荣筋拈痛方通过LncRNA H19/miR-675-3p促进软骨细胞增殖防治膝骨关节炎

目的:探究荣筋拈痛方通过调控LncRNA H19/miR-675-3p对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞基质代谢及增殖的影响。方法:30只大鼠分为空白血清组和荣筋拈痛方含药血清组,每组15只,分别给予等量生理盐水和荣筋拈痛方药液灌胃,制备空白血清和荣筋拈痛方含药血清。提取原代软骨细胞并采用Ⅱ型胶原免疫细胞化学法和甲苯胺蓝染色进行鉴定。采用IL-1β10 ng/mL干预24 h构建软骨细胞退变模型,分为空白组、模型组和荣筋拈痛方组。观察各组软骨细胞中lncRNA H19、miR-675-3p、CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA基因相对表达水平,CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA蛋白表达情况,EdU细胞增殖试剂盒检测各组软骨细胞增殖情况。结果:原代软骨细胞成簇生长,胞核清晰可辨,胞浆丰富,软骨细胞活力随传代次数的增加而下降。软骨细胞细胞外基质中的CollagenⅡ被染成棕黄色,苏木素将细胞核染成蓝色;甲苯胺蓝染色后细胞整体呈现蓝紫色。与空白组比较,模型组中LncRNA H19、miR-675-3p基因相对表达水平均下降(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组LncRNA H19、miR-675-3p基因相对表达水平上升(P<0.05)。与空白组比较,模型组CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA基因和蛋白相对表达水平均下降(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA基因和蛋白相对表达水平均上升(P<0.05)。与空白组比较,模型组中软骨细胞EdU阳性细胞率降低(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组EdU阳性细胞率上升(P<0.05)。结论:荣筋拈痛方可通过上调LncRNA H19/miR-675-3p促进CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA表达,抑制细胞外基质降解,促进软骨细胞增殖,起到治疗KOA的作用。

声门上型喉癌患者血清PTTG1、LncRNA H19表达与预后的关系

目的探讨声门上型喉癌患者血清PTTG1、LncRNA H19表达与预后的关系。方法回顾性选取75例声门上型喉癌患者纳入病例组,同时期选取体检正常人群30名纳入对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清PTTG1水平,采用实时荧光定量PCR检测血清LncRNA H19表达。分析血清PTTG1、LncRNA H19表达与预后的关系。结果病例组PTTG1、LncRNA H19表达均高于对照组(P<0.05)。存在淋巴结转移、肿瘤分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤分化程度为低分化的喉癌患者血清PTTG1、LncRNA H19表达均高于无淋巴结转移、肿瘤分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤分化程度为高或中分化(P<0.05),不同性别、年龄、肿瘤直径患者血清PTTG1、LncRNA H19表达差异无统计学意义(P>0.05)。单因素分析显示,淋巴结转移、肿瘤分期、肿瘤分化程度、血清PTTG1、LncRNA H19表达为影响声门上型喉癌患者预后不良因素(P<0.05);Cox回归分析显示,淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤分化程度低分化、血清PTTG1、LncRNA H19表达高均为声门上型喉癌患者预后不良危险因素(P<0.05)。结论淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤分化程度低分化、血清PTTG1和LncRNA H19的高表达是声门上型喉癌患者不良预后的危险因素,血清PTTG1和LncRNA H19的检测可能有助于预测声门上型喉癌患者的预后,并为个体化治疗提供依据。

敲低长链非编码RNA H19(lncRNA H19)促进人结肠细胞自噬抑制脂多糖诱导的凋亡

目的 探讨lncRNA H19在溃疡性结肠炎(UC)患者中的表达水平及其在UC中的作用。方法 收集西藏军区总医院25名UC患者和25名健康体检者的结肠黏膜标本及血清标本,采用荧光定量PCR检测lncRNA H19表达水平,并对血清标本进行受试者工作特征(ROC)曲线分析。采用脂多糖(LPS)处理建立体外HT29结肠细胞炎性模型,并采用荧光定量PCR检测lncRNA H19在结肠细胞的表达。通过慢病毒技术构建lncRNA H19低表达的HT29细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测HT29细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡和自噬蛋白表达情况。采用自噬激动剂雷帕霉素处理后,MTT法观察对HT29细胞存活的影响。结果 lncRNA H19在UC患者结肠黏膜组织和血清中高表达,ROC曲线下面积为0.786。LPS刺激后,HT29细胞lncRNA H19表达显著升高,并与刺激时间正相关。敲低lncRNA H19可促进HT29细胞存活并抑制细胞凋亡,促进细胞自噬水平增加;雷帕霉素处理后,细胞存活率明显升高。结论 敲低lncRNA H19促进结肠细胞自噬抑制LPS诱导的结肠细胞凋亡并促进其存活。

冠心病患者血清lncRNA H19、CHAST的表达水平及临床意义

目的探讨冠心病(coronary heart disease,CHD)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)H19、CHAST的表达水平及临床意义。方法选取2021年6月~2022年5月在笔者科室住院的冠心病患者135例,其中急性冠状动脉综合征76例,慢性冠状动脉综合征59例,选取同期住院且经冠状动脉造影排除CHD的对照组62例。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测量各组血清lncRNA H19、lncRNA CHAST的表达水平,同时检测各组血清超敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)等指标。采用ROC曲线分析血清lncRNA H19、lncRNA CHAST表达水平对CHD的诊断价值;Pearson相关性分析评估lncRNA H19、lncRNA CHAST表达水平与hs-CRP、TNF-α、IL-6、LDL、HDL等因素的相关性;Logistics回归分析CHD的危险因素。结果CHD组血清lncRNA H19、lncRNA CHAST表达水平较对照组升高(P<0.05)。CHD组hs-CRP、IL-6、TNF-α、LDL水平高于对照组(P<0.05),HDL水平低于对照组(P<0.05),lncRNA H19、lncRNA CHAST表达水平与hs-CRP、IL-6、TNF-α、LDL等指标呈正相关(P<0.05),与HDL呈负相关(P<0.05)。lncRNA H19、lncRNA CHAST为CHD的危险因素,且两者能较好的诊断CHD。结论lncRNA H19、lncRNA CHAST为CHD发病的危险因素,可作为诊断CHD的血清指标,且二者联合诊断CHD的价值更高。

过表达lncRNA H19、miR-675及低表达miR-4500对乳腺癌细胞增殖、侵袭的作用

目的:研究过表达lncRNA H19和miR-675及低表达miR-4500通过调控上皮间质转化和自噬促进乳腺癌细胞增殖、侵袭的机制及临床意义。方法:体外培养的乳腺癌MCF-7细胞分为过表达组、阴性对照组、空白组,每组设5个复孔。构建lncRNA H19过表达质粒,并以pc DNA3.1空白载体作为阴性对照,通过Lipofectamine 2000转染细胞,分别转染过表达组、阴性对照组的乳腺癌MCF-7细胞,检测对比各组癌细胞的增殖及侵袭能力,各组lncRNA H19和miR-675、miR-4500的mRNA相对表达量,各组N-cadherin、Vimentin、OPN、Snail、Slug等EMT相关基因的mRNA相对表达量及蛋白表达水平,以及各组LC3、Beclin1及mTOR蛋白表达水平。结果:过表达组的癌细胞增殖及侵袭能力较阴性对照组和空白组更强(P<0.05)。过表达组lncRNA H19和miR-675的mRNA相对表达量较阴性对照组和空白组更高(P<0.05),miR-4500的mRNA相对表达量较阴性对照组和空白组更低(P<0.05)。过表达组N-cadherin、Vimentin、OPN、Snail及Slug的mRNA相对表达量和蛋白表达水平较阴性对照组和空白组更高(P<0.05)。过表达组LC3及Beclin1的蛋白表达水平较阴性对照组和空白组更低,mTOR的蛋白表达水平较阴性对照组和空白组更高(P<0.05)。结论:过表达lncRNA H19和miR-675及低表达miR-4500能够调控上皮间质转化和自噬作用,进而促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭,临床意义较大,值得关注。

高良姜素通过下调lncRNA H19的表达抑制ox-LDL诱导的人源 正常主动脉内皮细胞血管生成活性

目的探索高良姜素对ox-LDL诱导的人源正常主动脉内皮细胞(HAECs)的影响及其机制。方法使用不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)的高良姜素孵育HAECs24h后,通过MTT检测细胞活性。以5mg/mLox-LDL诱导的HAECs为模型,使用20、40μmol/L高良姜素孵育24h。为观察高良姜素的作用机制,在HAECs中过表达lncRNAH19,使用40μmol/L高良姜素孵育24 h。通过qRT-PCR检测lncRNAH19的水平,划痕实验和血管形成实验用于观察迁移和管形成能力,使用流式细胞术检测ROS水平。通过Western blot检测VEGFA、MMP-2、MMP-9的蛋白水平。结果低浓度(0、10、20、40μmol/L)的高良姜素对细胞无明显毒性(P>0.05),而80μmol/L高良姜素会抑制HAECs细胞的活性(P<0.01)。ox-LDL诱导的HAECs中lncRNAH19的表达水平增加,高良姜素能降低ox-LDL诱导的HAECs的lncRNAH19的表达水平、迁移能力和血管形成能力,ROS水平以及VEGFA、MMP-2、MMP-9的蛋白水平(P<0.01)。但是,高良姜素的这些生物学作用均能被过表达lncRNAH19逆转(P<0.01)。结论高良姜素可能通过抑制lncRNAH19的表达以降低ox-LDL诱导的HAECs的迁移、氧化应激和血管形成能力来发挥治疗动脉粥样硬化的潜力。

lncRNA H19在自身免疫性疾病中的调控作用及其机制

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度至少为200个核苷酸的非蛋白质编码的RNA。现有证据表明lncRNA通过各种机制影响着人类的生长发育和疾病发生,且在免疫细胞的分化和激活中起着不可替代的作用,因此在自身免疫性疾病发生发展的进程中扮演重要角色。近年来lncRNA H19被发现在炎症、纤维化等与自身免疫性疾病相关的病理过程中发挥独特的调节功能,因此H19参与的分子机制有望成为治疗自身免疫性疾病的潜在靶点。本综述基于H19已知的功能讨论了其参与自身免疫性疾病发病的相关机制,并总结了H19在几种常见自身免疫性疾病中的研究成果。

基于lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的干预效应及机制

目的基于lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制。方法60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型。将成模小鼠随机分为模型组、顺铂组和中药低、中、高剂量联合顺铂组,每组10只,顺铂组予顺铂5 mg/kg腹腔注射,中药低、中、高剂量联合顺铂组予归芪益元膏1.75、3.5、7.0 g/kg灌胃联合顺铂5mg/kg腹腔注射,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续14d。观察小鼠一般状况,测量小鼠瘤质量并计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织病理形态,检测肿瘤组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O_(2))、亚铁离子(Fe^(2+))含量,免疫组化和Western blot检测肿瘤组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤组织lncRNAH19、miR-19b3p mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数均降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠一般状况不同程度改善,瘤质量减少(P<0.05),脾脏指数及胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤细胞溶解、破裂、数量减少,肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3pmRNA表达升高(P<0.05);与顺铂组比较,中药高剂量联合顺铂组小鼠瘤质量减少(P<0.05),体质量、脾脏指数和胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05)。结论归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠具有明显抑瘤作用,其作用机制可能与调节lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴相关铁死亡分子表达有关。

lncRNA H19促进胎盘间充质干细胞成骨分化的相关研究

目的观察lncRNA H19转染人胎盘间充质干细胞后对多个成骨、成血管因子表达的影响,为构建成骨性能良好的骨缺损填充物提供前期研究基础。方法首先进行调控成骨、成血管因子的miRNAs筛选,将目标锁定为miR-29b-3p、miR-29c-3p、miR-137-3p和miR-383-5p。通过进一步的生物信息学检索,lncRNA H19可以同时调控上述四种miRNAs。进而优选其中调控成骨成血管因子较多的miR-137-3p和miR-383-5p为H19的靶标,利用双荧光素酶报告基因实验验证H19与miR-383-5p、miR-137-3p是否具有调控关系。进一步将H19克隆到慢病毒,然后转染到胎盘间充质干细胞,观察干细胞中miR-137-3p和miR-383-5p表达情况,及IBSP、RUNX2、FGF5和BMP2K的表达能力。通过碱性磷酸酶和茜素红染色,观察转染了H19的胎盘间充质干细胞的成骨性能是否得到提高。结果转染lncRNA H19的人胎盘间充质干细胞内miR-137-3p、miR-383-5p表达下调,而RUNX2、IBSP的表达均明显升高(P<0.05),BMP2K和FGF5的表达各组间无明显差异(P>0.05)。胎盘间充质干细胞转染H19后成骨性能得到提升。结论转染lncRNA H19的人胎盘间充质干细胞可以促进某些成骨成血管因子的表达且提高成骨性能,为今后研制成骨性能良好的组织工程骨提供了可能。

LncRNA H19和VEGF-b在糖尿病视网膜病变患者中的表达及临床意义

目的 探究糖尿病视网膜病变(DR)患者中LncRNA H19和VEGF-b表达水平以及临床意义。方法 选取2型糖尿病患者120例分为糖尿病无视网膜病变组(DM组)、非增殖型糖尿病视网膜病变组(NPDR组)和增殖型糖尿病视网膜病变组(PDR组),每组各40例患者;选取特发性黄斑裂孔且不伴糖尿病的患者40例为对照组(NC组)。分别采用ELISA法和RT-qPCR法检测各玻璃体和血清样品中VEGF-b和LncRNA H19的表达水平;免疫组化检测LncRNA H19和VEGF-b阳性表达;通过Logistic多元回归分析VEGF-b和LncRNA H19是否为DR的危险因素。结果 免疫组化结果表明NC组患者视网膜组织中LncRNA H19阳性表达数高于PDR组(P<0.05),VEGFb阳性表达数低于PDR组(P<0.05)。ELISA检测结果显示NC、DM、NPDR、PDR组患者玻璃体和血清中VEGF-b表达水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LncRNA H19相对表达水依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blo结果显示PDR组患者膜组织中VEGF-b蛋白表达水平显著高于NC组(P<0.05)。相关性分析结果提示血清中VEGF-b浓度与血清中IL-6水平呈线性正相关(r=0.899,P<0.01),而LncRNA H19与IL-6呈负相关(r=-0.858,P<0.01)。结论 DR患者玻璃体和血清中及PDR患者视网膜组织中VEGF-b表达水平升高,而LncRNA H19相对表达水平下降,且为DR的危险因素,其可能参与了DR的发生发展过程。

利多卡因通过LncRNA H19/miR-671-5p分子轴调控胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨利多卡因对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对LncRNA H19/miR-671-5p的调控机制。方法:体外培养胃癌细胞AGS,使用不同浓度的利多卡因处理细胞;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;qRT-PCR检测H19及miR-671-5p的表达量;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-671-5p的靶向关系;将pcDNA-H19及其阴性对照pcDNA转染至AGS细胞,使用利多卡因处理细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果:与Con组相比,利多卡因不同剂量可明显降低细胞活力和Ki-67、PCNA、N-cadherin蛋白水平及H19的表达量(P<0.05),并可减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高E-cadherin蛋白水平及miR-671-5p的表达量(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实H19可靶向结合miR-671-5p;H19过表达可明显逆转利多卡因对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:利多卡因可能通过抑制H19表达及促进miR-671-5p表达从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

LncRNA H19/miR-203a/PTEN轴在小鼠GC-1细胞缺血再灌注损伤中的作用及影响机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19在小鼠体外GC-1细胞的表达,以及其通过调控微小RNA(miRNA)-203a/磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)轴对GC-1细胞凋亡和增殖的影响。方法:建立GC-1细胞体外缺氧复氧模型,qRT-PCR检测GC-1细胞不同复氧损伤时间点lncRNA H19的表达变化;MTT法、流式细胞术测定沉默lncRNA H19对GC-1细胞增殖和凋亡的影响;Western印迹检测沉默lncRNA H19对GC-1细胞凋亡相关蛋白Bax和caspase-3表达的影响;qRT-PCR和Western印迹分别测定沉默lncRNA H19后GC-1细胞miR-203a和PTEN的表达变化。结果:随着复氧损伤时间的增加,GC-1细胞lncRNA H19表达明显增加,在缺氧3 h/复氧12 h达到峰值,与此同时miR-203a表达明显降低。此外,沉默lncRNA H19增强了GC-1细胞的增殖能力并降低了其凋亡水平,增加了miR-203a表达水平并降低了PTEN表达水平,结果显著。结论:LncRNA H19在体外GC-1细胞中高表达,其可能通过调控miR-203a/PTEN信号途径改变GC-1细胞增殖及凋亡的能力。

lncRNA H19和lncRNA GAS5在急性缺血性脑卒中的表达及临床意义

目的本研究旨在检测长链非编码RNA H19和生长阻滞特异转录物5(GAS5)在急性缺血性脑卒中(IS)患者单个核细胞(PBMC)、大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠脑皮质组织和氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型PC12细胞的表达水平,探讨其作为IS分子诊断指标的可行性。方法收集23例IS组患者和33例健康对照外周血,提取PBMC,采用实时定量PCR(qPCR)检测PBMC中lncRNA H19和GAS5的表达水平。进一步构建大鼠MCAO模型和PC12细胞OGD/R模型,qPCR分别检测lncRNA H19和GAS5在大鼠脑皮质和PC12细胞中的表达。结果 qPCR结果显示,IS组患者PBMC的lncRNA H19表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IS组患者PBMC中的lncRNA GAS5表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。和假手术组相比,MCAO模型大鼠缺血脑皮质lncRNA H19和lncRNA GAS5表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞实验结果表明,PC12细胞在OGD/R后,lncRNA H19和lncRNA GAS5表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA H19和lncRNA GAS5在IS表达升高,有望成为诊断IS的生物标志物。

lncRNA H19靶向miR-4735-3p激活NF-κB信号通路调控宫颈癌顺铂耐药

目的揭示lncRNA H19调控宫颈癌细胞顺铂(DDP)耐药的作用及分子机制。方法体外建立顺铂耐药的宫颈癌细胞株HeLa/DDP。qRT-PCR检测H19和miR-4735-3p的表达。CCK-8实验检测不同浓度DDP作用下细胞的增殖抑制率,计算IC50值。克隆形成实验评估细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和c-Caspase3(c-Casp3)及NF-κB信号通路蛋白(p-IκBα/IκBα和p-p65/p65)的表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA交互沉降实验验证H19和miR-4735-3p之间的靶向关系。结果H19在HeLa/DDP细胞中高表达。敲低H19增强HeLa/DDP对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡。H19能够与miR-4735-3p靶向结合,敲低H19上调HeLa/DDP细胞中miR-4735-3p的表达。过表达miR-4735-3p增强HeLa/DDP对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡。抑制miR-4735-3p能够逆转H19敲低对HeLa/DDP顺铂敏感性的增强作用。敲低H19通过靶向miR-4735-3p抑制p-IκBα和p-p65蛋白表达。结论H19通过靶向miR-4735-3p,抑制NF-κB通路活性,增强HeLa/DDP细胞的顺铂敏感性。

养精胶囊通过LncRNA H19调控StAR促进睾酮合成的实验研究

目的:研究养精胶囊对LncRNA H19调控StAR作用及促进睾酮合成机制。方法:以体外MLTC-1细胞培养为模型,分别加入2mL的培养基以及终浓度为0.01mg/mL、0.1mg/mL、1mg/mL的养精胶囊水提物,并将其分别作为对照组和养精胶囊低、中、高剂量组,作用24h。通过ELISA测定细胞上清睾酮和游离睾酮浓度,通过qRT-PCR、Western Blot分别检测养精胶囊对MLTC-1中LncRNA H19 mRNA、StAR mRNA以及StAR蛋白表达的影响。结果:养精胶囊水提物可以显著提高MLTC-1细胞上清睾酮和游离睾酮浓度,同时还可以明显促进LncRNA H19 mRNA以及StAR mRNA和蛋白的表达水平,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:养精胶囊可以通过LncRNA H19调控StAR,进而增加睾酮合成。

哈萨克族食管鳞癌患者癌组织中LncRNA H19的表达情况及临床意义

目的:研究哈萨克族食管鳞癌患者癌组织中LncRNA H19的表达情况及相关临床意义。方法:回顾分析2014年7月至2015年12月在新疆医科大学第一附属医院接受手术治疗的80例哈萨克族食管鳞癌患者的临床资料。应用实时荧光定量PCR技术对其癌组织、癌旁组织中LncRNA H19的表达水平进行检测。根据癌组织中LncRNA H19表达水平的高低将其分为LncRNA H19高表达组(45例)与LncRNA H19低表达组(35例),并对比两组患者的各项临床指标。分析影响这些患者预后的因素。结果:这些患者癌组织中LncRNA H19的相对表达量高于其癌旁组织中LncRNA H19的相对表达量,P<0.05。LncRNA H19高表达组患者的5年生存率低于LncRNA H19低表达组患者,P<0.05。进行多因素Logistic回归分析的结果显示,肿瘤的临床分期、肿瘤是否处于进展期、癌组织中LncRNA H19的表达水平是这些患者中位生存期的影响因素,P<0.05。结论:哈萨克族食管鳞癌患者癌组织中LncRNA H19的表达水平高于其癌旁组织,其癌组织中LncRNA H19的表达水平是其预后的影响因素。

lncRNA H19/Sirt3介导自噬在脑出血后损伤中的作用机制

目的探讨lncRNA H19(H19)/Sirt3介导自噬在脑出血(ICH)后损伤中的作用机制。方法通过胶原酶注射建立ICH小鼠模型。将经氧合血红蛋白(OxyHb)处理的SH⁃SY5Y细胞用作体外ICH模型。含有sh⁃H19的慢病毒载体用于抑制ICH小鼠和培养的SH⁃SY5Y细胞中的H19表达。在ICH模型建立后48 h,对小鼠神经功能缺损进行mNSS评分,并对病灶体积进行分析,同时分别采用RT⁃qPCR法、Tunel染色和免疫荧光分析损伤组织中H19表达、神经元细胞凋亡和LC3表达。分别采用MTT法测量细胞活力、Tunel染色检测细胞凋亡以及Western blot分析自噬相关蛋白和Sirt3/AMPK/mTOR信号通路蛋白表达情况。结果H19表达在ICH后和OxyHb处理细胞中以时间依赖性方式增强(P<0.05)。H19敲低降低了ICH模型建立后第2天病灶体积和mNSS评分(P<0.01),减少神经元细胞凋亡(P<0.01),并增强了ICH损伤期间自噬的调节作用。H19敲低增强了暴露于OxyHb的SH⁃SY5Y细胞活力,减少了细胞凋亡,促进细胞自噬。H19主要通过调节Sirt3表达和激活AMPK⁃mTOR信号通路促进自噬。结论H19在体内外ICH模型中以时间依赖性方式增强。H19敲低可能通过Sirt3/AMPK/mTOR信号通路诱导自噬减轻ICH损伤。

LncRNA H19对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)H19对雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响。方法在体外通过用雨蛙素刺激AR42J细胞建立AP模型,采用qRT-PCR和Western blot检测沉默以及过表达H19后凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果H19沉默后,凋亡相关基因Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平下降,细胞凋亡率也相对减少(P<0.05);而过表达H19后,Caspase 3及Caspase 9的mRNA和蛋白水平增加,细胞凋亡率也是升高的(P<0.05)。结论沉默LncRNA H19可减少雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,提示其可能成为治疗急性胰腺炎的潜在有效靶点。

PTTG1、LncRNA H19的表达与早期声门型喉癌经口内镜CO_(2)激光切除术后远期疗效的相关性

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG1)、长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)H19的表达与早期声门型喉癌行经口内镜CO_(2)激光切除术后远期疗效的相关性。方法选取2016年3月至2021年3月宜兴市人民医院收治的96例确诊为早期声门型喉癌并接受经口内镜CO_(2)激光切除术治疗的患者作为研究对象。检测入组患者的血清PTTG1及癌组织、癌旁组织中LncRNA H19表达水平,并收集患者的一般资料。对行经口内镜CO_(2)激光切除术的患者的远期疗效进行单因素分析后,应用Logistic回归分析分析风险因素与术后预期疗效的相关性。结果分析声门型喉癌患者血清PTTG1表达水平,根据淋巴结转移、肿瘤分期和分化程度对患者分组比较,差异有统计学意义(t=3.160,7.740,4.840;P<0.05)。分析组织中LncRNA H19表达,根据TNM(T是指原发肿瘤,N是区域淋巴结、M是指远处转移)、分化程度及淋巴结转移对患者分组比较,差异有统计学意义(χ^(2)=4.000,5.000,9.058;P<0.05)。喉癌显微激光手术疗效单因素分析,声门型喉癌浸润方向累及声门下区、分化程度及LncRNA H19和PTTGI表达水平比较,差异有统计学意义(χ^(2)=49.878,26.923,9.909,6.891,5.008,7.563,9.643,9.028;P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,向下累及声门下区、高LncRNA H19、PTTG1表达水平均是影响早期声门型喉癌患者经口内镜CO_(2)激光切除术后远期疗效的独立预后因素(OR=13.649,95%CI:1.891~98.365;OR=12.466,95%CI:1.715~90.606;OR=11.045,95%CI:9.314~099;P<0.05)。结论声门型喉癌患者血清PTTG1、癌组织LncRNA H19表达水平均上调,这都与喉癌的发生发展密切相关,可作为早期声门型喉癌经口内镜CO_(2)激光切除术后疗效评估的参考指标。

lncRNA H19靶向miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响

背景 本研究旨在探究影响急性胰腺炎进程的潜在分子机制.通过功能缺失实验分析H19敲低对细胞功能的影响.并通过生物信息学预测以及实验验证确定H19与miR-30a-5p的互作关系.我们推测H19可能通过靶向miR-30a-5p来促进急性胰腺炎进程.目的 研究lnc RNA H19靶向miR-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响.方法 培养人胰腺AR42J细胞,雨蛙肽诱导建立胰腺损伤细胞模型.将实验分为雨蛙肽+si-NC组、雨蛙肽+si-H19组、雨蛙肽+miR-NC组、雨蛙肽+miR-30a-5p组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC组、雨蛙肽+si-H19+anti-miR-30a-5p组.实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测细胞中H19和m i R-30a-5p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附实验检测细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞自噬相关的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associatedprotein1lightchain3,LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达.双荧光素酶实验检测细胞中H19和miR-30a-5p靶向结合关系.结果 与正常胰腺细胞比较,雨蛙肽诱导损伤的胰腺炎细胞中H19表达水平显著升高, miR-30a-5p表达水平显著降低(P<0.05).与雨蛙肽+si-NC组比较,雨蛙肽+siH19组H19表达水平显著降低;细胞存活率显著升高;TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低;LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05).与雨蛙肽+miR-NC组比较,雨蛙肽+miR-30a-5p组miR-30a-5p表达水平显著升高;细胞存活率显著升高;TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低;LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05).与雨蛙肽+si-H19+anti-miR-NC比较,雨蛙肽+si-H19+antimiR-30a-5p组miR-30a-5p表达显著降低;细胞存活率显著降低;TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高;LC3-Ⅰ蛋白表达显著升高、LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 下调H19通过靶向miR-30a-5p来抑制雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬.