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高原鼠兔心脏中Ldh-c基因的表达及其对无氧糖酵解水平的影响 被引量:4
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作者 李筱 魏莲 +3 位作者 汪洋 许利娜 魏琳娜 魏登邦 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期312-318,共7页
高原鼠兔(Ochotona curzoniae)对高原低氧环境有很强的适应性。本研究组前期研究显示,精子特异性乳酸脱氢酶(sperm-specific lactate dehydrogenase,LDH-C4)基因Ldh-c在高原鼠兔心、肝、脑、肌肉等组织中都有表达。本研究为了阐明LDH-C... 高原鼠兔(Ochotona curzoniae)对高原低氧环境有很强的适应性。本研究组前期研究显示,精子特异性乳酸脱氢酶(sperm-specific lactate dehydrogenase,LDH-C4)基因Ldh-c在高原鼠兔心、肝、脑、肌肉等组织中都有表达。本研究为了阐明LDH-C4对高原鼠兔心肌组织无氧糖酵解水平的影响,将20只高原鼠兔随机分为抑制剂组和空白对照组,每组10只。抑制剂组注射1 m L 1 mol/L LDH-C4特异性抑制剂N-isopropyl oxamate于高原鼠兔股二头肌,双侧各注射500μL;空白对照组注射等量的生理盐水。应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定LDH-C4基因Ldh-c在高原鼠兔心肌组织中的m RNA和蛋白表达水平;比较抑制剂组和空白对照组高原鼠兔心肌组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;以及乳酸(lactate,LD)和ATP含量。结果显示,在m RNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔心肌组织中均有表达,相对表达量分别为0.47±0.06和0.68±0.08;当肌肉注射1 m L 1 mol/L的N-isopropyl oxamate时,30 min后血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L,与空白对照组相比,抑制剂组心肌组织中LDH活力[(6.18±0.48)U/mg vs(9.08±0.58)U/mg]、LD[(0.21±0.03)mmol/g vs(0.26±0.04)mmol/g]和ATP含量[(4.40±0.69)nmol/mg vs(6.18±0.73)nmol/mg]显著下降(P<0.01)。N-isopropyl oxamate对LDH活力、LD和ATP含量的抑制率分别为31.98%、20.90%和28.70%。以上结果说明:Ldh-c基因在高原鼠兔心肌组织中表达;LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为心肌组织的活动提供至少28%的ATP,这可能降低高原鼠兔在低氧环境中对氧气的依赖,增强其对低氧环境的适应。 展开更多
关键词 高原鼠兔 心肌组织 ldh-c基因 N-isopropyl oxamate 乳酸脱氢酶活力
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高原鼠兔肝中Ldh-c基因的表达及其对无氧糖酵解水平的影响 被引量:4
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作者 魏琳娜 魏莲 +3 位作者 汪洋 李筱 许利娜 魏登邦 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期846-854,共9页
高原鼠兔(Ochotona curzoniac)对高原低氧环境有很强的适应性。我们研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在高原鼠兔肝组织中表达。为了阐明LDH-C4对高原鼠兔肝组织无氧糖酵解水平的影响,将20只高原鼠兔随机分为抑制剂组和空白对照组... 高原鼠兔(Ochotona curzoniac)对高原低氧环境有很强的适应性。我们研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在高原鼠兔肝组织中表达。为了阐明LDH-C4对高原鼠兔肝组织无氧糖酵解水平的影响,将20只高原鼠兔随机分为抑制剂组和空白对照组,每组10只。抑制剂组注射1 mol/L LDH-C4特异性抑制剂N-异丙基草氨酸盐(N-isopropyl oxamate)于高原鼠兔股二头肌,双侧各注射500μl,空白对照组注射等剂量的0.9%生理盐水。应用荧光定量PCR和western blot方法,测定了精子特异性乳酸脱氢酶基因(Ldh-c)在高原鼠兔肝组织中的表达水平,应用高压液相色谱法测定了血液中抑制剂的浓度,用生物化学方法测定了抑制剂组和空白对照组高原鼠兔肝组织中乳酸脱氢酶(LDH)比活力以及乳酸(LD)和ATP含量。结果表明,在m RNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔肝组织中均有表达,m RNA相对表达水平为0.22±0.04,蛋白相对表达水平为0.97±0.20;当肌肉注射1 mol/L的抑制剂30 min后,血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L,肝组织中乳酸脱氢酶比活力抑制剂组和空白对照组分别为(4 990±290)U/g和(7 360±420)U/g,抑制剂组和空白对照组乳酸含量分别为(0.38±0.05)mmol/g和(0.53±0.03)mmol/g,抑制剂组和空白对照组ATP含量分别为(5.84±0.83)μmol/g和(7.78±1.06)μmol/g,经单因素方差分析,抑制剂组的乳酸脱氢酶比活力和乳酸及ATP含量均显著下降(P<0.01);抑制剂对乳酸脱氢酶比活力和乳酸及ATP含量的抑制率分别为30.19%±3.90%、32.22%±8.70%和24.94%±7.80%。以上结果说明,Ldh-c在高原鼠兔肝组织中表达,LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为其肝组织生命活动提供至少24%的ATP,这可能使高原鼠兔减小了在低氧环境中对氧气的依赖,增强了对低氧环境的适应力。 展开更多
关键词 高原鼠兔 肝组织 ldh-c基因 N-异丙基草氨酸盐 乳酸脱氢酶活力
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川西高原黑唇鼠兔乳酸脱氢酶C基因cDNA的克隆及序列分析
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作者 贺庆华 徐亚欧 +2 位作者 郑玉才 陈锋 张文磊 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期2270-2273,共4页
[目的]为研究以鼠兔LDH-C4为靶蛋白的节育型鼠药奠定基础。[方法]采用简并引物PCR克隆得到黑唇鼠兔LDH-C基因的EST序列,再根据EST序列采用RACE技术克隆出基因的开放阅读框(ORF)全长,和3’UTR序列。[结果]整个cDNA全长1 498 bp,其中ORF长... [目的]为研究以鼠兔LDH-C4为靶蛋白的节育型鼠药奠定基础。[方法]采用简并引物PCR克隆得到黑唇鼠兔LDH-C基因的EST序列,再根据EST序列采用RACE技术克隆出基因的开放阅读框(ORF)全长,和3’UTR序列。[结果]整个cDNA全长1 498 bp,其中ORF长996 bp,编码332个氨基酸,3’UTR长486 bp。ORF序列比对显示LDH-C基因在大的分类单位上均很保守。系统树分析显示黑唇鼠兔的LDH-C基因和灵长类及偶蹄目的遗传距离较近,和啮齿目较远。[结论]成功的克隆得到了黑唇鼠兔的LDH-C基因的cDNA序列。 展开更多
关键词 ldh-c基因 RACE EST 序列分析
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Cloning and Sequence Analysis of Lactate Dehydrogenase C(LDH-C)Gene from Black-lipped Pika in Western Sichuan Plateau 被引量:1
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作者 贺庆华 徐亚欧 +2 位作者 郑玉才 陈锋 张文磊 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第6期63-66,共4页
[Objective] The aim was to lay a foundation for research of contraceptive rodenticide with LDH-C4 as target protein. [ Method] EST sequence of LDH-C gene from black-lipped pika was cloned by PCR with degenerate primer... [Objective] The aim was to lay a foundation for research of contraceptive rodenticide with LDH-C4 as target protein. [ Method] EST sequence of LDH-C gene from black-lipped pika was cloned by PCR with degenerate primers; then the full length open reading frame (ORF) and 3'UTR sequence were cloned by RACE technique. [ Result] The full length cDNA was 1 498 bp containing an ORF of 996 bp and a 3'UTR of 486 bp. The ORF encoded a polypeptide of 332 amino acids. The alignment of LDH-C gene ORF nucleotide sequences from different species showed that the gene was conserved even between large taxons. The phylogenic tree showed that black-lipped pika LDH-C was closer to prima- tes and artiodactyla than to rodents. [Conclusion] cDNA sequence of LDH-C gene from black-lipped pika was cloned successfully. 展开更多
关键词 ldh-c gene RACE EST Sequence analysis
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高原鼠兔脑组织中精子特异性乳酸脱氢酶的作用 被引量:3
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作者 许利娜 魏莲 +3 位作者 汪洋 李筱 魏琳娜 魏登邦 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期431-437,共7页
高原鼠兔对高原低氧环境有很强的适应性。研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)基因在高原鼠兔脑组织中表达,为阐明LDH-C4在高原鼠兔脑组织中的作用,应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定了Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中的表达水平... 高原鼠兔对高原低氧环境有很强的适应性。研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)基因在高原鼠兔脑组织中表达,为阐明LDH-C4在高原鼠兔脑组织中的作用,应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定了Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中的表达水平;应用对精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)特异性的抑制剂(N-isopropyl oxamate),通过肌肉注射后,研究抑制剂对高原鼠兔脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP含量的影响。结果表明,在mRNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中均有表达,相对表达水平分别为0.38±0.05和0.74±0.13;当肌肉注射1 m L 1 mol/L的抑制剂30 min后,血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L;与对照组相比,抑制剂组脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP含量显著下降,抑制剂对LDH、乳酸和ATP的抑制率分别为30.78%、46.47%和21.04%。结果表明,精子特异性乳酸脱氢酶基因在高原鼠兔脑组织中表达。LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为其脑组织生命活动提供至少20%的ATP,可能使高原鼠兔减小在低氧环境中对氧气的依赖,增强对低氧环境的适应能力。 展开更多
关键词 高原鼠兔 脑组织 ldh-c基因 N-isopropyl oxamate 乳酸脱氢酶活力
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高原鼠兔组织中精子特异性乳酸脱氢酶的作用机理 被引量:1
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作者 王志洁 汪洋 +3 位作者 安志芳 魏琳娜 魏莲 魏登邦 《四川动物》 北大核心 2017年第6期624-631,共8页
高原鼠兔Ochotona curzoniae具有很强的高原低氧适应能力。前期研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在高原鼠兔体细胞中表达。为阐明LDH-C4在高原鼠兔组织中的作用机理,应用RNA干扰技术沉默高原鼠兔心肌、肝脏和脑组织中的Ldh-c基因... 高原鼠兔Ochotona curzoniae具有很强的高原低氧适应能力。前期研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在高原鼠兔体细胞中表达。为阐明LDH-C4在高原鼠兔组织中的作用机理,应用RNA干扰技术沉默高原鼠兔心肌、肝脏和脑组织中的Ldh-c基因;应用荧光定量PCR和Western Blot方法,测定Ldh-c基因在心肌、肝脏和脑组织中的表达水平;应用生物化学方法测定沉默Ldh-c基因后,心肌、肝脏和脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP的含量。结果表明,腹腔注射腺病毒p MultiRNAi-Ldhc能极显著降低高原鼠兔组织中Ldh-c基因的表达水平,在mRNA和蛋白水平,心肌中Ldh-c基因的表达分别下降48.11%和19.27%;肝脏中Ldh-c基因的表达分别下降70.16%和25.82%;脑中Ldh-c基因的表达分别下降49.08%和25.36%。沉默Ldh-c基因表达后,高原鼠兔心肌、肝脏和脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP的含量也显著降低,分别下降25.58%、41.94%和21.23%,28.16%、15.90%和24.66%以及16.65%、12.78%和18.50%。这些结果说明,高原鼠兔在低氧环境中,其心肌、肝脏和脑组织通过LDH-C4催化无氧糖酵解获得部分ATP,增强对低氧环境的适应能力。 展开更多
关键词 高原鼠兔 组织 ldh-c基因 乳酸脱氢酶活力 乳酸 ATP
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花鼠乳酸脱氢酶C基因cDNA的克隆、分析及原核表达
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作者 李昊 韩崇选 +1 位作者 张冬辉 周智敏 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期467-472,共6页
为研究花鼠乳酸脱氢酶C(lactate dehydrogenase C,LDH-C)对花鼠免疫不育控制的影响,以花鼠睾丸c DNA为模板,通过RT-PCR技术得到花鼠LDH-C基因c DNA编码区,并进行序列分析,构建花鼠LDH-C的原核表达载体,导入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表... 为研究花鼠乳酸脱氢酶C(lactate dehydrogenase C,LDH-C)对花鼠免疫不育控制的影响,以花鼠睾丸c DNA为模板,通过RT-PCR技术得到花鼠LDH-C基因c DNA编码区,并进行序列分析,构建花鼠LDH-C的原核表达载体,导入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法对表达产物进行鉴定。结果显示:扩增出的c DNA片段为999 bp,编码332个氨基酸,含有完整的开放阅读框;负电荷残基与正电荷残基均为36个;预测蛋白质分子量为37k D,理论等电点为7.04,无信号肽和跨膜区,推测其是一种非分泌、疏水性蛋白。α螺旋、无规则卷曲以及延伸链是s LDH-C蛋白二级结构的主要成分。重组菌在IPTG诱导下获得了约37 k D带有His-Tag的目的蛋白。 展开更多
关键词 花鼠 ldh-c基因 克隆 序列分析 基因表达
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