大负荷运动诱导大鼠骨骼肌损伤对其自噬超微结构及Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的影响

目的:观察大负荷离心运动对大鼠骨骼肌自噬超微结构及自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ的影响。方法:48只SD雄性大鼠适应性训练后随机分成对照组(C,n=8)和大负荷离心运动组(E,n=40)。E组于跑台进行90 min下坡跑,运动后0 h、12 h、24 h、48 h和72 h取比目鱼肌,透射电镜观察其自噬体超微结构变化;Western blot检测Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达;免疫荧光观测LC3的定位及含量变化。结果:E组比目鱼肌自噬体数量在运动后0 h、12 h和24 h均有增加,并伴LC3自噬荧光明显增强(P<0.01),同时运动后48 h自噬荧光仍有显著性升高(P<0.05);Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ在大负荷离心干预后表达升高(P<0.05),运动后12 h^24 h达到峰值(P<0.01),直至运动后72 h完全恢复。结论:大负荷离心运动可诱导骨骼肌自噬超微结构变化,自噬蛋白表达增强,以上可能是运动损伤的骨骼肌功能下降的原因之一。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

远志皂苷调节细胞自噬抗Aβ25-35诱导的SH-5Y5Y细胞凋亡的研究

目的从细胞自噬角度探讨远志皂苷(tenuifolin,Ten)抑制Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的作用及分子机制。方法建立Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型,通过MTT法和流式细胞术测定细胞活力和凋亡率,单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测自噬小泡的变化,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平的变化。结果 Ten抑制Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞活力降低及凋亡率增加,减少Aβ25-35诱导的自噬体增加,显著降低自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平。结论 Ten通过调节Aβ25-35诱导的细胞自噬,从而抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,发挥神经保护作用。

PARK2介导的线粒体自噬对锰诱导的神经细胞毒性的作用

目的用SK-N-SH细胞构建PARK2基因过表达/敲除稳转株,用于阐明PARK2和锰毒性的关系。方法慢病毒转染SK-N-SH细胞构建PARK2基因过表达/敲低细胞稳转株,分为3组:空载质粒组、PARK2过表达组和PARK2敲低组。以900μM Mn^(2+)对各组细胞染毒24 h后,用荧光探针检测细胞内ROS水平,电镜下观察细胞内自噬小体数量,WB法检测OPTN、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养基中DA水平。结果与空载质粒组比,PARK2过表达组细胞内Parkin蛋白表达增多、ROS水平降低、自噬小体数量增多、P62和OPTN蛋白表达下调、LC3Ⅱ/Ⅰ值增加及DA水平升高(P<0.05)。PARK2敲低组细胞内Parkin蛋白表达降低、P62和OPTN蛋白表达上调(P<0.05),而ROS水平、自噬小体数量、LC3Ⅱ/Ⅰ值以及DA含量与空载质粒组无差异。结论过表达PARK2基因能提高Parkin蛋白的表达,促进细胞内线粒体自噬来清除受损的线粒体,从而保护细胞。OPTN和P62蛋白可能作为PARK2的下游蛋白参与线粒体自噬过程。

痰瘀同治方调控自噬对心肌缺血区和动脉粥样硬化斑块内血管新生不同作用的实验研究

[目的]明确痰瘀同治方对心肌缺血区和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块内血管新生的双向调节作用,探讨自噬在其中的调控机制。[方法]选取载脂蛋白E基因敲除(Apolipoprotein E gene knockout,ApoE-/-)小鼠20只,随机分为模型对照组和痰瘀同治(Tanyu Tongzhi,TYTZ)组,每组10只,饲喂高脂饲料;另取C57BL/6J小鼠10只为正常对照组,饲喂基础饲料。饲喂4周后,模型对照组和TYTZ组皮下注射异丙肾上腺素针100mg/kg,连续2d,正常对照组皮下注射等量0.9%氯化钠注射液。造模成功后4周,TYTZ组给予TYTZ方流浸膏2145mg/(kg·d),以蒸馏水稀释成0.4mL灌胃,模型对照组和正常对照组给予等量蒸馏水灌胃。给药6周后,用CD31免疫组化染色观察心肌缺血区和主动脉的新生血管密度。Western blot检测心肌组织和主动脉微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅱ/Ⅰ蛋白表达。[结果]免疫组化染色结果显示,模型对照组心肌组织和主动脉组织CD31表达均显著高于正常对照组(P<0.05);TYTZ组心肌组织CD31表达明显高于模型对照组(P<0.05),而主动脉组织CD31表达则明显低于模型对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,模型对照组心肌组织和主动脉组织LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平均明显高于正常对照组(P<0.05);TYTZ组心肌组织LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著高于模型对照组(P<0.05),而主动脉组织LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达则明显低于模型对照组(P<0.05)。[结论]TYTZ方在抑制AS斑块内血管新生的同时能够促进心肌缺血区的血管新生,该方对自噬水平的双向调节作用可能是其中的调控机制。

养肺控瘤方通过Beclin-1促进自噬并抑制肺癌细胞A549转移

目的研究养肺控瘤方(yangfeikongliu formula,YKF)在肺癌A549细胞自噬和转移中的作用。方法大鼠的YKF的给药剂量将通过对人体临床的剂量换算后得出,给大鼠灌服人体等效剂量的5倍、10倍和15倍的YKF,并收集它们的血液以制备5×、10×和15×的含药血清。使用含有10%YKF含药血清的培养基对A549细胞进行培养。通过电子显微镜、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比例和自噬流串联mRFP-GFP-LC3来评估A549细胞自噬情况。通过Transwell测定法评估细胞迁移和侵袭,并使用CCK-8测定细胞活性。结果3种剂量YKF含药血清均抑制了肿瘤细胞活性,增加了A549细胞的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和p62及Beclin-1表达水平,表明YKF可促进A549细胞自噬死亡。支持本结果的指标为,5×YKF含药血清诱导的LC3点状点的增加在3-MA抑制自噬后被消除。此外,研究观察到沉默Beclin-1可以废除YKF诱导的LC3Ⅱ/Ⅰ比值和p62表达的增加,以及细胞活性、迁移和侵袭的减少。结论养肺控瘤方具有促进肺癌细胞A549自噬和抑制转移的抗肿瘤活性,且Beclin-1是其抗肿瘤活性的关键分子。

钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂对2型糖尿病大鼠心功能的保护作用及其机制研究

目的研究钠-葡萄糖共转运蛋白-2(SGLT2)抑制剂达格列净对糖尿病大鼠心功能和自噬水平的影响。方法SPF级健康成年雄性SD大鼠32只,体质量220~230g,采用随机数表法将大鼠分为对照组(Ctrl组)、糖尿病组(Dia组)、糖尿病+达格列净组(Dia+Dap组)和糖尿病组+达格列净+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(Dia+Dap+3-MA组),每组8只。高脂高糖饲料喂养4周,低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。测量空腹血糖(FBG)和胰岛素(INS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)确定2型糖尿病造模成功。造模成功后,继续饲养4周,Dia+Dap组大鼠每日灌胃给予达格列净[0.1 mg/(kg·d)];Dia+Dap+3-MA组大鼠尾静脉注射3-MA[15mg/(kg·周)]。每周检测各组大鼠体质量和血糖水平。4周后采用超声心动图测定各组大鼠心功能参数;Westernblot法检测微管相关蛋白轻链Ⅰ和Ⅱ(LC3Ⅰ和LC3Ⅱ)自噬相关蛋白p62的表达,计算LC3Ⅱ与LC3Ⅰ的比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)。结果STZ腹腔注射一周后,糖尿病组和对照组大鼠的FBG[(16.11±4.87)mmol/L vs(5.39±0.96)mmol/L]及HOMA-IR(5.77±2.43)vs(1.51±0.34)比较,糖尿病组明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);与Ctrl组比较,Dia组大鼠左室射血分数和舒张早期充盈峰值流速(E峰)/舒张晚期最大流速(A峰)比值降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,p62表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05);与Dia组比较,Dia+Dap组大鼠左室射血分数和E/A比值升高,LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高,p62表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);与Dia+Dap组比较,Dia+Dap+3-MA组大鼠左室射血分数和E/A比值降低,且LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,而p62表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂能够改善2型糖尿病引起的心脏收缩和舒张功能,这种保护作用可能与提高糖尿病心肌的自噬水平相关。

熊果酸通过促进自噬保护H_(2)O_(2)诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤

目的研究熊果酸(Ursoic acid,UA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及对细胞自噬的调节作用。方法以200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)诱导24 h建立H9C2心肌细胞氧化应激损伤模型。将H9C2细胞随机分为6组:正常组、溶剂组、模型组及熊果酸高、中、低剂量(10、5、2.5μmol·L^(-1))组。采用CCK-8法检测细胞存活率;EdU法检测细胞增殖能力;TBA法检测丙二醛(MDA)脂质氧化水平;WST-8法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western Blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及p62的表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞的存活率及EdU阳性细胞(红色荧光)百分比均明显降低(P<0.05);细胞内MDA脂质氧化水平明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05);LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值明显上调(P<0.05),p62蛋白表达明显下调(P<0.05)。与模型组比较,熊果酸高、中、低剂量均能明显提高H9C2的细胞存活率及EdU阳性细胞百分比(P<0.05);降低MDA水平(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05);上调LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值(P<0.05),下调p62蛋白表达水平(P<0.05)。结论熊果酸对H_(2)O_(2)诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤具有明显保护作用,可能与其促进细胞自噬有关。

枸杞多糖对脊髓神经细胞辐射损伤后的保护作用研究

目的:研究枸杞多糖(LBP)对辐射损伤脊髓神经(SCN)细胞的保护作用,并观察自噬相关蛋白LC3 II/I表达的变化,探讨LBP对辐射损伤保护作用的机制。方法:体外培养SCN细胞,应用不同剂量(0、2、6、10 Gy)X射线辐照损伤后,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率确定最佳辐射剂量,建立辐射损伤模型。用不同浓度(15、25、40 mg/L)LBP对辐射损伤的SCN细胞进行干预后,分别采用MTT法检测细胞存活率以确定最适LBP干预剂量;用最佳辐射剂量和LBP干预后,采用Western blot和免疫组化法检测自噬相关蛋白LC3 II/I的表达。结果:X射线辐照后,SCN细胞存活率在2～10 Gy范围内随着照射剂量的增加而逐渐降低,和正常对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);MTT实验结果显示,与辐射组相比,不同浓度LBP干预后SCN细胞存活率均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),故确定10 Gy X射线照射和40 mg/L LBP干预进行后续造模。免疫组化和Westernblot检测结果均显示,与正常对照组相比,辐射组细胞的自噬相关蛋白LC3 II/I表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与辐射组相比,LBP+辐射组细胞LC3 II/I蛋白表达亦明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:LBP对体外培养的脊髓神经元辐射损伤具有保护作用,可能与LBP促进自噬相关蛋白LC3 II/I表达有关。

夹脊电针通过PTEN通路对脊髓损伤自噬的影响

目的:观察抑制PTEN后,夹脊电针对脊髓损伤(SCI)大鼠后肢运动功能和脊髓组织中LC3-Ⅱ/Ⅰ、mTOR和STAT3含量的影响,探究夹脊电针干预SCI的疗效机制。方法:雄性SD大鼠随机分为电针(EA)组、bpV组、EA+bpV组、模型(Model)组和假手术(Sham)组,每组分为1、3、7、14 d时间点,每个时间点每组6只。采用Allen's方法造模,造模成功后第1天起,EA组针刺损伤部位上、下各一节段旁开约0.3 mm,左右各2针,上正下负连接电麻仪100 Hz连续脉冲波30 min/d。bpV组每日腹腔注射bpV(HOpic)0.2 mL。EA+bpV组在每日注射bpV后10 min进行电针治疗;Model组、Sham组和EA组每日腹腔注射等量生理盐水。各组在治疗1、3、7、14 d后第2天取材。在每日治疗前和取材前采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能。Elisa法检测脊髓组织中LC3-Ⅱ/Ⅰ、mTOR和STAT3的表达情况。结果:BBB评分结果显示EA组、bpV组和EA+bpV组评分在各时间点均显著高于模型组(P<0.05),EA组与bpV组之间无显著性差异(P>0.05),EA+bpV组评分显著高于EA组和bpV组(P<0.05)。Elisa结果显示EA组、bpV组和EA+bpV组均可显著性增高LC3-Ⅱ/Ⅰ和STAT3水平(P<0.05),降低mTOR水平(P>0.05)。结论:夹脊电针可能通过抑制PTEN通路促进大鼠SCI后自噬水平,有助于运动功能的恢复,这可能成为夹脊电针治疗SCI促进神经修复的科学依据。

二苯乙烯苷减轻小鼠急性脑缺血再灌注后的氧化应激损伤及其对自噬的影响

目的 研究小鼠急性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后二苯乙烯苷(TSG)对自噬作用的影响及其神经保护作用。方法 雄性昆明种小鼠100只,随机分为假手术组、模型组和TSG低、中、高剂量组(3、6、12 mg/kg)。采用双侧颈总动脉结扎法建立急性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注24 h,于缺血和再灌注前尾静脉注射给药各1次。断头取脑检测脑组织含水量,采用试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,HE染色检测小鼠脑组织病理变化,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白的表达。结果 与模型组比较,TSG组脑皮层神经元的病理性损伤较轻,神经元数量增加,形态改善,核固缩减轻;TSG中、高剂量组显著降低脑组织含水量及MDA的含量,并可显著升高血清中SOD活性(P <0. 01),TSG高剂量组亦可显著抑制自噬相关基因Atg6 (Beclin1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/Ⅰ)蛋白的表达(P <0. 05)。结论 TSG对小鼠急性CIRI具有很好的神经保护作用,作用机制可能与抑制CIRI中自噬激活有关。

心阳片通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片调节心肌细胞自噬改善心力衰竭(Heart failure,HF)小鼠心功能的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组,模型组,心阳片低、中、高剂量组(455、910、1820 mg·kg^-1)及3-甲基腺嘌呤组(15 mg·kg^-1,腹腔注射给药),每组8只;采用主动脉弓缩窄术复制HF小鼠模型;按上述剂量灌胃给药,灌胃体积为8 mL·kg^-1,每天给药1次,连续4周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能:小鼠左心室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS);采用q PCR法检测小鼠心脏组织HF生物标记物B型钠尿肽(BNP)mRNA的表达;采用Western Blot法检测小鼠心肌细胞自噬相关蛋白Beclin-1及LC3BⅡ/Ⅰ的表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF、LVFS显著降低(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组比较,心阳片低、中、高剂量组及3-甲基腺嘌呤组小鼠的LVEF、LVFS显著升高(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论心阳片可能通过抑制心肌细胞过度自噬改善HF小鼠的心功能。

心阳片通过调节RAGE介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片通过调节晚期糖基化终产物受体(RAGE)介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、3-甲基腺嘌呤组(自噬抑制剂,15 mg·kg^(-1))以及心阳片低、中、高剂量组(455、910、1 820 mg·kg^(-1)),每组10只;另将10只经基因型鉴定确认为RAGE-/-的小鼠作为RAGE敲除组。采用主动脉弓缩窄术(TAC)建立压力负荷性心力衰竭小鼠模型。模型复制成功后,按上述剂量对心阳片各剂量组小鼠进行灌胃给药,3-甲基腺嘌呤组进行腹腔注射给药,其余组别灌胃等容积生理盐水,每天给药1次,连续4周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能,采集小鼠左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS);使用Masson染色观察小鼠心肌组织纤维化程度;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠心脏左室心肌组织中的RAGE蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ的表达情况。结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF及LVFS明显降低(P<0.05),心肌纤维化面积明显增加(P<0.05),RAGE蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ的表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,RAGE敲除组、3-甲基腺嘌呤组及心阳片低、中、高剂量组小鼠的LVEF和LVFS明显升高(P<0.05),心肌纤维化面积明显减少(P<0.05),RAGE、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论心阳片可能通过调节RAGE介导的自噬,从而改善心力衰竭小鼠的心功能。

活血化瘀解毒方对脑缺血再灌注大鼠脑细胞自噬的影响

目的 探讨活血化瘀解毒方对脑缺血再灌注大鼠脑细胞自噬的影响。方法 80只SD大鼠随机分为假手术组12只、手术组66只。手术组采用线栓法制备大脑中动脉闭塞脑缺血/再灌注(MCAO)模型,假手术组仅分离血管不插栓。大鼠清醒后,进行神经功能缺损(mNss)评分,手术组根据评分情况进行分层随机分组,分为模型组、依达拉奉组、活血化瘀解毒方(HXHYJDF)组、3-MA组、3-MA+HXHYJDF组,每组各12只。各组予以相应干预,7d后再次进行mNss评分,而后处死取材。通过血液流变学观察大鼠腹主动脉血(低、中、高切边下全血黏度及血浆黏度)血瘀情况;HE染色观察大鼠缺血侧脑皮质层组织病理形态变化;透射电镜观察大鼠脑缺血侧皮质层神经细胞自噬小体超微结构;Western blot法检测大鼠脑缺血侧皮质组织ATG-13(自噬相关蛋白13)、VPS34(哺乳动物中的第III类PI3 Kinase)、LC3(微管相关蛋白1轻链3)蛋白表达情况。结果 (1)与假手术组相比,模型组第1天神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),且第7天评分未有明显降低,低、中、高切边下全血黏度及血浆黏度均升高(P<0.05),病理改变明显,电镜下神经细胞结构损伤,线粒体肿胀,自噬泡清晰可见,ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显增加(P<0.05)。(2)与模型组相比,各药物干预组神经功能缺损评分第1天差异无统计学意义(P>0.05),第7天评分均明显降低(P<0.05),低、中、高切边下全血黏度及血浆黏度水平均有所下降(P<0.05),脑组织病理改变有所改善,电镜下神经细胞结构损伤减轻,可见轻微肿胀线粒体结构,未见明显自噬体结构,依达拉奉组及HXHYJDF组ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显减少(P<0.05),3-MA组可能由于3-MA对ⅠPI3K和ⅢPI3K时相性抑制,ATG-13、VPS34表达无明显降低(P>0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平较HXHYJDF组也有明显升高(P<0.05),而3-MA+HXHYJDF组较3-MA组ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达均有不同程度的下调。结论 活血化瘀解毒方可减轻脑缺血再灌注大鼠脑损伤,可能与抑制细胞自噬,下调自噬相关蛋白ATG-13、VPS34、LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平有关。