裂果薯总皂苷对WB-F344恶性转化细胞上皮间质转化及迁移、侵袭的影响

目的:探讨裂果薯总皂苷(SSPHs)对WB-F344恶性转化细胞上皮间质转化(EMT)及迁移、侵袭的影响及其机制。方法:采用致癌剂1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)体外诱导大鼠肝卵圆细胞系WB-F344制备恶性转化细胞模型。实验分为对照组、MNNG组、MNNG+SSPHs组、MNNG+Wnt-1/β-catenin信号通路激活剂氯化锂(LiCl)+信号通路抑制剂(XAV-939)组、MNNG+LiCl组、MNNG+LiCl+SSPHs组。CCK-8法检测SSPHs对WB-F344恶性转化细胞活力;细胞划痕和Transwell侵袭实验分别检测WB-F344恶性转化细胞的迁移、侵袭能力;蛋白质免疫印迹(western blotting)法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达。结果:SSPHs处理后,WB-F344恶性转化细胞活力受到抑制(P<0.05)。与对照组比较,MNNG组划痕愈合率升高,细胞穿膜数增多,N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调(均P<0.05)。与MNNG组比较,MNNG+SSPHs组划痕愈合率降低,穿膜数减少,N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调(均P<0.05)。与MNNG+LiCl组比较,MNNG+LiCl+SSPHs组N-cadherin、Vimentin、Wnt-1、β-catenin蛋白表达下调,E-cadherin蛋白表达上调(均P<0.05),与MNNG+LiCl+XAV-939组结果相同。结论:SSPHs可抑制WB-F344恶性转化细胞的EMT和迁移、侵袭,其机制可能与调控Wnt-1/β-catenin信号通路相关。

miR-344b-3p靶向Tspo基因参与双酚S诱导的小鼠睾丸合成睾酮功能异常

目的探讨双酚S(bisphenol S,BPS)影响小鼠睾酮合成异常的作用及机制。方法构建浓度为0、2、10、50 mg·kg^(-1) BPS染毒小鼠模型,采用HE染色观察其睾丸组织的形态、计算机辅助精子分析系统(CASA)分析精子活力、ELISA检测血清睾酮水平的变化。采用RT-qPCR和Western blot检测睾酮生成关键基因mRNA和蛋白的表达水平。利用哺乳动物miRNA靶基因数据库(miRDB)预测筛选出BPS抑制睾酮合成靶基因的上游miRNA,通过RT-qPCR检测BPS染毒小鼠睾丸组织中候选miRNA的表达水平。进一步构建候选miRNA的Inhibitor/Mimics转染TM3细胞模型,并在此基础上进行BPS染毒,检测预测靶基因的表达及蛋白水平变化,确定最终发挥作用的上游miRNA。结果通过构建不同浓度BPS染毒小鼠模型发现,BPS暴露35 d后可导致小鼠睾丸组织病理损伤,精子活力和血清睾酮水平均下降(P均<0.05)。RT-qPCR和Western blot结果提示,Tspo和Cyp11a1是BPS诱导小鼠睾酮生成下降的靶分子(P<0.01)。通过miRDB数据库,筛选出睾酮合成靶基因上游miRNA分别为miR-344b-3p和miR-124-5p。在BPS暴露小鼠模型中发现,BPS染毒组小鼠睾丸组织中miR-344b-3p和miR-124-5p的表达较对照组均上调(P均<0.01)。用Inhibitor/Mimics转染TM3细胞发现,miR-344b-3p的靶基因Tspo得到明显恢复/抑制(P<0.05),在转染Mimics的基础上再进行BPS处理后发现,Tspo的基因表达及蛋白水平进一步降低(P<0.05)。结论BPS可能通过诱导miR-344b-3p抑制其靶基因Tspo的表达参与导致小鼠睾丸合成睾酮功能下降。

永久基本农田补划方案编制工作技术解析——以国道344西安过境公路为例

以国道344西安过境公路建设项目为例,对永久基本农田补划方案的技术要点进行了论述。通过GIS空间分析法,以鄠邑区为例对建设项目途经区县的永久农田补划潜力图斑进行提取,综合分析得出项目涉及区县的永久基本农田后备补划潜力的空间分布情况,为新时期国土空间规划背景下基本农田补划方案编制提供了参考。

Fischer 344大鼠上皮性卵巢癌动物模型的建立及其生物学特性

目的 :在具有正常免疫功能的Fischer3 44大鼠体内建立卵巢上皮癌模型并探讨其生物学特性。方法 :体外培养近交系Fischer3 44大鼠卵巢上皮低分化腺癌细胞株NuTu 1 9,采用细胞计数和MTT法观察细胞生长情况及其对顺铂 (cDDP) ,5 氟尿嘧啶 (5 FU)和足叶乙甙 (VP 1 6)的敏感性。将对数生长期的NuTu 1 9按 1× 1 0 7、1× 1 0 6和 1× 1 0 5细胞 /只接种于雌性Fischer3 44大鼠腹腔内 ,建立卵巢癌腹腔转移模型 ,观察成瘤率、肿瘤生长、播散情况及动物生存期 ,并对腹腔肿瘤进行病理学检查和原代组织培养 ,确定肿瘤的存在及性质。结果 :在体外培养条件下NuTu 1 9细胞生长迅速 ,其倍增时间约 1 8.9h。NuTu 1 9对cDDP和VP 1 6等卵巢癌常用化疗药物高度敏感。将不同数量的NuTu 1 9细胞接种大鼠腹腔后 ,成瘤率为 1 0 0 % ,迅速发生腹腔播散并产生大量血性腹水 ,其生物学行为与人类卵巢上皮癌相似。肿瘤细胞负荷增加 ,动物生存期明显缩短 (P <0 .0 1 )。模型动物肿瘤组织病理学检查证实胸腹腔多脏器肿瘤播散 ,腹腔肿瘤原代培养证实肿瘤组织的细胞形态和生物学特性与NuTu 1 9细胞一致。结论 :在具有正常免疫功能的大鼠体内建立卵巢上皮癌动物模型 ,有助于了解卵巢癌生物学及免疫学特性 。

牛黄参含药血清对肝干细胞WB-F 344增殖和凋亡的影响

目的研究牛黄参含药血清对大鼠肝干细胞WB-F344增殖及凋亡的影响,探讨益气解毒法诱导肝干细胞的作用机制。方法采用中药血清药理学方法,以不同浓度的牛黄参含药血清(5%、10%、20%)作用于WB-F344,以正常大鼠血清(5%、10%、20%)处理的WB-F344为空白对照组,以单纯培养体系处理的WB-F344为正常对照组;四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞的增殖,取药物血清的最佳增殖浓度,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经牛黄参含药血清干预后,MTT检测结果显示10%、20%浓度的牛黄参含药血清均能促进WB-F344的增殖(P<0.01),且10%为增殖的最佳浓度梯度;10%牛黄参含药血清作用的WB-F344细胞凋亡率与空白、正常对照组相比显著下降(P<0.01),且以10%牛黄参含药血清成分组效果最佳。结论牛黄参含药血清可在一定程度上促进WB-F344细胞的增殖,抑制其凋亡,这可能是益气解毒法作用于肝干细胞的机制之一。

四逆散含药血清对大鼠肝干细胞WB-F344增殖分化的影响

目的研究四逆散(柴胡,白芍,枳实,甘草)含药血清诱导大鼠肝干细胞WB-F344分化的作用。方法 SD大鼠灌胃四逆散,取其含药血清处理WB-F344细胞,应用CCK-8方法检测细胞活性,Western blot法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞色素P450 3A(CYP 3A)蛋白表达,PCR检测AFP、ALB的mRNA水平,PAS法检测糖原合成功能,尿素氮检测试剂盒观察尿素氮合成功能,Mito Tracker Red染色法检测线粒体数目,Clark氧电极检测细胞耗氧量,荧光素酶法测定细胞内ATP水平,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果含药血清对实验细胞无毒性作用,10%含药血清显示出较好的促进细胞增殖的效果;含药血清作用后,AFP的蛋白及基因水平有降低趋势,ALB的蛋白及基因水平有升高趋势,糖原合成功能、尿素氮合成功能提高,CYP 3A蛋白水平有一定增加。同时,线粒体数目增加,细胞呼吸功能、ATP水平、线粒体膜电位都有一定程度增加。结论四逆散含药血清可促进肝干细胞增殖、诱导其分化,可能为促进肝损伤修复的机制之一。

瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseFF和SephacrylS 200柱层系,从瘦肉型猪(PIC344)精液中提取出碱性磷酸酶。纯化倍数11 46,比活为81 23U/mg蛋白。提取液经PAGE和SDS PAGE检测,呈现一条带。该酶相对分子质量为90 12KD,亚基分子质量为48 41KD,该酶为两个相同亚基组成。等电点为8 19,最适pH值9 5,最适温度为40℃,以磷酸苯二钠为底物测得Km值为3 98×10-4mol/L。经分析,Cu2+、Cd2+为酶的抑制剂,Ni2+、Ca2+、Mg2+为该酶的激活剂。选用CuSO4、Cd(NO3)2作酶的抑制类型判断,结果表明,CuSO4为非竞争性抑制,抑制常数为1 32×10-3mol/L,Cd(NO3)2为竞争性抑制,抑制常数为3 33×10-4mol/L。

条件恐惧训练对F_(344)大鼠行为活动的影响

目的 诱导焦虑反应模型,观察焦虑反应对大鼠行为活动的影响。方法 条件恐惧训练,行为检测。结果 连续 4d的条件恐惧训练后,与对照组相比,F344大鼠在木僵行为实验中木僵反应增多884% (P<0. 001),小范围探究运动减少 88% (P<0. 001);在高架十字迷宫实验中,进入开放壁的次数和在开放壁停留时间分别减少 75% (P<0. 001)和 86% (P<0. 001);在开野实验中,踩格子数和在中央格停留时间分别减少 47% (P<0. 001)和 60% (P<0. 05)。结论 条件恐惧训练使大鼠焦虑反应增强,探究活动能力下降,它是一种诱导焦虑反应模型较理想的方法。

低硒对F344纯系大鼠子代神经行为发育和学习记忆能力的影响

目的建立F344纯系大鼠低硒动物模型,观察低硒对子代仔鼠神经行为发育和空间学习记忆能力的影响。方法以纯系F344大鼠为实验对象,采用人工半合成饲料(低硒组饲料硒含量<0.01mgkg,补硒对照组饲料中硒含量为0.1～0.3mgkg)建立低硒大鼠模型,观测子一代仔鼠哺乳期的生长体重变化、生长发育生理学指标和神经反射指标,并采用开场实验、Morris水迷宫实验检测其行为活动和空间学习记忆能力。结果(1)低硒组大鼠尾血GSHPx活性极其显著地低于对照组(P<0.001)。(2)低硒组仔鼠的出生体重和哺乳期神经发育不同时间点体重明显低于对照组。(3)仔鼠出生后第4天平面翻正和悬崖回避、第10天听觉惊愕反射实验中,低硒组评分均低于对照组(P<0.05),但在第7天平面翻正、悬崖回避和第11天后的听觉惊愕反射实验以及第12、14天前肢悬挂、后肢行走能力实验中,两组仔鼠结果差异无统计学意义(P>0.05)。(4)开场实验中:低硒组雄仔鼠在中央格停留时间、穿行格数较对照组明显减少(P<0.05)。(5)Morris水迷宫实验:①低硒组仔鼠第4、5天的定位航行实验中,平均潜伏期比对照组明显延长(P<0.05);在第6、9时间段的直线式搜索方式也较对照组减少(P<0.05);②低硒组在空间探索实验中,原站台象限活动时间较对照组减少(P<0.05)。结论成功利用纯系F344大鼠建立了低硒动物模型,母代长期硒缺乏导致了子一代F344仔鼠出生体重减低、生后体格发育和神经行为发育的迟缓,雄性仔鼠对新异环境中的适应能力减弱,并且导致了子代仔鼠空间学习和记忆能力能力的减弱。

压铸模具用ES-344ESR钢的失效分析

德国产压铸模具用钢ES 344ESR合金,经1010℃淬火和620℃回火后,压铸生产铸件8000件后,表面产生严重裂纹。通过成分分析、硬度测试、金相组织观察和扫描电镜断口及组织分析,发现合金反常失效主要来自两个方面的原因。一是合金热处理后,残余奥氏体含量比较多,使用后硬度(HRC28)过低,加上合金中的碳化物呈网状分布,降低了冲击韧性;二是由于变质剂或除气剂中的氯在高温时和水蒸气一道在应力的作用下产生了应力腐蚀。文章最后提出了相应的改进建议。

两种诱发Fischer344大鼠卵巢癌动物模型建立方法的比较

目的对细胞培养腹腔播散和局部埋线诱导的两种卵巢癌造模方法进行比较。方法①将细胞数5×106和5×107的大鼠上皮性卵巢癌细胞株Nutu-19细胞腹腔接种到同种的Fisch-er344大鼠腹中,观察大鼠的诱癌情况;②将含有二甲基苯蒽(DMBA)的棉线局部植入Fischer344大鼠卵巢中造成卵巢癌模型。结果通过两种诱癌方法的比较,局部埋线诱导法能够很准确地造成局部肿瘤模型,具有时间短,操作简单等优点。结论局部埋线诱导法诱导的大鼠卵巢癌动物模型大大地缩短了实验时间,具有较强的特异性。

过氧化氢促肝卵圆细胞株WB-F344的增殖及转化作用

目的 探讨过氧化氢（H_2O_2）对肝卵圆细胞株WB-F344的促增殖及转化作用。 方法 用H_2O_2直接作用于培养的WB-F344细胞，以MTT 比色试验、3H-TdR掺入液闪计数观察其对细胞的促增殖效应；经N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）启动的和未经MNNG启动的WB细胞用小剂量H_2O_2连续作用促其转化，以形态学观察、核型分析及甲基纤维素半固体培养进行检测。 结果 小剂量的H_2O_2一次作用具有明显的促进WB细胞增殖的效应，连续作用28 d，可促进经MNNG启动的和未经MNNG启动的WB细胞发生转化，形态上呈现典型的转化细胞的特征；核型分析显示染色体数目改变，染色体结构畸变率明显升高；在甲基纤维素半固体培养基中形成克隆。 结论 小剂量H_2O_2可诱使肝卵圆细胞增殖、转化，提示H_2O_2在肝癌发生中可能具有重要作用，抗氧化作用可能在肝癌的防治中具有一定的意义。

模拟微重力条件下WB-F344细胞的三维培养

与传统的单层平面培养相比,细胞三维培养可更好地模拟生物体内细胞的生长状态和微环境。以Cytodex-3微载体为支持物,利用旋转式细胞培养系统(RCCS)模拟微重力条件,悬浮培养法构建大鼠WB-F344细胞微重力三维培养模型。并通过细胞计数、光学显微镜、透射电镜、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术等方法分析了细胞增殖、显微结构、粘附分子及钙粘蛋白(E-cadherin)表达情况。结果表明,模拟微重力三维培养条件下WB-F344细胞增殖块,呈紧密多层排列、可见丰富的微绒毛和线粒体、胞间有桥粒和紧密连接形成,细胞粘着力加强、表现出良好的三维生长特征;与静置三维培养相比,纤粘连蛋白(Fn)mRNA表达呈上调趋势,细胞内E-cadherin表达量增加,这可能是微重力效应下细胞粘附力增强的部分机制。该培养体系可能有利于细胞之间,细胞与胞外基质之间相互作用及其作用机制的研究。

近交系F344大鼠喉移植改良模型的建立

背景与目的:喉为非生命必需器官,喉移植研究一直滞后于其它生命必需器官的移植,然而,一旦宿主对移植喉的免疫耐受诱导成功,那么,喉移植将是晚期喉癌治疗和喉功能重建的重要手段。本研究的目的在于建立改良鼠喉移植模型,提高受体鼠和移植喉的存活率,为喉移植抗免疫排斥和免疫耐受诱导研究提供动物模型。方法:采用近交系F344大白鼠建立喉移植Strome模型,并对该模型进行改良:供体喉切取时保留甲状腺上动脉和咽升动脉,形成舌骨、舌根、下咽、喉、甲状腺、部分颈段食管、气管的移植复合体,移植喉血运通过供体鼠双侧颈总动脉分别与受体鼠颈总动脉和颈前静脉端-端吻合重建,术中行对侧颈外静脉穿刺补液,术后皮下注射补液。术后1周解剖移植喉,观察移植喉大体形态和血管通畅情况,常规病理检查评价移植喉的组织变化和存活状况,对比Strome模型和改良模型的受体鼠及移植喉存活率。结果:StromeA组、StromeB组、改良组的受体鼠存活率和各组移植喉存活率分别为70%(14/20)、85%(17/20)、95%(19/20)和30%(6/20)、40%(8/20)、80%(16/20),改良模型优于Strome模型。结论:与Strome模型比较,改良模型加强围手术期的处理,降低受体鼠的死亡率;将咽升动脉及其分支包含在移植复合体中,增加移植血管蒂中喉供血动脉的侧支循环,降低侧支循环阻力,减少微循环障碍的发生率,提高移植喉的存活率。

SPF级F344大鼠的脏器重量和自发性病变的研究

目的建立F344大鼠的背景资料，为药物安全评价的病理学评价提供基础。方法10只溶剂对照用F344大鼠．7—10周龄，体重70—200g，雌雄各半，处死后解剖，称量脑、心、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺、睾丸或子宫和卵巢的绝对重量并计算相对体重和脑重的相对重量，并对上述称量脏器和胸骨、股骨、眼球、胃肠道、胰腺、附睾和前列腺或阴道、坐骨神经、肌肉、甲状腺进行病理检查。结果雄性大鼠的脑、心、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺和睾丸的绝对重量分别为：1．736±0．080，0．597±0．009，5．825±0．305，0．355±0．016，1．267±0．029，0．039±0．006，0．291±0．058和2．087±0．081；对体重的相对重量分别为：1．009±0．027。0．347±0．013，3．385±0．094。0．207±0．010。0．737±0．022。0．022±0．003，0．169±0．032和1．215±0．073；对脑重的相对重量分别为：0．345±0．021，3．356±0．091，0．205±0．015，0．731±0．031，0．022±0．003。0．168±0．034和1．206±0．105。雌性大鼠的脑、心、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺、卵巢和子宫的绝对重量分别为：1．642±0．066，0．446±0．009，3．677±0．262。0．319±0．012，0．947±0．057，0．041±0．012。0．246±0．043。0．050±0．011和0．267±0．062；对体重的相对重量分别为：1．338±0．100，0．363±0．021，2．996±0．288。0．259±0．016．0．772±0．070．0．034±0．010，0．201±0．038，0．041±0．009和0．217±0．051；对脑重的相对重量分别为：0．272±0．005。2．237±0．101。0．194±0．011，0．577±0．028，0．025±0．008。0．150±0．022。0．030±0．007和0．163±0．042。大体解剖均未见改变．病理组织学检查可见脾脏髓外造血、肝细胞空泡变性、肝脏小灶性炎、肾脏嗜碱性肾小管、肾脏皮髓交界处钙盐沉积、脾脏色素沉积、前列腺间质淋巴组织增生等自发性病变。结论在本试验条件下，10周龄内F344大鼠可出现自发性病变，但程度均较轻；其脏器重量可作为药物安全评价的病理学评价基础。

丁酸钠体外诱导大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞分化为胆管上皮细胞

目的:观察不同浓度丁酸钠对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞生长、分化的影响,探讨丁酸钠体外诱导WB-F344细胞分化为胆管上皮细胞的条件及分化规律。方法:不同浓度丁酸钠(0.75、2.25、3.75、4.5mmol/L)作用于WB-F344细胞(丁酸钠处理组),观察细胞形态学的变化,MTT法检测细胞生长情况,3.75mmol/L丁酸钠作用WB-F344细胞后,免疫组化观察细胞角蛋白19(CK19)蛋白表达的变化;RT-PCR观察CK19、β4-整合蛋白、γ-谷胺酰转肽酶(GGT)以及甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)mRNA表达的变化。以同期常规培养未作处理的WB-F344细胞作为空白对照组。结果:丁酸钠处理后,各组WB-F344细胞生长均受到抑制,3.75、4.5mmol/L丁酸钠处理组光密度值明显低于空白对照组(P<0.01),而0.75、2.25mmol/L组与空白对照组无明显差异;3.75、4.5mmol/L丁酸钠诱导后细胞变大变圆,细胞核增大,核质比减小,而0.75、2.25mmol/L组细胞形态无显著变化。3.75mmol/L丁酸钠处理组WB-F344细胞CK19阳性率为(92.3±1.1)%,明显高于空白对照组(1.3±0.2)%(P<0.01)。3.75mmol/L丁酸钠处理组可见β4-integrin表达,而空白对照组未见表达;GGT、CK19表达较空白对照组增强;空白对照组见AFP表达,而3.75mmol/L丁酸钠处理组未见表达;ALB在两组均未见表达。结论:3.75mmol/L丁酸钠适合体外诱导大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞向胆管上皮细胞分化。

K344型注水封隔器封层性能优化研究

针对现有K344型封隔器密封压差低,抗蠕动性能差等问题,对其进行了优化改进设计。改进后的K344型封隔器采用分离式双胶筒和加钢网结构;胶筒材料采用氢化丁腈胶;还增加设计了定载机构和压力保护机构。室内和现场试验及50口井的推广应用表明,改进后的K344封隔器设计合理,具有密封压差高、抗蠕动性能好、胶筒抗磨、耐击穿能力强等特点;定载和压力保护机构提高了封隔器的操作可靠性;这种封隔器可以作为分注井的常规工具在油田现场广泛推广应用。

苦参碱含药血清对WB-F344细胞形态、增殖和Jagged1信号分子表达的影响

目的研究苦参碱含药血清对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞形态、增殖及Jagged1信号分子表达的影响,探讨苦参碱对肝干细胞诱导分化的作用机制。方法用不同浓度苦参碱含药血清(5%、10%、20%)作用于WB-F344细胞,以未用苦参碱含药血清处理的WB-F344细胞为空白对照组,观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学法观察ALB、Jagged1蛋白表达变化,RT-PCR观察Jagged1、Hes1mRNA表达的变化。结果经苦参碱含药血清干预后,WB-F344细胞形态发生明显改变:药物组细胞较对照组细胞体积增大,核缩小,核浆比减小,培养48 h大部分细胞呈多边形。MTT结果显示,5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清24、48、72 h均能不同程度抑制WB-F344增殖,且存在时间、剂量依赖性。免疫细胞化学结果显示,空白对照组WB-F344细胞表达Jagged1蛋白,不表达ALB蛋白,经苦参碱含药血清处理后Jagged1蛋白表达显著下降(P<0.01),ALB蛋白表达显著升高(P<0.01)。RT-PCR结果显示,经苦参碱含药血清处理后Jagged1mRNA、Hes1mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论苦参碱含药血清可诱导WB-F344细胞向肝细胞特性方向分化,其作用机制与调节Notch信号通路的关键分子有关。

Leco C S-344红外碳硫分析仪实际使用及故障排除的点滴经验

我室引进的美国Leco C S—344碳硫分析仪,已使用了12年,分析了近13万个试样,在测试过程中曾出现过一些问题。现将一些实际使用情况及说明书未注明的故障及其原因介绍如下,供参考。

水平井K344封隔器不动管柱分段压裂技术及应用

针对前期水平井多段分段压裂,采用Y系列封隔器压后不能解封,油套不连通,开滑套球滞留井筒可能导致排液和采气通道不畅通、不能动管柱等难题。采用K344封隔器具有不动管柱压裂段数多,冲砂容易,不丢失压裂层段,压后自动解封,流动通道畅通及后期易于提出管柱等优点。经现场试验4口水平井,均顺利完成加砂压裂,最多分段数为10段,3口井压后封隔器解封,油套联通,较前期Y系列封隔器分段缩短测试周期30%以上,平均单井测试产量3.11×104m3/d,增产效果显著,在川西致密气藏水平井分段压裂改造具有更好的适应性。