砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响

目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关。

中药调控Nrf2/HO-1信号通路干预心肌缺血再灌注损伤的研究进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是心肌梗死患者进行血运重建时的严重并发症。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路在MIRI病理进程中具有重要意义。目前研究发现,中药对缺血再灌注引起的心肌损伤具有很好的效果。本文基于Nrf2/HO-1信号通路总结中药复方和单体干预MIRI的作用机制,发现中药复方(益心方、温阳通脉方、定心方Ⅰ号方)以及中药单体萜类(银杏内酯、黄芪甲苷、人参皂苷等)、酚类(巴西苏木素、苏木酮A、白藜芦醇等)、醌类(芦荟素、大黄素)等均可通过激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制氧化应激、炎症反应等,从而减轻MIRI。

黄酮类中药单体干预Nrf2/HO-1通路治疗糖尿病微血管并发症研究进展

糖尿病微血管并发症是糖尿病最主要的慢性并发症。研究表明,核转录因子红系2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路是治疗糖尿病微血管并发症的重要靶点。黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮、查耳酮、黄烷醇、花青素等黄酮类中药单体可以通过调控Nrf2/HO-1信号通路发挥缓解氧化应激、减少炎症反应、抑制细胞凋亡、减轻纤维化、改善血流动力学等作用,从而达到治疗糖尿病视网膜病变、糖尿病心肌病、糖尿病肾病、糖尿病周围神经病变等多种糖尿病微血管并发症的目的。

基于Keap1/Nrf2/ARE通路的中医药干预骨关节炎研究进展

骨关节炎是临床上常见的一种慢性筋骨疾病,其病程缠绵,反复发作,发病机制复杂,与氧化应激反应相关。Keap1/Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。骨关节炎的病程中Nrf2、NQO1、HO-1等关键蛋白表达受到抑制,组织抗氧化及抗炎能力减弱,软骨细胞损伤,软骨结构破坏。目前西医的治疗侧重于缓解症状,但不能逆转骨关节炎的进展,急需有效的非手术策略来延缓骨关节炎的病理过程。近年来,大量基础及临床试验表明Keap1/Nrf2/ARE通路是中医药治疗骨关节炎的潜在靶点之一。基于骨关节炎本虚标实的病机,中医药以补虚、化瘀、解毒等法调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路,在发挥抗氧化及抗炎作用同时,还能调节软骨细胞外基质的稳态,发挥对骨关节炎的治疗作用。本文总结了中医药靶向干预Keap1/Nrf2/ARE信号通路防治骨关节炎的作用机制,旨在为中医药更合理的运用临床防治骨关节炎提供理论基础。

红景天苷对糖尿病足溃疡大鼠Nrf2/Keap1信号通路及伤口愈合的影响

目的探究红景天苷(Sal)对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠核转录因子E2相关因子2/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Nrf2/Keap1)信号通路及伤口愈合的影响。方法采用高脂高糖饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,并于足背部除毛剪皮至筋膜,制作面积约为3 mm×7 mm的溃疡创面建立DFU大鼠模型,随机分为DFU模型组(DFU组)、Sal低(Sal-L,0.1 g/(kg·d))、中(Sal-M,0.2 g/(kg·d))高(Sal-H,0.3 g/(kg·d))剂量组,阳性药物二甲双胍组(MET组,0.65 g/(kg·d)),另设血糖正常创面大鼠为对照组(NC组),连续灌胃2周。分别于治疗第7天、第14天后检测各组大鼠体重及空腹血糖(FBG)水平,免疫组化检测创面组织CD34表达情况,计算创面微血管密度(MVD);生物化学法测定创面组织MDA、SOD水平;免疫印迹(Western blot)检测创面组织Nrf2、Keap1蛋白表达。结果治疗第0天各组大鼠体重之间比较无统计学意义(P>0.05),各组DFU组、Sal-L组、Sal-M组、Sal-H组、MET组大鼠FBG水平均高于NC组(P<0.05);治疗第7天、第14天,与NC组比较,DFU组、Sal-L组、Sal-M组、Sal-H组、MET组大鼠体重、FBG水平、MDA含量、Keap1蛋白表达量均升高(P<0.05),创面愈合率、CD34阳性细胞、MVD、SOD活性、Nrf2蛋白表达量显著降低(P<0.05);与DFU组比较,Sal-L组、Sal-M组、Sal-H组、MET组大鼠体重、FBG水平、MDA含量、Keap1蛋白表达量均显著降低(P<0.05),创面愈合率、CD34阳性细胞、MVD、SOD活性、Nrf2蛋白表达量显著升高(P<0.05),其中Sal-L组与MET组差异无统计学意义(P>0.05)。结论Sal可能通过调节Nrf2/Keap1信号通路,增加DFU大鼠抗氧化能力,促进创面愈合。

Keap1/Nrf2信号通路与神经退行性疾病的研究进展

神经退行性疾病是一类大脑及脊髓神经元坏死或功能丢失导致的神经功能障碍,目前发病机制仍不明确。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)包含一段具有高度保守碱性亮氨酸拉链,广泛分布于不同细胞,可通过氧化应激、自噬、神经细胞凋亡、炎症反应等参与细胞内多条重要信号转导通路。在神经退行性疾病中,Nrf2的表达及活性异常是其病理及生理机制重要的一环,具有重要的研究意义,可能是神经退行性疾病的潜在治疗靶点,进一步明确Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/Nrf2信号通路对神经退行性疾病的病理作用,对探寻神经退行性疾病的预防及治疗有重要意义。

Keap1-Nrf2信号通路在机体氧化应激损伤防护中的研究进展

Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路是细胞防御氧化应激损伤的最重要机制之一,其调控的下游Ⅱ相代谢酶和抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。Keap1-Nrf2信号通路在多种疾病中扮演重要角色,并且临床上已经开始开展针对性的靶点药物研发,有望基于该通路设计与生产出特效生物医药。本文从Keap1-Nrf2信号通路的基本结构与氧化应激、调控机制及与各种疾病的关系等方面展开综述。

圣草酚调控MAPK和Nrf2/HO-1信号通路缓解非酒精性脂肪肝的作用及机制

目的研究圣草酚缓解非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用及可能机制。方法将16只C57BL/6J小鼠按体重随机分为对照组、NAFLD模型组和圣草酚低、高剂量组(50、100 mg/kg),每组4只。除对照组外,其余各组均使用高脂饲料诱导NAFLD模型。在预处理4周后,采取腹腔注射方式(0.01 mL/g)进行给药,每日1次,连续6周。测定小鼠体重、肝脏质量,观察小鼠肝组织病理损伤情况,测定小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和甘油三酯(TG)水平及肝组织中核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达。使用0.5 mmol/L油酸诱导HepG2细胞建立体外NAFLD模型,实验设置正常对照组、NAFLD模型组和圣草酚低、中、高浓度组(50、100、150μmol/L);给药组在诱导模型的同时加入圣草酚,培养24 h。观察细胞中脂质沉积情况,检测细胞中TG、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白[细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)]磷酸化水平和Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果体内实验中,与NAFLD模型组比较,圣草酚低、高剂量组小鼠体重、肝脏质量和血清中AST、ALT和TG的水平(圣草酚低剂量组小鼠血清AST水平除外)均显著降低(P<0.01),脂滴沉积形成的空泡数量显著减少,Nrf2、HO-1蛋白表达水平进一步升高(P<0.01)。体外实验中,与NAFLD模型组比较,圣草酚低、中、高浓度组细胞中脂质沉积减少(P<0.01),ROS、MDA、TG水平显著降低(P<0.05或P<0.01),ERK、JNK磷酸化水平均显著下调(P<0.01),Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论圣草酚可能通过抑制MAPK信号通路,进而激活Nrf2/HO-1信号通路来缓解NAFLD。

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨虾青素对创伤性脑损伤模型大鼠氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨虾青素对创伤性脑损伤(TBI)大鼠氧化应激和炎症反应的影响。方法将雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、虾青素低剂量组(20 mg/kg)、虾青素高剂量组(40 mg/kg)、虾青素+ML385组[虾青素40 mg/kg+核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)抑制剂ML38530 mg/kg],每组14只。除假手术组外,其余各组大鼠按改良的Feeney自由落体撞击法复制TBI大鼠模型。各药物组大鼠灌胃或腹腔注射相应药液,假手术组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。分别于药物干预后第1、3、7天对各组大鼠的神经功能进行评分;于药物干预后第7天,观察各组大鼠脑组织形态学变化并进行炎症浸润评分,观察其脑组织神经细胞超微结构,检测脑组织中氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)]、炎症反应指标[肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、诱导型一氧化氮合酶]含量和Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白及mRNA的表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠脑组织水肿明显并伴有大量炎症细胞浸润,神经细胞的细胞器形态受损、数量减少且超微结构破损严重;其神经功能评分,脑组织中SOD、CAT、GSH-Px、NO含量和Nrf2、HO-1、NQO1蛋白及mRNA的相对表达水平均显著降低,炎症浸润评分、MDA含量和炎症反应指标含量均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,低、高剂量虾青素可显著改善脑组织及神经细胞的病理状态和神经功能评分(虾青素低剂量组药物干预第1天除外),可剂量依赖性地升高脑组织中SOD、CAT、GSH-Px、NO含量和Nrf2、HO-1、NQO1蛋白及mRNA的相对表达水平,降低炎症浸润评分、MDA含量和炎症反应指标含量(P<0.05);而ML385可显著抑制虾青素的上述作用(P<0.05)。结论虾青素可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路而减轻TBI大鼠的氧化应激,缓解其神经功能损伤,降低炎症反应水平。

中药有效成分基于Nrf2/HO-1信号通路改善糖尿病视网膜病变的研究进展

糖尿病视网膜病变(DR)是指由长期高血糖引起的视网膜局部微血管病理改变,是威胁成人视力健康的重要原因。DR的发生机制多样,其中氧化应激贯穿全过程。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)是协调编码抗氧化和解毒酶基因表达的关键转录因子,血红素加氧酶-1(HO-1)是其诱导的一种重要的抗氧化酶,因此Nrf2/HO-1通路是氧化应激的关键环节。该通路被激活后可通过发挥抗炎、抗氧化等作用延缓DR的进展,是治疗DR的潜在靶点,但其具体作用机制未来仍需深入研究。

藜芦胺对人胶质母细胞瘤细胞U251增殖的影响及机制

目的 探究藜芦胺(VTM)对人胶质母细胞瘤(GBM)细胞U251增殖的影响及其潜在机制。方法 借助网络药理学方法,筛选VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点,并进行基因本体、京都基因和基因组百科全书富集分析。以U251细胞为对象,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、细胞形态变化观察、2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法、FerroOrange荧光探针法、Western blot实验对VTM抑制U251细胞增殖的作用及可能机制进行验证。结果 共筛选出VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点462个,富集于氧化应激、细胞凋亡等生物学过程,胞质囊泡、线粒体膜等细胞成分,影响二价铁离子(Fe^(2+))结合、DNA转录过程等分子功能,以及铁死亡、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路等。40、60、80、100、120、140μmol/L的VTM均可显著降低细胞存活率(P<0.01);40、80、120μmol/L的VTM可使细胞萎缩、细胞核破碎,可显著抑制其克隆形成,显著提高其活性氧(ROS)、Fe^(2+)水平,并可不同程度地上调核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白的表达,下调谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 VTM可抑制U251细胞的增殖,促进细胞内ROS和Fe^(2+)的蓄积,从而诱导铁死亡,上述作用可能与调控Nrf2/HO-1/GPX4信号通路有关。

Keap1-Nrf2和NF-κB信号通路介导脂多糖诱导的脑损伤效应研究

目的探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1⁃红系衍生的核因子2相关因子2(Keap1⁃Nrf2)和核因子κB(NF⁃κB)信号通路在脓毒症相关脑病(SAE)中的作用。方法40只雄性SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为4组(n=10):对照组和脂多糖(LPS)处理6、24、48 h组。根据小鼠一般状况和旷场实验评价小鼠的行为学变化。采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测小鼠外周血促炎性因子含量,采用抗氧化检测试剂盒检测脑组织抗氧化活性。实时定量PCR(qPCR)检测小鼠海马组织中Toll样受体4(Tlr4)、NF⁃κB、Keap1、Nrf2 mRNA含量,Western印迹分析NF⁃κB、Nrf2、Keap1和Tlr4蛋白的表达。结果与对照组相比,LPS 6 h组白细胞介素6(IL⁃6)血清浓度呈上升趋势,但差异无统计学意义,24、48 h达高峰(P<0.01);LPS 6 h和24 h组白细胞介素18(IL⁃18)血清浓度增加(P<0.01),但48 h组差异无统计学意义;脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性增加(P<0.05);除了LPS 24 h组旷场内中央区域时间差异无统计学意义,其他LPS组小鼠旷场内中央区域活动时间、活动路程及活动总路程均显著减少(P<0.01)。与对照组相比,LPS组小鼠海马区Tlr4、LPS 6 h、48 h组NF⁃κB和LPS 6 h组Keap1及Nrf2 mRNA表达增加(P<0.05);LPS组NF⁃κB、Keap1、Tlr4蛋白和LPS 24 h、48 h组Nrf2蛋白水平上升(P<0.05)。结论Keap1⁃Nrf2和NF⁃κB信号途径在脓毒症脑病中发挥一定作用。

食管癌全胸段切除后切口感染外周血单核细胞Keap1-Nrf2信号通路的变化及意义

目的分析食管癌全胸段切除后切口感染外周血单核细胞Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子(Nrf2)信号通路的变化及意义。方法选择2018年5月-2021年2月青海省人民医院收治的行全胸段切除术的食管癌患者96例,根据术后是否发生切口感染分为切口感染组34例和无切口感染组62例,采集感染患者标本进行病原菌分离、鉴定,检测两组患者外周血单核细胞Keap1-Nrf2信号通路相关基因表达及下游抗氧化酶、血清氧化应激指标水平、T淋巴细胞亚群水平变化。结果34例感染患者共分离病原菌46株,以革兰阴性菌为主(67.39%);切口感染组患者外周血单核细胞keapl mRNA表达量高于无切口感染组患者(P<0.05),Nrf2、抗氧化反应元件(ARE)以及血红素加氧酶(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO-1)mRNA表达量低于无切口感染组患者(P<0.05);切口感染组患者血清丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)水平高于无切口感染组患者(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平低于无切口感染组患者(P<0.05);切口感染组患者外周血T淋巴细胞亚群CD_(3)^(+)、CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)水平低于无切口感染组患者(P<0.05)。结论食管癌全胸段切除后切口感染与外周血单核细胞Keap1-Nrf2信号通路表达抑制存在密切关联,可能与增加氧化应激及抑制免疫反应有关,明确术后感染原因及发病机制对改善患者预后至关重要。

Nrf2为靶点治疗支气管肺发育不良的研究进展

支气管肺发育不良(BPD)是早产儿最常见的慢性肺部疾病,其主要的病理特征是肺泡发育不良以及肺血管发育障碍,存在包括神经发育迟缓在内的长期后遗症,临床转归较差。目前关于BPD发病的确切机制尚不清楚,但研究已发现高氧暴露引起的氧化应激是早产儿BPD的重要危险因素。核转录因子E2相关因子2(Nrf2)是抗氧化机制的重要调节因子,有望为BPD的治疗提供新靶点。本文综述了BPD与Nrf2的相关性,以及Nrf2为靶点治疗支气管肺发育不良及其相关药物的研究进展,以期为临床BPD的治疗提供新的治疗方向。

麝香对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的:探讨麝香对阿尔兹海默症(AD)细胞模型氧化应激损伤及凋亡的保护作用。方法:使用LC-MS/MS法分析麝香化学成分。通过β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))诱导PC12细胞建立体外AD细胞模型,采用CCK-8法测定PC12细胞存活率,考察Aβ_(1-42)对PC12的细胞毒性及麝香对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞损伤的保护作用;采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞凋亡的影响,JC-1法检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞线粒体膜电位的影响;采用探针DCFH-DA检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞内活性氧(ROS)的影响;采用超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒检测麝香对Aβ_(1-42)致PC12细胞内抗氧化酶活性水平的影响;采用Western blot法检测PC12细胞内相关凋亡蛋白BAX、BCL-2和Cleaved caspase-3的表达以及核因子红细胞2相关因子2(Nrf-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)和Kelch样ECH相关蛋白1(Keap 1)的表达。结果:通过LC-MS/MS法鉴定出麝香的7种化学成分分别为:次黄嘌呤、雄烯二酮、表睾酮、十六碳酰胺、麝香酮、油酸酰胺、硬脂酰胺。与空白对照组比较,模型对照组PC12细胞存活率显著降低(P<0.01),细胞内ROS水平、细胞凋亡率显著升高(P<0.01),线粒体膜电位明显降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活力明显降低(P<0.05或P<0.01),BAX、Cleaved caspase-3和Keap 1蛋白表达明显上调,BCL-2、Nrf-2和HO-1蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,麝香0.025、0.05、0.1 mg/mL组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞内ROS水平、细胞凋亡显著减少(P<0.01),SOD活力明显升高(P<0.05或P<0.01);其中0.05和0.1 mg/mL组中线粒体膜电位显著升高(P<0.01),BAX、Cleaved caspase-3和Keap 1蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);麝香0.1 mg/mL组GSH-Px活力显著升高(P<0.01),BCL-2、Nrf-2和HO-1蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:麝香通过Nrf-2/HO-1通路显著改善Aβ_(1-42)诱导的AD细胞模型的氧化应激和凋亡。

热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜Keap1-Nrf2/ARE/HO-1信号通路的影响

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化元件(ARE)/血红素加氧酶(HO-1)信号转导通路的影响,从氧化应激角度探讨热补针法治疗RA的机制。方法:新西兰兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、捻转补法组、热补针法组,每组6只。通过卵蛋白诱导联合低温冷冻法复制RA寒证模型。平补平泻组、捻转补法组、热补针法组分别于双侧“足三里”施以平补平泻法、捻转补法及热补针法,每次30 min,1次/d,治疗7 d。治疗后观察各组家兔的一般情况;测定各组家兔膝关节周径、痛阈值;彩色超声诊断仪观察家兔膝关节滑膜变化并进行影像评级;HE染色观察各组家兔膝关节滑膜组织病理形态并评分;荧量定量PCR法检测各组家兔膝关节滑膜组织Keap1、Nrf2、HO-1、谷胱甘肽氧化酶(GSH-PX)1 mRNA表达水平;Western blot法检测各组家兔膝关节滑膜组织HO-1蛋白表达量。结果:正常组家兔摄食、饮水正常,活动灵敏,精神状态良好;模型组家兔肢体蜷缩,精神萎靡,脱毛严重,活动量小,饮食、饮水量少,皮肤青紫,双后腿蜷曲跛行,触之躲避行为明显。针刺后,各针刺组家兔较模型组一般情况均好转、活动量增大。与正常组比较,模型组家兔膝关节周径明显增大(P<0.05);与模型组比较,各针刺组膝关节周径缩小(P<0.05)。与正常组比较,模型组家兔的膝关节病理积分,滑膜组织Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),滑膜组织Keap1、GSH-PX1 mRNA表达量和痛阈降低(P<0.05)。与模型组比较,各针刺组痛阈,滑膜组织Nrf2、GSH-PX1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达升高(P<0.05),膝关节周径、病理积分及滑膜组织Keap1 mRNA表达量降低(P<0.05)。热补针法组痛阈,Nrf2、GSH-PX1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达高于平补平泻组和捻转补法组(P<0.05),膝关节病理积分及滑膜Keap1 mRNA表达量低于平补平泻组和捻转补法组(P<0.05)。结论:热补针法可能通过调控Keap1-Nrf2/ARE/HO-1信号转导通路提高机体抗氧化应激能力,是其治疗RA的机制之一。

灯盏花素对肝纤维化大鼠的干预作用及机制

目的基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad2/胞外信号调节激酶1(ERK1)通路和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路,探讨灯盏花素对肝纤维化(HF)大鼠的干预作用及潜在机制。方法将60只大鼠随机分为正常对照组,模型组,灯盏花素低、中、高剂量组(5.4、10.8、21.6 mg/kg)和秋水仙碱组(阳性对照,0.45 mg/kg),每组10只,雌雄各半。除正常对照组外,其余各组大鼠均以四氯化碳诱导构建HF模型。随后,各药物组大鼠灌胃相应药液,每天1次,连续28 d。观察各组大鼠的肝脏外观并计算其肝脏系数,检测其血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和肝组织中ALT、AST、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,观察其肝组织炎症和纤维化情况,检测肝组织中TGF-β1、Smad、ERK1、Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏可见大面积的白色结节灶、明显的炎症细胞浸润和胶原纤维沉积;其体重,肝组织中SOD、GSH-Px水平和Nrf2、HO-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P<0.05);肝脏系数,Masson染色阳性面积百分比,血清及肝组织中ALT、AST水平,肝组织中MDA水平和TGF-β1、Smad2、ERK1、Keap1蛋白及mRNA的表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各药物组大鼠肝组织病变均有所改善,上述定量指标普遍逆转(P<0.05)。结论灯盏花素对大鼠HF有较好的干预作用,其作用可能与抑制TGF-β1/Smad2/ERK1通路来抗纤维化,调控Keap1/Nrf2/HO-1通路来抑制氧化应激有关。

氧化苦参碱对帕金森小鼠中枢神经系统氧化应激的影响

目的探讨氧化苦参碱对帕金森小鼠中枢神经系统氧化应激的影响及其可能机制。方法将80只C57BL/6小黑鼠随机分为正常组、模型组及氧化苦参碱低、高剂量组,每组20只。模型组及氧化苦参碱低、高剂量组小鼠分别给予1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氢吡啶(MPTP) 30 mg·kg^-1溶入0.6 mL生理盐水腹腔注射建立帕金森病小鼠模型,正常组小鼠腹腔注射生理盐水0.6 mL,每日1次,连续7 d。动物模型制备成功后,氧化苦参碱低、高剂量组小鼠分别给予氧化苦参碱150、250 mg·kg^-1溶入0.2 mL生理盐水中腹腔注射,正常组、模型组小鼠分别给予0.2 mL生理盐水腹腔注射,均每日1次,连续27 d。小鼠处死前每日测体质量。分别于末次注射MPTP后的第1、7、27天采用旷场实验测量各组小鼠水平运动距离。末次注射MPTP后的第27天处死小鼠取脑组织,苏木精-伊红染色观察4组小鼠脑组织黑质纹状体处神经元损伤情况;比色法检测4组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量,末端脱氧核苷酸介导的d UTP缺口末端标记测定法检测4组小鼠脑组织细胞凋亡情况,Western blot法检测4组小鼠脑组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子红细胞系-2相关因子2(Nrf2)、抗氧化反应元件(ARE)蛋白表达。结果造模前,4组小鼠体质量比较差异无统计学意义(F=0.214,P> 0.05);造模后5、9、13、17、21、27 d,4组小鼠体质量比较差异均有统计学意义(F=1.057、1.087、1.344、5.374、3.582、6.274,P> 0.05),其中模型组及氧化苦参碱低、高剂量组小鼠体质量均低于正常组(P <0.05),氧化苦参碱低剂量组小鼠体质量高于模型组(P> 0.05);氧化苦参碱高剂量组小鼠造模后第17、21、27天的体质量与模型组比较显著增高(P <0.05);氧化苦参碱高剂量组小鼠造模后第27天的体质量高于低剂量组(P <0.05)。末次注射MPTP后第1天起,模型组小鼠水平运动距离即显著短于正常组(P <0.05);第1、7天时,氧化苦参碱低、高剂量组小鼠水平运动距离与模型组比较差异无统计学意义(P﹥0.05);第27天时,氧化苦参碱低、高剂量组小鼠的水平运动距离大于模型组(P <0.05);末次注射MPTP后第1、7、27天,氧化苦参碱高剂量组小鼠水平运动距离与低剂量组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。末次注射MPTP后第27天,模型组及氧化苦参碱低、高剂量组小鼠脑组织细胞损伤率高于正常组(P <0.05);氧化苦参碱低、高剂量组小鼠脑组织细胞损伤率低于模型组(P <0.05);氧化苦参碱高剂量组小鼠脑组织细胞损伤率低于氧化苦参碱低剂量组(P <0.05)。4组小鼠脑组织中SOD、GSH-Px、GSH、MDA相对表达量比较差异均有统计学意义(F=11.374、10.925、6.688、9.346,P <0.05)。与正常组比较,模型组及氧化苦参碱低、高剂量组小鼠脑组织中SOD、GSH-Px、GSH含量显著降低,MDA含量显著增高(P <0.05);氧化苦参碱低剂量组小鼠脑组织中SOD、GSH-Px、GSH、MDA相对表达量与模型组比较差异无统计学意义(P> 0.05);氧化苦参碱高剂量组小鼠脑组织中SOD、GSH-Px、GSH相对表达量显著高于模型组和低剂量组(P <0.05),MDA相对表达量显著低于模型组和低剂量组(P <0.05)。与正常组比较,模型组、氧化苦参碱低、高剂量组小鼠脑组织细胞凋亡率显著升高(P <0.05);与模型组比较,氧化苦参碱低、高剂量组小鼠脑组织细胞凋亡率显著减少(P <0.05);与氧化苦参碱低剂量组比较,高剂量组小鼠脑组织细胞凋亡率显著减少(P <0.05)。4组小鼠脑组织Keap1、Nrf2、ARE蛋白表达比较差异均有统计学意义(F=10.954、8.241、10.699,P <0.05)。与正常组比较,模型组及氧化苦参碱低、高剂量组小鼠脑组织中Keap1蛋白相对表达量显著降低,Nrf2、ARE蛋白相对表达量显著升高(P <0.05);氧化苦参碱低剂量组小鼠脑组织中Keap1、ARE、Nrf2蛋白相对表达量与模型组比较差异无统计学意义(P> 0.05);与模型组和氧化苦参碱低剂量组比较,氧化苦参碱高剂量组小鼠脑组织中Keap1蛋白相对表达量显著降低,Nrf2、ARE蛋白相对表达量显著升高(P <0.05)。结论氧化苦参碱能有效抑制帕金森小鼠中枢神经系统氧化应激反应,该作用可能是通过激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路活性发生的。

岩藻黄素对小鼠非酒精性脂肪性肝病的修复作用

目的:探究岩藻黄素对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的修复作用及其机制。方法:将52只C57BL/6小鼠随机分成4组,正常组14只,其余为实验组,实验组给予8周的高脂饮食喂养之后,再分为模型组、岩藻黄素低剂量和高剂量组,给予灌胃6周,每日1次。每周记录小鼠的体质量,第14周结束时小鼠禁食12 h后全部处死。后续分别测定各组小鼠血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活力,总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C)、游离脂肪酸、脂联素和瘦素含量;检测肝脏组织匀浆液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子α含量;透射电镜下观察肝脏的组织病理学变化并采用蛋白免疫印迹法检测肝脏中5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)和Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)信号通路蛋白表达情况。结果:与模型组相比,岩藻黄素组中的TC、TG、LDL-C、ALT、AST显著降低(P<0.05),HDL-C显著升高(P<0.05),且降低了瘦素水平,增加了脂联素分泌,GSH-Px、SOD、CAT升高(P<0.05),MDA降低(P<0.05),且炎症因子的水平降低。苏木精-伊红染色、油红O染色、糖原染色和透射电镜结果显示岩藻黄素组肝脏组织学结构好转,趋近于正常组。蛋白免疫印迹法结果显示岩藻黄素治疗可上调AMPK信号通路中磷酸化5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物激活受体α、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶、肉碱脂酰转移酶1,下调固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶表达;抑制Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/Nrf2信号通路中Keap-1的水平,提高Nrf2及其下游抗氧化蛋白血红素氧合酶1、NAD(P)H-醌氧化还原酶1和谷氨酸-半胱氨酸连接酶的表达水平;下调TLR4信号通路中TLR4蛋白的表达,抑制髓样分化因子88、磷酸化人核因子κB抑制蛋白α和磷酸化核因子κB蛋白(p65)的表达。结论:岩藻黄素可通过调节脂质代谢、减少氧化应激和调节炎症等途径修复高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病。

鸦胆子苦醇对KEAP1突变A549肺癌细胞的抑制作用

目的探讨鸦胆子苦醇对Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(KEAP1)突变A549肺癌细胞的抑制作用。方法CCK-8法检测鸦胆子苦醇20、40、80、160 nmol/L作用24 h的过表达KEAP1野生型和突变型A549细胞的细胞存活率,实时PCR法检测鸦胆子苦醇0、20、40 nmol/L作用4 h和鸦胆子苦醇20 nmol/L作用0、4、8 h的过表达KEAP1突变型A549细胞中核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)基因及其下游基因硫氧还蛋白(TXN)、血红素加氧酶1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA表达,Western blot法检测鸦胆子苦醇0、20、40 nmol/L作用4 h的过表达KEAP1突变型A549细胞中Nrf2和HO-1基因的蛋白表达。结果鸦胆子苦醇不同浓度作用的过表达KEAP1突变型A549细胞的细胞存活率低于过表达KEAP1野生型A549细胞(P<0.01)。鸦胆子苦醇20、40 nmol/L作用的A549细胞中TXN、HO-1、NQO1 mRNA表达均下降,且鸦胆子苦醇20 nmol/L作用4、8 h的A549细胞中TXN、HO-1、NQO1 mRNA表达均下降(P<0.01)。鸦胆子苦醇40 nmol/L作用的A549细胞中Nrf2和HO-1基因的蛋白表达下降(P<0.01)。结论鸦胆子苦醇对过表达KEAP1突变型A549细胞抑制作用强于过表达KEAP1野生型,且其对肺癌的抑制作用可能是通过下调Nrf2基因及其下游基因表达来实现。