酶染色检测抗酒石酸磷酸酶活性。运用核浆分离联合荧光实时定量PCR技术检测lnc-Kcnq1ot1亚细胞定位。结果与对照相比,lnc-Kcnq1ot1在卵巢去势、鼠尾悬吊以及自然衰老引起的疏松股骨组织中表达显著降低(P<0.05);在MC3T3-E1向成骨细胞分化过程中表达增多(P<0.05);在小鼠BMMs和RAW264.7向破骨细胞分化过程中表达显著降低(P<0.05)。在MC3T3-E1细胞中,沉默lnc-Kcnq1ot1抑制Bglap和Alp的表达(P<0.05),并减弱成骨诱导剂引起的成骨细胞分化;在小鼠BMMs和RAW264.7细胞中,沉默lnc-Kcnq1ot1促进Ctsk和Oscar的表达(P<0.05),并加重RANKL诱导的破骨细胞分化。核浆定位显示lnc-Kcnq1ot1主要定位在MC3T3-E1和RAW264.7细胞核内。结论lnc-Kcnq1ot1促进成骨细胞分化和抑制破骨细胞分化,可能成为骨质疏松症的一个潜在治疗靶点。

KCNQ1OT1在肿瘤中的表达及意义

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸且缺乏开放性阅读框架的非编码RNA,在表观遗传、转录以及转录后等多个水平参与肿瘤的发生发展。lncRNA KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1 opposite strand/antisense transcript 1,KCNQ1OT1)在多种肿瘤中异常表达并在其中起不同的作用。研究KCNQ1OT1在不同肿瘤中的作用及相关机制有望为肿瘤治疗提供新的思路。本文对KCNQ1OT1在肿瘤中作用的研究进展进行综述。