siRNA沉默KLF4的表达促进食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移

目的:探讨体外沉默Kruppel样因子4(Kruppel like factor 4,KLF4)基因的表达对食管癌KYSE140细胞增殖及迁移的影响。方法:Western blotting法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4蛋白的表达,化学合成2对靶向KLF4的siRNA(KLF4-siRNA1,KLF4-siRNA2),并设对照siRNA(Ctrl-siRNA),分别体外转染至高表达KLF4的食管癌KYSE140细胞中,形成KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140及Ctrl-siRNA-KYSE140细胞,通过MTT实验、Transwell实验分别检测转染后食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移。结果:食管癌细胞株KYSE140中KLF4蛋白的表达明显高于KYSE150、EC109及EC9706细胞株[(5.62±0.02)vs(1.71±0.23)、(3.24±0.35)、(3.16±0.41),均P<0.05]。KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140与Ctrl-siRNA-KYSE140细胞相比,KLF4蛋白表达明显降低[(0.49±0.18)、(0.32±0.09)vs(0.98±0.19),均P<0.05],细胞增殖能力明显增高[(1.2±0.8)、(1.4±0.1)vs(0.6±0.1),均P<0.05],迁移细胞数量也明显增加[(780±22)、(475±25)vs(83±17)个,P<0.05]。结论:KLF4在人食管癌细胞的增殖和迁移过程中起着负调控作用。

KLF4过表达对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采用热应激(42℃)处理稳定表达小鼠KLF4基因的Raw264.7巨噬细胞1h,37℃恢复12h,采用流式细胞术、Hoechest33258染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:获得了KLF4过表达的Raw264.7细胞株,流式细胞术结果显示,转空载体组和KLF4过表达组细胞凋亡百分率较热应激前均升高,但与转空载体组相比较KLF4过表达组升高更明显;荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变;KLF4过表达细胞琼脂糖凝胶电泳能检测到明显的DNA"梯状条带"。结论:KLF4可以促进热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡。

牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立

为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。

人KLF4基因克隆及重组KLF4慢病毒表达载体的构建

背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH-KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细胞包装病毒,荧光显微镜观察报告基因的表达情况,收集病毒上清,测定病毒的滴度。将重组的慢病毒感染5637细胞,RT-PCR检测KLF4mRNA的表达。结果与结论:重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实重组慢病毒载体pCDH-KLF4的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染5637细胞后,细胞内KLF4mRNA高表达。结果证实,实验成功构建KLF4基因慢病毒过表达载体。

KLF4对肝癌细胞HepG2化疗和光动力治疗的调节作用

目的:分析重组人Krüppel类因子4(Krüppel-like factors 4,KLF4)基因在肝癌HepG2细胞中对化疗和光动力治疗的调节作用。方法:构建人KLF4慢病毒pWPTS-KLF4载体,应用RT-PCR、Western blotting检测pWPTS-KLF4感染后HepG2细胞中KLF4 mRNA和蛋白的表达,MTT实验检测HepG2细胞对顺铂、环磷酰胺或氟尿嘧啶耐受性的变化以及对光动力治疗敏感性的变化,罗丹明123染色检测HepG2细胞线粒体膜电位的变化。结果:成功构建慢病毒pWPTS-KLF4载体。顺铂、环磷酰胺或氟尿嘧啶处理HepG2细胞72 h后,pWPTS-KLF4感染组HepG2细胞存活率较对照组明显增高[(43.43±4.78)%vs(18.09±1.02)%;(110.51±4.58)%vs(75.23±5.92)%;(34.55±2.93)%vs(19.16±1.32)%,P<0.01]。光敏剂艾拉介导的光动力治疗后24 h,pWPTS-KLF4感染组HepG2细胞存活率较对照组明显减少[(37.16±3.26)%vs(57.24±8.01)%,P<0.01],细胞的线粒体膜电位明显降低。结论:重组人KLF4可以提高HepG2细胞化疗耐受性,增加光动力治疗敏感性。

klf4反义基因腺病毒载体的构建和鉴定

本研究针对klf4基因,利用AdEasy腺病毒载体系统构建人klf4反义基因重组腺病毒载体。klf4基因片段反向克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV,利用同源重组技术在大肠杆菌BJ5183内构建重组腺病毒Ad-反义klf4,酶切线性化重组载体,并在293细胞中扩增、制备重组病毒。经限制性酶切、PCR扩增和测序检测鉴定,证明Ad-反义klf4重组腺病毒基因正确插入后,将Ad-反义klf4转染人原代脐静脉内皮细胞,采用real-time PCR、Western blot方法观察其对内皮细胞中KLF4表达的抑制效果。结果表明:成功构建了重组klf4反义基因腺病毒载体,重组腺病毒可明显降低细胞内klf4 mRNA和KLF4蛋白表达。结论:成功构建了Ad-反义klf4重组腺病毒载体,这为进一步研究klf4的生物学功能及应用提供物质基础。

大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因的表达及启动子区甲基化观察

目的观察大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因表达及启动子区CpG位点的甲基化变化。方法大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞在体外用25μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松诱导其分化,在诱导第0、7、14天分别提取细胞DNA和RNA。采用实时荧光定量PCR法检测Klf4、Nanog基因mRNA,甲基化特异性PCR法观察Klf4、Nanog基因启动子区CpG位点甲基化。结果与诱导第0天比较,第7、14天Klf4 mRNA相对表达量降低(P均<0.05);与诱导第0天比较,第7、14天Nanog mRNA相对表达量均降低(P均<0.05)。与诱导第0天比较,诱导第7天Klf4启动子区第1、2个CpG位点甲基化频率升高(P均<0.05);与诱导第7天比较,诱导第14天Klf4启动子区第1个CpG位点甲基化频率升高,第2、3个CpG位点甲基化频率降低,P均<0.05。与诱导第0天比较,诱导第7天Nanog启动子区第1个CpG位点甲基化频率降低,第2个CpG位点甲基化频率升高,P均<0.05;与诱导第7天比较,诱导第14天Nanog启动子区第1个CpG位点甲基化频率升高,第2个CpG位点甲基化频率降低,P均<0.05。结论大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞在体外诱导向肝细胞分化过程中,Klf4、Nanog基因表达随诱导时间增加呈现先下降后回升趋势,两者启动子区CpG位点甲基化程度随诱导时间增加出现不同程度变化;Klf4和Nanog基因启动子区CpG位点的甲基化变化不仅会影响Klf4、Nanog基因的表达,而且起到重要的调控作用。

奶牛Klf4基因CDS区和3′UTR的克隆及生物信息学分析

以奶牛乳腺组织cDNA为模板,采用PCR技术扩增奶牛Klf4基因CDS区和3′UTR,同时构建PMIR-Klf4-3′UTR表达质粒;应用生物信息学方法对Klf4基因CDS区及其编码蛋白的理化性质、亚细胞定位、翻译后的修饰结构和蛋白结构进行生物信息学分析.结果表明:奶牛Klf4基因CDS区长度为1434 bp,可编码477个氨基酸,分子质量为50759.17 u,理论等电点为8.76,属于亲水性蛋白.Klf4基因3′UTR长度为366 bp,酶切重组PMIR-Klf4-3′UTR表达质粒得到长度分别为366和6470 bp的两条带,表明成功构建了重组质粒.同源性和遗传进化分析可知,牛Klf4基因与山羊、绵羊的亲缘性最近,达到98%以上,与斑马鱼的亲缘关系最远.KLF4蛋白有56个磷酸化位点,包含16个苏氨酸磷酸化位点、37个丝氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点.在二级结构和三级结构中,KLF4蛋白α-螺旋占18.03%,无规则卷曲占68.76%,存在3个锌指结构域.本研究为进一步探讨Klf4基因在奶牛乳腺炎表观遗传学调控过程中的作用提供数据支撑.

KLF4基因表达与JAK2 V617F点突变的关联性研究

目的检测骨髓增殖性疾病(MPDs)中JAK2 V617F点突变与锌指蛋白转录因子(KLF4 mRNA)表达,探讨JAK2 V617F点突变与KLF4 mRNA表达水平与BCR/ABL阴性的MPDs的关系。方法用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)技术检测4组JAK2 V617F点突变,根据结果分为阴性、阳性。反转录特异性聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测4组KLF4 mRNA的表达水平。结果BCR/ABL阴性的MPDs的62例患者中JAK2 V617F基因突变慢性特发性骨髓纤维化(IMF)中有5例,阳性率55.56%(5/9),原发性血小板增多症(ET)中有15例,阳性率57.69%(15/26),真性红细胞增多症(PV)中有23例,阳性率88.46%(23/26),慢性嗜中性白血病1例。慢性粒细胞性白血病(CML)、急性白血病(AL)、对照组均没有阳性病例。KLF4mRNA在每例样本中均有表达。KLF4 mRNA表达水平在PV组显著高于其他3组(P<0.05)。结论BCR/ABL融合基因阴性的MPDs患者存在高频率JAK2 V617F点突变,KLF4 mRNA在PV患者中高表达。JAK2 V617F突变导致了KLF4基因表达的增高。JAK2 V617F突变阳性的ET患者,易出现并发症。AS-PCR是一种简单、有效检测JAK2 V617F突变方法。

LncRNA-MEG3和KLF4在鼻咽癌发生发展中的作用及可能机制

目的探讨LncRNAs-MEG3在鼻咽癌发生发展中的作用及其可能的分子机制。方法qRTPCR检测鼻咽癌细胞中MEG3与miR-543的含量,荧光素酶报告法研究MEG3与miR-543的关系,分析MEG3和KLF4介导的鼻咽癌细胞增殖和凋亡的变化,Western blot检测KLF4、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果鼻咽癌细胞株中MEG3的表达呈下降趋势,miR-543的表达呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);荧光素酶报告和Western blot显示MEG3可结合miR-543以调控KLF4的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡并影响Bcl-2和Bax蛋白表达水平,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA-MEG3可通过吸附结合miR-543靶向调控KLF4的表达,发挥抑制鼻咽癌发生发展的作用。LncRNA-MEG3可能是鼻咽癌靶向治疗的一种新的生物标志物。

小鼠Klf4基因的原核表达研究

[目的]对小鼠Klf4基因重组蛋白进行原核表达分析。[方法]利用双酶切从重组质粒p MXs-Klf4上回收小鼠Klf4基因片段,克隆入p ET-41a(+)载体后转化BL21大肠杆菌,用IPTG诱导表达,探讨诱导表达最佳浓度和时间,最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定及分析。[结果]重组质粒Klf4-p ET-41a(+)在IPTG诱导下可表达与预期相符的约为51 ku的KLF4蛋白;经IPTG刺激后重组蛋白表达增多,以0.8 mmol/L IPTG诱导6 h为佳;重组蛋白以包涵体形式存在于大肠杆菌BL21中。[结论]小鼠Klf4基因可在原核细胞中表达。

Klf4抑制Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞增殖的研究

目的探讨Klf4基因对大鼠软骨细胞增殖影响及相关机制。方法从出生24 h SD幼鼠的股骨头提取软骨细胞,细胞免疫荧光鉴定Col2a1和Sox9基因的表达。转染慢病毒载体PCDH-GFP-Klf4和辅助质粒PSPAX2及PMD2.0G至293ft细胞中产生慢病毒,48 h后收集病毒上清,用其感染大鼠软骨细胞作为Klf4组,用PCDH-GFP慢病毒感染细胞作为对照组。采用CCK8法检测2组细胞生长增殖变化;采用Western blot方法,分别检测2组细胞中Klf4基因表达、增殖相关基因PCNA和CyclinD1蛋白表达、Wnt/β-catenin信号通路上下游基因表达情况。结果原代培养软骨细胞均强表达Col2a1和Sox9基因。慢病毒PCDH-GFP-Klf4和PCDH-GFP成功感染软骨细胞,Klf4基因在软骨细胞过表达。Klf4组软骨细胞生长明显受到抑制,PCNA和CyclinD1蛋白表达和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达均明显下调。结论过表达Klf4基因可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达而抑制软骨细胞增殖。

KLF4 与上皮间质转化的关系在肿瘤中的研究进展

KLF4(Krüppel-like factor 4)是一种锌指蛋白转录因子,KLFs家族的重要成员之一。KLF4参与肿瘤的发生、发展及侵袭转移过程。上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞通过特定程序转化为具有侵袭性和迁移性间质表型细胞的可逆生物学过程,尤其在促进肿瘤侵袭转移中有重要作用。近来研究发现,KLF4能激活上皮肿瘤相关标记物表达,同时抑制间质肿瘤相关标记物表达,逆转EMT过程进而抑制癌细胞的侵袭和转移。本文对KLF4与EMT的关系在肿瘤中的研究进展进行综述。

靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体的构建及其在肺动脉高压动物模型中的应用

目的构建靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体,并应用于肺血管疾病,为后期研究肺血管KLF4基因敲减在肺动脉高压大鼠中的作用及相关分子机制奠定基础。方法根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,以pHBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP作为空白载体,通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV-r-KLF4shRNA-GFP,行测序分析,并进行病毒扩增、纯化及滴度测定。本研究对长时间(3个月)接触香烟烟雾的大鼠进行气道注入AAV1-KLF4-shRNA的干预治疗,观察大鼠右心室收缩压、平均右心室压等血流动力学指标改变。结果经测序检测显示,大鼠AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体构建成功。健康对照组、生理盐水模型组、对照病毒模型组、治疗干预组的右心室收缩压和平均右心室压比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对长时间接触香烟烟雾的肺动脉高压模型大鼠应用AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体,能有效改善右心室收缩压和平均右心室压,该载体在相关疾病动物模型中应用有效,为后期顺利开展AAV1-KLF4-shRNA在肺动脉高压中的预防和治疗作用,以及相关分子机制的深入研究提供基础条件。

微小RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响。方法研究起止时间为2018年3-10月。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量。将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞)。以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系。结果miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)%、(10.21±3.02)%比miR-7-5p组(24.41±8.15)%](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达。结论miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡。

非NF2突变型颅底脑膜瘤临床病理特点分析

目的探讨非NF2基因突变AKT1(E17K)、SMO(L412F)、KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)型颅底脑膜瘤的临床病理特点。方法收集92例颅底脑膜瘤患者的临床病理资料,并对所有脑膜瘤样本进行Sanger基因测序,检测4个非NF2点突变:AKT1(E17K)、SMO(L412F)、KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)。结果92例颅底脑膜瘤中共检测出24例非NF2突变型脑膜瘤,1例为WHO 2级(非典型性),23例为WHO 1级。其中,AKT1(E17K)突变7例,SMO(L412F)突变7例,KLF4(K409Q)突变8例,TRAF7(G536S)突变2例。AKT1(E17K)、SMO(L412F)和KLF4(K409Q)突变型多为脑膜上皮型和过渡型,KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型主要为分泌型。KLF4(K409Q)突变型和TRAF7(G536S)突变型的肿瘤体积较小。较小的肿瘤体积对于预测KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型脑膜瘤有一定特异性和敏感性(AUC分别为0.784和0.955),差异有统计学意义(均P<0.05)。AKT1(E17K)、SMO(L412F)和TRAF7(G536S)突变型多好发于颅底中线。KLF4(K409Q)突变型肿瘤多位于颅内右侧,其中4例(50%)位于岩斜区。结论非NF2基因突变脑膜瘤多好发于颅底中线处,病理级别多为WHO 1级,AKT1(E17K)和SMO(L412F)突变型病理亚型多为脑膜上皮型和过渡型,分泌型多见于KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型。KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型肿瘤体积相对较小。

一种肺血管基因敲减动物模型的构建及在肺动脉高压中的运用

目的 探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒(AAV1)携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法 根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然后进一步构建AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体。将44只清洁级SD大鼠随机分为4组:健康对照组、盐水模型组、对照病毒载体组、基因敲减组。后3组大鼠分别气管内注入生理盐水(盐水模型组)、AAV1-control vector(对照病毒载体组)、AAV1-KLF4-shRNA(基因敲减组)。1个月后对后3组进行烟熏造模,烟熏4个月后麻醉各组大鼠,分别检测右心室收缩压和平均右心室压,并取肺组织以免疫荧光法观察病毒载体在肺血管中的表达情况,通过PCR方法测定肺动脉中KLF4水平,通过HE染色比较肺小血管中膜厚度评估肺血管肥厚程度。取大鼠心脏计算右心肥厚指数。结果 细胞计数和细胞迁移实验证实选用的KLF4-siRNA链有效。免疫荧光实验显示,经大鼠气道注入的1型腺相关病毒载体均沿肺血管分布。荧光定量PCR实验显示,基因敲减(AAV1-KLF4-shRNA)组大鼠肺小动脉中KLF4的mRNA表达量明显低于其他两组。血流动力学检测结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的右心室收缩压和平均右心室压均明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的右心室收缩压和平均右心室压均明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。HE染色及右心肥厚指数结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的肺小血管重构及心室重构程度明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的肺小血管重构及心室重构程度明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。结论 肺血管特异性KLF4基因敲减模型构建成功并成功地在肺动脉高压中发挥作用,为进一步深入研究肺动脉高压的发病机制提供了平台和实验基础。

Klf4的功能研究进展

Klf4作为真核生物转录因子,参与调控细胞增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程,是体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS细胞)的重要诱导因子之一。本文综述了Klf4在细胞增殖、分化、肿瘤发生、皮肤屏障、热休克及iPS细胞诱导等方面的研究进展,为深入研究Klf4在重编程中的作用机制和功能提供参考。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人甲状腺癌TPC-1细胞生长及KLF4基因表达的调节作用

目的抑癌基因甲基化具有可逆性，相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人甲状腺癌TPC-1细胞增殖的影响，及5-iza-CdR对KLF4基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法使用不同浓度的5-Aza-CdR处理TPC-1细胞，采用MTF检测5-Aza-CdR对细胞增殖的影响，利用RT-PCR及蛋白质印迹法（Westemblot）方法检测KLF4基因mRNA和蛋白表达的水平。结果5-Aga—CdR作用于TPC-1细胞24、48及72h后，TPC-1细胞增殖受抑制，且在一定范围内抑制率呈浓度和时间依赖性；TPC-1细胞经5-Aza．CdR干预后，KLF4基因mRNA和蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论5-Aza-CdR能抑制TPC-1细胞增殖，其作用可能是通过去甲基化上调抑癌基因KLF4的表达实现，为甲状腺癌的治疗提供了新思路。

5-Aza-CdR对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的去甲基化作用

目的探讨启动子甲基化对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的作用及5-Aza-CdR干预对启动子甲基化的影响。方法使用不同浓度的5-Aza-CdR处理急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞,采用噻唑蓝(MTT)检测去甲基化药物5-Aza-CdRa对CEM/C1细胞增殖的影响,并利用半定量逆转录聚合反应(RT-PCR)检测去甲基化药物处理后CEM/C1细胞中KLF4基因mRNA的表达水平。结果 5-Aza-CdR抑制体外培养的人急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖,呈浓度依赖性。经5-Aza-CdR处理CEM/C1细胞后,RT-PCR检测KLF4 mRNA恢复了表达。结论启动子区高甲基化是急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞中KLF4基因失活的主要原因,5-Aza-CdR能逆转KLF4基因甲基化状态,从而调控KLF4基因表达并抑制细胞生长。