新疆葡萄酒中的酚类物质对LO2细胞自噬的影响

为了探究新疆葡萄酒酚类物质对肝细胞自噬的影响,该研究使用体外培养的人正常肝细胞(LO2),通过免疫印迹、实时荧光定量、细胞免疫荧光、流式细胞术等方法观察LO2细胞中微管相关蛋白1A/1B-轻链3(microtubule-associated proteins 1A/1B light chain3,LC3)和螯合体1(sequestosome 1,P62)的水平变化,初步评估新疆葡萄酒中酚类物质对LO2细胞自噬的影响作用。免疫印迹结果发现,橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯,可显著提升LO2细胞中LC3蛋白的表达水平,提示橙皮苷和表儿茶素没食子酸酯或对LO2细胞自噬活性有一定影响作用。进一步通过实时荧光定量方法观察橙皮苷和表儿茶素没食子酸酯对LC3和P62蛋白mRNA的影响作用发现,橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯处理细胞后,显著上调了LC3蛋白的mRNA水平,同时降低了P62蛋白的mRNA水平;细胞免疫荧光染色显示橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯处理LO2细胞后,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)标记的LC3蛋白荧光强度增强,提示细胞内形成自噬小体;流式细胞术结果进一步发现,GFP-LC3/RFP-LC3荧光强度比值减小,表明自噬小体成熟。综上所述,橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯对LO2细胞自噬活性具有一定的促进作用,但其作用机理尚需要进一步深入研究。

POR基因敲除、回补及过表达LO2细胞株的构建及作为AFB_(1)染毒模型的初步应用

为了构建POR基因稳定敲除(POR^(KO))、回补(PORCO)、过表达(POR^(OE))的LO2细胞株,以便为后续深入开展POR基因在AFB_(1)致毒性机理中的功能研究提供细胞模型。本研究首先利用CRISPR/Cas9技术设计2条靶向POR基因的sgRNA并克隆至lentiCRISPR v2载体,进行慢病毒包装与感染,筛选出LO2 POR^(KO)单克隆细胞后进行测序及Western blot鉴定。其次用同源重组方法构建pcDNA3.1(+)/myc-His B-POR重组质粒,经对POR^(KO)细胞和野生型细胞转染分别构建LO2 PORCO及LO2 POR^(OE)细胞株,以G-418筛选后进行Western blotting鉴定。再用4μmol·L^(-1)及8μmol·L^(-1)AFB_(1)分别对野生型、LO2 POR^(KO)、LO2 PORCO、LO2 POR^(OE)细胞株染毒48 h,观察细胞形态并测定细胞存活率。结果表明,靶向exon5的sgRNA-2可成功敲除POR基因,得到LO2 POR^(KO)细胞株;成功构建表达POR重组蛋白的LO2 PORCO及LO2 POR^(OE)细胞株。对AFB_(1)处理后的各细胞存活率测定结果表明,相较于野生型LO2细胞43.66%±0.58%和27.90%±0.46%的存活率,LO2 POR^(KO)细胞存活率具有极显著性差异,均为100%(P<0.0001);LO2 PORCO细胞存活率仍有显著性差异,分别为57.07%±0.74%和42.54%±0.68%(P<0.05);LO2 POR^(OE)细胞存活率则显著降低,分别为24.58%±0.92%和17.99%±0.81%(P<0.01)。综上所述,本研究成功构建了LO2 POR^(KO)、LO2 PORCO、LO2 POR^(OE)细胞株,并以AFB_(1)染毒处理分别研究了各细胞株的存活率和细胞形态学变化,发现POR基因对AFB_(1)所致细胞毒性的影响巨大。研究结果为后续深入开展POR基因在AFB_(1)致毒性机理中的功能研究奠定了基础。

基于脂肪变性细胞模型研究明桑降脂茶调控LO2细胞脂代谢的作用

目的明确明桑降脂茶的降脂作用及其发挥降脂作用的物质基础。方法制备大鼠空白血清、明桑降脂茶全方和桑叶减味含药血清,以油酸诱导人正常肝细胞(LO2细胞)建立脂肪变性细胞模型,将细胞分为对照组(含空白血清)、模型组(含空白血清)、明桑降脂茶全方血清处理组、桑叶减味血清处理组。培养4 h后,显微镜下观察各组脂肪积累情况;酶标仪测定细胞内脂质含量;按试剂盒说明测定细胞内甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(totalcholesterlo,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,以及过氧化物酶体增殖物启动受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)、固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein 1c,SREBP-1c)表达。高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)研究各组指纹图谱、绿原酸和橙黄决明素含量的差异。结果与模型组比较,明桑降脂茶全方血清组、桑叶减味血清组均能显著降低细胞内脂滴数量和脂质含量,降低TG、TC、LDL-C含量和SREBP-1c表达,升高HDL-C含量和PPARα表达,全方血清组的降脂作用优于桑叶减味血清组;全方血清组、桑叶减味血清组、空白血清组共有峰分别为53、35、23个,三者共有峰18个;剔除共有峰后,全方血清组有22个不同于桑叶减味血清组的差异峰,桑叶减味血清组有4个不同于全方血清组的差异峰;全方血清组中绿原酸和橙黄决明素含量均高于桑叶减味血清组,绿原酸含量在二者之间差异显著。结论明桑降脂茶具有明显的降脂作用,桑叶在其中发挥重要降脂作用。

玉米糖肽对酒精诱导损伤LO2细胞的保护效应

构建LO2细胞酒精性损伤模型,在细胞水平上研究玉米糖肽干预对酒精诱导损伤的LO2细胞的保护效应,并探讨玉米糖肽拮抗酒精性肝细胞损伤的可能机理。结果表明:与酒精模型组相比,50μg/mL玉米糖肽的预处理能够增加损伤LO2细胞中酒精代谢酶(ADH和ALDH)和抗氧化酶(SOD、CAT和GSH-Px)活力以及GSH含量;降低ROS和MDA含量,说明玉米糖肽通过促进酒精代谢和增强抗氧化活力,维持LO2细胞结构的完整,防止肝内酶(AST、ALT和LDH)的泄露,并降低LO2细胞早期凋亡和死亡细胞的比例,达到保护酒精诱导损伤的LO2细胞的效果。

西凤酒全酒干预对LO2细胞和健康小鼠肠道菌群的影响

西凤酒中微量成分种类丰富,但关于其微量成分的作用及量效关系研究较少。因此,该研究基于细胞和动物实验探讨了西凤酒(以红西凤为代表)中微量成分对LO2细胞和健康小鼠肠道菌群的影响情况。细胞实验结果表明,乙醇浓度越高,细胞增殖抑制率、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)泄漏量越大,相同乙醇浓度下,红西凤和食用酒精(对照组)干预组之间具有显著性差异(P<0.05)。动物实验结果表明,不同剂量红西凤和食用酒精干预均导致小鼠体重、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)含量降低,肝重体重比、AST、ALT、TC、总胆固醇(total cholesterol,TC)、总甘油三酯(total triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)含量升高,肝脏组织出现不同程度脂肪变性,肠道菌群发生明显变化(门水平上,厚壁菌门与拟杆菌门比例下降;属水平上,乳酸杆菌属、毛螺菌属等相对丰度降低,幽门螺杆菌属、链球菌属等相对丰度增加),LEfSe分析结果显示,小鼠肠道菌群存在的差异与红西凤和食用酒精干预剂量有一定关系,且高剂量干预对小鼠肠道菌群的影响有扩大的趋势,然而同剂量下,红西凤干预对小鼠的损伤程度轻于食用酒精,以低剂量红西凤干预对小鼠的影响最轻,推测红西凤中各微量成分可能通过调节小鼠肠道菌群从而减缓对肝脏的损伤程度。以上结果说明,适量摄入红西凤在一定程度上可以缓解酒精对LO2细胞及小鼠肠道菌群的负面影响,该研究将为西凤酒的健康消费提供理论依据。

富锶茶多糖提取物的抗氧化活性及其对H_(2)O_(2)诱导LO2细胞氧化损伤保护研究

目的 探明富锶茶多糖最佳提取工艺,并分析其体外抗氧化活性及对H_(2)O_(2)诱导LO2细胞氧化损伤的保护作用。方法 本研究采用热水超声辅助法从茶叶中提取富锶茶多糖,通过Box-Behnken响应面实验法对富锶茶多糖的提取工艺条件进行了优化;以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、羟基自由基(·OH)、 2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) ammonium salt, ABTS]阳离子自由基的清除能力和Fe3+的还原能力为指标,分析富锶茶多糖的体外抗氧化活性;并以H_(2)O_(2)建立LO2细胞损伤模型,研究富锶茶多糖对LO2细胞氧化应激损伤的改善机制。结果 富锶茶多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度67℃、浸提时间57 min、料液比1:25 (g:mL),富锶茶多糖得率为3.50%±0.12%。在体外抗氧化方面,富锶茶多糖对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基、·OH和Fe3+的还原能力具有较好的清除能力;在改善LO2细胞氧化应激损伤方面,随着多糖质量浓度升高,细胞存活率也显著提高,当多糖质量浓度为50.0μg/mL时,细胞存活率达到99.5%;在清除机体过氧化机制上,相对于模型组,超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力均有所增强,浓度越高处理的SOD活力越高,氧化氢酶(catalase, CAT)活力在中、高实验组中有显著提高,从细胞水平表明富锶茶多糖对LO2细胞氧化损伤具有明显的改善作用。结论 富锶茶多糖具有良好的抗氧化性以及对H_(2)O_(2)诱导LO2细胞氧化损伤有很好的保护作用,为富锶茶多糖功能性产品开发提供了理论基础。

三白草中化学成分对H_2O_2损伤LO2细胞保护作用

目的研究三白草中主要化学成分对H2O2损伤人正常肝细胞LO2的保护作用。方法供试品为三白草中木脂素类成分:Rel-(7S,8R,7’R,8’R)-3,3’,4,4’,5,5’-hexamethoxy-7-O-7’,8,8’-llignan、Di-O-methyltetra hydrofuriguaiacin B、里卡灵A、里卡灵B、三白草素、二氢愈创木酸;黄酮类成分:异槲皮苷、槲皮苷。LO2细胞接种于96孔板培养,加入100μmol/L的受试成分,培养24h后加入20μL 1.2mmol/L H2O2作用1h。使用MTT法检测各组细胞存活率。结果异槲皮苷和槲皮苷对H2O2损伤LO2细胞有显著保护作用,里卡灵A和二氢愈创木酸对细胞有显著损伤作用。结论该实验可以为三白草保肝作用的研究提供理论基础。

九香虫防御性物质水溶液成分分析及其对LO2细胞活性的影响

研究了九香虫的防御性物质水溶液中挥发性成分及其相对百分含量,以及该水溶液对人肝LO2细胞活性的研究。采用温水浸泡法获得九香虫的防御性物质水溶液;GC-MS获得该水溶液的挥发性成分组成,并用面积归一法计算各成分的相对百分含量;利用MTT法、流式细胞术研究该水溶液对LO2细胞的影响。研究表明,九香虫防御性物质水溶液中挥发性成分包含19种化合物,其中相对百分含量最高的为反-2-己烯醛(88.54%),其次为2-甲基-4-戊烯醛(5.16%)、十三烷(3.43%)等;该水溶液作用LO2细胞后,IC50为3.64μL,呈剂量依赖性;细胞周期结果显示,G2/M期细胞比例明显降低,而G0/G1期细胞比例明显升高,且差异具有统计学意义。九香虫防御性物质水溶液成分主要是烯醛和烷烃类化合物;该物质能够抑制人肝LO2细胞的体外增殖,可能与其细胞周期阻滞有关。

厄贝沙坦激活PPAR-γ介导AMPK/mTOR通路诱导自噬改善LO2细胞脂肪变

目的探讨厄贝沙坦调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)介导磷酸腺苷依赖的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路及自噬对LO2细胞脂肪变的影响。方法采用脂混合物(LM)诱导LO2细胞建立细胞脂肪变模型,将造模后细胞分为模型组、厄贝沙坦组和厄贝沙坦联合PPAR-γ抑制剂组,另设正常组。分别干预24 h后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)含量,并行油红O染色分析细胞内脂质沉积,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞PPAR-γ、AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达,应用激光共聚焦技术观察自噬标志蛋白LC3B的变化。结果10μmol/L及以下浓度的厄贝沙坦对LO2细胞生长无明显毒性作用,20μmol/L厄贝沙坦对细胞毒性作用较大,表现出明显的抑制作用。与正常组比较,模型组LO2细胞内TG和TC含量升高,油红O染色显示脂质大量沉积,PPAR-γ、p-AMPK和LC3B蛋白表达水平降低,mTOR磷酸化水平升高(均P<0.05);与模型组比较,经厄贝沙坦治疗后,LO2细胞内TG和TC含量降低,油红O染色显示脂质沉积减少,PPAR-γ、p-AMPK和LC3B蛋白表达水平升高,mTOR磷酸化水平降低(均P<0.05);但经厄贝沙坦联合PPAR-γ抑制剂干预后,PPAP-γ抑制剂抑制了厄贝沙坦对LO2细胞脂肪变的治疗作用。结论厄贝沙坦可通过激活PPAR-γ介导的AMPK/mTOR信号通路,促进LM诱导LO2细胞的自噬,从而减轻脂质沉积,改善肝细胞脂肪变。

LO2细胞不同缺氧复氧时间细胞存活率检测及瘦素的影响

【目的】复制肝细胞缺血缺氧模型和瘦素对它的影响。【方法】将LO2细胞分别缺氧2h、4h、8h和12h和正常组,后用CCK-8检测各组细胞的A490值,与正常组比较算出细胞的存活率。并用不同浓度的瘦素(分别为100μg/L、200μg/L、400μg/L、800μg/L和1600μg/L)加入缺氧12h的LO2细胞,观察瘦素对其细胞存活率的影响。【结果】LO2细胞经厌氧培养后,缺氧2h、4h、8h和12h细胞CCK-8A490值显著低于缺氧正常组平均值(P<0.01),随着缺氧时间的延长,A490值、细胞存活率逐渐下降;经厌氧培养后的LO2细胞与正常组相比,细胞CCK-8A490值显著低于对照组(P<0.01),不同浓度的LEP能减轻厌氧培养的LO2细胞损伤,A490值、细胞存活增高。【结论】采用厌氧气体培养LO2细胞复制肝脏缺血模型是可行的;瘦素对经厌氧培养后的LO2细胞有保护作用。

Pdx1与Ngn3协同诱导LO2细胞分化为胰腺β样细胞

目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建pEGFP-C1/Pdx1与pEGFP-C1/Ngn3真核表达质粒,并共转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法检测目的基因及胰岛素相关基因葡萄糖转运体2(GLUT2)与胰岛素的表达情况。结果:目的基因克隆正确,RT-PCR、免疫组化、间接荧光证实转染后LO2细胞中有Pdx1、Ngn3和胰岛素及胰岛素相关基因GLUT2的表达。结论:Pdx1与Ngn3协同作用可诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。

三黄茵赤方含药血清对LO2细胞DNA氧化损伤的影响

目的探讨三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法采集三黄茵赤方含药血清,以LO2细胞株为研究对象,通过H2O2诱导LO2细胞DNA氧化损伤模型,实验分正常对照组、H2O2模型组、三黄茵赤方含药血清5%、10%、15%浓度组、维生素E组,采用倒置显微镜观察各组形态,CCK-8法测定细胞存活率,生化法检测细胞内SOD、CAT和GSH-PX活性,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,ELISA检测细胞内8-OHd G含量,彗星实验检测细胞DNA损伤情况。结果与H2O2模型组比较,三黄茵赤方含药血清10%、15%浓度组、维生素E组均能提高细胞存活率(P<0.05),增强细胞内SOD、CAT、GSH-PX活性(P<0.05),改善细胞对ROS清除能力(P<0.01),降低细胞内8-OHd G含量(P<0.01),减低细胞拖尾率、尾长、尾矩及Olive尾矩(P<0.05)。结论三黄茵赤方含药血清对H2O2诱导LO2细胞DNA氧化性损伤具有保护作用,以15%浓度含药血清组作用最显著。

清肝降脂方对脂肪变性LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达的影响

目的:通过建立游离脂肪酸体外诱导的LO2细胞非酒精脂肪肝模型,探讨不同剂量的清肝降脂方对肝脏脂肪变LO2细胞HO-1、Egr-1基因及蛋白表达水平的影响。方法:建立游离脂肪酸诱导脂肪变性LO2肝细胞体外模型。人肝LO2细胞采用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养,待细胞均匀分布,随机分为6组:正常对照组、模型组、清肝降脂方高剂量组、中剂量组、低剂量组、水林佳对照组,每组6瓶。除正常对照组外,其余5组细胞均以0.5 mmol/L的游离脂肪酸诱导LO2非酒精脂肪肝细胞模型,诱导24 h后,各组随机抽取1瓶进行油红O染色,观察LO2细胞的脂肪化程度。确定模型诱导成功后,正常对照组和模型组分别加入10%正常大鼠血清,低、中、高剂量清肝降脂方药物血清组及水林佳药物血清组添加10%含相对应药物的大鼠血清,培养24h后,收集细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测血红素氧化酶-1(HO-1)、早期生长反应因子-1(Egr-1)的基因及蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组LO2细胞HO-1、Egr-1 mRNA和蛋白表达有所增加;与模型对照组比较,自拟清肝降脂方三剂量组和对照药物组HO-1 mRNA及蛋白表达有所增高,Egr-1mRNA和蛋白表达明显降低;与对照药物组比较,清肝降脂方高剂量组HO-1 mRNA表达有所增高,Egr-1 mRNA表达有所降低。结论:Egr-1高表达可能会导致肝损伤机制之一;HO-1高表达可能是保护肝损伤机制之一;两者可能都是通过调节TNF-α表达来调节NAFLD细胞的损伤进展。清肝降脂方可明显改善LO2细胞Egr-1、HO-1 mRNA及蛋白的表达,可能为其治疗机制、临床诊断和判断进展参考指标。

索拉非尼在HepG2与LO2细胞的摄取动力学

目的探讨索拉非尼在肝癌细胞(HepG2)与正常肝细胞(LO2)的摄取动力学特性。方法取正常培养的处于对数期的HepG2与LO2细胞株,加入含索拉非尼系列浓度的培养液,孵育后处理细胞,检测索拉非尼及细胞蛋白浓度,分析摄取动力学参数。结果HepG2与LO2细胞对索拉非尼的摄取随着浓度的增加而趋于饱和,但与LO2细胞相比较,HepG2细胞对索拉非尼的摄取量明显增加。当加入10 mol·L^(-1)的索拉非尼,HepG2与LO2细胞对索拉非尼的摄取随着时间的增加而增加,均在20 min时趋于饱和。HepG2细胞的摄取动力参数V_(max)为(684.14±78.19)pmol·mg protein^(-1)·min^(-1),K_(m)为(93.3±17.56)μmol·L^(-1);LO2细胞的摄取动力参数V_(max)为(335.61±69.73)pmol·mg protein^(-1)·min^(-1),K_(m)为(135.68±29.34)μmol·L^(-1);结果显示HepG2细胞对索拉非尼的摄取速率明显高于LO2细胞。结论索拉非尼在肝癌细胞中摄取量及摄取速率明显高于正常肝细胞,对肝癌细胞具有一定的靶向性。

甘乐方对氧化损伤LO2细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨甘乐方对H_2O_2诱导损伤LO2细胞的护作用及其可能机制。方法:用800μmol/L的H_2O_2诱导LO2细胞,复制人正常肝细胞氧化损伤细胞模型。采用CCK-8法测定细胞存活率,生化法检测细胞内MDA、GSH、CAT,荧光探针检测细胞内ROS水平和线粒体膜电位情况,ELISA法检测细胞内8-OHdG含量,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3、Bax表达。结果:与模型组比较,甘乐方能使H_2O_2作用下LO2细胞存活率显著升高,细胞内MDA、ROS、8-OHdG含量显著降低,GSH、CAT水平及线粒体膜电位显著升高,Caspase-3、Bax蛋白水平显著下调,G_0/G_1期细胞百分比显著降低,G_2/M期的细胞百分比显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:甘乐方对H_2O_2诱导的LO2细胞氧化损伤具有护作用。

睡莲酚对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

目的研究睡莲酚对H2O2致正常肝(LO2)细胞损伤的保护作用。方法将LO2细胞分为药物组(给予6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/mL的睡莲酚)、空白组(给予完全培养液),置于37℃、5%CO2环境下分别培养24、48和72 h后,采用MTT法检测样品对LO2细胞的毒性。0.6 mmol/L H2O2处理LO2细胞4 h构建H2O2损伤LO2细胞模型。用含6.25、12.50、25.00μg/mL的睡莲酚的培养液干预损伤肝细胞,MTT法测定细胞活力,并检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)、氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)的水平。结果睡莲酚在6.50~25.00μg/mL的浓度范围内给药24、48和72 h,对正常人体肝(LO2)细胞无毒性作用。与空白组比较,给药组细胞的存活率达到90%以上,差异无统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,给药组该范围内可抑制H2O2对LO2细胞的损伤,升高细胞活力,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2致急性损伤肝细胞的ALT、AST、MDA和NO水平均降低,SOD活力升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论睡莲酚对氧化应激致肝细胞损伤有保护作用。

玉米谷蛋白水解物对乙醇诱导损伤LO2细胞的保护作用

采用复合蛋白酶(protamex)和碱性蛋白酶(alcalase)协同水解玉米谷蛋白,制备玉米谷蛋白水解物(corn gluten hydrolysate,CGH),研究了玉米谷蛋白水解物的体外抗氧化活性,利用乙醇诱导LO2细胞氧化损伤模型对玉米谷蛋白水解物的抗氧化应激作用进行研究。结果表明,玉米谷蛋白水解物具有良好的体外抗氧化活性,其羟自由基(·OH)清除率和DPPH自由基清除率和Fe^(2+)螯合能力的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值分别为0.61、3.96、0.79 mg/mL。玉米谷蛋白水解物能够显著降低(P<0.05)乙醇诱导损伤的LO2细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,并显著提高(P<0.05)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)活性和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,对氧化应激损伤的LO2细胞具有保护作用。该研究为玉米谷蛋白水解物作为天然抗氧化剂应用在食品工业中奠定了理论基础。

石胆酸诱导的LO2细胞胰岛素抵抗模型及其应用

目的利用石胆酸刺激人正常肝细胞(LO2)建立胰岛素抵抗模型,并用于筛选具有改善胰岛素抵抗降血糖活性的化合物。方法用不同浓度石胆酸(LCA)处理LO2细胞不同时间。通过MTT法检测细胞活性,并用不同浓度胰岛素刺激细胞,采用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)作为光学探针检测细胞的葡萄糖摄取能力,明确建立稳定的LO2细胞胰岛素抵抗模型所需LCA的最适浓度及时间。Western blot检测LCA对胰岛素信号通路关键蛋白:磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、胰岛素受体底物1(IRS1)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)表达的影响。模型建立后,以二甲双胍为阳性药,对5种黄酮类化合物奥卡宁、异奥卡宁、马里苷、黄诺马苷、紫铆因及1种环烯醚萜类化合物梓醇,进行改善胰岛素抵抗降血糖活性筛选,以2-NBDG荧光标记葡萄糖法评估细胞糖摄取情况,以MTT法评估细胞存活率。结果 LCA作用于LO2细胞可显著降低细胞糖吸收,并产生明显的胰岛素耐受,而25μmol·L^(-1) LCA作用于LO2细胞24 h,模型稳定性最好。与对照组相比,12.5和25μmol·L^(-1) LCA组IRS1的蛋白磷酸化水平显著降低(P <0.05),且12.5和50μmol·L^(-1) LCA能明显减少AKT蛋白的磷酸化水平(P <0.01)。活性筛选发现,奥卡宁、异奥卡宁及紫铆因均能显著提高细胞糖摄取能力,并且其改善细胞胰岛素抵抗降血糖活性显著优于阳性药二甲双胍。结论 LCA可诱导LO2细胞建立稳定、可靠的胰岛素抵抗模型并用于药物筛选。

狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

目的:探讨狭基线纹香茶菜水溶性总黄酮(WSTF)对氧化应激损伤LO_2细胞的保护作用。方法:通过细胞毒性实验确定给药范围,建立过氧化氢(H2O_2)致LO_2细胞损伤模型,用含不同浓度WSTF的培养液与急性损伤肝细胞共孵育不同时间,采用MTT比色法测定细胞活力,检测谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙二醛(MDA)的水平,评价WSTF对肝细胞损伤的保护作用。检测细胞线粒体膜电位和细胞内活性氧簇(ROS)水平,分析WSTF抑制H2O_2诱导LO_2细胞凋亡情况。结果:0.3 mmol·L^(-1)H2O_2处理LO_2细胞4 h构建H2O_2损伤LO_2细胞模型,确定0.031 2~0.125 mg·ml^(-1)WSTF为保护LO_2细胞损伤的给药浓度范围。WSTF可抑制H2O_2对肝细胞的损伤,并明显降低H2O_2致急性损伤肝细胞的ALT、AST释放量和MDA水平,逆转H2O_2诱导LO_2肝细胞线粒体膜电位去极化和细胞内ROS升高。结论:WSTF体外给药对肝细胞损伤有保护作用。

油酰乙醇酰胺改善LO2细胞中脂肪酸诱导的氧化应激

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是最常见的慢性疾病之一,氧化应激在其发病和发展过程中起着关键作用。油酰乙醇酰胺(OEA)作为一种天然存在的脂质信号分子,具有多种药理学特性。研究探讨了油酰乙醇酰胺对脂肪酸诱导的LO2细胞氧化应激的影响及作用机制。通过0.4 mmol/L油酸和棕榈酸混合物(摩尔比2∶1)诱导LO2细胞产生氧化应激,添加不同浓度的OEA共同处理24 h。结果表明,OEA能够显著降低LO2细胞内ROS和MDA含量,提高抗氧化酶(SOD、CAT和GPx)活性。进一步的研究表明,OEA主要通过上调Nrf2和HO-1蛋白及mRNA的表达水平来改善氧化应激。