KIAA1199基因与肿瘤关系的研究进展

KIAA1199基因是HUGE蛋白质数据库中KIAA基因家族中的重要成员,其表达主要通过遗传和表观遗传机制调控,参与细胞内信号通路转导,具有调节细胞生长、分化、凋亡、运动等生物学行为的重要功能。研究发现KIAA1199基因与肿瘤的发生发展关系十分密切,是一种促癌基因,在多种类型肿瘤中表达上调,尤其是结直肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中明显上调,并可促进肿瘤细胞的增殖、黏附、侵袭及迁移等活动,重建肿瘤细胞与周围细胞及细胞外基质的联系,促进EMT进程。同时,KIAA1199基因与Wnt/β-catennin信号通路关系密切,是该通路的重要靶基因,并且可反馈调节该通路中重要复合体水平。由此认为KIAA1199基因可通过上述一系列机制促进肿瘤发生发展。

KIAA1199基因在消化系统肿瘤中的作用

KIAA1199基因是HUGE数据库中的重要成员之一,通过表观遗传学等机制参与细胞内信号通路的转导,调控细胞生长、分化、凋亡、迁移等活动。近年研究发现,KIAA1199基因与肿瘤的发生、发展关系密切,在人类多种肿瘤尤其是消化系统肿瘤中的表达均异常升高,具有促进肿瘤细胞增殖、黏附、侵袭、迁移等作用。本文就KIAA1199基因在消化系统肿瘤中的作用作一综述。

KIAA1199基因重组慢病毒载体的构建及在人胃肿瘤细胞MKN28中的表达

目的构建KIAA1199基因过表达的重组慢病毒载体,感染人胃癌细胞MKN28并使KIAA1199基因有效表达。方法将慢病毒载体GV367和KIAA1199基因序列用Age I和Nhe I双酶切、连接、筛选及测序获得重组慢病毒质粒GV367-KIAA1199。将测序正确的GV367-KIAA1199重组载体和辅助质粒Help1.0和Help2.0用Lipofectamine2000共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体LV-KIAA1199。予荧光稀释法和药物筛选法测定重组慢病毒的感染滴度。以携带空白基因片段的慢病毒载体LV-NC为病毒对照组。将LV-KIAA1199和LV-NC以相同的病毒感染复数(MOI)分别感染人胃癌细胞株MKN28;荧光显微镜观察EGFP在细胞中的表达;实时定量PCR检测KIAA1199的m RNA在细胞中的表达水平。结果重组慢病毒载体LV-KIAA1199构建成功,LV-KIAA1199感染胃癌细胞后,荧光显微镜下可见细胞中呈现绿色荧光;KIAA1199的m RNA的表达均显著高于对照病毒组。结论重组慢病毒载体LV-KIAA1199可携带KIAA1199基因在人胃癌细胞株MKN28中进行有效过表达。

KIAA1199基因的研究进展

随着人类基因组学进入了后基因组计划,研究人类基因组所蕴藏的遗传信息,探索其具有的功能成为重要的方向之一。HUGE蛋白质数据库的建立正式这个方向的代表。它具有代表性的KIAA基因家族因其编码一些重要的蛋白而为人重视,其中KIAA1199基因因其与多种肿瘤的发生、发展密切相关而备受关注。本文就KIAA1199基因的结构、认识、研究新进展而作一综述。

胰腺导管腺癌中KIAA1199基因的表达及临床意义

目的探讨KIAA1199在胰腺导管腺癌(PDAC)中的表达及其临床意义。方法收集60例经术后病理确诊的PDAC组织及其中20例可获得的癌旁胰腺组织,进行免疫组织化学染色实验,检测石蜡切片中KIAA1199基因的表达情况,并分析其与相关临床病理因素及肿瘤术后存活时间之间的关系。同时运用Western blot和qRT-PCR实验检测10对新鲜冰冻PDAC标本和相应癌旁组织中KIAA1199的表达情况。结果KIAA1199在PDAC组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为70.0%(42/60)和25.0%(5/20),差异有统计学意义(P<0.05)。统计学分析结果显示患者的淋巴结转移(P<0.05)、分化程度(P=0.010)、神经侵犯(P=0.016)、TNM分期(P=0.047)等临床因素和KIAA1199的表达密切相关(P<0.05);患者的年龄(P=0.206)、性别(P=0.515)和肿瘤位置(P=0.726)等因素和KIAA1199的表达并无显著相关(P>0.05)。运用Kaplan-Meier法进行生存分析,KIAA1199阳性患者的总生存期(OS)中位生存时间为13.5个月,阴性表达的OS中位生存时间为17个月;KIAA1199阳性患者无病生存期(DFS)中位生存时间为10个月,而表达阴性患者的DFS的中位生存时间为13.5个月,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot和qRT-PCR实验证实KIAA1199在PDAC组织中表达较癌旁组织表达高,差异有统计学意义(P=0.0001,P<0.0001)。结论KIAA1199基因在PDAC组织中高表达,与PDAC患者的病理分化程度、TNM分期、神经是否浸润、淋巴结有无转移密切相关,且与患者的预后生存时间有着密不可分的联系,KIAA1199可能作为未来预测PDAC的新的生物学标志物。

结直肠腺癌KIAA1199基因表达与临床病理学相关性

目的探讨KIAA1199基因在结直肠腺癌中的表达与临床病理特征及预后的相关性及临床意义。方法采用实时定量PCR法(qPCR)检测手术切除结直肠腺癌及癌旁正常组织KIAA1199 mRNA表达;采用免疫组织化学染色(IHC)检测结直肠腺癌组织蜡块KIAA1199蛋白原位表达;分别分析KIAA1199 mRNA、蛋白表达水平与患者临床病理特征及预后生存的相关性。结果结直肠腺癌组织KIAA1199 mRNA水平(2-△△Ct=42.410 6±1.060 5)明显高于癌旁正常组织(2-△△Ct=1)(P<0.01),结直肠腺癌组织KIAA1199 mRNA水平与患者年龄、淋巴结及远处转移、临床分期呈正相关(P<0.01),与患者生存期呈负相关(P<0.01);结直肠腺癌组织KIAA1199蛋白表达水平[83.00%(83/100)]明显高于癌旁正常组织(阴性)(P<0.01),结直肠腺癌组织KIAA1199蛋白表达水平与原发灶浸润深度及临床分期呈正相关(P<0.01),与患者生存期呈负相关(P<0.01)。结论 KIAA1199基因可作为一种较有价值的评估结直肠腺癌病程进展及预后的标志物。

KIAA1199基因表达与胃癌临床病理学相关性

[目的]探讨K1AA1199基因在胃癌中的表达与临床病理特征及预后的相关性，以明确KIAA1199基因在胃癌中的临床意义。[方法]采用实时定量RT-PCR方法检测手术切除胃癌及癌旁正常组织中KIAA1199的mRNA表达；采用免疫组织化学染色方法检测胃癌组织中KIAA1199的蛋白原位表达；分析KIAA1199的mRNA表达水平与患者临床病理特征及预后的相关性。[结果]胃癌组织KIAA1199的mRNA水平明显高于癌旁正常组织（P〈0．05），胃癌组织中KIAA1199蛋白表达较癌旁正常组织亦升高。X2检验发现胃癌组织KIAA1199的mRNA水平与肿瘤分化程度、浆膜浸润、淋巴结转移及临床分期呈正相关（P〈0．05），与患者年龄、性别及远处转移无相关性。生存分析提示KIAA1199mRNA高表达组生存率明显低于低表达组（P〈0．05）。[结论]KIAA1199基因在胃癌中表达量升高，与胃癌的临床病理学及生存率密切相关，对评估胃癌病程进展及预后有一定指导意义。

靶向沉默KIAA1199基因表达对人非小细胞肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的探究靶向沉默KIAA1199基因表达对人非小细胞肺癌A549细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹(western blot)检测肺正常上皮细胞系BEAS-2B和肺癌细胞系(A549、H332和H1299)中KIAA1199 mRNA和蛋白的表达;以小干扰RNA(siRNA)技术沉默A549细胞中KIAA1199的表达,并经qRT-PCR和Weatern blot验证KIAA1199表达变化;CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室和划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力,Weatern blot检测细胞中相关蛋白的表达。结果与正常上皮细胞系BEAS-2B比较,肺癌细胞系A549、H332和H1299细胞中KIAA1199 mRNA和蛋白的表达均升高(P<0.05);与空白组比较,KIAA1199-siRNA组KIAA1199mRNA和蛋白表达、细胞A值、穿膜细胞数和迁移率、细胞中PCNA、Cyclin D1、p-p38/p38、p-JNK/JNK及p-ERK1/2/ERK1/2表达均降低,细胞凋亡率和细胞中caspase-3和caspase-9蛋白表达增加(均P<0.05),但空白组和sc-siRNA组上述指标的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默KIAA1199基因表达可抑制A549细胞的增殖、侵袭与迁移,诱导其凋亡,可能与阻滞MAPK信号通路有关。

靶向抑制KIAA1199基因的表达对人结肠癌细胞SW620生长的影响

目的探讨靶向沉默KIAA1199基因的表达对人结肠癌SW620细胞生长能力的影响。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制KIAA1199分子的慢病毒载体LV3-KIAA1199-shRNA并感染人结肠癌细胞株SW620为实验组(shKIAA1199),携带无义序列的对照慢病毒载体LV3-NC-shRNA为阴性对照组(shNC),未转染的细胞为空白对照组(MOCK)。72 h后用荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR法验证慢病毒感染后KIAA1199 mRNA在MOCK、shNC和shKIAA1199各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选KIAA1199静默和阴性对照的稳转细胞。用MTT法检测MOCK、shNC和shKIAA1199各组细胞活力,流式细胞仪分别检测三组细胞的凋亡率和细胞周期的变化。结果携带靶向干扰KIAA1199基因的慢病毒感染人结肠癌细胞株SW620后,能有效下调KIAA1199在细胞内的表达水平并成功筛选KIAA1199静默的SW620稳转细胞;与MOCK和shNC组比较,shKIAA1199组细胞活力减少(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),处于细胞周期中G1期的细胞数量比例明显下降(P<0.05),G2/M期细胞比例增加(P<0.05)。结论下调KIAA1199基因的表达可抑制SW620细胞的增殖,促进该细胞的凋亡,使该肿瘤细胞的生长周期受到阻滞。

KIAA1199基因沉默对肺腺癌细胞A549增殖和迁移侵袭影响

目的 KIAA1199作为致癌基因在很多癌症中高表达。本研究探讨干扰KIAA1199基因表达对肺腺癌细胞A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法设计合成KIAA1199siRNA并通过蛋白质印迹法检测KIAA1199siRNA的干扰效率。CCK-8实验和Transwell实验检测KIAA1199基因表达被干扰后对肺腺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响。结果 KIAA1199基因沉默后,表达量在对照组(1.547±0.026)、KIAA1199siRNA#1组(0.506±0.011)和KIAA1199siRNA#2组(0.498±0.018),KIAA1199siRNA#1组(P=0.003)和KIAA1199siRNA#2组(P=0.002)均低于对照组,差异有统计学意义。CCK-8检测发现对照组细胞增殖活性第3天(20.8±1.5)、第4天(30.7±2.3)和第5天(42.7±3.9),KIAA1199siRNA#1组的细胞增殖活性第3天(15.5±1.1)、第4天(20.8±2.1)和第5天(33.8±4.1),均低于对照组,且差异均有统计学意义,t3d=5.270,P3d=0.001;t4d=4.227,P4d=0.001;t5d=5.412,P5d=0.001。KIAA1199siRNA#2组细胞增殖增殖活性第3天(15.0±0.7)、第4天(20.6±3.1)和第5天(31.8±3.2),均低于对照组,且差异均有统计学意义,t3d=7.690,P3d=0.001;t4d=6.572,P4d=0.001;t5d=5.367,P5d=0.001。Transwell迁移结果显示,细胞迁移数目对照组(121.34±24.51)、KIAA1199siRNA 1#组(69.73±9.45)和KIAA1199siRNA 2#组(65.78±10.04)3组间比较差异有统计学意义,F=15.627,P<0.001;KIAA1199siRNA 1#组(t=8.172,P=0.005)和KIAA1199siRNA 2#组(t=6.538,P=0.004)均少于对照组,且差异有统计学意义。Transwell侵袭结果显示,细胞侵袭数目对照组(63.51±2.32)、KIAA1199siRNA 1#组(30.23±3.14)和KIAA1199siRNA 2#组(26.08±2.01),3组间比较差异有统计学意义,F=13.548,P<0.001;KIAA1199siRNA 1#组(t=5.790,P=0.003)和KIAA1199siRNA 2#组(t=4.529,P=0.004)均少于对照组,且差异有统计学意义。KIAA1199siRNA 1#组和KIAA1199siRNA 2#组的上皮标志物E-cadherin表达上调,而间质标记物Vimentin和N-cadherin表达下调。结论 KIAA1199在肺腺癌组织中高表达,并与患者的生存预后呈负相关。下调KIAA1199基因的表达抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

维吾尔族和汉族女性乳腺癌与KIAA1199基因表达调控的关系

目的探讨维吾尔族和汉族女性乳腺癌与KIAA1199表达调控的关系。方法收集维吾尔族和汉族女性乳腺纤维腺瘤、乳腺癌患者的石蜡包埋组织标本150例(维吾尔族68例,汉族82例),另选取新鲜组织标本58例(维吾尔族21例,汉族37例),采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测KIAA1199蛋白和mRNA表达水平。结果乳腺纤维腺瘤细胞中KIAA1199蛋白表达上调率为31.9%,乳腺癌细胞中KIAA1199蛋白表达上调率为76.7%,差异有统计学意义(P<0.01),维吾尔族、汉族女性乳腺癌KIAA1199表达上调率的变化趋势具有共性(维吾尔族2=12.30,P<0.01;汉族2=15.19,P<0.01),其族群差异无统计学意义(P>0.05)。KIAA1199基因的转录表达水平在乳腺癌组织中明显上调,其mRNA相对含量为0.967±0.281,乳腺纤维腺瘤组织中KIAA1199 mRNA含量为0.475±0.176,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 KIAA1199表达上调伴随着乳腺病变进程,可能成为乳腺癌分子预警指标。

KIAA0101调控胃癌细胞周期的相关基因筛选

目的筛选KIAA0101基因对细胞周期影响的相关基因。方法以RT-PCR方法分析胃癌组织相对于配对癌旁组织中KIAA0101基因表达量,利用DAVID数据库对差异基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,使用KEGG绘制通路图,将与KIAA0101表达模式相关的基因列表回带入TCGA cBioPortal进行基因之间相互网络作用的关系研究,并借由系统生成基因拓扑关系图。最后采用RT-PCR方法对候选基因进行筛选。结果癌组织中KIAA0101 mRNA表达水平为1.104±0.379,显著高于配对癌旁组织(0.421±0.172;P=0.0179)。系统通过汇总分析全部基因探针的表达强度,对来自478例组织中与KIAA0101相关的基因进行了筛选。GO功能分析显示差异基因主要富集在蛋白磷酸化、RNA加工、细胞周期、DNA代谢过程、蛋白质转运、乙酰化、细胞凋亡、蛋白质水解、氧化还原等功能。KIAA0101表达水平的改变主要影响的胃癌相关通路有:细胞周期、剪接体、DNA复制、p53信号转导通路等。KEGG通路图及基因拓扑图显示,BUB1B、MAD2L1、CDC45、CDK1、CCNE1、CCNB2等与KIAA0101相关的基因也与细胞周期相关,RT-PCR结果证实BUB1B、MAD2L、CDK1、CCNE1、CCNB2 mRNA表达水平显著高于配对癌旁组织(P<0.05),CDC45 mRNA表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论 KIAA0101可能通过影响BUB1B、MAD2L1、CDK1、CCNE1、CCNB2表达产生对细胞周期的影响,这个结果可以为KIAA0101影响细胞周期的作用机制、肿瘤标志物的筛选和药物靶点的选择提供参考。

shRNA干扰A549细胞KIAA0101基因表达的初步研究

目的探讨小发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒介导的RNA干扰技术对人肺腺癌A549细胞KIAA0101基因表达的抑制作用。方法应用pSIREN-RetroQ载体构建KIAA0101基因shRNA重组质粒,经脂质体法导入A549细胞,分别设置为空白对照组、阴性对照组、干扰A组和干扰B组,采用实时定量PCR法和免疫印迹(Western blot)法检测检测转染后细胞KIAA0101基因mRNA与表达蛋白质的变化,四唑盐(MTT)比色法测定各组干扰细胞活性。结果成功构建KIAA0101基因shRNA重组质粒,相对阴性对照组与空白对照组,干扰B组KIAA0101的mRNA与蛋白质表达水平均下降达70%(P≤0.05)以上,MTT法结果显示降低KIAA0101的表达可抑制肺癌细胞的生长活性。结论shRNA干扰质粒可以显著降低细胞内KIAA0101mRNA与蛋白质的表达水平,并且抑制癌细胞的生长活性,为该基因在肺癌中的深入研究奠定了基础。

荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280

【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernblot杂交,将杂交阳性的片段且经RT-PCR反复验证,选取差异明显的片段进行克隆测序;经生物信息学分析处理,选取同源性低的EST片段R6,利用cDNA5'端快速扩增PCR(5'RACE法)进行基因全长的克隆。【结果】利用5'RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区,扩增并获取全长4821bp及完整的可读框(ORF),RT-PCR及Northernblot印迹结果证实了克隆的结果,同源性分析发现该基因ORF与人大脑中已知的KIAA0280基因高度同源,同源性96%,编码166个氨基酸,为结构及功能未明确蛋白质,该基因定位于大鼠第11号染色体长臂(11q.13)。【结论】应用荧光差异显示PCR成功地自大鼠体内克隆到与人KIAA0280相似的基因,其在大鼠急性局灶性脑缺血中明显上调,该蛋白质结构及功能均未见报道及研究,其显著地差异表达提示其在脑缺血病理过程中具有重要作用。

KIAA0101基因在人非小细胞肺癌中的功能预测

目的应用生物信息学分析方法对肺癌组织中高表达的基因KIAA0101进行功能预测与分析。方法通过dChip软件对人肺癌基因表达谱数据集中癌旁组织与癌组织两组样本进行比较,筛选出与KIAA0101基因共表达的差异基因。运用DAVID、GO、STRING等生物信息学软件对筛选基因进行生物学功能分析,并通过GATHER转录因子预测软件预测该组基因的共同转录因子。结果与癌旁正常组织比较,肺癌组织中KIAA0101等9个基因表达水平升高两倍以上,并且具有相似表达变化趋势;转录因子预测发现该组多数基因启动子区含有转录因子E2F1结合位点。结论筛选出人非小细胞肺癌组织中与KIAA0101基因共表达的一组基因,其中BUB1B、CDC20、CCNB2等基因与细胞周期的调节密切相关,推测KIAA0101基因可能参与肺癌细胞周期的调节,并且该组基因转录水平表达升高可能受转录因子E2F1的调控。

慢病毒介导的KIAA1199表达下调对肝癌HuH-7细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究慢病毒介导的KIAA1199表达下调对肝癌HuH-7细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法肝癌HuH-7细胞感染LV3-KIAA1199 shRNA慢病毒,qRT-PCR和Western blotting测定下调效果,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡。Western blotting检测激活的Caspase-3(C-Caspase-3)、激活的Caspase-9(C-Caspase-9)、β-catenin、C-myc蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl处理感染LV3-KIAA1199 shRNA慢病毒的肝癌细胞,检测细胞增殖、凋亡变化。结果感染LV3-KIAA1199 shRNA慢病毒的肝癌HuH-7细胞中KIAA1199 mRNA和蛋白水平均下降,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9表达水平升高,β-catenin、C-myc蛋白表达水平下降。Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl可以逆转下调KIAA1199对肝癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用。结论慢病毒介导的KIAA1199表达下调通过阻断Wnt/β-catenin信号诱导肝癌HuH-7细胞增殖抑制和凋亡增加。

KIAA1199和Ki67在胃癌组织中表达的相关性及其临床意义

目的分析胃癌(gastric cancer,GC)组织中KIAA1199和Ki67的表达及其与患者临床病理学特征及预后的关系,探讨KIAA1199在GC中的临床意义.方法回顾性分析2013年1月至2014年12月在武汉大学中南医院接受手术治疗的90例GC患者的组织和临床病理资料,通过免疫组织化学法检测KI-AA1199和Ki67在GC组织和癌旁正常组织中的表达情况,分析其表达水平与患者临床病理特征之间的关系,并采用Kaplan-Meier法和Cox回归模型探讨影响患者预后的相关因素.结果KIAA1199和Ki67在GC组织的表达均显著高于癌旁组织(P均<0.05),KIAA1199主要在胞浆中表达,而Ki67主要表达于胞核,两者的表达水平呈显著正相关(r=0.504,P<0.05).胃癌组织中KIAA1199的表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P均<0.05),Ki67的表达水平与患者年龄、肿瘤分化程度和TNM分期显著相关(P均<0.05).生存分析显示,胃癌组织中KIAA1199的表达水平与患者的总生存期显著负相关(P<0.05),而Ki67的表达水平则与患者的预后无明显相关性(P>0.05).多元Cox回归分析显示KI-AA1199高表达是影响GC患者预后的独立因素(P<0.05).结论KIAA1199表达是影响GC患者预后的一个独立因素,在GC的术后预后评估方面具有潜在的临床应用价值.

人KIAA1173基因的克隆、转染及生物学特性的实验研究

目的建立表达KIAA1173基因的鼻咽癌6-10B细胞模型,并观察转染细胞的生物学活性。方法从新鲜肌肉组织中提取总RNA,采取逆转录PCR得到人KIAA1173基因cDNA。获得的人KIAA1173基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),进行酶切和序列鉴定。将重组质粒pcDNA3.1(+)-KIAA1173和空载体利用阳离子脂质体介导转入鼻咽癌6-10B细胞,经G418筛选阳性克隆。用RT-PCR、原位杂交及免疫细胞化学等方法检测KIAA1173基因在6-10B细胞中的稳定表达情况,并通过MTT法、肿瘤细胞侵袭实验及裸鼠体内成瘤性实验方法,检测KIAA1173基因对鼻咽癌细胞的增殖、侵袭及成瘤能力的影响。以空白质粒转染组作为对照。结果在mRNA和蛋白水平证实,转染细胞内有KIAA1173基因的高表达,表明细胞可表达人KIAA1173基因。6-10B在转染了pcDNA3.1(+)-KIAA1173后,较转染空载体pcDNA3.1(+),肿瘤细胞的增殖能力、侵袭能力及裸鼠体内成瘤能力明显降低(P<0.05)。结论结果提示KIAA1173基因可能是一鼻咽癌肿瘤抑制基因。获得生物学活性稳定的KIAA1173基因高表达的鼻咽癌细胞模型,为进一步研究奠定了基础。

表达人KIAA1173基因的鼻咽癌6-10B细胞模型的建立

目的建立表达人KIAA1173基因的鼻咽癌6-10B细胞模型,为探究人KIAA1173基因在鼻咽癌发病机制中的作用奠定实验基础。方法从新鲜肌肉组织中提取总RNA,采取逆转录PCR(RT-PCR)得到人KI-AA1173基因cDNA,纯化PCR产物,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,转化,铺板,筛选阳性克隆,酶切鉴定并进行序列测定。将重组质粒pcDNA3.1(+)-KIAA1173和空载体利用阳离子脂质体介导转入鼻咽癌6-10B细胞,经G418筛选阳性克隆。用RT-PCR、原位杂交及免疫细胞化学方法检测KIAA1173基因在6-10B细胞中的稳定表达情况。以空白质粒转染组作为对照。结果重组质粒pcDNA3.1(+)-KIAA1173经酶切和DNA测序分析显示与GenBank所公布的相应序列相符,插入方向正确,阅读框架完整。转染KIAA1173基因的6-10B细胞阳性克隆在mRNA和蛋白水平证实,转染细胞内有该基因高表达,表明细胞可表达人KIAA1173基因。结论成功获得了人KIAA1173基因全长cDNA的基因克隆,将该基因导入鼻咽癌6-10B细胞后,获得生物学活性稳定的KIAA1173基因高表达的细胞模型。

KIAA0319基因与汉族儿童阅读障碍的关联性研究

目的研究KIAA0319基因与汉族儿童发展性阅读障碍的关系,为疾病的筛查和干预提供依据。方法采用病例对照研究方法,选取汉族阅读障碍儿童168例,控制混杂因素后选择健康对照儿童168例,一次性口腔黏膜拭子采集DNA,利用多重SNP分型试剂盒对KIAA0319基因的4个SNPs位点(rs4504469、rs3212236、rs6935076、rs3756821)进行遗传多态性研究。结果KIAA0319基因位点rs6935076、rs3756821、rs3212236的等位基因频率和基因型频率在阅读障碍组和健康对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05);经Bonferrion校正检验后,位点rs6935076的等位基因频率(P=0.023)、rs3756821的等位基因(P=0.015)和基因型频率(P=0.010)仍有显著差异;多个位点间的连锁分析形成1个单倍域,其中“CCC”和“TTT”单倍体与阅读障碍儿童具有显著关联(P<0.05)。结论KIAA0319基因是汉族儿童阅读障碍的遗传易感因素。