齐墩果酸对衰老睾丸间质细胞(Leydig细胞)的作用以及EGF/EGFR表达的影响

目的观察齐墩果酸对衰老睾丸间质细胞(Leydig细胞)的影响以及对表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的调控作用。方法原代培养大鼠Leydig细胞,将其分为正常组、模型组和齐墩果酸组。模型组和齐墩果酸组采用H2O2(300μmol/L)和FeSO4(100μmol/L)每日处理2 h,持续4 d,造细胞衰老模型。之后正常组和模型组在DMEM/F12培养液培养3 d,齐墩果酸组在齐墩果酸终浓度为20μmol/L的DMEM/F12培养液中培养3 d。ELISA法检测细胞睾酮分泌情况;BrdU免疫荧光染色检测细胞增殖率;DAPI荧光染色检测细胞凋亡率;qRT-PCR检测细胞EGF和EGFR mRNA表达。结果模型组睾酮分泌水平、细胞增殖率、EGF和EGFR mRNA表达水平均低于正常组(P<0.05),凋亡率均高于正常组(P<0.05)。齐墩果酸可抑制Leydig细胞凋亡(P<0.05),并提高细胞睾酮分泌水平、细胞增殖水平、EGF和EGFR mRNA表达水平(P<0.05)。结论齐墩果酸可促进衰老Leydig细胞睾酮分泌及细胞增殖、抑制细胞凋亡,其机制与调控EGF和EGFR mRNA表达有关。

LHCGR基因突变致Leydig细胞发育不全患者的临床特点及遗传分析

社会性别为女性,以原发性闭经伴性征异常的46,XY性发育异常(DSD)患者,可涉及多种病因,包括单纯性性腺发育不全、雄激素生物合成途径中不同酶的缺陷或雄激素作用缺陷(雄激素不敏感综合征)等。本文报道了1例“四不像”46,XY DSD病例,结合临床推理和基因检测,最终将其归类为特异诊断——睾丸间质细胞(Leydig细胞)发育不全,是由黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体(LHCGR)基因突变,导致Leydig细胞发育不全而不能分泌足够雄激素的罕见病变。在了解其发病机制的基础上,就不难理解其类女性外观而无子宫,雄激素低而黄体生成素和抗苗勒管激素明显升高的特点。在与常见DSD疾病模板比对并发现“不同点”的基础上,基因检测有助于我们找到特异的病变基因,进而明确诊断,拓展疾病谱和提升鉴别诊断能力。

卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤临床病理特征分析(附5例)

目的:分析卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor, SLCT)临床病理特征。方法:报道5例卵巢sertoli-Leydig细胞瘤,总结其镜下表现,免疫组化特点,并复习文献。结果:5例卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤,2例低分化,其余3例为高分化,中分化和网状型。Sertoli细胞,表达α-inhibin、Calretinin、WT-1,Leydig细胞α-inhibin、Claretinin表达比Sertoli细胞强,还可表达Melan-A。结论:卵巢Sertoli-Leydig细胞瘤是一种罕见的卵巢肿瘤,其形态丰富要注意和许多疾病鉴别诊断,病理医生应充分了解其病理特征避免出现误诊和漏诊。

卵巢甲状腺肿伴间质Leydig细胞增生误诊1例

卵巢甲状腺肿是较常见的单胚层畸胎瘤，但伴间质Leydig细胞增生者鲜有报道。在日常工作中遇到1例，该例镜下表现与分化较好的Sertoli—Leydig细胞瘤相似，现总结如下。

大鼠睾丸Leydig细胞的培养和鉴定

目的:研究体外培养大鼠睾丸Leyd ig细胞的有效方法。方法:原代培养大鼠睾丸Leyd ig细胞,用4 U/m l人绒毛膜促性腺激素(hCG)作用细胞,对照组未用hCG,放射免疫法测定培养液中睾酮浓度,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫组化染色观察睾丸Leyd ig细胞形态和生物学特性。结果:培养细胞成分均一、增殖旺盛、分化率高。接种72 h后大鼠睾丸Leyd ig细胞纯度达95%。接种后24 h内,hCG刺激组较对照组睾酮分泌量明显提高(P<0.05)。结论:体外培养的睾丸Leyd ig细胞可分泌高浓度的睾酮;睾丸Leyd ig细胞的纯化和培养方法的建立,可为中老年男性雄激素部分缺乏综合征睾酮替代治疗的基础和临床研究提供一条可行的思路。

雄蚕益肾方对LOH大鼠Leydig细胞胆固醇转运蛋白、睾酮合成酶和SF-1表达的影响

目的:探讨雄蚕益肾方对LOH大鼠Leydig细胞胆固醇转运蛋白、睾酮合成酶和SF-1表达的影响。方法:25只18月龄雄性SD大鼠随机均分为模型组、丙酸睾酮组、雄蚕益肾方-低、中、高剂量组,2月龄雄性SD大鼠5只设为正常组。雄蚕益肾方-低、中、高剂量组分别给予10.4、20.8、41.6 g/(kg·d)体重剂量的雄蚕益肾方配方颗粒剂灌胃;丙酸睾酮组大鼠肌注5.21 mg/(kg·d).体重剂量的丙酸睾酮,每周3次;正常组和模型组给予相同体积的蒸馏水灌胃,均连续28 d。实验结束后取睾丸组织进行Western印迹检测StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4和SF-1蛋白表达。结果:模型组大鼠睾丸组织StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4蛋白和SF-1表达均显著低于正常组(P<0.05);与模型组相比,雄蚕益肾方-低、中、高各剂量组大鼠睾丸组织StAR、TSPO、CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4蛋白和SF-1显著增高(P<0.05)。结论:雄蚕益肾方能上调LOH大鼠睾丸组织胆固醇转运蛋白(StAR、TSPO)、睾酮合成酶(CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4)以及上游转录因子SF-1表达水平,可能是其干预LOH的机制之一。

hCG对成年小鼠睾丸Leydig细胞中睾酮生成酶的调节作用

目的 从分子水平探讨 h CG对成年小鼠睾丸 L eydig细胞中胆固醇侧链裂解酶 (P45 0 scc)、17α-羟化酶 (P45 0 c17)和 3β-羟甾脱氢酶 (3βHSD)的调节作用。 方法 体外培养成年小鼠睾丸 L eydig细胞 ,分别测定培养1、8h h CG刺激组及对照组细胞培养上清中睾酮含量 ,同时运用半定量 RT- PCR及核酸内切酶酶切方法测定两组细胞中 P45 0 scc、P45 0 c17及 I、VI两型总的 3βHSD的 m RNA水平 ,并测定了 I、VI两型 3βHSD m RNA的比值。 结果 1.培养 1、8h刺激组睾酮含量均明显高于对照组 (1h P<0 .0 1,8h P<0 .0 0 5 ) ;2 .培养 8h,刺激组 P45 0 scc和P45 0 c17m RNA水平明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;而培养 1、8h刺激组 I、VI两型总的 3βHSD m RNA水平和对照组相比均无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但 VI型 3βHSD m RNA和 I型 3βHSD m RNA的比值逐渐增高。 结论 h CG能在转录水平刺激 P45 0 scc、P45 0 c17及 VI型 3βHSD的表达 ,促进睾酮生成。

小鼠胚胎睾丸Leydig细胞培养、纯化及其功能研究

目的:探讨小鼠胚胎睾丸Leyd ig细胞体外培养、鉴定、纯化的方法,并进行形态学观察、分泌睾酮能力等生物学特性检测。方法:选择胎龄16 d的胎鼠睾丸,0.03%胶原酶Ⅰ消化,3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD)染色鉴定及纯度测定,锥虫蓝染色检测细胞活率。放免法测定Leyd ig细胞不同培养时间及密度下分泌睾酮的水平。结果:Leyd ig细胞培养前和培养72 h后纯度分别为(45.10±1.66)%和(81.17±2.32)%;培养液中可检测到睾酮,睾酮水平与Leyd ig细胞数、培养时间相关,单个Leyd ig细胞睾酮分泌能力逐日下降。结论:该法分离的胚胎Leyd ig细胞纯度较高,生长性好,保持增殖和分泌睾酮的生物学特性,可应用于相关的研究。

血管活性肠肽对大鼠Leydig细胞的免疫调节作用

目的:研究血管活性肠肽(VIP)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)免疫功能的调节。方法:以VIP作用于溶脲脲原体(UU)感染的SD大鼠及大鼠Leydig细胞为研究对象,观察VIP对大鼠Leydig细胞分泌的细胞因子(IL-1、IL-6及TGF-β)和FasL表达的调节,从体外及动物整体水平来探讨VIP对大鼠Leydig细胞免疫功能的调节。结果:在睾丸局部感染时,VIP能调节Leydig细胞IL-1、IL-6、TGF-β及FasL的分泌和表达格局;同时VIP对大鼠睾丸局部免疫豁免的调节和维持也起到一定的作用。结论:VIP能调节大鼠Leydig细胞的免疫功能,并参与调节大鼠睾丸局部的免疫豁免。

血管活性肠肽对leydig细胞分泌的IL-1、IL-6和TGF-β的影响

目的研究血管活性肠肽(VIP)对感染时的leydig细胞分泌的细胞因子IL-1I、L-6和TGF-β的影响。方法SD大鼠的睾丸经Ⅱ型胶原酶消化、过滤及Percoll分离获得高纯度、高活率的leydig细胞,经不同剂量的VIP作用后,再感染溶脲脲原体(UU),观察在UU感染时,不同剂量VIP对leydig细胞分泌的IL-1(MTT法)I、L-6、TGF-β(ELISA法)的影响。结果UU感染时,VIP对leydig细胞分泌的细胞因子有明显的影响:能促进leydig细胞分泌IL-1(活性)、抑制IL-6(含量)分泌;同时既能促进(高剂量VIP)又能抑制(低剂量VIP)TGF-β分泌。结论在UU感染时,VIP能改变大鼠leydig细胞细胞因子的分泌格局,表明VIP在抗感染免疫中具有一定的免疫调节作用。

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对原代培养小鼠胚胎睾丸Leydig细胞功能影响研究

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[D i(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]对体外培养的小鼠胚胎睾丸间质细胞(Leyd ig细胞)3β-羟基类固醇脱氢酶(3-βHSD)活性及睾酮合成的影响。方法小鼠胚胎Leyd ig细胞原代培养。DE-HP染毒剂量分别为25、50、100、200 mg/L,通过检测睾酮合成关键酶3β-HSD活性、放免法测定培养液中睾酮浓度,研究DEHP对Leyd ig细胞功能影响。结果小鼠胚胎Leyd ig细胞分离培养后,纯度和存活率分别达(81.17±2.32)%、(80.88±2.80)%。DEHP(25 mg/L)处理12 h,或DEHP(50 mg/L)处理6 h后,实验组与对照组比较3β-HSD酶活性明显降低(P<0.05),随着时间延长和药物浓度增加差异更显著(P<0.01)。DEHP50、100 mg/L实验组,在12、24 h的睾酮水平明显低于对照组(P<0.05)或(P<0.01),存在时间-效应关系;DEHP 200 mg/L实验组在6、12、24 h与对照组比较均有非常显著差异(P<0.01),并可观察到Leyd ig细胞明显的形态学改变。结论DEHP能影响原代培养小鼠胚胎Leyd ig细胞3β-羟基类固醇脱氢酶活性,并抑制睾酮合成,存在时间-效应和剂量-效应关系。

邻苯二甲酸二乙基己酯对新生小鼠睾丸及Leydig细胞影响的实验研究

目的：探讨邻苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）对新生小鼠睾丸及Leydig细胞形态结构及功能的影响。方法：DEHP分别以低、中、高3组剂量[100、200、500mg／（kg·d）]灌胃作用于怀孕12d到产后3d（GD12～PND3）的KM母鼠，观察DEHP对新生雄性仔鼠体重、睾丸重量、Leydig细胞形态结构和3β-羟基类固醇脱氢酶（3β—HSD）活性、酶反应面积的影响。结果：DEHP作用于母鼠后，其雄性子代幼鼠体重和睾丸重量减轻，睾丸Leydig细胞形态、超微结构发生改变；高剂量组Leydig细胞数量明显增多；低、中剂量组睾酮合成关键酶3β-HSD酶活性下降，酶反应面积减小，但高剂量组在仔鼠出生后15d时酶活性降低[（吸光度值（0．154±0.011）1）8空白对照组（0．222±0.013），P〈0．01]，而酶反应面积增大[（6303．0±745．6）μm^2 vs 空白对照组（5091．4±214．4）μm^2，P〈0．01）]。结论：DEHP能影响新生雄性小鼠体重、睾丸重量、Leydig细胞的形态结构和3B—HSD活性，具有抗雄激素效应。

TGF-β1对大鼠睾丸Leydig细胞间连接蛋白43介导缝隙连接通讯功能的影响

目的:观察转化生长因子TGF-β1对成年大鼠睾丸Leydig细胞间连接蛋白Cx43表达以及由Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的影响,旨在探讨TGF-β1对Leydig细胞的影响是否与其改变细胞间GJIC功能相关。方法:将原代培养纯化的Leydig细胞分为6组:实验组分别以1、2、5、10 ng/ml的TGF-β1处理细胞20 h,空白对照组以含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液处理细胞,部分实验中以GJIC抑制剂甘珀酸(Carbenox-olone)处理细胞作为阳性对照组。采用免疫荧光法和Western印迹观察Cx43在细胞中的定位和表达变化,用荧光漂白恢复实验(FRAP)检测细胞间GJIC功能的改变。结果:Cx43表达呈斑点状散在分布于Leydig细胞的胞质和胞膜中,TGF-β1处理20 h后,Cx43在胞质中的表达强度随着TGF-β1浓度的增加较空白对照组明显增强,而其在胞膜中的表达则无明显改变。Western印迹结果显示磷酸化状态的Cx43随着TGF-β1浓度增加表现出较空白对照明显增强的趋势(P<0.05),而非磷酸化状态则无显著差异。FRAP结果显示经5 ng/ml TGF-β1作用20 h后细胞内荧光强度较空白对照明显减弱,具有显著性差异(P<0.01),且其平均荧光恢复率仅为(43.58±1.87)%。结论:TGF-β1可显著下调Leydig细胞间的GJIC功能,这种抑制作用可能通过增加其连接蛋白Cx43在细胞质中的表达,提高其磷酸化水平来实现。

TNF-α对大鼠Leydig细胞的作用及机制研究

目的 观察TNF-α对睾丸细胞功能的影响并探讨其可能机制。方法 通过Percoll不连续密度梯度分离获取大鼠Leydig细胞进行原代培养。HE染色进行细胞形态学观察。Leydig细胞培养48h后在培养液中分别加入不同浓度的大鼠TNF-α，使其终浓度达到0．1、1、10、100ng／ml，分别在培养的第1、2．3、4天取上清，通过放免法测定上清液中睾酮的含量，应用MTT法测定细胞增殖情况，流式细胞术与丫啶橙（AO）染色检测及观察Leydig细胞凋亡情况。结果 原代细胞通过提纯后的细胞纯度可达70％～80%。HE染色后可见细胞胞质含量丰富，含有分泌颗粒，胞核圆。TNF-α在0．1～100ng／ml浓度范围内能呈剂量依赖的方式抑制Leydig细胞睾酮的基础分泌。0．1、1、10、100ng／ml TNF-α作用24h后，对Leydig细胞睾酮分泌量的抑制率分别为22．03％、34．98％、52．95％、74．83％。各组Leydig细胞睾酮的分泌量随时间延长呈减少的趋势，但除100ng／ml组外，其他各组各时间点比较差异无统计学意义。高浓度TNF-α（10、100ng／m1）组具有抑制Leydig细胞增殖和促进其凋亡作用，其增殖抑制率分别达到38．35％±4．17％、76．35％±8．65％，而凋亡率分别为13．23％±1．11％、26．43％±5．82％，与对照组比较有统计学意义（P〈0．01）。AO染色见高浓度TNF-α（10、100ng／ml）组出现明显的细胞凋亡。结论TNF-α对Leydig细胞睾酮的基础分泌具有抑制作用，在较高浓度时该作用可能与其抑制Leydig细胞增殖并促进细胞凋亡有相关。

DEHP对雄性仔鼠胚胎Leydig细胞雄激素合成的影响

目的:研究邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对雄性仔鼠胚胎Leydig细胞(FLC)雄激素合成的影响。方法:DEHP分别以低、中、高3组剂量(10、100、750 mg.kg-1.d-1)灌胃作用于怀孕12 d到产后1 d(GD12-PND1)的SD母鼠,观察DEHP对雄仔鼠血清睾酮(T)水平、睾丸FLC形态结构、睾丸FLC的类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)及胰岛素样生长因子1(IGF-I)mRNA的相对表达量(ΔΔCT法)。结果:低剂量组血清T水平显著高于对照组(P<0.01);而中、高剂量组血清T水平显著低于对照组(P<0.05)。光镜下低剂量组可见间质细胞聚集呈簇分布,中剂量组与高剂量组均可见间质细胞呈瘤样增生。电镜示低剂量组间质细胞椭圆形、长梭形,脂质颗粒减少,线粒体、滑面内质网丰富。中、高剂量组间质细胞呈梭形或椭圆形,大小不一,核大、圆,胞浆丰富,细胞聚集一起,胞质内可见丰富的脂质颗粒,脂质颗粒染色深,滑面内质网及线粒体扩张。高剂量组睾丸FLC的StAR mRNA的相对含量显著低于对照组(P<0.01)。低剂量组睾丸FLC的IGF-Ⅰ mRNA相对含量显著高于对照组(P<0.01)。结论:DEHP对新生雄性仔鼠睾丸FLC有毒性作用,可影响雄性仔鼠睾丸FLC的形态学及其生成类固醇的能力。其可能机制是低剂量DEHP宫内暴露后,促进睾丸FLC的IGF-ⅠmRNA表达从而引起血清睾酮升高,而高剂量DEHP可能通过抑制睾丸FLC StAR mRNA表达从而降低血清睾酮水平。

5周间歇性负重游泳训练对大鼠睾丸Leydig细胞胆固醇代谢的影响

采用实时荧光定量PCR的Taqman技术探讨5周间歇性负重游泳训练导致大鼠血清睾酮水平降低时,大鼠睾丸Leydig细胞胆固醇代谢关键环节上的HMG-CoA还原酶、LDL-R、SR-BI、类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)基因表达的变化。结果显示,运动引起血清睾酮显著降低时(P<0.01),Leydig细胞内LDL-R mRNA表达量显著增加(P<0.05),HMG-CoA还原酶、SR-BI、StAR mRNA表达量无显著性变化。结果表明当大鼠以负重5%体重的负荷强度进行5周的间歇性游泳训练引起血清睾酮显著降低时,Leydig细胞通过LDL-R介导的内吞作用摄取外源性胆固醇作用加强,Leydig细胞内胆固醇的合成、摄取和转运的关键环节未发生障碍。

邻苯二甲酸酯染毒哺乳期母鼠对雄性仔鼠睾丸Leydig细胞形态及功能的影响

目的:观察邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对哺乳期雄性仔鼠睾丸子Leydig细胞(PLC)形态和功能的影响及作用机制。方法:SD孕鼠20只,随机均分为4组(n=5):正常对照组,低剂量组,中剂量组,高剂量组。仔鼠出生第1天起分别以0、10、100、750 mg/(kg·d)DEHP灌胃染毒母鼠,直到仔鼠出生后21 d。用化学发光法检测雄性仔鼠血清睾酮(T)水平;测量体重、睾丸重量、肛生殖器距离(AGD);光镜及电镜下观察睾丸Leydig细胞形态结构;免疫组化方法检测睾丸类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)表达;Real-time PCR法检测睾丸胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA的表达。结果:与正常组比较,低剂量组T无明显变化,中、高剂量组血清T水平明显降低(P<0.01)。低剂量组睾丸重量增加(P<0.05),高剂量组睾丸重量、仔鼠体重明显下降(P<0.01);中、高剂量组AGD明显缩短(P<0.01)。低剂量组睾丸Leydig细胞明显增生,呈簇状分布;中、高剂量组睾丸Leydig细胞灶区轻度增生,高剂量组部分生精小管生精细胞层次减少、生精细胞凋亡并脱落。电镜观察各给药组Leydig细胞胞浆脂质颗粒减少,线粒体、内质网减少。低剂量组IGF-ⅠmRNA表达增高(P<0.05);中、高剂量组睾丸St AR蛋白表达降低(P<0.05)。结论:哺乳期染毒DEHP可干扰仔鼠PLC的睾酮合成,St AR蛋白的降低和Leydig细胞的损伤可能是其机制。

大鼠Leydig细胞分泌的IL-1和TGF-β_1在感染时的免疫调节作用

目的:研究Leydig细胞在抗感染中的免疫调节作用。方法:SD大鼠睾丸经Ⅱ型胶原酶消化、过滤及Percoll分离获得高纯度、高活率的Leydig细胞。体外培养的Leydig细胞经解脲脲原体(UU)感染后,观察其细胞培养上清液中白介素-I(interleukin-1,IL-1)活性(四唑盐比色法即MTT法)和转移生长因子(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)含量(ELISA法)的变化。结果:UU感染可明显促进Leydig细胞分泌IL-1和TGF-β_1的能力,且与UU的感染剂量有关。结论:大鼠Leydig细胞在抗感染免疫中,可通过其分泌的IL-1和TGF-β_1发挥免疫调节作用。

邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)的代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydigcells)睾酮合成的影响。方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型,MEHP染毒剂量组分为对照(0μmol/L)、62.5、125、250、500、1000μmol/L,通过噻唑蓝(MTT)法观察线粒体活性,放射免疫法测定睾酮浓度,RTPCR法测定Leydig细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR)mRNA表达。结果:MEHP染毒24h后,Leydig细胞线粒体活性在250μmol/L时显著上升,1000μmol/L时显著下降,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。基础状态及人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激状态下,Leydig细胞睾酮合成水平均呈上升趋势,与对照组相比,250、500μmol/L剂量组差异均有显著性(P<0.01)。Leydig细胞StARmRNA的表达在62.5、125、250μmol/L时与对照组相比均未见有显著性改变,在500、1000μmol/L时显著下降(P<0.01)。结论:MEHP直接影响原代培养Leydig细胞线粒体活性及睾酮合成,胆固醇跨膜转运的调节因子StAR与MEHP引起睾酮合成上升的原因可能无关。

环境污染物三丁基氯化锡和氯化三苯锡对大鼠睾丸Leydig细胞的影响

目的：探讨环境污染物三丁基氯化锡（TBT）和氯化三苯锡（TPT）对大鼠睾丸Leydig细胞的影响。方法：①用0～80nmol／L浓度的TBT和TPT处理大鼠睾丸Leydig（LC-540）细胞24～96h，用四唑蓝（MTT）法确定细胞的存活率；②用DNA片段法确定是否存在细胞凋亡；③观察细胞内Ca^2＋螯合剂氨基苯乙烷四乙酸（BAPTA）和蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89、蛋白激酶C（PKC）抑制剂GF109203X、酪氨酸蛋白激酶（TPK）抑制剂Genistein是否可以阻断TBT所致的细胞凋亡；④检测TBT处理的原代大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的变化。结果：@TBT和TPT影响Leydig细胞存活率的强度基本相同，在20～80nmol／L浓度时细胞存活率呈剂量和时间依赖性降低；②DNA片段法研究证实TBT和TPT可引起细胞凋亡；③BAPTA可阻断20nmol／L的TBT所致的细胞凋亡，而PKA、PKC和TPK抑制剂对细胞存活率没有影响；@TBT可减少Leydig细胞分泌睾酮，并使其对人绒毛膜促性腺激素（hCG）刺激的反应性降低。结论：环境污染物TBT和TPT能直接导致睾丸Leydig细胞凋亡，并抑制睾酮分泌，这种致凋亡作用可能与细胞内Ca^2＋浓度增加有关。