血浆lncRNA XIST在子宫平滑肌瘤患者中的相对表达量及其临床意义

目的探讨血浆长链非编码RNA X-非活性特异性转录本(lncRNA XIST)在子宫平滑肌瘤(UL)患者中的相对表达量及其临床意义。方法选取2018年5月至2022年2月在该院首次接受了UL外科手术治疗的562例女性为UL组,从其中的116例患者中同时获得了UL肿块组织及癌旁组织。另招募280例妇科体检健康女性作为对照组。根据随访情况,将UL组患者进一步分为复发组与未复发组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析所有研究对象的血浆lncRNA XIST相对表达量,以及116例患者UL肿块及癌旁组织中lncRNA XIST相对表达量。比较UL组与对照组、复发组与未复发组血浆lncRNA XIST相对表达量,比较UL肿块组织及癌旁组织中lncRNA XIST相对表达量。采用Pearson相关分析UL组织与血浆lncRNA XIST相对表达量的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆lncRNA XIST相对表达量对UL的诊断价值,以及对术后复发的预测价值。采用多变量Cox比例风险回归分析UL术后复发生存的影响因素。结果UL组血浆lncRNA XIST相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(Z=15.732,P<0.001)。血浆lncRNA XIST诊断UL的曲线下面积(AUC)为0.948(95%CI:0.933~0.963,P<0.001)。UL肿块组织lncRNA XIST相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(Z=6.672,P<0.001)。UL患者血浆和UL肿块lncRNA XIST相对表达量呈正相关(r=0.198,P=0.033)。224例(43.42%)UL患者出现了疾病复发,纳入复发组,其余患者纳入未复发组。复发组血浆lncRNA XIST相对表达量明显高于未复发组,差异有统计学意义(Z=4.779,P<0.001)。血浆lncRNA XIST预测术后复发的AUC为0.618(95%CI:0.572~0.663,P<0.001)。多变量Cox比例风险回归分析结果显示,超声检查肌瘤数量、血浆lncRNA XIST相对表达量和术后残余是术后无复发生存的独立影响因素(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线分析结果显示,与血浆lncRNA XIST≤3.483患者相比,血浆lncRNA XIST>3.483患者无复发生存时间更短(Log-rank χ^(2)=32.259,P<0.001)。结论高血浆lncRNA XIST相对表达量可能是引起UL的机制之一,此外高血浆lncRNA XIST相对表达量预示着UL患者的预后不良。

沉默lncRNA XIST对阿霉素诱导的扩张型心肌病的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA X-无活性特异性转录物(lncRNA XIST)对阿霉素诱导的扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用阿霉素诱导法建立DCM大鼠模型,将DCM大鼠分为模型组、sh-NC组和sh-XIST组,每组10只;另取10只健康SD大鼠设为对照组。采用超声影像系统检测各组大鼠心脏功能指数左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF),采用苏木素伊红染色和Masson三色染色检测大鼠心肌组织病理学变化,TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡水平。采用阿霉素诱导H9c2细胞系构建DCM细胞模型,将DCM细胞分为模型组、sh-NC组、sh-XIST组、sh-XIST+miR-NC组和sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组,未经阿霉素处理的H9c2细胞作为对照组。采用双荧光素酶报告试验分析XIST、miR-149-5p和血小板源性生长因子C(PDGFC)的靶向关系。采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平。采用RT-qPCR检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中XIST、miR-149-5p和PDGFC表达水平。采用Western blot检测大鼠心肌组织和H9c2细胞中PDGFC、α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1表达水平。结果 (1)与sh-NC组比较,sh-XIST组大鼠心肌组织中XIST水平及PDGFC的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.01),LVESD、LVEDD、TUNEL阳性细胞率以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p水平和LVEF水平均升高(P<0.01);心肌细胞坏死和组织纤维化均减少。(2)与sh-NC组比较,sh-XIST组H9c2细胞凋亡率、XIST水平、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均降低(P<0.05),miR-149-5p表达水平升高(P<0.05)。与sh-XIST+miR-NC组比较,sh-XIST+miR-149-5p inhibitor组H9c2细胞凋亡率、PDGFC mRNA和蛋白水平以及α-SMA、collagenⅠ和TGF-β1蛋白水平均升高(P<0.05),miR-149-5p表达水平降低(P<0.05)。结论 沉默lncRNA XIST通过上调miR-149-5p表达和抑制PDGFC表达,进而抑制阿霉素诱导的DCM大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡水平,从而改善DCM的发展。

腹泻型肠易激综合征湿热质与非湿热质患者外周血lncRNA XIST、lncRNA TUG1表达及意义

目的比较腹泻型肠易激综合征湿热质与非湿热质患者外周血长链非编码RNA X染色体失活特异转录因子(lncRNA XIST)、长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)表达的差异并分析其临床意义。方法选择2021年1月至2023年12月期间江苏省如皋市中医院收治的120例腹泻型肠易激综合征患者作为观察组,根据中医体质分为湿热质亚组和非湿热质亚组;选择同期体检的100名健康者作为对照组。检测外周血lncRNA XIST、lncRNA TUG1表达水平及血清C反应蛋白(CRP)水平并比较差异,分析腹泻型肠易激综合征湿热质的影响因素及诊断指标。结果观察组患者外周血lncRNA XIST的表达水平高于对照组,lncRNA TUG1的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(t=8.136、9.324,P<0.05);观察组中湿热质亚组患者外周血lncRNA XIST的表达水平及血清CRP的水平高于非湿热质亚组,lncRNA TUG1的表达水平低于非湿热质亚组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA XIST是腹泻型肠易激综合征湿热质的危险因素,lncRNA TUG1是腹泻型肠易激综合征湿热质的保护因素(P<0.05);外周血lncRNA XIST、lncRNA TUG1诊断腹泻型肠易激综合征湿热质的ROC曲线下面积分别为0.754和0.810。结论lncRNA XIST表达增加、lncRNA TUG1表达降低与湿热质腹泻型肠易激综合征相关,外周血中两项指标的表达水平对湿热质腹泻型肠易激综合征具有诊断价值。

LncRNA XIST靶向miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)XIST通过miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用及机制。方法RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、T98G、U87-MG、A172、SW1783中XIST表达水平及si-XIST转染U251细胞后XIST与miR-543表达;在胶质瘤细胞U251中敲低XIST后,MTT法、流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖和凋亡情况;用双荧光素酶报告基因验证LncRNA XIST与miR-543的靶向关系。结果XIST在U251细胞中表达水平(0.79±0.08)最高,故以U251细胞进行后续实验;与XIST组[(2.35±0.17)、(0.37±0.05)]相比,si-XIST组U251细胞XIST表达水平(0.25±0.19)较低,miR-543表达水平(3.15±0.36)较高(P<0.05);与XIST组[(0.57±0.09)、(0.81±0.01)、(1.15±0.04)]相比,si-XIST组胶质瘤U251细胞A570在24、48、72 h[(0.22±0.02)、(0.31±0.03)、(0.55±0.04)]明显降低(P<0.05)。与XIST组(1.12±0.56)%相比,si-XIST组细胞凋亡率(35.64±4.31)%较高(P<0.05)。共转染XIST-wt和miR-543处理组中相对荧光素酶活性显著下降[(1.15±0.22)vs(0.22±0.03)](P<0.05)。结论干扰LncRNA XIST可通过靶向负调控miR-543表达,抑制胶质瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。

血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达与脓毒症患者病情严重程度及患者预后的关系

目的研究脓毒症患者血清长非编码RNA X非活性特异性转录本(lncRNA XIST)和微小RNA(miRNA)-130a表达与脓毒症患者病情严重程度及预后的关系,以探究其临床意义。方法选取2021年1月至2022年12月西安国际医学中心医院收治的脓毒症患者73例作为研究对象,根据症状严重程度分为脓毒症组(52例)和脓毒性休克组(21例),另选取30例同时期在该院接受体检的健康者作为对照组。采用反转录聚合酶链反应检测血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达水平,全自动生化仪检测C反应蛋白、白细胞计数、降钙素原、乳酸水平,并记录序贯器官衰竭(SOFA)评分、急性生理与慢性健康(APACHEⅡ)评分,采用多因素Logistic回归进行危险因素分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA XIST和miRNA-130a表达水平对脓毒症的预测价值。结果与对照组比较,脓毒症组和脓毒性休克组血清lncRNA XIST表达水平均升高,且脓毒性休克组高于脓毒症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,脓毒症组和脓毒性休克组血清miRNA-130a表达水平均降低,且脓毒性休克组低于脓毒症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,脓毒性休克、SOFA评分≥7.85分、APACHEⅡ评分≥19.55分、lncRNA XIST表达水平升高、miRNA-130a表达水平降低是脓毒症患者预后情况的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清lncRNA XIST和miRNA-130a联合诊断ROC曲线下面积大于各项指标单独检测,诊断价值理想。结论lncRNA XIST在脓毒症患者血清中表达明显增加,miRNA-130a在脓毒症患者血清中表达明显下降,两者联合诊断灵敏度和特异性更高,对预测脓毒症发生具有一定临床参考意义。

lncRNA XIST靶向miR-150对LPS诱导的小鼠肺上皮MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌的影响

目的研究lncRNA XIST靶向miR-150对脂多糖(LPS)诱导的MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌的影响及机制。方法小鼠肺上皮MLE-12细胞分成Control、LPS(LPS处理)、sh-NC+LPS(转染shRNA control,给予LPS处理)、sh-XIST+LPS(转染XIST shRNA,给予LPS处理)组,采用qRT-PCR方法检测XIST表达水平,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,采用Western blotting方法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达,利用TBA法检测MDA含量,利用黄嘌呤氧化法检测SOD活性,利用DCFH-DA法检测ROS水平,利用ELISA法分析培养液上清中IL-1β、TNF-α水平。利用生物信息学软件Starbase分析XIST的可能靶基因(miR-150),然后利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在MLE-12细胞中将XIST shRNA、miR-150 inhibitor共转染,然后给予LPS处理,同样测定细胞凋亡、氧化损伤指标、炎症因子分泌变化。结果与Control组比较,LPS组MLE-12细胞中XIST水平升高,细胞凋亡率和Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低,ROS和MDA水平升高,SOD水平降低,细胞分泌的IL-1β、TNF-α增多;与sh-NC+LPS组比较,sh-XIST+LPSMLE-12组细胞中XIST水平降低,细胞凋亡率和Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,ROS和MDA水平降低,SOD水平升高,细胞分泌的IL-1β、TNF-α减少。下调XIST靶向促进miR-150表达。miR-150 inhibitor能够逆转XIST shRNA对LPS诱导的MLE-12细胞凋亡、氧化损伤指标、炎症因子分泌的作用。结论下调lncRNA XIST靶向miR-150可抑制LPS诱导的小鼠肺上皮MLE-12细胞凋亡和炎症因子分泌作用。

长春新碱通过lncRNA XIST/miR-485-5p调控宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的:探讨长春新碱对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对lncRNA XIST/miR-485-5p通路的调控作用。方法:采用不同浓度的长春新碱处理宫颈癌细胞HeLa;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics分别转染入HeLa细胞;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics、miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST、miR-485-5p mimics+pcDNA-lncRNA XIST分别转染入HeLa细胞后加入长春新碱处理细胞。采用MTT实验检测细胞活力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,qPCR法检测lncRNA XIST、miR-485-5p表达,双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA XIST与miR-485-5p的靶向关系,Western blotting法检测CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达。结果:与NC组比较,长春新碱不同剂量组细胞活力显著降低,迁移及侵袭细胞数减少,CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平降低,lncRNA XIST表达水平降低,miR-485-5p表达水平升高(均P<0.05)。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-lncRNA XIST组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,迁移及侵袭细胞数增多(均P<0.05),而lncRNA XIST过表达可明显逆转长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用。与miR-NC组比较,miR-485-5p组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05),而miR-485-5p过表达可增强长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用。双荧光素酶报告基因实验证实lncRNA XIST可竞争性结合miR-485-5p。与miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组比较,miR-485-5p+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05)。结论:长春新碱可通过调控lncRNA XIST/miR-485-5p而减弱宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

LncRNA XIST通过海绵吸附miR-133a调控甲状腺癌细胞的增殖和凋亡

目的探究LncRNA XIST对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法收集49例甲状腺癌手术患者的癌组织和癌旁组织,培养甲状腺上皮细胞系Nthy-ori 3-1和甲状腺癌细胞系TPC-1、FTC-133、SW579、WRO,采用qRT-PCR检测甲状腺癌组织和癌旁组织及各细胞中LncRNA XIST和miR-133a的表达;培养TPC-1和FTC-13细胞,将细胞分为Control组、DMSO组、oe-NC组、oe-XIST组、si-NC组、si-XIST组、oe-NC+NC mimic组、oe-XIST+NC mimic组、oe-NC+miR-133a mimic组及oe-XIST+miR-133a mimic组,RNA pull down检测LncRNA XIST和miR-133a的结合情况,MTT检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡,qRT-PCR检测LncRNA XIST和miR-133a的表达。结果与癌旁组织比较,甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达降低,miR-133a表达升高(P<0.05);与甲状腺上皮细胞系Nthy-ori 3-1比较,TPC-1、FTC-133、SW579、WRO细胞中LncRNA XIST表达显著升高,miR-133a表达降低(P<0.05);与oe-NC组比较,oe-XIST组细胞48 h和72 h时增殖能力增强(P<0.05);与si-NC组比较,si-XIST组细胞48 h和72 h时增殖能力降低(P<0.05)。与oe-NC组比较,oe-XIST组细胞凋亡比例降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-XIST组细胞细胞凋亡比例升高(P<0.05);与oe-NC+NC mimic比较,oe-XIST+NC mimic组细胞中XIST表达升高,oe-NC+miR-133a mimic组细胞中miR-133a表达升高,oe-XIST+miR-133a mimic组细胞中XIST和miR-133a表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与oe-XIST+NC mimic比较,oe-XIST+miR-133a mimic组细胞中miR-133a表达显著升高(P<0.05)。结论Ln cRNA XIST在甲状腺癌细胞中过表达,其通过海绵吸附miR-133a,进而促进甲状腺癌细胞增殖和凋亡。

lncRNA XIST通过miR-32-5p/EZH2分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA XIST通过miR-32-5p/果蝇Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为。方法:收集2014年7月至2018年8月中南大学湘雅医院直肠肛门外科资料完整的结直肠癌患者28例癌组织和配对的癌旁组织标本,采用qPCR检测结直肠癌组织及细胞系中lncRNA XIST和miR-32-5p的表达水平,双荧光素酶报告基因验证1ncRNA XIST、miR-32-5p和EZH2的靶向关系,并进一步通过WB检测EZH2的表达水平。CCK-8、Transwell及Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测HCT-8细胞增殖、迁移及凋亡情况。结果:lncRNA XIST在结直肠癌组织及细胞系中高表达,且在HCT-8细胞中表达最高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因证实,lncRNA XIST靶向负调控miR-32-5p(P<0.05),且EZH2是miR-32-5p的靶基因。敲降1ncRNA XIST抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡(P<0.05或P<0.01);进一步实验证明,敲降lncRNA XIST上调miR-32-5p的表达水平,从而下调EZH2表达水平,进而抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡。结论:lncRNA XIST通过miR-32-5p/EZH2分子轴促进HCT-8细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡。

lncRNA XIST通过调控miR-337-3p/HOXC8轴促进胃癌的发展进程

目的:探讨lncRNA XIST(XIST)通过调控miR-337-3p/HOXC8分子轴介导胃癌发展进程的分子机制。方法:选取2013年3月至2018年1月河北省唐山市开滦总医院普通外科手术切除的58例胃癌组织和对应的癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系AGS、MGC803、HGC27和人胃黏膜细胞GES-1,用qPCR检测胃癌组织和细胞系中XIST和miR-337-3p的表达水平。将XIST敲降载体、miR-337-3p mimics/inhibitor和HOXC8过表达载体转染进AGS细胞,用CCK-8、Transwell实验检测AGS细胞的增殖及侵袭能力,用WB检测HOXC8及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证XIST、miR-337-3p和HOXC8的靶向关系。结果:XIST在胃癌组织和细胞系中高表达(均P<0.01)。敲降XIST显著抑制AGS细胞的增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。XIST靶向作用miR-337-3p并下调其表达,HOXC8是miR-337-3p的靶基因。敲降XIST通过靶向上调miR-337-3p对HOXC8表达的抑制作用,从而抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。结论:敲降XIST可抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT,其作用机制是通过靶向miR-337-3p并下调HOXC8的表达。

LncRNA XIST调控miR-200b/ZEB1轴参与儿童急性髓系白血病阿柔比星耐药的机制研究

目的:研究LncRNA XIST调控miR-200b/ZEB1轴参与儿童急性髓系白血病(AML)阿柔比星耐药的机制。方法:以阿柔比星浓度递增法诱导建立人AML阿柔比星耐药细胞株K562/ADM,检测人AML细胞K562及K562/ADM细胞中LncRNA XIST表达。体外培养K562/ADM细胞,随机分为对照组、LncRNA XIST inhibitor组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组,分组转染并以药物处理后,检测各组细胞增殖凋亡情况;检测各组细胞LncRNA XIST、miR-200b、ZEB1、MDR1 mRNA表达水平和ZEB1、耐药蛋白P-gp蛋白表达水平。结果:相比K562细胞,LncRNA XIST在K562/ADM细胞中表达明显升高(P<0.05)。与对照组相比,阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组细胞存活率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05);LncRNA XIST inhibitor组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组上述指标无明显改变(P>0.05)。与LncRNA XIST inhibitor组相比,阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组细胞存活率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组分别相比,阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组、LncRNA XIST inhibitor组LncRNA XIST、ZEB1及MDR1 mRNA表达水平、ZEB1及P-gp蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),miR-200b表达水平均明显升高(P<0.05);阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组细胞上述各指标无明显改变(P>0.05)。结论:LncRNA XIST可使儿童AML细胞产生耐药性,下调其表达可促进miR-200b表达,降低ZEB1表达,抑制耐药基因MDR1、P-gp表达,提高阿柔比星对AML细胞的杀伤。

LncRNA XIST对顺铂诱导的肝癌细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨LncRNA XIST对顺铂(CDDP)诱导的肝癌细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:用miRanda预测XIST和miR-133a结合位点,用双荧光素酶报告实验分析二者之间的靶向关系。将肝癌HepG2细胞用10μmol/L的CDDP处理48 h后,分别转染siRNA-NC和XIST-siRNA,或miR-133a抑制剂和抑制剂NC,或pcDNA-3.1(+)+mimic-NC、pcDNA-XIST+mimic-NC和pcDNA-XIST+miR-133a mimic,48 h后CCK-8法检测细胞活力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白和Wnt/β-catenin通路蛋白的表达;实时荧光定量PCR法检测XIST和miR-133a表达水平。结果:miRanda预测XIST与miR-133a存在结合位点,双荧光素酶报告实验证实二者存在靶向关系。与siRNA-NC组比较,XIST-siRNA组细胞Bax、Caspase-3、Caspase-9、Wnt和β-catenin蛋白表达降低,Bcl-2表达升高,细胞活力升高(P<0.05)。与抑制剂NC组比较,miR-133a抑制剂组Bax、Caspase-3、Caspase-9、Wnt和β-catenin蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降,细胞活力降低(P<0.05)。与pcDNA-3.1(+)+mimic-NC组比较,pcDNA-XIST+mimic-NC组Bax、Caspase-3、Caspase-9、Wnt和β-catenin蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低,细胞活力升高(P<0.05)。与pcDNA-3.1(+)+mimic-NC组相比,pcDNA-XIST+miR-133a mimic组Bax、Caspase-3和Caspase-9、Wnt和β-catenin、Bcl-2蛋白表达水平及细胞活力无明显改变(P>0.05)。结论:XIST可能通过调节miR-133a-Wnt/β-catenin轴促进CDDP诱导的HepG2细胞凋亡。

LncRNA XIST在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的探讨在急性髓系白血病(AML)患者中长链非编码RNA X染色体失活特异性转录因子(LncRNA XIST)的表达情况及其临床意义。方法收集105例AML初治组(AML)、20例AML化疗后完全缓解组(AML-CR)和20例缺铁性贫血(IDA)对照组(CON)的骨髓标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA XIST的表达量,分析3组之间的表达差异,探讨其表达水平与患者的临床特征及预后的相关性。结果与对照组比较, LncRNA XIST在初治AML组中低表达( P <0.001)。与初治的AML组比较,其在AML-CR组中表达明显上调( P <0.001),而AML-CR 组与对照组中LncRNA XIST表达水平的差异无统计学意义( P >0.05)。AML初治组中,LncRNA XIST的表达水平与AML分型急性髓细胞白血病部分成熟型-急性早幼粒细胞白血病/急性粒单核细胞白血病-急性单核细胞白血病(M2-M3/M4-M5)、有无髓外浸润、白细胞数及乳酸脱氢酶水平存在相关性。LncRNA XIST低表达组患者的生存率明显低于高表达组患者( P =0.018)。通过COX回归分析显示,LncRNA XIST和白球比可以作为AML独立预后因素。结论 LncRNA XIST在初治AML患者中低表达,化疗完全缓解中表达上调,且与预后相关,提示其有作为AML患者的预后标志物及治疗靶点的可能。

乳腺癌MCF-7细胞中LncRNA XIST的表达及功能研究

目的探讨lncRNA XIST在乳腺癌MCF-7细胞中的表达及其对MCF-7细胞功能的影响。方法qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A及人乳腺癌MCF-7细胞中XIST的表达水平;利用瞬时转染技术在MCF-7细胞中过表达XIST,MTT法和Transwell小室法检测XIST过表达后MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化情况;生物信息学预测并用qRT-PCR检测与XIST有潜在结合位点的miRNA表达变化情况;并在MCF-7细胞中瞬时转染miR-130b-3p Inhibitor,qRT-PCR检测细胞中XIST的表达水平。结果乳腺癌MCF-7细胞中XIST低表达(P<0.001),miR-130b-3p高表达(P<0.001)。XIST过表达可显著抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.001)、促进MCF-7细胞的迁移和侵袭,而且XIST过表达后MCF-7细胞中miR-130b-3p表达水平显著降低(P<0.01),miR-130b-3p低表达后MCF-7细胞中XIST表达水平显著增加(P<0.001)。结论乳腺癌MCF-7细胞中XIST和miR-130b-3p的表达呈负相关,且XIST过表达可显著抑制MCF-7细胞的增殖、促进迁移和侵袭。

lncRNA XIST通过靶向miR-3666调控胃癌细胞增殖、侵袭转移机制

目的:探讨lncRNA XIST对胃癌细胞增殖、侵袭转移的影响及分子机制。方法:收集武汉市第四医院30例胃癌患者癌组织及癌旁组织,培养正常胃黏膜上皮细胞MRG-1、胃癌细胞SGC-7901和AGS,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA XIST和miR-3666表达水平;通过敲减胃腺癌细胞AGS中lncRNA XIST表达以及下调miR-3666表达水平,分析lncRNA XIST及miR-3666对胃癌细胞的调控作用,将细胞AGS分为si-NC组、si-XIST组、miR-NC组、miR-3666组、si-XIST+antimiR-NC组、si-XIST+anti-miR-3666组;MTT检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测lncRNA XIST和miR-3666的靶向关系。结果:与癌旁组织和正常胃黏膜上皮细胞MRG-1比较,胃癌组织和AGS、SGC-7901细胞中XIST表达水平升高,miR-3666表达水平降低(P<0.05)。敲除lncRNA XIST或过表达miR-3666,AGS细胞增殖能力减弱,迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。lncRNA XIST靶向调控miR-3666,抑制miR-3666逆转了XIST基因敲除对胃癌AGS细胞增殖、运动性及凋亡的影响。结论:敲除lncRNA XIST可通过上调miR-3666抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。

LncRNA XIST通过调控miR-186-5p促进非小细胞肺癌的增殖和侵袭实验研究

目的:探究LncRNA XIST通过调控miR-186-5p促进非小细胞肺癌增殖和侵袭的作用机制。方法:选用非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549、H1299、Calu-3及人支气管上皮细胞系BEAS-2B进行研究。采用RT-PCR检测NSCLC细胞系中LncRNA XIST表达情况。构建XIST siRNA转染敲降XIST表达,采用MTT法、Transwell实验及Western blot法验证其对NSCLC细胞增殖、侵袭及相关蛋白表达的影响。构建包含miR-186-5p结合位点的pmir GLO-XIST-Wt和pmir GLO-XIST-Mut基因片段报告载体,采用荧光素基因实验进行两者结合验证,并利用RIP实验及营救实验检测验证XIST和miR-186-5p靶向调控关系。结果:NSCLC细胞系A549、H1299、Calu-3中LncRNA XIST表达水平均显著高于人支气管上皮细胞系BEAS-2B(P<0.05)。敲降XIST表达后A549、H1299细胞中LncRNA XIST表达显著降低,miR-186-5p表达显著增高(P<0.05)。过表达miR-186-5p可显著降低A549、H1299细胞中XIST表达。敲降XIST显著抑制A549、H1299细胞增殖、侵袭能力,降低CCND1、PCNA、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05)。XIST是miR-186-5p的靶向基因。XIST与miR-186-5p存在于相同RISC复合物中,miR-186-5p以Ago2依赖的方式调控XIST。过表达miR-186-5p后A549细胞增殖、侵袭能力显著降低,逆转XIST过表达后促进A549细胞增殖、侵袭。结论:LncRNA XIST在非小细胞肺癌中高表达,LncRNA XIST通过调控miR-186-5p进而抑制XIST表达影响NSCLC的生物学行为。

LncRNA XIST负调控miR-196b对急性髓系白血病细胞KG1a生物行为的影响

目的:探讨lncRNA X染色体失活特异性转录因子(XIST)对急性髓系白血病细胞KG1a增殖和凋亡的影响及其相关作用机制。方法:收集北京航天中心医院2017年1月至2019年5月收治的41例急性髓系白血病患者,以及20例符合缺铁性贫血国际标准的患者作为对照组。将KG1a细胞分为pcDNA、pcDNA-XIST、pcDNA-XIST+miR-NC和pcDNA-XIST+miR-196b共4组。实时荧光定量PCR检测XIST和miR-196b表达水平,CCK-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测cleaved-caspase3、pro-caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测XIST和miR-196b的靶向关系。结果:急性髓系白血病组患者骨髓细胞中lncRNA XIST表达水平明显低于缺铁性贫血组(P<0.001)。KG1a细胞pcDNA-XIST组lncRNA XIST表达水平、G_(0)/G_(1)期细胞所占比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3和Bax的表达水平较pcDNA组均明显升高(均P<0.001),而miR-196b表达水平、细胞活性、S期细胞比例、pro-caspase3和Bcl-2表达水平均明显降低(均P<0.001)。pcDNA-XIST+miR-196b组细胞活性、S期细胞所占比例、pro-caspase3和Bcl-2表达水平较pcDNA-XIST组均明显升高(均P<0.001),而G_(0)/G_(1)期细胞所占比例、细胞凋亡率、cleaved-caspase3和Bax表达水平均明显降低(均P<0.001)。结论:过表达lncRNA XIST通过下调miR-196b表达抑制急性髓系白血病细胞KG1a增殖,促进细胞凋亡。

LncRNA XIST、miR-204及FN1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨LncRNA XIST,miR-204及FN1在PTC组织和癌旁组织及LncRNA XIST在PTC细胞系中的表达及意义。方法:应用Real-time PCR技术检测20例甲状腺乳头状癌和其癌旁组织中LncRNA XIST,miR-204及FN1的表达情况,应用QPCR检测3株甲状腺癌细胞系(BCPAP, TPC-1, KTC-1) LncRNA XIST、miR-204-5p的表达水平,应用荧光原位杂交(FISH)检测PTC细胞系BCPAP中LncRNA XIST的表达定位,应用双荧光素酶报告基因检测人293T细胞的LncRNA XIST、miR-204及FN1相互作用。结果:与癌旁组相比,PTC癌组织组的LncRNA XIST的表达水平显著上调(p 【0.05),PTC癌组织组的FN1的表达水平极显著上调(p 【0.01),而PTC癌组织组的miR-204-5p的表达水平极显著下调(p 【0.01),差异均具有统计学意义;BCPAP细胞的LncRNA XIST的表达水平最高,且miR-204-5p的表达水平最低;LncRNA XIST主要在细胞质中表达;LncRNA XIST与miR-204有相互作用(p 【0.05),FN1与miR-204有相互作用(p 【0.05)。结论:LncRNA XIST在甲状腺乳头状癌中高表达,miR-204在甲状腺乳头状癌中低表达,FN1在甲状腺乳头状癌中高表达;LncRNA XIST,miR-204及FN1相互作用,参与甲状腺乳头状癌的发生发展,并可为甲状腺乳头状癌潜在诊断标志物和治疗靶点的寻找提供理论依据,LncRNA XIST可能是甲状腺乳头状癌诊断和治疗的一个新靶点。

lncRNA XIST靶向miR-30b-5p调控高糖条件下肾小管上皮细胞损伤的机制

目的探讨lncRNA XIST对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在的作用机制。方法肾小管上皮细胞HK-2分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-XIST组、高糖+miR-NC组、高糖+miR-30b-5p组、高糖+si-XIST+anti-miR-NC组、高糖+si-XIST+anti-miR-30b-5p组,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-30b-5p和XIST mRNA表达水平;Western印迹法检测蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果相较于对照组,高糖组XIST mRNA表达水平显著升高,miR-30b-5p表达水平显著下降(P<0.05)。lncRNA XIST靶向调控miR-30b-5p的表达;下调XIST或miR-30b-5p过表达均可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡和TNF-α和IL-6的释放(P<0.05)。抑制miR-30b-5p表达逆转了下调XIST表达对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用。结论lncRNA XIST可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,改善高糖诱导的HK-2细胞损伤,其机制可能与miR-30b-5p的表达有关。

lncRNA XIST预警卵巢癌耐药和不良预后的应用价值探讨

目的探讨lncRNA XIST在预警卵巢癌耐药及临床不良预后的应用价值,为其作为肿瘤标志物应用于临床提供理论依据。方法基于Oncomine数据库卵巢癌表达谱芯片分析卵巢癌组织与正常卵巢组织的lncRNA XIST表达差异。基于GEO和TCGA数据库独立表达谱芯片,应用Kaplan-Meier plotter和ROC plotter分析lncRNA XIST与患者预后的关联性及其在预警化疗药物耐药的价值。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测lncRNA XIST在卵巢癌亲本细胞HeyA8及SKOV3、紫杉醇耐药细胞HeyA8-R及SKOV3-R和卡铂耐药细胞HeyA8-CBP和SKOV3-CBP中的表达情况。结果与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织lncRNA XIST表达水平显著下调(P<0.05)。与lncRNA XIST高表达组相比,lncRNA XIST低表达组在总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)和进展后生存期(PPS)方面的预后更差(P<0.05)。RT-qPCR检测结果显示,与卵巢癌敏感细胞HeyA8及SKOV3相比,lncRNA XIST在紫杉醇耐药细胞HeyA8-R和SKOV3-R及卡铂耐药细胞HeyA8-CBP和SKOV3-CBP中均显著下调(P<0.05)。与敏感组织相比,lncRNA XIST在耐药组织中的表达也显著下调,且其低表达潜在预警卵巢癌耐药(P<0.05)。进一步的ROC plotter分析结果显示,对于所有药物耐药,lncRNA XIST的预警截断值为8977;对于铂类药物耐药,lncRNA XIST的预警截断值为8977;对于紫杉醇耐药,lncRNA XIST的预警截断值为8245;对于铂类药物+紫杉醇耐药,lncRNA XIST的预警截断值为8245,均具有一定的预警价值(P<0.05)。结论lncRNA XIST有望作为卵巢癌化疗药物耐药和患者预后的预警标志物,具有临床应用价值。