腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用

目的 :研究腺病毒介导的KDR启动子 胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法 :应用PCR克隆出人KDR基因启动子序列 - 2 2 5bp～ +12 7bp ,以AdEasysystem为载体 ,构建携带受KDR启动子或CMV启动子调控tk基因表达的 2种重组腺病毒质粒 pAdKDR tk和 pAdCMV tk ,在 2 93细胞中包装、扩增后 ,体外感染表达KDR的脐静脉血管内皮细胞系HUVEC和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2 ,并给予不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理 ,5d后收集存活细胞并计数。结果 :产生的病毒滴度均为 5× 10 9pfu/ml。在MOI为 10 0、GCV为 5 0 μg/ml条件下 ,AdKDR tk转染HUVEC后细胞生存率下降 (31 49%± 6 .42 % ) ,AdKDR tk转染HepG2后细胞生存率为 76 .5 7%± 3.49% ,而转染AdCMV tk的 2细胞系生存率均显著下降 ,细胞生存率分别为 2 2 .2 4%± 3.77% (HUVEC)和 2 6 .5 3%± 6 .84% (HepG2 )。 结论 :KDR基因启动子可调控HSV tk在血管内皮细胞中特异性表达 ,为进一步开展靶向肿瘤血管内皮的自杀基因治疗研究奠定了基础。

腺病毒介导KDR启动子的胸苷激酶基因治疗小鼠人鼻咽癌模型

目的研究腺病毒介导的KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)系统(AdKDR-tk)结合丙氧鸟苷(GCV)对裸鼠人鼻咽癌的治疗作用.方法建立人鼻咽癌裸鼠模型,将36只成瘤鼠随机分成AdKDR-tk/GCV组、AdCMV-tk/GCV组和生理盐水/GCV组,每组12只.采用瘤内注射分别给予重组腺病毒及生理盐水,24h后重复注射1次.次日起连续10d每日ipGCV1次,100mg/kg.治疗结束后处死裸鼠,检测肿瘤质量、组织形态学变化及肿瘤微血管密度.结果Ad-CMV-tk/GCV组裸鼠鼻咽癌瘤体质量(1.81±0.84)g及肿瘤微血管密度(11.54±1.56)个/mm3、AdKDR-tk/GCV组[分别为(1.48±0.88)g,(9.87±2.18)个/mm3]与生理盐水/GCV组[分别为(2.53±1.21)g,(17.78±2.12)个/mm3]相比差异有显著性(P<0.05).AdCMV-tk/GCV组与AdKDR-tk/GCV组比较也存在显著差异(P<0.05).结论癌灶内注射AdK-DR-tk对裸鼠人鼻咽癌生长具有明显抑制作用,为鼻咽癌的治疗提供新的方法.

KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用

目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应.

KDR启动子启动双自杀基因对LOVO细胞的杀伤作用

目的探讨KDR启动子双自杀基因体系对结肠癌LOVO细胞的抑制作用。方法分别以重组腺病毒pAdEasy-KDR-CDglyTK、pAdEasy-CDglyTK转染LOVO细胞和未经转染的转染LOVO细胞,分别给予不同浓度5-FC、GCV、5-FC+GCV,观察对细胞的抑制作用,用MTT法观察杀伤效应。结果含有pAdEasy-KDR-CDglyTK、pAdEasy-CDglyTK对LOVO细胞有明显的杀伤作用(P<0.01);携带pAdEasy-KDR-CDglyTK组较其他两组生存率明显降低(P<0.01);联合用药生存率明显低于单一用药(P<0.01)。并且具有明显的旁观者效应。结论双自杀基因对LOVO细胞具有明显的抑制作用,联合用药优于单独用药,携带KDR启动子的双自杀基因有更强的抑制作用及旁观者效应。

转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因系统对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用

背景与目的研究KDR启动子转录调控双自杀基因系统(CDglyTK)对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用。方法应用分子生物学技术克隆KDR基因的启动子KDRp,构建KDR启动子调控的双自杀基因(CDglyTK)真核表达质粒pcDNA3-KDRp-CdglyTK。并将其导入L9981和人肝癌细胞HepG2中。给予不同的前药(GCV和/或5-FC)处理后,应用MTT法检测各组细胞的存活率。并应用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期和凋亡。结果成功的克隆KDR启动子和构建pcDNA3-KDRp-CdglyTK质粒。pcDNA3-KDRp-CdglyTK转染后,L9981细胞中均可检测到CD和TKmRNA,而HepG2细胞中则无。联合应用5-FC+GCV处理对转双自杀基因细胞(L9981)的杀伤作用显著高于单独应用5-FC或GCV(P<0.05),且二者显示了良好的药物协同作用。结论KDR基因启动子调控双自杀基因系统可以靶向性杀伤人肺癌细胞。

KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和(或)5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。分别应用透射电镜、Hoechest33258/PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体转染后,95%以上SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P<0·01)。两种前药联合应用优于任一前药单独应用的疗效(P<0·01)。流式细胞术检测表明该体系可抑制SCG7901细胞DNA的合成,表现为S期细胞比例增高及G2期细胞减少。同时,Hoechest33258/PI染色和电镜下可见SCG7901有凋亡改变。结论KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡。

KDR启动子驱动的双自杀基因对人结肠癌细胞的特异性杀伤作用

目的探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK对人结肠癌细胞SW480的特异性杀伤作用。方法用腺病毒AdKDR-CDglyTK感染表达KDR的SW480细胞和不表达KDR的LS174T细胞,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测重组腺病毒及转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理,MTT法检测该系统对不同细胞株的杀伤效应和旁观者效应;用流式细胞术观察细胞内DNA含量和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SW480和LS174T细胞中有GFP表达。RT-PCR检测发现SW480细胞有目的基因的表达,而LS174T细胞无表达。在前药应用下,已转染腺病毒的SW480和LS174T细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SW480细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该系统有明显的旁观者效应。用流式细胞仪测定给药组出现典型的凋亡峰,细胞周期显示治疗组细胞G0-G1期比率增多,S期细胞减少。结论KDR启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人结肠癌SW480细胞,抑制其增殖并诱导细胞凋亡。

腺病毒介导KDR启动子的胸苷激酶基因对血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的:体外实验评估腺病毒介导KDR启动子-胸苷激酶系统(HSV-tk)杀伤血管内皮细胞的作用.方法:采用新型AdEasy系统,构建受KDR启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk和AdCMV-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外分别感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞株(HUVEC)和不表达KDR的人鼻咽癌细胞株CNE-2,用丙氧鸟苷(GCV)处理受染细胞,并以MTT法检测其细胞增殖情况.结果:病毒滴度均为1×1013pfu/L.在感染复数(MO I)为100的条件下,GCV浓度由0增至50 mg/L时感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和CNE-2细胞存活率从(89.4±4.6)%和(91.5±4.4)%分别下降至(22.9±4.7)%和(71.4±2.9)%(P<0.01),而感染AdCMV-tk的HUVEC细胞和CNE-2细胞存活率从(89.9±6.2)%和(90.8±5.7)%分别下降至(12.8±2.6)%和(18.8±6.1)%(P>0.05).结论:腺病毒介导KDR启动子-胸苷激酶系统具有特异性杀伤血管内皮细胞作用.

腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞旁观者效应的实验研究

目的:研究腺病毒介导的血管内皮因子受体(KDR)启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的旁观者效应。方法:采用新型腺病毒载体AdEasy系统,构建由KDR启动子调控的、腺病毒介导的、单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因系统(AdK- DR-HSV-tk),在人胚胎肾细胞系293细胞中包装、扩增后,体外感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),建立HUVEC/tk转化细胞株。观察丙氧鸟苷((GCV)对HUVEC、HUVEC／tk细胞的存活率及旁观者效应。结果:从病毒滴度及PCR检查,证实tk基因随病毒的感染已成功地导入293细胞及HUVEC细胞。HUVEC／tk细胞对丙氧鸟苷的敏感性显著高于亲代HUVEC细胞。HUVEC／tk及HUVEC+HUVEC／tk混合细胞还随丙氧鸟苷浓度的增加受到明显的抑制。HUVEC+HUVEC／tk混合细胞的存活率,随HUVEC／tk细胞比例的增加而降低,说明腺病毒介导的KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷系统不但能杀伤tk+细胞,也能杀伤未导入tk的细胞,存在明显的旁观者效应。结论:腺病毒介导的KDR启动子单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷系统对血管内皮细胞具有明显的杀伤及旁观者效应。

KDR启动子介导胸苷激酶体外靶向杀伤血管内皮细胞

目的构建含以KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒,体外评估其对血管内皮细胞的特异性杀伤效能。方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk和AdCMV-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外分别感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2,用丙氧鸟苷(GCV)处理受染细胞,并以MTT法检测其细胞增殖情况。结果病毒滴度均为1×1010pfu/mL。在感染复数(MOI)为100的条件下,当细胞培养液中加入的GCV浓度由0增至50μg/mL时,感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞其存活率由100%分别下降至(28.94±5.67)%和(75.45±2.91)%(P<0.01),而感染含AdCMV-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞其存活率分别下降至(17.56±2.48)%和(23.15±5.72)%(P>0.05)。结论KDR启动子介导的HSV-tk具有特异性杀伤血管内皮细胞的作用。

KDR启动子驱动的双自杀基因对实体瘤细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的腺病毒介导KDR启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDRCDglyTK)体系对实体肿瘤细胞及血管内皮细胞靶向杀伤作用。方法分别将KDR和CMV启动子融合基因腺病毒体外感染表达KDR的ECV304、MCF7、MGC803及SW620细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5FC和/或GCV,观察其对各细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果两种腺病毒对各细胞的感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,各细胞株均达约100%感染;感染AdCMVCDglyTK的各组细胞和感染AdKDRCDglyTK的ECV304、MCF7、MGC803及SW620对前药具有较高的敏感性,且其敏感性差异无统计学意义(P均>0.05);与其他细胞相比,感染AdKDRCDglyTK的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01);且观察到该体系明显的旁观者效应。结论KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤实体肿瘤细胞及血管内皮细胞。

腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对血管内皮细胞的靶向杀伤作用

目的 探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系,对人脐血管内皮细胞ECV30 4的选择性杀伤作用。方法 将质粒pAdEasy -KDR- CDglyTK在2 93细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的ECV30 4细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5 - 氟胞嘧啶(5 -fuorocytosine ,5 -FC)和/或丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV) ,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果 所得病毒对两种细胞细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加;表达KDR的ECV30 4细胞对前药的具有较高的敏感性,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0 . 0 1) ;融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0 . 0 1) ;且观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测治疗后ECV30 4细胞G1期比率增多及S期细胞减少(P均<0 . 0 1) ,同时,电镜下可见ECV30 4有凋亡和坏死改变。结论 KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人血管内皮细胞。

腺病毒驱动KDR启动子介导CD/TK融合基因系统对肝癌细胞的靶向杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK双自杀基因系统（AdKDR- CDglyTK）对肝癌细胞选择性杀伤作用。方法 将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后，体外感染表达KDR的BEL-7402细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株，并给予不同浓度的前药5-FC和/或GCV，观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应。结果 所得病毒滴度为2.5×10^12pfu/ml。两种细胞的感染率相似，其感染率随腺病毒滴度的递增而增加。RT-PCR方法 检测发现：感染AdKDR-CDglyTK的BEL-7402有目的 基因CDglyTK的表达，感染AdKDR- CDglyTK的LS174T细胞无目的 基因表达。表达KDR的BEL-7402细胞对前药具有较高的敏感性，不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感（F=750.03，P〈0.001）。融合基因的疗效优于任一单自杀基因（F=275.89，P〈0.05）。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养，观察到该体系明显的旁观者效应。结论 KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的肝癌细胞。

血管内皮生长因子受体启动子驱动重组腺病毒双自杀基因系统选择性杀伤大肠癌细胞

目的探讨血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动重组腺病毒CDglyTK融合基因体系对结直肠癌细胞株LOVO及人脐血管内皮细胞株ECV304的选择性杀伤作用。方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的LoVo、ECV304细胞和对照组不表达KDR的LS174T细胞,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对细胞株的杀伤效应。结果制备的病毒滴度为2.0×1012pfu/ml。3种细胞的感染率相似,且感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,所有细胞株均接近100%感染。以MOI为100的重组体分别感染各细胞株,发现其对前药的敏感性不同:表达KDR的LoVo和ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,且二者敏感性无显著差异(P>0.1);与前二者相比,LS174T细胞对前药不敏感(P<0.001)。同时,CDglyTK双自杀基因的疗效优于任一单自杀基因(P<0.001)。流式细胞术检测表明该体系抑制LoVo细胞DNA的合成,表现为S期细胞比率增多及G1期细胞减少(P<0.001)。结论KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤结直肠癌LoVo细胞和血管内皮细胞。

重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌细胞增值的影响

目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响。方法重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞生长增值的影响。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P>0.05)。在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P<0.01)。融合基因的疗效优于单一自杀基因(P<0.01)。结论KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,抑制其增值。

AdKDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌MGC-803细胞体的外杀伤作用

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子第二受体,亦即酪氨酸激酶受体(kinase domain-containing receptor,KDR) 启动子驱动的CDglyTK融合基因体系对人胃癌细胞株MGC-803的杀伤作用。方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK 在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的MGC-803细胞株,并给予不同浓度的前药5-FC和／或更昔洛韦,观察该体系对MGC-803细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果所得病毒滴度为2．0×1012pfu／ml。MGC-803细胞株感染率随腺病毒滴度的递增而增加。融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P<0．001)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测表明该体系抑制MGC-803细胞DNA的合成,表现为G1期细胞比率增多及S期细胞减少(P<0．001)。同时,电镜下可见MGC-803细胞有凋亡和坏死改变。结论腺病毒介导KDR启动子驱动的CDglyTK融合基因体系可以有效地杀伤人胃癌细胞。

腺病毒介导的KDR-HSV-tk系统对血管内皮细胞的杀伤作用及旁观者效应

目的研究腺病毒介导的KDR-HSV-tk系统对血管内皮细胞的杀伤作用及旁杀效应。方法体外构建受KDR启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的Ad KDR-HSV-tk和Ad CMV-HSV-tk,经293细胞包装、扩增后,分别感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和不表达KDR的人鼻咽癌细胞CNE-2,建立HUVEC/tk及CNE-2/tk,观察丙氧鸟苷(GCV)处理后HUVEC杀伤率及旁观者效应。结果受感染的HUVEC和CNE-2细胞中均有绿色荧光蛋白的表达。在感染复数(MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50 mg/L时含Ad KDRHSV-tk的HUVEC和CNE-2细胞存活率从100%分别降至(23.1±3.9)%和(69.8±3.1)%(P<0.01);感染Ad CMV-HSV-tk的HUVEC和CNE-2细胞存活率从100%分别降至(13.9±2.9)%和(15.7±5.2)%(P<0.05);HUVEC/tk细胞对GCV的敏感性明显高于亲代HUVEC细胞,HUVEC+HUVEC/tk混合细胞的生存率随HUVEC/tk比例的增加而下降,说明Ad KDR-HSV-tk/GCV系统不但能杀伤转染tk基因的HUVEC,也能杀伤未导入转染tk基因的HUVEC细胞,存在明显的旁观者效应。结论腺病毒介导的KDR-HSV-tk/GCV系统对血管内皮细胞具有特异的杀伤作用及旁观者效应,为抗肿瘤血管靶向治疗奠定了基础。

KDR介导的双自杀基因重组腺病毒对ECV304细胞增殖活性、细胞周期及凋亡的影响

目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人脐血管内皮细胞株ECV304的增殖活性、细胞周期及凋亡的影响。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的ECV304细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对ECV304细胞的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果重组腺病毒对ECV304细胞及对照组LS174T细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,所有细胞株均达约100%感染。以MOI为100的重组体分别感染各细胞株表现出对前药的不同敏感性:表达KDR的ECV304细胞对前药的具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0.001)。融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0.001)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测表明该体系抑制ECV304细胞DNA的合成,表现为S期细胞比率增多及G1期细胞减少(P均<0.001)。同时,电镜下可见ECV304有凋亡和坏死改变。结论KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人血管内皮细胞,其机制与细胞周期阻滞、凋亡及坏死有关。

pAdKDR/CD/TK双自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用的试验研究

目的探讨含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法观察不同前药对HepG2细胞、血管内皮细胞ECV304和LST174细胞的杀伤作用,评估KDR启动子的靶向杀伤作用。观察不同前药对转染不同自杀基因的HepG2细胞的杀伤作用,及旁观者效应。结果转染腺病毒的HepG2细胞及血管内皮ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,而感染腺病毒的LST174细胞对前药不敏感(P<0.05)。当转染细胞混合比例为50%时,应用前药后,转染CD/TK,CD,TK的HepG2细胞生存率分别为11.8±1.2%、41.3±3.7%、43.1±2.3%(P<0.05)。结论含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞具有高度靶向杀伤作用;联合用药对转染双自杀基因的肝癌HepG2细胞具有协调增强杀伤作用。

放疗增强对转染pAdKDR/CD/TK自杀基因系统的SW480大肠癌细胞的杀伤作用

目的研究γ射线照射对含KDR启动子双自杀基因大肠癌细胞SW480的杀伤协同作用,和自杀基因及前药的放射增敏作用。方法重组腺病毒pAdKDR-TK、pAdKDR-CD和pAdKDR-TK/CD转染SW480细胞,观察γ射线对SW480细胞基因转染率的增强作用和对前药GCV、5-FC、GCV+5-FC杀伤SW480细胞的放射增敏效应,以及前药GCV、5-FC、GCV+5-FC对γ射线杀伤SW480细胞的协同增效作用。结果转染双自杀基因的大肠癌细胞射线组比对照组转染率有明显升高(P<0.01),γ射线对转染KDR-TK/CD基因的SW480细胞比未转染基因的对照组SW480细胞具有更强的杀伤作用(P<0.001)。结论γ射线照射能明显提高双自杀基因的转染效率,强化了基因治疗的"旁观者效应",自杀基因对γ射线的增敏作用。