8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者血糖在目标范围内时间的相关性及预测糖尿病周围神经病变的价值

目的探讨8-异前列腺素F2α(8-isoPGF2α)、镍纹样蛋白(Metrnl)、微管相关蛋白3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/微管相关蛋白-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)与2型糖尿病(T2MD)患者血糖在目标范围内时间(TIR)的相关性及对糖尿病周围神经病变(DPN)预测价值。方法选取2020年5月至2022年10月新乡医学院第一附属医院收治的187例T2DM患者进行前瞻性研究,根据是否合并DPN分为DPN组(n=48)和无DPN组(n=139)。比较两组患者及根据TIR四分位数分组的患者8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ水平,采用Pearson相关性分析8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR相关性,采用多因素Logistic回归分析DPN的相关影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)评价8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ预测DPN的价值。结果DPN组患者的TIR为(51.43±7.68)%,明显低于无DPN组的(56.94±8.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);DPN组患者的8-isoPGF2α、Metrnl分别为(162.78±51.33)pg/mL、(259.18±74.42)pg/mL,明显高于无DPN组的(129.56±43.00)pg/mL、(208.37±65.61)pg/mL,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ为0.89±0.27,明显低于无DPN组的1.15±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);根据TIR第25、50、75百分位数将全部患者分为Q1~Q4四组,8-isoPGF2α、Metrnl在Q4组最低,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ在Q4组最高;8-isoPGF2α、Metrnl随着TIR降低逐渐升高,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ随着TIR降低而降低,四组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,8-isoPGF2α、Metrnl与TIR呈显著负相关(r=-0.786、-0.665,P<0.01),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与TIR呈显著正相关(r=0.711,P<0.01);多因素Logistic回归分析结果显示,TIR、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ是DPN的独立相关保护因素(P<0.05),8-isoPGF2α、Metrnl是DPN的独立相关危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,单一指标中,Metrnl预测DPN的AUC最大(0.830),特异度最高(87.05%),8-isoPGF2α+Metrnl+LC3B-Ⅱ预测DPN的AUC为0.923(95%CI:0.875~0.957),大于Metrnl,预测敏感度为87.50%,特异度为85.61%(P<0.05)。结论8-isoPGF2α、Metrnl、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ与T2MD患者TIR有关,均是患者并发DPN的预警因素。联合检测三者能为临床分层管理和早期识别DPN高风险人群提供参考。

LC3B-Ⅱ在不同级别胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3B-Ⅱ,LC3BⅡ)在不同级别胶质瘤中的表达及意义。方法:免疫组化法检测45例不同级别胶质瘤中LC3B-Ⅱ的表达,并结合临床资料分析其与胶质瘤临床特征之间的关系。结果:LC3B-Ⅱ在高级别胶质瘤组织中的表达高于低级别胶质瘤组织,差异具有统计学意义。胶质瘤组织中LC3B-Ⅱ的表达不受年龄、性别因素的影响。结论:在高级别胶质瘤中细胞自噬较为严重,LC3B-Ⅱ可作为胶质瘤的辅助病理指标。

Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-Ⅱ mRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA的影响

目的探讨Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达的影响。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、Salubrinal组(Sal组),各组又分为再灌6、12、24、72 h 4个亚组。各组于再灌相应时间点行神经功能缺损评分,并断头取脑行HE染色及Real time-PCR检测。结果神经功能缺损:与假手术组比较,模型组、Sal组各时间点均有神经功能缺损(P<0.01);与模型组比较,再灌24、72 h Sal组神经功能缺损评分降低(P<0.05)。HE染色:模型组神经元减少、缺失,细胞肿胀,部分破裂,细胞核固缩、偏移、深染,胶质细胞增生,经Salubrinal干预后,再灌各时间点神经元增多,胞膜较完整,核固缩现象较轻,水肿轻微。Real time-PCR检测:与假手术组比较,模型组、Sal组各指标于再灌各时间点均增高(P<0.01)。与模型组比,Sal组LC3-ⅡmRNA表达于再灌12、24、72 h下降明显(P<0.05);Sal组LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA于再灌后各时间点下降均明显(P<0.01)。结论 Salubrinal通过下调LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA比值,对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。

电针预处理对心肌缺血大鼠心肌自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin 1、HIF-1α表达影响

目的观察电针内关预处理对心肌缺血(AMI)大鼠心肌自噬相关蛋白的影响。方法大鼠随机分成伪手术组、模型组、电针预处理组;构建AMI大鼠模型,造模前电针刺激14 d,刺激电流1 mA,频率为2 Hz,30 min/d。运用PowerLab 16导生理记录仪记录分析各组大鼠心电图,Western Blot检测心肌组织微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin 1基因(Beclin 1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,PCR检测LC3ⅠmRNA、LC3ⅡmRNA、Beclin 1 mRNA、HIF-1ɑmRNA。结果与伪手术组比较,模型组LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白及mRNA表达水平升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升(P<0.01),LC3Ⅰ、HIF-1α蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01);与模型组相比,电针组LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白及mRNA表达水平明显下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.01),LC3Ⅰ、HIF-1α蛋白及mRNA水平升高(P<0.01)。结论针刺预处理对AMI大鼠心肌保护作用可能与下调LC3Ⅱ、Beclin 1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,上调LC3Ⅰ、HIF-1α表达有关。

大量摄入乙醇对大鼠海马区自噬相关蛋白ATG5及LC3Ⅰ/Ⅱ的影响

目的探讨大量乙醇灌胃1~4天大鼠海马区内自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ及ATG5表达的动态过程。方法利用连续大量灌胃给予乙醇1~4天建立大鼠模型,分别为对照组、D1、D2、D3、D4共5组。D1、D2、D3、D4组用乙醇(25%W/V,5 g/kg)灌胃,D1组大鼠给予乙醇灌胃1天,D2组大鼠给予乙醇灌胃2天,D3组大鼠给予乙醇灌胃3天,D4组大鼠给予乙醇灌胃4天。每8小时灌胃一次。对照组给予等体积纯净水灌胃。利用血液乙醇浓度测定试剂盒检测各组大鼠血液中乙醇浓度后,采用Western Blot技术检测各组大鼠大脑海马区LC3Ⅰ/Ⅱ,ATG5蛋白的表达情况并进行统计学分析。结果 D1~D4组大鼠血液乙醇浓度均大于300 mg/d L,说明大鼠均处于严重醉酒状态。D1~D4组大鼠海马区的LC3Ⅱ蛋白的相对灰度值分别为(0.63±0.03)、(1.30±0.07)、(1.26±0.07)和(1.24±0.07),与对照组(0.46±0.02)相比,D2、D3、D4组均显著性上调(P<0.001)。D1~D4组大鼠海马区ATG5蛋白的相对灰度值分别为(1.12±0.06)、(0.54±0.08)、(0.55±0.16)和(0.75±0.04),与对照组(0.60±0.07)相比,D1组显著性上调(P<0.01)。结论大量摄入乙醇过程中,大鼠均处于严重醉酒状态,乙醇可能通过上调大鼠大脑海马区的ATG5蛋白的表达激活自噬,从而增加自噬小体LC3Ⅱ的积累,是亚慢性乙醇脑损伤大鼠海马脑区自噬活性增强的可能机制之一。

大负荷运动诱导大鼠骨骼肌损伤对其自噬超微结构及Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的影响

目的:观察大负荷离心运动对大鼠骨骼肌自噬超微结构及自噬相关蛋白Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ的影响。方法:48只SD雄性大鼠适应性训练后随机分成对照组(C,n=8)和大负荷离心运动组(E,n=40)。E组于跑台进行90 min下坡跑,运动后0 h、12 h、24 h、48 h和72 h取比目鱼肌,透射电镜观察其自噬体超微结构变化;Western blot检测Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达;免疫荧光观测LC3的定位及含量变化。结果:E组比目鱼肌自噬体数量在运动后0 h、12 h和24 h均有增加,并伴LC3自噬荧光明显增强(P<0.01),同时运动后48 h自噬荧光仍有显著性升高(P<0.05);Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ在大负荷离心干预后表达升高(P<0.05),运动后12 h^24 h达到峰值(P<0.01),直至运动后72 h完全恢复。结论:大负荷离心运动可诱导骨骼肌自噬超微结构变化,自噬蛋白表达增强,以上可能是运动损伤的骨骼肌功能下降的原因之一。

补肾活血方对人胚肺成纤维细胞IL-17A、LC3-Ⅱ影响的实验研究

目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法 首先,观察不同浓度的含药血清对人胚肺成纤维细胞的抑制情况及细胞内的胶原蛋白的含量,确定出实验用含药血清的最佳血药浓度;其次,应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白对照组,TGF-β1处理组,TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(含药血清组),TGF-β1处理+基因敲除阴性对照组(sh-NC组),TGF-β1处理+IL-7A基因敲减组(sh-IL-17A组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+过表达质粒阴性对照组(Vector组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A过表达质粒组(IL-17AOE组),进行相应药物培养后,检测各组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A表达量的变化。结果 TGF-β1处理组中人胚肺成纤维细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较空白对照组明显增多(P<0.05);含药血清组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较TGF-β1处理组明显较少,而自噬小体的数量较TGF-β1处理组明显增多;sh-IL-17A组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较sh-NC组明显较少,而自噬小体的数量较sh-NC组明显增多;IL-17AOE组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A mRNA等各项指标较Vector组明显增多,而自噬小体的数量较Vector组明显减少。结论 补肾活血方可以对MRC-5细胞中的胶原显著降解。这一作用与抑制IL-17A介导的通路,激活细胞自噬,进一步降解胶原蛋白有关。

PGR、G-17、miR-27b-3p对慢性胃炎患者预后不良和癌变的预测价值

目的 探讨胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ(PGR)、胃泌素17(G-17)、微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)对慢性胃炎患者预后不良和癌变的预测价值。方法 选择慢性胃炎患者257例(观察组),经胃癌风险筛查,高危62例、中危74例、低危121例;规范治疗3个月后,预后良好202例、预后不良55例。另选体检健康的志愿者153例作为对照组。采集所有研究对象清晨空腹肘静脉血,离心留取血清,检测血清PGⅠ、PGⅡ、G-17、miR-27b-3p,计算PGR。比较两组间以及慢性胃炎患者不同预后者、不同胃癌风险者血清PGⅠ、PGⅡ、G-17、miR-27b-3p水平和PGR。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析PGR、G-17、miR-27b-3p对慢性胃炎患者预后不良或癌变的预测价值。结果 与对照组比较,观察组血清PGⅠ、PGⅡ、miR-27b-3p水平显著升高,血清G-17水平及PGR显著降低(P均<0.05)。慢性胃炎患者预后良好者血清PGⅠ、PGⅡ、miR-27b-3p水平显著低于预后不良者,血清G-17水平及PGR显著高于预后不良者(P均<0.05)。慢性胃炎患者癌变高危者血清PGⅠ、PGⅡ、miR-27b-3p水平显著高于中危者和低危者,血清G-17水平及PGR显著低于中危者和低危者(P均<0.05);慢性胃炎患者癌变中危者血清PGⅠ、PGⅡ、miR-27b-3p水平显著高于低危者,血清G-17水平及PGR显著低于低危者(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,PGR、G-17、miR-27b-3p对慢性胃炎患者预后不良或癌变均有一定预测价值,三者联合时预测价值更高(P均<0.01)。结论 PGR、G-17、miR-27b-3p可作为预测慢性胃炎患者预后不良和癌变的生物标志物,三者联合时预测价值更高。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

远志皂苷调节细胞自噬抗Aβ25-35诱导的SH-5Y5Y细胞凋亡的研究

目的从细胞自噬角度探讨远志皂苷(tenuifolin,Ten)抑制Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的作用及分子机制。方法建立Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型,通过MTT法和流式细胞术测定细胞活力和凋亡率,单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测自噬小泡的变化,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平的变化。结果 Ten抑制Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞活力降低及凋亡率增加,减少Aβ25-35诱导的自噬体增加,显著降低自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平。结论 Ten通过调节Aβ25-35诱导的细胞自噬,从而抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,发挥神经保护作用。

痰瘀同治方调控自噬对心肌缺血区和动脉粥样硬化斑块内血管新生不同作用的实验研究

[目的]明确痰瘀同治方对心肌缺血区和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块内血管新生的双向调节作用,探讨自噬在其中的调控机制。[方法]选取载脂蛋白E基因敲除(Apolipoprotein E gene knockout,ApoE-/-)小鼠20只,随机分为模型对照组和痰瘀同治(Tanyu Tongzhi,TYTZ)组,每组10只,饲喂高脂饲料;另取C57BL/6J小鼠10只为正常对照组,饲喂基础饲料。饲喂4周后,模型对照组和TYTZ组皮下注射异丙肾上腺素针100mg/kg,连续2d,正常对照组皮下注射等量0.9%氯化钠注射液。造模成功后4周,TYTZ组给予TYTZ方流浸膏2145mg/(kg·d),以蒸馏水稀释成0.4mL灌胃,模型对照组和正常对照组给予等量蒸馏水灌胃。给药6周后,用CD31免疫组化染色观察心肌缺血区和主动脉的新生血管密度。Western blot检测心肌组织和主动脉微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅱ/Ⅰ蛋白表达。[结果]免疫组化染色结果显示,模型对照组心肌组织和主动脉组织CD31表达均显著高于正常对照组(P<0.05);TYTZ组心肌组织CD31表达明显高于模型对照组(P<0.05),而主动脉组织CD31表达则明显低于模型对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,模型对照组心肌组织和主动脉组织LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平均明显高于正常对照组(P<0.05);TYTZ组心肌组织LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著高于模型对照组(P<0.05),而主动脉组织LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达则明显低于模型对照组(P<0.05)。[结论]TYTZ方在抑制AS斑块内血管新生的同时能够促进心肌缺血区的血管新生,该方对自噬水平的双向调节作用可能是其中的调控机制。

熊果酸通过促进自噬保护H_(2)O_(2)诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤

目的研究熊果酸(Ursoic acid,UA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及对细胞自噬的调节作用。方法以200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)诱导24 h建立H9C2心肌细胞氧化应激损伤模型。将H9C2细胞随机分为6组:正常组、溶剂组、模型组及熊果酸高、中、低剂量(10、5、2.5μmol·L^(-1))组。采用CCK-8法检测细胞存活率;EdU法检测细胞增殖能力;TBA法检测丙二醛(MDA)脂质氧化水平;WST-8法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western Blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及p62的表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞的存活率及EdU阳性细胞(红色荧光)百分比均明显降低(P<0.05);细胞内MDA脂质氧化水平明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05);LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值明显上调(P<0.05),p62蛋白表达明显下调(P<0.05)。与模型组比较,熊果酸高、中、低剂量均能明显提高H9C2的细胞存活率及EdU阳性细胞百分比(P<0.05);降低MDA水平(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05);上调LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值(P<0.05),下调p62蛋白表达水平(P<0.05)。结论熊果酸对H_(2)O_(2)诱导的H9C2大鼠心肌细胞氧化应激损伤具有明显保护作用,可能与其促进细胞自噬有关。

养肺控瘤方通过Beclin-1促进自噬并抑制肺癌细胞A549转移

目的研究养肺控瘤方(yangfeikongliu formula,YKF)在肺癌A549细胞自噬和转移中的作用。方法大鼠的YKF的给药剂量将通过对人体临床的剂量换算后得出,给大鼠灌服人体等效剂量的5倍、10倍和15倍的YKF,并收集它们的血液以制备5×、10×和15×的含药血清。使用含有10%YKF含药血清的培养基对A549细胞进行培养。通过电子显微镜、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比例和自噬流串联mRFP-GFP-LC3来评估A549细胞自噬情况。通过Transwell测定法评估细胞迁移和侵袭,并使用CCK-8测定细胞活性。结果3种剂量YKF含药血清均抑制了肿瘤细胞活性,增加了A549细胞的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和p62及Beclin-1表达水平,表明YKF可促进A549细胞自噬死亡。支持本结果的指标为,5×YKF含药血清诱导的LC3点状点的增加在3-MA抑制自噬后被消除。此外,研究观察到沉默Beclin-1可以废除YKF诱导的LC3Ⅱ/Ⅰ比值和p62表达的增加,以及细胞活性、迁移和侵袭的减少。结论养肺控瘤方具有促进肺癌细胞A549自噬和抑制转移的抗肿瘤活性,且Beclin-1是其抗肿瘤活性的关键分子。

PPARγ及其配体介导的自噬在染料木黄酮抑制前列腺癌细胞活性中的作用

目的:探讨染料木黄酮对前列腺癌PC-3细胞恶性生物行为学的抑制作用、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor,PPARγ)及其配体介导的自噬在该过程中的作用。方法:以0、10、20、40和60μmol/L染料木黄酮处理前列腺癌细胞,采用cell counting kit-8细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖率,采用定量反转录聚合酶链反应检测细胞中PPARγ信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)相对表达量。将前列腺癌细胞随机分为对照组、罗格列酮组、染料木黄酮组、罗格列酮+染料木黄酮组。各组以相应药物处理24 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖率,采用划痕试验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹法检测PPARγ、p62、Beclin1蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ。结果:与0μmol/L染料木黄酮组对比,10、20、40和60μmol/L染料木黄酮组细胞增殖率降低、PPARγmRNA相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组对比,罗格列酮组和染料木黄酮组细胞增殖率、划痕愈合率和p62降低,侵袭细胞数减少,PPARγ、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高(P<0.05)。与罗格列酮组和染料木黄酮组对比,罗格列酮+染料木黄酮组细胞增殖率、划痕愈合率和p62降低,侵袭细胞数减少,PPARγ、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高(P<0.05)。结论:染料木黄酮可抑制前列腺癌细胞增殖,降低迁移和侵袭能力,其可能是通过激活PPARγ诱导细胞自噬而发挥作用。

A型流感病毒对肺巨噬细胞自噬的影响及麻杏石甘汤含药血清的干预作用

目的探讨麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒诱导的肺巨噬细胞自噬的干预作用。方法以A型流感病毒感染的RAW264. 7细胞为研究对象,分为麻杏石甘汤含药血清低、中、高剂量组、奥司他韦组、3-MA+流感病毒组、流感病毒组、3-MA组、雷帕霉素组、空白组,干预12 h后,分别用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术检测细胞自噬情况;Western blot法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ表达。结果麻杏石甘汤含药血清能不同程度抑制流感病毒诱导的细胞自噬标志蛋白LC3的膜聚集,抑制细胞内自噬小体和自噬溶酶体的增加,以及LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且呈现一定的量效关系。结论麻杏石甘汤可能通过抑制A型流感病毒诱导的细胞自噬,最终调控A型流感病毒的致病作用。

莲心碱对膀胱癌细胞T24增殖与自噬体形成的影响

目的研究莲心碱(Liensinine)抑制膀胱癌T24细胞增殖的作用并探讨其促进细胞自噬体形成的作用。方法以不同浓度的莲心碱作用于T24细胞,通过细胞增殖实验及克隆形成实验,检测莲心碱对T24细胞增殖的影响;应用Western Blot检测技术分析T24细胞所表达的p62蛋白、LC3B-Ⅱ蛋白的变化情况;采用激光共聚焦显微成像技术,观察莲心碱对T24细胞自噬体形成的影响。结果莲心碱能够明显抑制T24细胞的增殖,与空白组间的差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),并呈量效依赖关系;Western Blot检测结果显示,莲心碱可增强p62蛋白与LC3B-Ⅱ蛋白的水平(P<0.05,P<0.01);激光共聚焦显微成像结果显示,莲心碱能够明显地诱导T24细胞自噬体形成(P<0.05,P<0.01)。结论莲心碱可明显抑制T24细胞的增殖,促进膀胱癌T24细胞的自噬体形成并增强p62与LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平。

沉默表皮生长因子受体的表达对肺腺癌A549细胞自噬的影响

目的:研究降低表皮生长因子受体(EGFR)的表达对肺腺癌A549细胞自噬活性的影响.方法:A549细胞中加入EGF处理,分为4组,即未处理组和10、25、50 ng/mL EGF处理组,用Western blot方法检测EGFR的蛋白表达;采用转染siRNA降低肺腺癌细胞A549细胞EGFR的表达,将A549细胞分为4组,即未处理组、EGFR siRNA-1组、EGFR siRNA-2组和EGFR siRNA-3组,分别采用Real-time RT-PCR和Western blot方法检测EGFR mRNA和蛋白表达水平来评价3个siRNA的沉默效果;将A549细胞分为转染EGFR siRNA组、转染空载体组、转染试剂组(只加入等量转染试剂)及未处理组,且4组均加入等量的50 ng/mL EGF,用Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达,观察沉默EGFR表达对自噬活性变化;A549细胞分为转染EGFR siRNA组和转染空载体组,用透射电子显微镜观察自噬小体.结果:转染siRNA后A549细胞EGF蛋白的表达降低,LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化水平升高(P<0.05),细胞内出现较多自噬小体,自噬活性明显增加.结论:降低EGFR的表达可以提高肺腺癌A549细胞自噬活性.

夹脊电针通过PTEN通路对脊髓损伤自噬的影响

目的:观察抑制PTEN后,夹脊电针对脊髓损伤(SCI)大鼠后肢运动功能和脊髓组织中LC3-Ⅱ/Ⅰ、mTOR和STAT3含量的影响,探究夹脊电针干预SCI的疗效机制。方法:雄性SD大鼠随机分为电针(EA)组、bpV组、EA+bpV组、模型(Model)组和假手术(Sham)组,每组分为1、3、7、14 d时间点,每个时间点每组6只。采用Allen's方法造模,造模成功后第1天起,EA组针刺损伤部位上、下各一节段旁开约0.3 mm,左右各2针,上正下负连接电麻仪100 Hz连续脉冲波30 min/d。bpV组每日腹腔注射bpV(HOpic)0.2 mL。EA+bpV组在每日注射bpV后10 min进行电针治疗;Model组、Sham组和EA组每日腹腔注射等量生理盐水。各组在治疗1、3、7、14 d后第2天取材。在每日治疗前和取材前采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能。Elisa法检测脊髓组织中LC3-Ⅱ/Ⅰ、mTOR和STAT3的表达情况。结果:BBB评分结果显示EA组、bpV组和EA+bpV组评分在各时间点均显著高于模型组(P<0.05),EA组与bpV组之间无显著性差异(P>0.05),EA+bpV组评分显著高于EA组和bpV组(P<0.05)。Elisa结果显示EA组、bpV组和EA+bpV组均可显著性增高LC3-Ⅱ/Ⅰ和STAT3水平(P<0.05),降低mTOR水平(P>0.05)。结论:夹脊电针可能通过抑制PTEN通路促进大鼠SCI后自噬水平,有助于运动功能的恢复,这可能成为夹脊电针治疗SCI促进神经修复的科学依据。

二苯乙烯苷减轻小鼠急性脑缺血再灌注后的氧化应激损伤及其对自噬的影响

目的 研究小鼠急性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后二苯乙烯苷(TSG)对自噬作用的影响及其神经保护作用。方法 雄性昆明种小鼠100只,随机分为假手术组、模型组和TSG低、中、高剂量组(3、6、12 mg/kg)。采用双侧颈总动脉结扎法建立急性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注24 h,于缺血和再灌注前尾静脉注射给药各1次。断头取脑检测脑组织含水量,采用试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,HE染色检测小鼠脑组织病理变化,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白的表达。结果 与模型组比较,TSG组脑皮层神经元的病理性损伤较轻,神经元数量增加,形态改善,核固缩减轻;TSG中、高剂量组显著降低脑组织含水量及MDA的含量,并可显著升高血清中SOD活性(P <0. 01),TSG高剂量组亦可显著抑制自噬相关基因Atg6 (Beclin1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/Ⅰ)蛋白的表达(P <0. 05)。结论 TSG对小鼠急性CIRI具有很好的神经保护作用,作用机制可能与抑制CIRI中自噬激活有关。

高剂量西罗莫司可能通过促进细胞自噬对老年小鼠肝脏缺血-再灌注损伤起保护作用

目的探讨高剂量西罗莫司(雷帕霉素)对老年小鼠肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)的保护作用及其作用机制。方法 20只C57BL/6系老年小鼠按随机数字表法随机分为4组:缺血-再灌注组(IRI组)、低剂量雷帕霉素预处理组(rpm组)、高剂量雷帕霉素预处理组(RPM组)、对照组(Sham组),每组5只。Sham组仅开腹、关腹;其余3组建立老年小鼠70%HIRI模型,缺血时间均为60 min;rpm组和RPM组分别在术前1 h腹腔注射雷帕霉素1 mg/kg和5 mg/kg。再灌注12 h后,采用苏木素-伊红(HE)染色检测各组小鼠肝组织病理学变化,并采用Suzuki评分法进行病理学评分;比较各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平、血清肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-10水平以及肝组织中细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ蛋白水平。结果小鼠肝组织HE染色示Sham组为正常肝组织;IRI组和rpm组肝细胞损伤严重,炎症细胞大量浸润;RPM组可见肝窦轻度淤血,炎症细胞轻度浸润。病理学评分示RPM组为5(4~6)分,均低于rpm组[7(5~8)分]及IRI组[8(7~10)分](Z=-2.554、-2.731,均为P<0.05)。各组小鼠术后肝功能结果显示,RPM组AST[(691±207)U/L]显著低于IRI组[(2 032±575)U/L]、rpm组[(1 817±777)U/L](t=4.90、3.13,均为P<0.05);RPM组ALT[(996±584)U/L]均显著低于IRI组[(2 992±992)U/L]、rpm组[(2 373±687)U/L](t=3.86、3.41,均为P<0.05),而IRI组和rpm组的AST、ALT比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。各组小鼠血清中的TNF-α和IL-10水平比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Western-blot法显示RPM组肝组织LC3B-Ⅱ蛋白的相对表达量明显高于Sham组、IRI组、rpm组(均为P<0.05)。结论高剂量雷帕霉素可能通过促进细胞自噬对老年小鼠HIRI起保护作用。